Стереоізомернозбагачені сполуки 3-амінокарбонілбіциклогептен-піримідиндіаміну та їхнє застосування

1. Сполука структурної формули (І): 3 88660 4 6. Сполука за будь-яким із пп. 1-5, у якій R5 являє собою фтор. N N R4 N O 7. Сполука за п. 6, у якій R1 являє собою водень; і ; R2 являє собою і R 3 вибраний із групи, що складається з водню, нижчого алкілу, галогену, -CF3, N N R4 N O або і R3 є іншим, ніж N O N N N , N O N . 8. Сполука за п. 7, у якій R3 являє собою водень, метил, метокси, трифторметил або хлор. 4 9. Сполука за п. 7, у якій R являє собою метил, С(О)СН3, -С(О)ОСН3 або -С(О)ОСН2СН3. 10. Сполука за п. 6, у якій R1 являє собою водень; 2 R є іншим, ніж O N N R4 або 3 і R являє собою N O N N N N O N . 2 11. Сполука за п. 10, у якій R являє собою водень, метил, метокси, трифторметил або хлор. 4 12. Сполука за п. 10, у якій R являє собою метил, -С(О)СН3, -С(О)ОСН3 або -С(О)СН2СН3. 13. Сполука за п. 6, у якій R2 є іншим, ніж N N або і R3 є іншим, ніж N O R4 , N N N N R4 N O N R4 O N N R4 і . 19. Сполука за п. 18, у якій R3 вибраний із групи, що складається з водню, метилу, хлору, -CF3, R4 , O O і ; 3 і R вибраний із групи, що складається з водню, нижчого алкілу, галогену, -CF3, або N R4 і ; і R4 являє собою метил, -CORа або -CO(O)Ra, де Ra являє собою метил або етил. 18. Сполука за п. 16, у якій R 2 вибраний із групи, що складається з водню, , N N і . 17. Сполука за п. 16, у якій R3 вибраний із групи, що складається з водню, метилу, хлору, -CF3, R4 або N N O R4 O N N R4 і ; і R4 являє собою метил, -CORa або -CO(O)Ra, де Ra являє собою метил або етил. 20. Сполука за п. 19, у якій R2 являє собою N N R4 , R4 являє собою -CORa, де 3 R являє собою метил; і R являє собою водень. 2 21. Сполука за п. 19, у якій R являє собою a N N R4 , R4 являє собою -CO(O)Ra, де Ra являє собою етил; і R3 являє собою водень. 22. Сполука за п. 19, у якій R 2 являє собою , або O N . 14. Сполука за п. 13, у якій R1 і R2 кожний являє собою водень і R3 являє собою -OCH2NHRa. 15. Сполука за п. 13, у якій R1, R2 і R3 кожен незалежно вибраний із групи, що складається з водню, метилу, метокси, трифторметилу і хлору, за умови, що щонайменше два з R1, R2 і R3 є іншими, ніж водень. 16. Сполука за п. 6, у якій R1 являє собою водень; R2 вибраний із групи, що складається з водню, N O і R 3 являє собою водень. 23. Сполука за п. 19, у якій R2 являє собою водень; R3 являє собою N O N N R4 або ; 4 a a і R являє собою метил, -COR або -CO(O)R , де a R являє собою метил або етил. 5 88660 6 36. Спосіб інгібування процесу, опосередкованого 24. Сполука за п. 19, у якій R2 являє собою Aurora-кіназою, при якому обробляють клітину, експресуючу Aurora-кіназу, кількістю сполуки за п. N N R4 1, ефективною для інгібування процесу, опосеред, кованого Aurora-кіназою. 4 3 R являє собою метил ; і R вибраний із групи, що 37. Спосіб за п. 36, при якому інгібований процес, складається з водню, метилу, хлору і -CF3. опосередкований Aurora-кіназою, являє собою 25. Сполука за п. 24, у якій R3 являє собою метил. мітоз. 26. Сполука за п. 1, що являє собою істотно чис38. Спосіб за п. 36, при якому клітина являє собою тий (1R,2R,3S,4S)-N4-(3клітину пухлини. aмінокарбонілбіцикло[2.2.1]гeпт-5-eн-2-іл)-5-фтop39. Спосіб за п. 36, при якому клітину обробляють N2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4сполукою у концентрації, що є рівною або перевипіримідиндіамін. щує її ІК50, як визначено в аналізі in vitro. 27. Сполука за п. 1, що являє собою чистий 40. Спосіб лікування захворювання, опосередко(1R,2R,3S,4S)-N4-(3ваного Aurora-кіназою, при якому об'єкту, що поамінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фтортребує цього, вводять кількість сполуки за п. 1, N2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4ефективну для лікування цього захворювання. піримідиндіамін. 41. Спосіб за п. 40, при якому захворювання, опо28. Композиція, що містить сполуку за п. 1 і носій, середковане Aurora-кіназою, являє собою проліексципієнт і/або розріджувач. феративне захворювання. 29. Композиція за п. 28, у якій носій, ексципієнт 42. Спосіб за п. 41, при якому проліферативне і/або розріджувач є фармацевтично прийнятними. захворювання являє собою рак. 30. Спосіб інгібування проліферації клітини, при 43. Спосіб за п. 42, при якому рак являє собою якому клітину обробляють кількістю сполуки за п. метастатичну пухлину. 1, ефективною для інгібування її проліферації. 44. Спосіб за п. 43, при якому рак вибраний із гру31. Спосіб за п. 30, при якому клітина являє собою пи, що складається з раку легені, раку молочної клітину пухлини. залози, раку шлунка, раку яєчника, раку шийки 32. Спосіб за п. 31, при якому клітина пухлини явматки, меланоми, раку нирки, раку простати, лімляє собою клітину пухлини легені, ободової кишки, фоми, нейробластоми, раку підшлункової залози, молочної залози, шлунка, яєчника, шийки матки, раку сечового міхура і раку печінки. меланоми, нирки, простати, лімфоми, нейроблас45. Спосіб за п. 40, при якому сполуку вводять у томи, підшлункової залози, сечового міхура або формі фармацевтичної композиції. печінки. 46. Спосіб за п. 40, при якому сполуку вводять 33. Спосіб інгібування активності Aurora-кінази, перорально. при якому Aurora-кіназу піддають взаємодії з кіль47. Спосіб за п. 40, при якому сполуку уводять кістю сполуки за п. 1, ефективною для інгібування внутрішньовенно. її активності. 48. Спосіб за п. 40, при якому об'єкт являє собою 34. Спосіб за п. 33, що здійснюють in vitro з ізольолюдину. ваної або частково ізольованої Aurora-кіназою. 49. Спосіб за п. 40, при якому сполуку вводять у 35. Спосіб за п. 33, що здійснюють in vitro із клітикількості, ефективній для досягнення концентрації ною, експресуючою Aurora-кіназу. в сироватці, що є рівною або перевищує її ІК50, як визначено в аналізі in vitro. 1. Перехресне посилання на родинну заявку У даній заявці заявляється пріоритет згідно 35 U. S. С. §119(е) за заявкою №60/628199, поданою 15 листопада 2004, зміст якої включено тут шляхом посилання. 2. Область винаходу Даний опис відноситься до стереоізомерно збагачених композицій 4N-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-N2заміщених сполук феніл-2,4-піримідиндіаміну, що виявляють антипроліферативну активність до проліків цих сполук, до проміжних сполук і до способів синтезу для одержання цих сполук і/або проліків, до фармацевтичних композицій, що містять сполуки і/або проліки, і до застосування сполук і/або проліків у ряді випадків, включаючи, наприклад, лікування проліферативних порушень, таких як пухлини і раки. 3. Попередній рівень техніки Рак являє собою групу різних захворювань, що характеризуються неконтрольованим ростом і поширенням аномальних клітин. У цілому в усі типи раку залучена деяка аномалія в регуляції росту і розподілу клітини. Шляхи, що регулюють клітинні розподіли і/або клітинні взаємодії, змінюються в ракових клітинах так, що ефекти цих регуляторних механізмів при регуляції або обмеженні клітинного росту є недостатніми або обійденими. За допомогою успішних раундів мутації і природного добору група аномальних клітин, що звичайно виходять від єдиної мутантної клітини, накопичує додаткові мутації, що забезпечують селективну перевагу росту в порівнянні з іншими клітинами, і, таким чином, еволюціонує в клітинний тип, що переважає в клітинній масі. Цей процес мутацій і природного добору підсилюється за рахунок генетичної нестабільності, що виявляється багатьма типами ракових клітин, де ця нестабільність накопичуєть 7 88660 8 ся або в результаті соматичних мутацій, або успадковується по зародковій лінії. Посилена мінливість ракових клітин підвищує ймовірність їхнього прогресування убік утворення злоякісних клітин. Оскільки ракові клітини перетерплюють подальшу еволюцію, деякі стають локально інвазивними, а потім утворюють метастази з колонізацією тканин, інших, ніж тканина походження ракових клітин. Це включаючи їхні проліки, солі, гідрати, сольвати властивість рівнобіжна з гетерогенністю популяції і N-оксиди, що є збагаченими відповідним діастепухлинних клітин робить рак захворюванням, осореомером структурної формули (Іа), позначеним бливо важким для лікування і знищення. як (1R,2R,3S,4S)-діастереомер: У традиційних терапіях раку використовують перевагу більш високої проліферативної здатності ракових клітин і їхньої підвищеної чутливості до ушкодження ДНК. Іонізуюче випромінювання, включаючи γ-промені і рентгенівські промені, а також цитотоксичні агенти, такі як блеоміцин, цисплатин, вінбластин, циклофосфамід, 5'фторурацил і метотрексат, засновані на великому ушкодженні ДНК і дестабілізації структури хромосом, що в кінцевому рахунку приводить до руйнування ракових клітин. Ці терапії особливо ефективні для тих типів раків, що мають дефекти в де 1 контролі клітинного циклу, що обмежують здаткожен R незалежно обраний із групи, що ність цих клітин до репарації ушкодженої ДНК пескладається з водню, нижчого алкілу, -(CH2)nOH, a a b a ред вступом у розподіл клітини. Невиборча прироOR , -O(CH2)n-R , -O(CH2)n-R , -C(O)OR , галогену, да цих терапій, однак, часто приводить у -CF3 і -OCF3; 2 результаті до важких і побічних виснажуючих ефекожен R незалежно обраний із групи, що ктів. Системне застосування цих ліків може привескладається з водню, нижчого алкілу, -ORa, a b a сти в результаті до ушкодження нормальних здоO(CH2)nR , -O(CH2)n-R , -NHC(O)R , галогену, -CF3, рових органів і тканин і представляє ризик для здоров'я пацієнта. -OCF3, і ; Хоча розроблені багато виборчих хіміотерапій, кожен R3 незалежно обраний із групи, що заснованих на знанні того, як розвиваються ракові складається з водню, нижчого алкілу, -(СН2)n-ОН, клітини, наприклад, антиестрогенна сполука тамоORa, -O(CH2)n-Ra, -O(CH2)n-Rb, галогену, -CF3, ксифен, ефективність усіх хіміотерапій піддається розвитку стійкості до ліків. Зокрема, підвищена експресія переносників, зв'язаних із клітинною , , i ; OCF3, 4 мембраною, таких як Mdrl, дає фенотип множинної кожен R незалежно обраний із групи, що лікарської стійкості, що характеризується підвищескладається з водню, нижчого алкілу, арилалкілу, a c c a a c c ним відтоком ліків із клітини. Ці типи адаптації раOR , -NR R , -C(O)R , -C(O)OR i -C(O)NR R ; 5 кових клітин сильно обмежують ефективність деR являє собою водень, галоген, фтор, -CN, a яких класів хіміотерапевтичних агентів Отже, NO2, -C(O)OR або -CF3; ідентифікація інших хіміотерапевтичних агентів, кожен n незалежно являє собою ціле число від зокрема, активних стереоізомерів і/або стереоізо1 до 3; мерних сумішей, є важливою для встановлених кожен Ra незалежно обраний із групи, що терапій, ефективно спрямованих на гетерогенну складається з водню, нижчого алкілу і нижчого природу проліферативного захворювання і на поциклоалкілу; b долання якої-небудь стійкості, що може розвивакожен R незалежно обраний із групи, що тися в ході лікування іншими сполуками. Крім того, складається з -ORa, -CF3, -OCF3, -NRcRc, -C(O)Ra, a c c a d застосування комбінацій хіміотерапевтичних агенC(O)OR , -C(O)NR R i -C(O)NR R , c тів, включаючи різні стереоізомери і/або стереокожен R незалежно обраний із групи, що ізомерні суміші конкретного хіміотерапевтичного складається з водню і нижчого алкілу, або, альтеc агенту, що можуть мати різні властивості і клітинні рнативно, два замісники R можуть разом з атомішені, підвищує ефективність хіміотерапії й обмом азоту, з яким вони зв'язані, утворювати 4-9межує розвиток лікарської стійкості. членне насичене кільце, що можливо включає 1-2 a 4. Короткий опис винаходу додаткові гетероатомні групи, обрані з О, NR , a a a a a a В одному аспекті запропоновані 4N-(3NR -C(O)R , NR -C(O)OR i NR -C(O)NR і d амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-2Nкожен R незалежно являє собою нижчий мозаміщені сполуки феніл-2,4-піримідиндіаміну, збаногідроксиалкіл або нижчий дигідроксиалкіл. гачені специфічними діастереомерами, що виявУ деяких втіленнях сполука структурної форляють антипроліферативну активність проти ряду мули (І) являє собою рацемічну суміш (2-екзо-3різних типів пухлинних клітин. У деяких втіленнях екзо) цис-ізомерів у відповідності зі структурною запропоновані сполуки структурної формули (І): формулою (IIа): 9 88660 10 боксильні групи, що можуть бути включені в проліки, включають, але не обмежені ними, складні ефіри (включаючи ефіри силілу, ефіри оксамінової кислоти і тіоефіри), аміди і гідразиди. Ще в одному іншому аспекті запропоновані композиції, що містять одну або більше ніж одне стереоізомерно збагачену сполуку. Ці композиції, як правило, містять сполуку(и) і/або її проліки, солі, включаючи їхні проліки, солі, гідрати, сольвати гідрати, сольвати і/або N-оксиди і придатний носій, 1 2 3 5 і N-оксиди, де R , R , R і R є такими, як визначеексципієнт і/або розріджувач. Точна природа носія, но вище для структурної формули (І). ексципієнта і/або розріджувача буде залежати від У деяких втіленнях сполука являє собою стебажаного застосування для композиції і може знареоізомерно збагачений діастереомер у відповідходитися в діапазоні від придатності або прийнятності зі структурною формулою (Іа), див. вище, ності для застосувань in vitro до придатності або включаючи його проліки, солі, гідрати, сольвати і прийнятності для застосування у ветеринарії і до N-оксиди, що є, власне кажучи, вільним від його придатності або прийнятності для застосувань у енантиомеру і будь-якого іншого його діастереомедицині. меру. Стереоізомерно збагачені сполуки, описані Ще в одному іншому аспекті запропоновані тут, є ефективними інгібіторами клітин з аномальпроліки стереоізомерно збагачених сполук. Такі ної проліферації, таких як ракові клітини, в аналіпроліки можуть бути активними в їхній проліковій зах in vitro. Таким чином, ще в одному іншому асформі, або можуть бути неактивними доти, поки не пекті запропоновані способи інгібування будуть перетворені у фізіологічних або інших умопроліферації аномальних клітин, і, зокрема, пухвах застосування у форму активних ліків. У пролілинних клітин. Ці способи в цілому включають взаках одна або більше ніж одна функціональна група ємодію аномальної клітини, такий як пухлинна клістереоізомерно збагачених сполук включена в тина, з кількістю одного або більше ніж однієї прогрупування, що відривається від молекули в стереоізомерно збагаченої сполуки, описаної тут, умовах застосування, звичайно шляхом гідролізу, і/або її проліків, солей, гідратів, сольватів і/або Nферментативного розщеплення або якого-небудь оксидів, ефективних для інгібування проліферації іншого механізму розщеплення, з утворенням фуклітини. Клітини можна піддавати взаємодії із спонкціональних груп. Наприклад, первинні або втолуками як такими, або можна готувати препарат ринні аміногрупи можуть бути включені в амідне цієї сполуки у вигляді композиції. Ці способи можпрогрупування, що розщеплюється в умовах зана практикувати в in vitro контекстах, або в in vivo стосування з утворенням первинної або вторинної контекстах як терапевтичний підхід до лікування аміногрупи. Таким чином, проліки включають конкабо попередження проліферативних розладів, ретні типи захисних груп, названих "прогрупами", таких як канцерогенні раки. що маскують одну або більше ніж одну функціонаЩе в одному аспекті винаходу запропоновані льну групу сполук, які розщеплюються в умовах способи лікування проліферативних розладів. Ці застосування з утворенням активної лікарської способи можна практикувати на тваринах у ветесполуки. Функціональні групи усередині стереоізоринарних цілях, або для людей. Ці способи в ціломерно збагачених сполук, що можуть маскуватися му включають введення суб'єкту тварини або люпрогрупами для включення в прогрупування, дини кількості однієї або більше ніж однієї включають, але не обмежені ними, аміни (первинні стереоізомерно збагаченої сполуки, описаної тут, і вторинні), гідроксили, сульфаніли (тіоли), карбокі/або її проліків, солей, гідратів, сольватів і/або Nсили, карбоніли і т.д. Безліч прогруп, придатних оксидів, ефективної для лікування або попередля маскування таких функціональних груп з утводження проліферативного розладу. Сполуку(и) ренням прогрупувань, що розщеплюються в бажаможна вводити цьому об'єкту як такі, або цю(і) них умовах, відомі в даній області техніки. Усі ці сполуку(и) можна вводити у формі композиції. прогрупи, окремо або в поєднанні, можуть бути Проліферативні порушення, які можна лікувати включені в проліки. Конкретні приклади прогрупувідповідно до цих способів, включають, але не вань, що утворюють первинні або вторинні амінообмежені ними, злоякісні пухлини. групи, що можуть бути включені в проліки, вклюСтереоізомерно збагачені сполуки, описані чають, але не обмежені ними, аміди, карбамати, тут, є ефективними інгібіторами Aurora-кіназ. іміни, сечовини, фосфеніли, фосфорили і сульфеAurora-кінази являють собою сімейство ферментів, ніли. Конкретні приклади прогрупувань, що утвовідомих як ключові регулятори клітинного розподірюють сульфанільні групи, що можуть бути вклюлу. Підвищені рівні Aurora-кіназ виявлені в декільчені в проліки, включають, але не обмежені ними, кох типах ракових клітин людини, таких як при раку прості тіоефири, наприклад, S-метильні похідні молочної залози, ободової кишки, нирок, шийки (монотіо, дитіо, окситіо, амінотіоацетали), тіоефіри матки, нейробластомі, меланомі, лімфомі, раку силілу, складні тіоефіри, тіокарбонати, тіокарбапідшлункової залози, простати, й інших солідних мати, асиметричні дисульфіди і т.д. Конкретні припухлин [див., наприклад, Bischott et al., 1998, ЕМклади прогрупувань, що розщеплюються з утвоВО J. 17: 3052-3065; Geopfert & Brinkley, 2000, ренням гідроксильних груп, що можуть бути Curr. Top. Dev. Biol. 49: 331-342; Sakakura et al., включені в проліки, включають, але не обмежені 2001, Br. J. Cancer 84: 824- 831], і показано, що ними, сульфонати, складні ефіри і карбонати. Конгіперекспресія Aurora-кіназ приводить у результаті кретні приклади прогрупувань, що утворюють кардо клітинної трансформації, процесу, за допомо 11 88660 12 гою якого нормальні клітини стають раковими. Хозазначене число атомів вуглецю (тобто С1-С6 ча не слід обмежуватися якою-небудь теорією дії, означає від одного до шести атомів вуглецю), що вважають, що стереоізомерно збагачені сполуки, утворюється в результаті видалення одного атома описані тут, а також їхні активні проліки, солі, гідводню від одного атома вуглецю вихідного алкану, рати, сольвати і/або N-оксиди, виявляють їхню алкену або алкіну. Типові алкільні групи включаантипроліферативну активність за допомогою інгіють, але не обмежені ними, метил; етили, такі як бування однієї або більше ніж однієї Aurora-кінази. етаніл, етеніл, етиніл; пропіли, такі як пропан-1-іл, Таким чином, ще в одному аспекті винаходу пропан-2-іл, циклопропан-1-іл, проп-1-ен-1-іл, запропоновані способи інгібування активності проп-1-ен-2-іл, проп-2-ен-1-іл, циклопроп-1-ен-1-іл; Aurora-кінази. Ці способи в цілому включають взациклопроп-2-ен-1-іл, проп-1-ін-1-іл, проп-2-ін-1-іл і ємодію Aurora-кінази з кількістю однієї або більше т.д.; бутили, такі як бутан-1-іл, бутан-2-іл, 2-метилніж однієї стереоізомерно збагаченої сполуки, пропан-1-іл, 2-метил-пропан-2-іл, циклобутан-1-іл, описаної тут, і/або її проліків, солей, гідратів, сольбут-1-ен-1-іл, бут-1-ен-2-іл, 2-метил-проп-1-ен-1-іл, ватів і/або N-оксидів, ефективних для інгібування її бут-2-ен-1-іл, бут-2-ен-2-іл, буту-1,3-дієн-1-іл, бутуактивності. Ці способи можна практикувати in vitro 1,3-дієн-2-іл, циклобут-1-ен-1-іл, циклобут-1-ен-3з очищеними або частково очищеними ферментаіл, циклобута-1,3-дієн-1-іл, бут-1-ин-1-іл, бут-1-инми, що представляють собою Aurora-кінази (на3-іл, бут-3-ин-1-іл і т.д.; і т.п. Де необхідні конкретні приклад, з екстрактами клітин, експресуючих рівні насичення, використовують номенклатуру Aurora-кіназу), in vitro з інтактними клітинами, екс"алканіл", "алкеніл" і/або "алкініл", як визначено пресуючими Aurora-кіназу, або in vivo для інгібунижче. "Нижчий алкіл" відноситься до алкільної вання процесу, опосередкованого Aurora-кіназою групи, що містить від 1 до 6 атомів вуглецю. "Алканіл" сам по собі або як частина іншого (наприклад, клітинного мітозу) і/або як терапевтизамісника відноситься до насиченого розгалуженочний підхід до лікування або попередження або го, лінійного або циклічного алкілу, утвореному в захворювань розладів, що опосередковані, щонайменше частково, активністю Aurora-кінази. результаті видалення одного атома водню від одЩе в одному аспекті винаходу запропоновані ного атома вуглецю вихідного алкана. Типові алспособи лікування або профілактики захворювань канільние групи включають, але не обмежені ними, або порушень, опосередкованих Aurora-кіназою. Ці метанил; етанил; пропанили, такі як пропан-1-іл, способи в цілому включають введення тварині або пропан-2-іл (ізопропил), циклопропан-1-іл і т.д.; бутанили, такі як бутан-1-іл, бутан-2-іл (уторлюдині кількості однієї або більше ніж однієї стебутив), 2-метил-пропан-1-іл (ізобутил), 2-метилреоізомерно збагаченої сполуки, описаної тут, пропан-2-іл (тер-бутив), циклобутан-1-іл і т.д.; і т.п. і/або її проліків, солей, гідратів, сольватів і/або N"Алкенил" сам по собі або як частина іншого оксидів, ефективних для лікування або профілактики захворювання або порушення, опосередковазамісника відноситься до ненасиченого розгалуженого, лінійного або циклічного алкілу, що має, ного Aurora-кіназою. Захворювання або порушенщонайменше, один подвійний зв'язок вуглецьня, опосередковане Aurora-кіназою, включає будьвуглець, утвореного в результаті видалення однояке захворювання, порушення або інший хворобго атома водню від одного атома вуглецю вихідноливий стан, що обумовлений членом сімейства го алкена. Ця група може знаходитися або в цис, Aurora-кіназ. Конкретні приклади таких захворюабо в транс конформації щодо подвійного зв'язку вань або порушень, опосередкованих Aurora(зв'язків). Типові алкенильні групи включають, але кіназою, включають, але не обмежені ними, мелане обмежені ними, етеніл; пропеніли, такі як пропному, лейкоз і солідні ракові пухлини, такі як, наприклад, раки ободової кишки, молочної залози, 1-ен-1-іл, проп-1-ен-2-іл, проп-2-ен-1-іл, проп-2-еншлунку, яєчника, шийки матки, нирок, простати, 2-іл, циклопроп-1-ен-1-іл; циклопроп-2-ен-1-іл; булімфоми, нейробластоми, раки простати і сечовотеніли, такі як бут-1-ен-1-іл, бут-1-ен-2-іл, 2-метилпроп-1-ен-1-іл, бут-2-ен-1-іл, бут-2-ен-2-іл, бутаго міхура. Інші аспекти включають, але не обмежені ни1,3-дієн-1-іл, бута-1,3-дієн-2-іл, циклобут-1-ен-1-іл, ми, проміжні сполуки і способи, застосовувані для циклобут-1-ен-3-іл, циклобута-1,3-дієн-1-іл і т.д.; і т.п. синтезу стереоізомерно збагачених сполук і пролі"Алкініл" сам по собі або як частина іншого заків, як буде описано нижче більше докладно. 5. Короткий опис графічних матеріалів місника відноситься до ненасиченого розгалуженого, лінійного або циклічного алкілу, що має, щоФіг.1-4 показують інгібіторний ефект біснайменше, один потрійний зв'язок вуглецьгідрохлориду (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторвуглець, утвореного в результаті видалення одноN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4го атома водню від одного атома вуглецю вихіднопіримідиндіаміну (сполука 60а-2НСІ) у відношенні го алкіну. Типові алкінільні групи включають, але росту різноманітних типів пухлин у стандартних не обмежені ними, етиніл; пропиніли, такі як пропмоделях обробки ксенотрансплантату і регресії. 1-ін-1-іл, проп-2-ін-1-іл і т.д.; бутиніли, такі як бут-16. Докладний опис винаходу ін-1-іл, бут-1-ін-3-іл, бут-3-ін-1-іл і т.д.; і т.п. 6.1 Визначення "Алкілдиіл" сам по собі або як частина іншого замісника відноситься до насиченої або ненасичеТут приведені нижче терміни мають наступні ної розгалуженої, лінійної або циклічної двовалензначення: тної вуглеводневої групи, що має зазначене число "Алкіл" сам по собі або як частина іншого заміатомів вуглецю (тобто С1-С6 означає від одного сника відноситься до насиченого або ненасиченодо шести атомів вуглецю), утвореної в результаті го розгалуженого, лінійного або циклічного одновидалення одного атома водню від кожного з двох валентного вуглеводневого радикалу, що має 13 88660 14 різних атомів вуглецю вихідного алкана, алкена "Циклоалкіл" сам по собі або як частина іншого або алкіна, або в результаті видалення двох атозамісника відноситься до циклічного варіанта грумів водню від одного атома вуглецю вихідного пи "алкіл". Типові циклоалкільні групи включають, алкана, алкена або алкіна. Два одновалентних але не обмежені ними, циклопропіл; циклобутили, радикальних центри або кожна валентність двоватакі як циклобутаніл і циклобутеніл; циклопентили, лентного радикального центра може утворити такі як циклопентаніл і циклопентеніл; циклогексизв'язок з однаковими або різними атомами. Типові ли, такі як циклогексаніл і циклогексеніл; і т.п. групи алкілдиіл включають, але не обмежені ними, "Вихідна ароматична кільцева система" віднометандиіл; етандиіли, такі як етан-1,1-диіл, етанситься до ненасиченої циклічної або поліциклічної 1,2-диіл, етен-1,1-диіл, етен-1,2-диіл; пропілдиіли, кільцевої системи, що має систему кон'югованих πтакі як пропан-1,1-диіл, пропан-1,2-диіл, пропанелектронів. Конкретно включені у визначення "ви2,2-диіл, пропан-1,3-диіл, циклопропан-1,1-диіл, хідна ароматична кільцева система" конденсовані циклопропан-1,2-диіл, проп-1-ен-1,1-диіл, проп-1кільцеві системи, у яких одне або більше ніж одне ен-1,2-диіл, проп-2-ен-1,2-диіл, проп-1-ен-1,3-диіл, з кілець є ароматичним, і одне або більше ніж одциклопроп-1-ен-1,2-диіл, циклопроп-2-ен-1,2-диіл, не з кілець є насиченим або ненасиченим, як, нациклопроп-2-ен-1,1-диіл, проп-1-ин-1,3-диіл і т.д.; приклад, флуорен, індан, інден, фенален, тетрагібутилдиіли, такі як бутан-1,1-диіл, бутан-1,2-диіл, дронафталін і т.д. Типові вихідні ароматичні бутан-1,3-диіл, бутан-1,4-диіл, бутан-2,2-диіл, 2кільцеві системи включають, але не обмежені ниметил-пропан-1,1-диіл, 2-метил-пропан-1,2-диіл, ми, ацеантрилен, аценафтилен, ацефенантрилен, циклобутан-1,1-диіл; циклобутан-1,2-диіл, циклоантрацен, азулен, бензол, хризен, коронен, флуобутан-1,3-диіл, бут-1І-ен-1,1-диіл, бут-1-ен-1,2рантен, флуорен, гексацен, гексафен, гексален, диіл, бут-1-ен-1,3-диіл, бут-1-ен-1,4-диіл, 2-метиліндацен, s-індацен, індан, інден, нафталін, октапроп-1-ен-1,1-диіл, 2-метанилиден-пропан-1,1цен, октафен, октален, овальний, пента-2,4-дієн, диіл, буту-1,3 -дієн-1,1-диіл, буту-1,3-дієн-1,2-диіл, пентацен, пентален, пентафен, перилен, фенален, буту-1,3-дієн-1,3-диіл, буту-1,3-дієн-1,4-диіл, цикфенантрен, піцен, плейаден, пірен, пірантрен, рулобут-1-ен-1,2-диіл, циклобут-1-ен-1,3-диіл, цикбіцен, тетрагідронафталін, трифенілен, тринафталобут-2-ен-1,2-диіл, циклобута-1,3-дієн-1,2-диіл, лін і т.п. циклобута-1,3-дієн-1,3-диіл, бут-1-ин-1,3-диіл, бут"Арил" сам по собі або як частина іншого замі1-ин-1,4-диіл, буту-1,3-диін-1,4-диіл і т.д.; тощо. Де сника відноситься до одновалентної ароматичної необхідні конкретні рівні насичення, використовувуглеводневої групи, що має зазначене число ють номенклатуру алканілдиіл, алкенилдиіл і/або атомів вуглецю (тобто С5-С15 означає від 5 до 15 алкінілдиіл. Де конкретно необхідно, щоб дві ваатомів вуглецю), утвореної в результаті видалення лентності знаходилися на тому самому атомі вугодного атома водню від одного атома вуглецю лецю, використовують номенклатуру "алкіліден". вихідної ароматичної кільцевої системи Типові "Нижчий алкілдиіл" являє собою групу алкілдиіл, арильні групи включають, але не обмежені ними, що містить від 1 до 6 атомів вуглецю. У деяких групи, утворені з ацеантрилену, аценафтилену, втіленнях групи алкілдиіл являють собою насичені ацефенантрилену, антрацену, азулена, бензолу, ациклічні групи алканілдиіл, у яких радикальні хризену, коронену, флуорантену, флуорену, гекцентри знаходяться при кінцевих атомах вуглецю, сацену, гексафену, гексалену, індацену, sнаприклад, метандиіл (метано); етан-1,2-диіл індацену, індану, індену, нафталіну, октацену, ок(етано); пропан-1,3-диіл (пропано); бутан-1,4-диіл тафену, окталену, овалену, пента-2,4-дієну, пен(бутано) і т.п. (також названі алкіленами, визначетацену, пенталену, пентафену, перилену, фенаними нижче). лену, фенантрену, піцену, плейадену, пірену, "Алкілен" сам по собі або як частина іншого пірантрену, рубіцену, тетрагідронафталіну, трифезамісника відноситься до лінійної насиченої або нілену, тринафталіну і тому подібного, а також ненасиченої групи алкілдиіл, що має два кінцевих їхніх різних гідроізомерів. У деяких втіленнях ариодновалентних радикальних центри, утворених у льна група являє собою (С5-С15)арил, де (С5результаті видалення одного атома водню від коС10) є більш звичайною. Конкретними прикладами жного з двох кінцевих атомів вуглецю лінійного є феніл і нафтил. вихідного алкана, алкена або алкіна. Положення "Галоген" або "галогено" самі по собі або як подвійного зв'язку або потрійного зв'язку, якщо він частина іншого замісника, якщо не зазначене інше, присутній, зокрема, алкілену зазначене в квадратвідносяться до фтор-, хлор-, бром- і йод-. них дужках. Типові алкіленові групи включають, "Галогеноалкіл" сам по собі або як частина інале не обмежені ними, метилен (метано); етилени, шого замісника відноситься до алкільної групи, у такі як етано, етено, етино; пропілени, такі як проякій один або більше ніж один атом водню заміпано, проп[1]ено, проп[1,2]дієно, проп[1]іно і т.д.; щений галогеном. Таким чином, у термін "галогебутилени, такі як бутано, бут[1]ено, бут[2]ено, буноалкіл" варто включати моногалогеналкіли, дигату[1,3]дієно, бут[1]іно, бут[2]іно, буту[1,3]диіно і логеналкіли, тригалогеналкіли і т.д. аж до т.д.; і т.п. Де необхідні конкретні рівні насичення, пергалогеналкілів. Наприклад, вираз "(С1використовують номенклатуру алкано, алкено С2)галогеналкіл" включає фторметил, дифтормеі/або алкіно. У деяких втіленнях алкіленова група тил, трифторметил, 1-фторетил, 1,1-дифторетил, являє собою (С1-С6) або (С1-СЗ) алкілен. У де1,2-дифторетил, 1,1,1-трифторетил, перфторетил і яких втіленнях алкіленовая група являє собою т.д. лінійну насичену групу алкано, наприклад, метано, "Гідроксиалкіл" сам по собі або як частина інетано, пропано, бутано і т.п. шого замісника відноситься до алкільної групи, у якій один або більше ніж один атом водню замі 15 88660 16 щений гідроксильним замісником. Таким чином, у типово приєднані до функціональної групи ліків за термін "гідроксиалкіл" варто включати моногідрокдопомогою зв'язків, що розщеплюються в конкретсиалкіли, дигідроксиалкіли, тригідроксиалкіли і т.д. них умовах застосування. Таким чином, прогрупа Визначені вище групи можуть включати префіявляє собою ту частину прогрупування, що розщекси і/або суфікси, що звичайно використовують у плюється з вивільненням функціональної групи в конкретних умовах застосування. Як конкретний даній області техніки для утворення додаткових приклад, амідне прогрупування формули -NHдобре відомих груп замісників. Як приклади, "алкіC(O)CH3 містить прогрупу -С(О)СН3. локси" або "алкокси" відноситься до групи форму"Проліферативне порушення" відноситься до ли -OR, "алкілумін" відноситься до групи формули захворювання або порушення, що характеризу-NHR і "диалкілумін" відноситься до групи формується аберрантною проліферацією клітин, наприли -NRR, де кожен R незалежно являє собою алклад, де клітини поділяються більше, ніж їхній відкіл. Як інший приклад, "галогеналкокси" або "гало1 повідні нормальні клітини. Аберрантна геналкілокси" відноситься до групи формули -OR , де R' являє собою галогеноалкіл. проліферація може бути викликана будь-яким ме"Проліки" відносяться до похідної активної ханізмом дії або поєднанням механізмів дії. Насполуки (ліків), якій може бути потрібним перетвоприклад, клітинний цикл однієї або більше ніж одрення в умовах застосування, як, наприклад, усенієї клітини може піддаватися такому впливу, що редині організму, з вивільненням активних ліків. клітина(и) поділяються частіше, ніж їхні відповідні Проліки часто, але не обов'язково, є фармакологінормальні клітини, або, як інший приклад, одна чно неактивними до перетворення в активні ліки. або більш ніж одна клітина може обходити інгібіторні сигнали, що повинні в нормі обмежувати число Проліки звичайно одержують шляхом маскування їхніх розподілів. Проліферативні захворювання функціональної групи в лікарській сполуці, що включають, але не обмежені ними, повільно або вважається почасти необхідною для активності, швидко зростаючі пухлини і раки. прогрупою (визначеною нижче) з утворенням про"Антипроліферативна сполука" відноситься до групування, що перетерплює перетворення, таке сполуки, що інгібує проліферацію клітини в порівяк розщеплення, у конкретних умовах застосуваннянні з неопрацьованою контрольною клітиною ня з вивільненням функціональної групи, і, отже, подібного типу. Інгібування може бути викликане активних ліків. Розщеплення прогрупування може за допомогою будь-якого механізму або поєднання відбуватися спонтанно, як, наприклад, у результаті механізмів і може приводити до інгібування проліреакції гідролізу, або його можна каталізувати або ферації цитостатичним або цитотоксичним шляіндукувати іншим агентом, як, наприклад, за допохом. Як конкретний приклад інгібування, як викомогою ферменту, за допомогою світла, за допомористовують тут, включає, але не обмежується, гою кислоти або основи, або за допомогою або зупинку розподілу клітини, зниження швидкості зміни впливу фізичного параметру або параметру клітинного розподілу, проліферації і/або росту навколишнього середовища, такого як зміна темі/або індукцію клітинної загибелі за допомогою ператури. Агент може бути ендогенним стосовно будь-якого механізму дії, включаючи, наприклад, умов застосування, таким як фермент, що є присуапоптоз. тнім у клітинах, в які вводять проліки, або кислі умови шлунку, або він може забезпечуватися екзо"Aurora-кіназа" відноситься до члена сімейства генним шляхом. серин/треонінових білкових кіназ, що у цілому наШирока розмаїтість прогруп, а також отримазивають "Aurora-кінази". Сімейство сених у результаті прогрупувань, придатних для марин/треонінових білкових Aurora-кіназ є істотним для клітинної проліферації [див., наприклад, скування функціональних груп в активних стереоBischhoff & Plowman, 1999, Trends Cell Biol. 9: 454ізомерно збагачених сполуках, описаних тут, з 459; Giet & Prigent, 1999, J. Cell Science 112: 3591утворенням проліків добре відомо в даній області техніки. Наприклад, гідроксильна функціональна 3601; Nigg, 2001, Nat. Rev. Мої. Cell Biol. 2· 21-32; група може бути замаскована у вигляді прогрупуAdams et al., 2001, Trends Cell Biol. 11: 49-54]. В вання сульфонату, або ефіру карбонату, що моданий час відомо три члени цього сімейства ссавжуть піддаватися гідролізу in vivo з утворенням ців: Aurora-A ("2"), Aurora-B ("1") і Aurora-C ("3") гідроксильної групи. Функціональна аміногрупа [див , наприклад, Giet & Prigent, 1999, J. Cell Sci. може бути замаскована у вигляді прогрупування 112: 3591-3601, Bischoff & Plowman, 1999, Trends аміду, карбамату, іміну, сечовини, фосфенілу, фоCell Biol. 9: 454-459]. Як використовують тут, сфорилу або сульфенілу, що можуть піддаватися "Aurora-кіназа" включає не тільки ці три відомі гідролізу in vivo з утворенням аміногрупи. Карбокчлени цього сімейства ссавців, але також відкриті сильна група може бути замаскована у вигляді останнім часом члени цього сімейства ссавців і прогрупування ефіру (включаючи ефіри силілу і гомологічні білки з інших видів і організмів [не обтіоефири), або аміду гідразиду, що можуть піддамежуючі приклади гомологічних членів сімейства ватися гідролізу in vivo з утворенням карбоксильAurora-кіназ з інших видів і організмів див. у ної групи. Інші конкретні приклади придатних проSchumacher et al., 1998, J. Cell Biol. 143:1635-1646; Kimuraetal., 1997, J. Biol. Chem. 272: 13766-13771]. груп і їхніх відповідних прогрупувань будуть "Процес, опосередкований Aurora-кіназою", очевидні фахівцям уданій області техніки. або "захворювання або порушення, опосередко"Прогрупа" відноситься до типу захисної групи, ване Aurora-кіназою", відноситься до клітинного що при використанні для маскування функціонапроцесу, захворювання або порушення, у якому льної групи усередині активної стереоізомерно відіграє роль Aurora-кіназа. Вважають, що Auroraзбагаченої лікарської сполуки з утворенням прокінази відіграють ключову роль у фосфорилюванні групування, перетворює ліки в проліки. Прогрупи 17 88660 18 білків, що регулюють мітотичну фазу клітинного 1998, Gene 244: 1-7]. Рівні цього ферменту зросциклу. Людські Aurora-кінази виявляють окрему тають як функція стадії Дюкса при первинних расубклітинну локалізацію в процесі мітозу. Наприках ободової і прямої кишки [Katayama et al, 1999, клад, Aurora-A позитивно регулюється під час фаJ. Nat'l Cancer Inst. 91: 1160-1162]. Aurora-C, що у зи Μ клітинного циклу і локалізується до полюса нормі виявляється тільки в зародкових клітинах, веретена під час мітозу, що дозволяє припустити також гіперекспресується у високому відсотку перучасть у функції центросом. Якщо активність винних раків ободової і прямої кишки й у ряді пухAurora-A є максимальною під час профази, ввалинних клітинних ліній, включаючи клітини аденожають, що Aurora-B відіграє важливу роль під час карциноми шийки матки і клітини карциноми поділу хроматид і утворення борозни дроблення в молочної залози [Kimura et al., 1999, J. Biol. Chem. анафазі і телофазі. Роль Aurora-C менш ясна, але 274: 7334-7340; Takahashi et al., 2000, Jpn. J. показано, що вона локалізована на центросомах Cancer Res. 91: 1007-1014]. Навпроти, сімейство Aurora експресується на під час мітозу від анафази до цитокінезу Крім того, низькому рівні в більшості нормальних тканин, де інгібування активності Aurora-кіназ у клітинах ссавиключення складають тканини з високою часткою вців приводить до аномального клітинного росту і клітин, що поділяються, такі як тимус і сіменник поліплоїдії [Terada et al., 1998, EMBO J. 17 667676]. Таким чином, вважають, що Aurora-кінази [Bischoff et al., 1998, EMBO J., 17: 3052-3065]. регулюють клітинний розподіл, сегрегацію хромоДодатковий огляд ролей Aurora-кіназ, що грасом, утворення мітотичного веретена і цитокинез. ють у проліферативних порушеннях, ]див. у Як використано тут, усі ці різні процеси знаходятьBischhoff & Plowman, 1999, Trends Cell Biol. 9: 454ся в межах обсягу "процесу, опосередкованого 459; Giet & Prigent, 1999, J. Cell Science 112: 3591Aurora-кіназами". 3601; Nigg, 2001, Nat. Rev. Мої. Cell Biol. 2: 21-32; Крім того, з моменту його відкриття в 1997 роAdams et al., 2001, Trends Cell Biol. 11:49-54 і ці, сімейство Aurora-кіназ ссавців тісно зв'язували Dutertre et al., 2002, Oncogene 21:6175-6183]. з онкогенезом. Найбільш незаперечне свідчення Хоча гіперекспресія білків раковими клітинами цього полягає в тому, що гіперекспресія Aurora-A не завжди є показником того, що інгібування актитрансформує фібробласти гризунів [Bischoff etal., вності білка буде приводити до протипухолинного 1998, EMBO J. 17: 3052-3065]. Клітини з підвищеефекту, у функціональних аналізах підтверджено, ними рівнями цієї кінази містять множинні центрощо, щонайменше, приведені нижче типи пухлинсоми і багатополярні веретена і швидко стають них клітин чуттєві до інгібування активності Auroraанеуплоідними. Онкогенна активність Aurora-кіназ, кіназ: простати (DU145), шийки матки (Неlа), підшлункової залози (Міа-Раса2, ВХ-РС3), гістологічймовірно, зв'язана зі створенням такої генетичної ного лейкозу (U937), легеневої аденокарциноми, нестабільності. Дійсно, спостерігали кореляцію між легеневого епідермоїду, дрібноклітинної карциноампліфікацією локусу Aurora-A і хромосомною неми легені, молочної залози, ниркової карциноми, стабільністю в пухлинах молочної залози і шлунка [Miyoshi et al., 2001, Int. J. Cancer 92: 370-373; МоІ3 (усі) і Molt4 (усі). Sakakura etal., 2001, Brit. J. Cancer 84: 824-831]. На підставі встановленої ролі Aurora-кіназ при Повідомляли, що Aurora-кінази гіперекспресуряді раків приклади "захворювань і порушень, опоються в широкому ряді пухлин людини. Підвищена середкованих Aurora-кіназами", включають, але не експресія Aurora-A виявлена більш ніж у 50% пухобмежені ними, меланому, лейкоз і солідні пухлинні раки, такі як, наприклад, рак ободової кишки, лин ободової і прямої кишки [Bischoff et al., 1998, молочної залози, шлунку, яєчника, шийки матки, EMBO J. 17: 3052-3065; Takahashi et al., 2000, Jpn. нирки, простати; лімфому, нейробластому, раки J. Cancer Res. 91: 1007-1014], яєчника [Gritsko et підшлункової залози і сечового міхура. al., 2003, Clinical Cancer Research 9: 1420-1426] і "Терапевтично ефективна кількість" відноситьшлунка [Sakakura, 2001, Brit. J. Cancer 84: 824ся до кількості сполуки, достатньої для лікування 831], і в 94% інвазивних внутріпроточних аденокаконкретного розладу або захворювання, або однорцином молочної залози [Tanaka, 1999, Cancer го або більше ніж одного з його симптомів. У відResearch. 59: 2041-2044]. Також повідомляли про ношенні онкогенних проліферативних порушень високі рівні Aurora-A у пухлинних клітинних лініях терапевтично ефективна кількість включає кільнирок, шийки матки, нейробластоми, меланоми, кість, достатня для того, серед іншого, щоб виклилімфоми, підшлункової залози і простати [Bischoff кати скорочення пухлини або зниження швидкості et al., 1998, EMBO J. 17: 3052-3065; Kimura et al., росту пухлини. 1999, J. Biol. Chem. 274: 7334-7340; Zhou et al., У багатьох ситуаціях стандартні терапії для 1998, Nature Genetics 20: 189-193; Li et al., 2003, онкогенного проліферативного порушення вклюClin Cancer Res. 9(3): 991-7]. Ампліфікачають хірургічне втручання по видаленню пухлини цію/гіперекспресію Aurora-A спостерігають при (пухлин), або окремо, або в поєднанні з лікарськираках сечового міхура людини, і ампліфікація ми (хіміотерапіями) і/або променевими терапіями. Aurora-A зв'язана з анеуплоідією і агресивним кліЯк використано тут, у "терапевтично ефективну нічним проявом [Sen et al, 2002, J Natl Cancer Inst. кількість" сполуки варто включати кількість сполу94(17): 1320-9]. Крім того, ампліфікація локусу ки, що або попереджає рецидив пухлин у об'єктів, Aurora-Α (20ql3) корелює з поганим прогнозом для у яких пухлина(и) вилучена оперативним шляхом, пацієнтів з невузловим раком молочної залози [Isola et al., 1995, American Journal of Pathology або сповільнює швидкість рецидиву пухлини у 147: 905-911]. Aurora-B перетерплює підвищену таких об'єктів. експресію в безлічі пухлинних клітинних лініях люВідповідно, як використано тут, кількості сполук, що забезпечують терапевтичну користь у подини, включаючи лейкозні клітини [Katayama et al., 19 88660 20 єднанні з іншим типом терапії, таким як хірургічне клад, заявку серійний номер 11/133419, подану 18 втручання і/або лікування іншими антипроліфератравня 2005, одночасно розглянуту заявку серійтивними агентами, включаючи, наприклад, 5ний номер_______, за назвою "Стереоізомерно фторурацил, вінорелбін, таксол, вінбластин, циспзбагачені β-лактами з використанням Candida латин, топотекан і т.д., включені в значення " теAntarctica", подану одночасно з даною заявкою рапевтично ефективна кількість". (ідентифіковану патентним повіреним під номером "Профілактично ефективна кількість" відно375462-030US) і Міжнародну заявку № ситься до кількості сполуки, достатньої для попеPCT/US05/17470, подану 18 травня 2005, і пріориредження розвитку зазначеного порушення або тетні заявки, на які посилаються там]: захворювання в об'єкта. Звичайно об'єкти, для яких практикують профілактику, не страждають зазначеним порушенням або захворюванням, але розпізнані як такі, що володіють підвищеним ризиком розвитку даного захворювання або порушення на підставі факторів, таких як, але не обмежених ними, діагностичні маркери і родовід. 6.2 Стереоізомерно збагачені і стереоізомерно чисті сполуки Фахівцям у даній області техніки буде зрозуміНедавно було виявлено, що деякі N4-(3ло, що в структурній формулі (І) стереохімія при амінокарбоніл біцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-N2атомах вуглецю 1, 2, 3 і 4 не зазначена, так що заміщені сполуки феніл-2,4-піримідиндіаміну, сполуки структурної формули (І) включають вісім представлені структурною формулою (І) нижче, є діастереомерів, проілюстрованих структурними ефективними інгібіторами активності Aurora-кіназ і формулами (la)-(lh) нижче: проліферації пухлинних клітин in vitro [див., напри Сполуки структурної формули (І) також включають два цис-рацемата, представлені структурними формулами (IIа) і (lIb), і два транс-рацемата, представлені структурними формулами (ІІІа) і (ІІІb) нижче: 21 Цис-рацемат структурної формули (IIа) може відноситися до 2-екзо-3-екзо рацемата і включає (1R,2R,3S,4S) і (1S,2S,3R,4R) діастереомери структурних формул (Іа) і (Іb), відповідно. Цис-рацемат структурної формули (lIb) може відноситися до 2ендо-3-ендо рацемата і включає (1R,2S,3R,4S) і (1S,2R,3S,4R) діастереомери структурних формул (Іс) і (Id), відповідно. Як описано більш докладно в 5 розділі «Приклади», для сполук, у яких R являє собою фтор, R1 являє собою водень, R2 являє со3 бою 4-метилпіперазин-1-іл і R являє собою метил, ці два цис-рацемата виявляють антипроліферативну активність проти ряду різних пухлинних клітинних ліній в антипроліферативних аналізах in vitro. Однак, цей 2-екзо-3-екзо рацемат (рацемат r1) є приблизно в двадцять разів більш ефективним, ніж відповідний 2-ендо-3-ендо рацемат (рацемат r2) у відношенні всіх клітинних ліній, протестованих з обома рацематами. Крім того, було показано, що (1R,2R,3S,4S) діастереомер рацемати r1 є в значній мірі відповідальним за ефективність рацемата r1. При тестуванні у вигляді ізольованих стереоізомерів цей (1R,2R,3S,4S) діастереомер (позначений як діастереомер "а"), як правило, мав ІК50 у наномолярному діапазоні, тоді як діастереомер (1S,2S,3R,4R) (позначений як енантиомер "b"), як правило, мав ІК50 у мікромолярному діапазоні у відношенні тих же клітинних ліній. Таким чином, у цілому (1R,2R,3S,4S) діастереомері ці сполуки є, як правило, у 1000 разів більш ефективними, ніж його відповідний (1S,2S,3R,4R) енантиомер. Він також є приблизно в 20-50 разів більш ефективним, ніж його відповідний 2-ендо-3-ендо r2 рацемат у проаналізованих клітинних лініях. (1R,2R,3S,4S) діастереомер виявляв подібним чином кращі результати в порівнянні з його (1S,2S,3R,4R) енантиомером в аналізах інгібування на клітинній основі проти кінази Aurora В. На підставі ефективності цього (1R,2R,3S,4S) діастереомеру, що спостерігається, очікують, що повний діапазон (1R,2R,3S,4S) діастереомерів у відповідності зі структурною формулою (Іа) буде виявляти подібним чином велику ефективність у порівнянні з їхніми відповідними (1S,2S,3R,4R) енантиомерами, 2-екзо-3-екзо ра 88660 22 цематами, 2-ендо-3-ендо рацематами й іншими відповідними діастереомерами. Відповідно, тут запропоновані сполуки, що збагачені цим особливо ефективним (1R,2R,3S,4S) діастереомером. В одному втіленні такі стереоізомерно збагачені сполуки включають сполуки відповідно до структурної формули (І): які є збагаченими відповідним діастереомером структурної формули (Іа): де: 1 кожен R незалежно обраний із групи, що складається з водню, нижчого алкілу, -(СН2)nОН, a a b a OR , -O(CH2)n-R , -O(CH2)n-R , -C(O)OR , галогену, -CF3 і -OCF3; 2 кожен R незалежно обраний із групи, що складається з водню, нижчого алкілу, -ORa, a b a O(CH2)nR , -O(CH2)n-R , -NHC(O)R , галогену, -CF3, -OCF3, і кожен R3 незалежно обраний із групи, що складається з водню, нижчого алкілу, -(CH2)n-OH, _ORa, -O(CH2)n-Ra, -O(CH2)n-Rb, галогену, -CF3, OCF3, , , i ; 23 88660 24 кожен R4 незалежно обраний із групи, що приблизно 95% або більше бажаного стереоізомера, називають тут "власне кажучи чистими" стескладається з водню, нижчого алкілу, арилалкілу, a c c a a c c реоізомерами. Стереоізомерно збагачені сполуки, OR , -NR R , -C(O)R , -C(O)OR i -C(O)NR R ; R5 являє собою водень, галоген, фтор, -CN, що містять приблизно 99% або більше бажаного a стереоізомера, називають тут "чистими" стереоNO2, -C(O)OR або -CF3; кожен n незалежно являє собою ціле число від ізомерами. Чистоту будь-якої стереоізомерно зба1 до 3; гаченої сполуки (діастереоізомерну чистоту; %ди) кожен Ra незалежно обраний із групи, що можна підтвердити, використовуючи загальноприйняті аналітичні способи, як буде більше доскладається з водню, нижчого алкілу і нижчого кладно описано нижче. циклоалкілу; b У деяких втіленнях різних стереоізомерно збакожен R незалежно обраний із групи, що складається з -ORa, -CF3, -OCF3, -NRcRc, -C(O)Ra, гачених сполук, описаних тут, R1 являє собою воa c c a d C(O)OR , -C(O)NR R і -C(O)NR R ; c кожен R незалежно обраний із групи, що день; R2 являє собою або і R3 складається з водню і нижчого алкілу, або альтернативно два замісники Rc можуть разом з атомом є іншим, ніж , або . В азоту, з яким вони пов'язані, утворювати 4-9інших втіленнях різних стереоізомерно збагачених членне насичене кільце, що можливо включає 1-2 3 a сполук, описаних тут, R являє собою водень, медодаткові гетероатомні групи, обрані з О, NR , a a a a a a тил, метокси, трифторметил або хлор. В інших же NR -C(O)R , NR -C(O)OR i NR -C(O)NR і 4 d втіленнях R являє собою метил, -С(О)СН3, кожен R незалежно являє собою нижчий моС(О)ОСН3 або -С(О)ОСН2СН3. ногідроксиалкіл або нижчий дигідроксиалкіл. В інших втіленнях різних стереоізомерно збаВ іншому втіленні такі стереоізомерно збага1 гачених сполук, описаних тут, R являє собою вочені сполуки включають 2-екзо-3-екзо цисрацемати у відповідності зі структурною формудень, R2 є іншим, ніж або і R3 лою (IIа), де R1, R2, R3, R4 і R5 є такими, як визнаявляє чено вище для структурної формули (І), що є зба. гаченими діастереомером структурної формули (Іа). Як використано тут, сполука є "збагаченим" собою , або . Ще в конкретним діастереомером, коли цей діастерео2 інших втіленнях R являє собою водень, метил, мер є присутнім у надлишку в порівнянні з будьметокси, трифторметил або хлор. Переважно R4 яким іншим діастереомером, що є присутнім у являє собою метил, -С(О)СН3, -С(О)ОСН3 або сполуці. Даний відсоток конкретного діастереомеС(О)СН2СН3. ру, що складає сполуку, буде залежати від числа В інших втіленнях різних стереоізомерно збаінших присутніх діастереомерів. Як конкретний гачених сполук, описаних тут, приклад, рацемична суміш є "збагаченою" зазначеним енантиомером, коли цей енантиомер склаR2 є іншим, ніж або і R3 є дає більше ніж 50% цієї суміші. Незалежно від числа присутніх діастереомерів сполуки, що є збагаченою конкретним діастереомером, буде іншим, ніж , або . Ще в 1 2 звичайно містити, щонайменше, приблизно 60%, інших втіленнях R і R кожний являє собою во70%, 80%, 90% або навіть більше зазначеного день і R3 являє собою -OCH2NHR3. У деяких інших 1 2 3 діастереомеру. Кількість збагачення конкретним втіленнях R , R і R кожен незалежно від іншого діастереомером можна підтвердити, використовуобраний із групи, що складається з водню, метилу, ючи загальноприйняті аналітичні способи, рутинно метокси, трифторметила і хлору, за умови, що, використовувані фахівцями в даній області техніщонайменше, два з R1, R2 і R3 є іншими, ніж воки, як буде більш докладно обговорюватися ниждень. 1 че. Ще в інших втіленнях R являє собою водень, 2 В іншому втіленні стереоізомерно збагачені R обраний із групи, що складається з водню, сполуки включають сполуки у відповідності зі стру1 2 3 4 5 ктурною формулою (Іа), вище, де R , R , R , R і R і і R3 обраний із групи, що є такими, як визначено вище для структурної фоскладається з водню, нижчого алкілу, галогену, рмули (І), що є, власне кажучи, вільними від відповідного енантиомера і/або будь-якого іншого відCF3, і . Ще в інших втіленнях повідного діастереомеру. Під "власне кажучи R3 обраний із групи, що складається з водню, мевільним" мають на увазі, що сполука містить менше приблизно 10% небажаних діастереомерів тилу, хлору, -CF3, і , a R4 являє і/або енантиомерів, як установлено з використанa a собою метил, -COR або -CO(O)R , де Ra являє ням загальноприйнятих аналітичних способів, русобою метил або етил. Ще в одному втіленні R2 тинно використовуваних фахівцями в даній обласобраний із групи, що складається з водню, ті техніки (обговорюються більш докладно нижче). У деяких втіленнях кількість небажаних стереоізомерів може бути менше 10%, наприклад, 9%, 8%, і і R3 обраний із групи, що 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% або навіть менше. складається з водню, нижчого алкілу, галогену, Стереоізомерно збагачені сполуки, що містять 25 88660 26 раний із групи, що складається з водню, метилу, 3 хлору і -CF3. Більш переважно R являє собою CF3, і . Ще в інших втіленнях 3 метил. R обраний із групи, що складається з водню, меЩе в інших втіленнях різних стереоізомерно 5 4 збагачених сполук, описаних тут, R являє собою тилу, хлору, -CF3, і і R являє a a a фтор. собою метил, -COR або -CO(O)R , де R являє 2 Ще в інших втіленнях стереоізомерно збагачесобою метил або етил. Переважно R являє собою на сполука являє собою власне кажучи, стереоізомерно чистий або стереоізомерно чистий , R4 являє собою -CORa, де Ra являє (1R,2R,3S,4S)-N4-(33 собою метил; і R являє собою водень. В інших амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,42 4 , R являє втіленнях R являє собою піримідиндіамін. a a 3 собою -CO(O)R , де R являє собою етил, і R явДодаткові зразкові втілення сполук у відповід2 ляє собою водень. Ще в одному іншому втіленні R ності зі структурною формулою (І), що можуть бути стереоізомерно збагаченими відповідним діастеявляє собою і R3 являє собою водень. реомером приведеної вище структурної формули 2 Ще в одному втіленні R являє собою водень; (Іа), власне кажучи вільними від їхніх будь-яких енантиомерів і/або діастереомерів, і/або власне R3 являє собою або ; і R4 явкажучи чистими або чистими по діастереомеру a a ляє собою метил, -COR або -CO(O)R , де Ra явприведеної вище структурній формули (Іа), про2 ляє собою метил або етил. Переважно R являє ілюстровані нижче в Таблиці 1. собою , R4 являє собою метил і R3 об 27 Коли зазначені конкретні діастереомери і/або рацемічні суміші конкретних сполук, описаних тут, таких як сполуки, описані в Таблиці 1, за номером сполуки випливає літера, що позначає конкретний діастереомер або рацемичну суміш, як описано нижче: a=(1R,2R,3S,4S) b=(1S,2S,3R,4R) c=(1R,2S,3R,4S) d=(1S,2R,3S,4R) e=(1R,2R,3R,4S) f=(1S,2S,3S,4R) g=(1R,2S,3S,4S) h=(1S,2R,3R,4R) r1=2-екзо-3-екзо цис-рацемат r2=2-ендо-3-ендо цис-рацемат r3= 2-екзо-3-ендо транс-рацемат r4=2-ендо-3-екзо транс-рацемат. Таким чином, як конкретний приклад (1R,2R,3S,4S) діастереомер сполуки 60 називають сполукою 60а. Фахівцям у даній області техніки буде зрозуміло, що стереоізомерно збагачені сполуки, описані тут, можуть включати функціональні групи, що можуть бути замасковані прогрупами з утворенням проліків. Такі проліки звичайно, але не обов'язково, є фармакологічно неактивними до перетворення їх у форму активних ліків. Наприклад, ефірні групи звичайно перетерплюють каталізуємий кислотою гідроліз з одержанням вихідної карбонової кислоти під дією кислих умов шлунка, або каталізуємий основою гідроліз під дією основних умов тонкого кишечнику або крові. Таким чином, при пероральному введенні пацієнту стереоізомерно збагачені сполуки, що включають ефірні угруповання, можна вважати проліки їхньої відповідної карбонової кислоти незалежно від того, чи є ефірна форма фармакологічно активною. В об'єм винаходу включені проліки різних стереоізомерно збагачених сполук, описаних тут. У таких проліках будь-яке доступне функціональне угруповання може бути замасковане прогрупой з 88660 28 утворенням проліків. Функціональні групи усередині стереоізомерно збагачених сполук, описаних тут, що можуть бути замасковані прогрупами для включення в прогрупування, включають, але не обмежені ними, аміни (первинні і вторинні), гідроксили, сульфаніли (тіоли), карбоксили і т.д. Безліч прогруп, придатних для маскування таких функціональних груп з утворенням прогрупувань, що розщеплюються в конкретних умовах застосування, відомо в даній області техніки. Усі ці прогрупи, окремо або в поєднаннях, можна включати в стереоізомерно збагачені проліки за винаходом. В одному ілюстративному втіленні стереоізомерно збагачені проліки являють собою сполуки у відповідності зі структурною формулою (І), у яких a b c R , R і R можуть являти собою, на додаток до їхніх визначених вище альтернативам, прогрупу, що є збагаченою відповідним діастереомером приведеної вище структурної формули (Іа). Фахівцям у даній області техніки буде зрозуміло, що багато із сполук і проліків, описаних тут, а також різні види сполук, конкретно описані і/або проілюстровані тут, можуть виявляти таутомерію і конформаційну ізомерію. Наприклад, сполуки і проліки можуть існувати в декількох таутомерних формах, включаючи енольну форму, кетоформу та їхні суміші. Оскільки назви різних сполук, формули і зображення сполук у межах опису і формули винаходу можуть представляти тільки одну із можливих таутомерних або конформаційних форм, повинно бути зрозумілим, що винахід охоплює будь-які таутомери або конформаційні ізомери сполук або проліків, що мають одну або більше ніж одну із властивостей, описаних тут, а також суміші цих різноманітних різних таутомерних форм. У випадках обмеженого обертання навколо структури ядра 2,4-піримідиндіаміну також можливі атропоізомери, і вони також конкретно включені до сполуки і/або проліків за винаходом. У залежності від природи різних замісників стереоізомерно збагачені сполуки і проліки можуть знаходитися у формі солей. Такі солі включають 29 88660 30 солі, придатні для фармацевтичних застосувань Фармацевтично прийнятні солі також включа("фармацевтично прийнятні солі"), солі, придатні ють солі, утворені, коли кислотний протон, що є для ветеринарних цілей і т.д. Такі солі можуть бути присутнім у вихідній сполуці, або заміщений іоном утворені з кислот або основ, як добре відомо в металу (наприклад, іоном лужного металу, іоном даній області техніки. лужноземельного металу або іоном алюмінію), або У деяких втіленнях сіль являє собою фармавзаємодіє з органічною основою (наприклад, етацевтично прийнятну сіль. У цілому фармацевтично ноламіном, діетаноламіном, триетаноламіном, Nприйнятні солі являють собою ті солі, що зберігаметилглюкаміном, морфоліном, піперидином, диють, власне кажучи, одну або більше ніж одну із метиламіном, диетиламіном і т.д.). бажаних фармакологічних активностей вихідної Як стереоізомерно збагачені сполуки і проліки, сполуки, і які є придатними для введення людям. так і їхні солі можуть також знаходитися у формі Фармацевтично прийнятні солі включають солі гідратів, сольватів і/або N-оксидів, як добре відомо приєднання кислоти, утворені з неорганічними в даній області техніки. Стереоізомерне збагачення і/або чистота спокислотами або з органічними кислотами. Неорганілук і проліків, описаних тут, може бути встановлечні кислоти, придатні для утворення фармацевтина загальноприйнятими аналітичними способами, чно прийнятних солей приєднання кислоти, вклюдобре відомими фахівцям у даній області техніки. чають, для прикладу і без обмеження, Наприклад, використання хіральних реагентів галогеноводневі кислоти (наприклад, соляну кисзрушення ЯМР, газовий хроматографічний аналіз лоту, бромоводневу кислоту, йодоводневу кислоту із використанням хіральних колонок, рідинний і т.д), сірчану кислоту, азотну кислоту, фосфорну хроматографічний аналіз високого тиску з викорикислоту і т.п. Органічні кислоти, придатні для утвостанням хіральних колонок, утворення діастереорення фармацевтично прийнятних солей приєдмерних похідних за допомогою взаємодії з хіральнання кислоти, включають, для прикладу і без обними реагентами і загальноприйнятий аналіз меження, оцтову кислоту, трифтороцтову кислоту, можна використовувати для встановлення стереопропіонову кислоту, гексанову кислоту, циклопенізомерного збагачення і/або чистоти конкретного танпропіонову кислоту, гликолеву кислоту, щавлестереоізомеру. Альтернативно, синтез з викорисву кислоту, піровиноградну кислоту, молочну кистанням вихідних речовин відомого стереоізомерлоту, малонову кислоту, бурштинову кислоту, ного збагачення і/або чистоти можна використовуяблучну кислоту, малеїнову кислоту, фумарову вати для встановлення стереоізомерного кислоту, винну кислоту, лимонну кислоту, пальмізбагачення і/або чистоти сполук, описаних тут. тинову кислоту, бензойну кислоту, 3-(4Інші аналітичні способи для демонстрації стереогідроксибензоіл)бензойну кислоту, коричну кислоізомерної однорідності входять у межі компетенції ту, мигдальну кислоту, алкілсульфонові кислоти фахівця в даній області техніки. (наприклад, метансульфонову кислоту, етансуль6.3 Способи синтезу фонову кислоту, 1,2-етан-дисульфонову кислоту, Стереоізомерно збагачені сполуки і проліки 2-гідроксиетансульфонову кислоту і т. д.), арилсуможна синтезувати за допомогою ряду різних схем льфонові кислоти (наприклад, бензолсульфонову синтезу, використовуючи наявні у продажу вихідні кислоту, 4-хлорбензолсульфонову кислоту, 2речовини і/або вихідні речовини, отримані загальнафталінсульфонову кислоту, 4ноприйнятими способами синтезу. Ряд зразкових толуолсульфонову кислоту, камфорсульфонову схем синтезу, які можна використовувати для синкислоту і т.д.), 4-метилбіцикло[2.2.2]-окт-2-ен-1тезу стереоізомерно збагачених сполук і проліків, карбонову кислоту, глюкогептонову кислоту, 3описаний у WO 03/063794 і US 2004/0029902, опис фенілпропіонову кислоту, триметилоцтову кислояких включено тут шляхом посилання. ту, трет-бутилоцтову кислоту, лаурилсірчану кисЗ метою ілюстрації зразкова схема синтезу, лоту, глюконову кислоту, глутамінову кислоту, гідяку можна використовувати для синтезу повного роксинафтойну кислоту, саліцилову кислоту, спектра сполук, описаних тут, проілюстрована нистеаринову кислоту, муконову кислоту і т.п. жче на Схемі (І): 31 На Схемі (І) R1, R2, R3 і R5 є такими, як визначено вище для структурної формули (І), X являє собою галоген (наприклад, F, СІ, Br або І), і кожен G незалежно від іншого обраний із О і S. Слід зазначити, що "*" в амінокарбоксаміді 6 показує, що конкретний стереоцентр не зазначено. Відповідно, фахівцям у даній області техніки буде зрозуміло, що Схему (І) можна використовувати для одержання рацемічних діастереомерних сумішей, діастереомерно збагачених сумішей сполук відповідно до структурної формули (І), а також стереоізомерів сполук структурної формули (І), що є, власне кажучи, вільними від інших зазначених діастереомерів. Посилаючись на Схему (І), урацил або тіоурацил 2 дигалогенують у положеннях 2 і 4, використовуючи стандартний галогенуючий агент РОХ3 (або інші галогенуючі агенти) у стандартних умовах з одержанням 2,4-біс-галогенопіримідину 4. Галогенід у положенні С4 є в більшому ступені реактивним стосовно нуклеофілів, ніж галогенід у положенні С2 у піримідині 4. Цю диференціальну реактивність можна використовувати, щоб синтезувати сполуки і проліки, описані тут, спочатку шляхом взаємодії 2,4-біс-галогенопіримідину 4 з одним еквівалентом 2-амінобіцикло[2.2.1]гепт-5ен-3-карбоксамідом 6 з одержанням 8 з наступною взаємодією з аніліном 10 з одержанням сполук відповідно до структурної формули (І). Фахівцям у даній області техніки буде зрозумілим, що стереоізомерна конфігурація й оптична чистота амінокарбоксаміду 6 буде в більшості випадків визначати стереоізомерну конфігурацію й оптичну чистоту сполук структурної формули (І). 88660 32 У більшості ситуацій С4 галогенід є в більшому ступені реактивним стосовно нуклеофів, як проілюстровано на Схемі. Однак, як буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, ідентичність за5 місника R може змінити цю реактивність. Напри5 клад, коли R являє собою трифторметил, одержують суміш 50:50 4N-заміщеного-4піримідинаміну 8 і відповідного 2N-заміщеного-2піримідинаміну. Незалежно від ідентичності заміс5 ника R регіоселективність реакції можна контролювати шляхом регуляції розчинника й інших умов синтезу (таких як температура), як добре відомо в даній області техніки. Реакції, зображені на Схемі (І), можуть протікати швидше, коли реакційні суміші нагрівають за допомогою мікрохвильової печі. При нагріванні таким способом можна використовувати нижчеописані умови: нагрівання до 175°С у етанолі протягом 5-20хв. у Smith Reactor (Personal Chemistry, Biotage AB, Sweden) у герметично закритій пробірці (при тиску 20Бар). Вихідні речовини урацил і тіоурацил 2 можна купувати або одержувати, використовуючи стандартні методики органічної хімії. Наявні у продажу урацил і тіоурацил, які можна використовувати як вихідні речовини в Схемі (І) включають, шляхом прикладу і без обмеження, урацил (Aldrich #130788; CAS Registry 66-22-8); 2-тіо-урацил (Aldrich #11558-4; CAS Registry 141-90-2); 2,4-дитіоурацил (Aldrich #15846-1; CAS Registry 2001-93-6); 5бромурацилІ (Aldrich #85247-3; CAS Registry 51-207; 5-фторурацил (Aldrich #85847-1; CAS Registry 51-21-8); 5-йодоурацил (Aldrich #85785-8; CAS Registry 696-07-1); 5-нітроурацил (Aldrich #85276-7; 33 88660 34 CAS Registry 611-08-5); 5-(трифторметил)-урацил приєднання і видалення можна знайти, наприклад, (Aldrich #22327-1; CAS Registry 54-20-6). Додаткові у Greene & Wuts, Protective Groups in Organic 5-заміщені урацили і/або тіоурацили є у продажу Synthesis, 3d Edition, John Wiley & Sons, Inc., New від General Intermediates of Canada, Inc., York (1999) і в цитируемих там посиланнях (тут Edmonton, CA (http://www.generalintermediates.com) далі "Greene & Wuts"). і/або Interchim, Cedex, France Проліки, як описано тут, можуть бути отримані (http://www.interchim.com), або можуть бути отришляхом рутинної модифікації вищеописаних спомані з використанням стандартних методик. Безліч собів. посилань на підручники, що навчають придатним Як буде зрозуміло фахівцям у даній області способам синтезу, приведено нижче. техніки, бажаний (1R,2R,3S,4S) діастереомер, що Аніліни 10 можна купувати або можна синтевідповідає приведеній вище структурній формулі зувати, використовуючи стандартні методики. На(Іа), можна виділити шляхом хірального поділу або приклад, аніліни, які підходять, можна синтезувати інших стандартних методик. Способи хірального з нітропопередників, використовуючи стандартні поділу конкретних діастереомерів більш докладно хімічні методи. Конкретні зразкові реакції приведеописані в розділі «Приклади». ні в розділі «Приклади». Див. також Vogel, 1989, Стереоізомерно збагачені сполуки і/або, власPractical Organic Chemistry, Addison Wesley не кажучи, чисті і/або чисті діастереомери можна Longman, Ltd. і John Wiley & Sons, Inc. також синтезувати з 2-аміно-3-карбоксамідних виФахівцям у даній області техніки буде зрозуміхідних речовин 6, що володіють специфічною стело, що в деяких випадках аніліни 10 можуть вклюреохімією, або за допомогою хіральних допоміжчати функціональні групи, що вимагають захисту в них речовин. процесі синтезу. Точна ідентифікація будь-якої В одному зразковому втіленні, проілюстровавикористовуваної захисної групи (груп) буде заленому нижче на Схемі (II), бажаний діастереомер жати від ідентифікації функціональної групи, що розділяють хімічним шляхом, використовуючи (R)підлягає захисту, і буде очевидна фахівцям у даній метил-пара-метоксибензиламін 18 у якості хіральобласті техніки. Посібник з вибору придатних заного допоміжної речовини. хисних груп, а також стратегії синтезу для їхнього На Схемі (II) 2-екзо-3-екзо рацемічний βлактам 14М [отриманий, як описано Stajar et al., 1984, Tetrahedron 40(12): 2385] захищають групою Вос з одержанням відповідного рацемічного Восзахищеного β-лактаму 16М. Потім Вос-захищений рацемат 16М піддають взаємодії з (R)-метил-пара метоксибензиламіном 18 з одержанням суміші діастереомерів 20а і 20b. Цю діастереомерну суміш обробляють кислотою, такий як ТФО (трифтороцтова кислота), з відщіпленням групи Вос з одержанням суміші діастереомерів 22а і 22b, яку можна піддати взаємодії з 2,4 35 88660 36 дігалогенопіримідином 4 з одержанням рацемічної каталогу L4777), як описано Еnіkо et al., 2004, суміші сполук 24а і 24b. На цій стадії сполуки 24а і Tetrahedron Asymmetry 15: 573-575. В іншому зраз24b можна відокремити одна від одної шляхом ковому втіленні (власне кажучи) стереоізомерно кристалізації і піддати взаємодії з аніліном 10 з чисті β-лактами можна розділити і виділити з 2одержанням ізольованих діастереомерів 25а і 25b. екзо-3-екзо Вос-захищеного рацемічного βПотім хіральні допоміжні речовини з ізольованих лактаму 16М, використовуючи іммобілізований на діастереомерів 25а і 25b можна відокремити з смолі хіразим L-2-тип Б, фермент c.f. (Candida одержанням ізольованих діастереомерів відповідantarctica тип Б, c-f, що випускається Biocatalytics, но до структурних формул (Іа) і (Іb), відповідно. Inc., Pasadena, CA), як описано в заявці серійний Для сполук 25а і 25b, у яких R1 являє собою номер 60/628401, поданої 15 листопада 2004, спі2 3 водень, R являє собою 4-метил-піперазин-1-іл, R льно поданій заявці серійний номер 11/133419, являє собою метил і R5 являє собою фтор, відщіпподаної 18 травня 2005, і в Міжнародній заявці № лення хіральної допоміжної речовини виявилося PCT/US05/17470, поданої 18 травня 2005, і в одважким. Для цих та інших сполук, де таке відокреночасно розглянутій заявці серійний номер____ за млення виявляється важким, хіральну допоміжну назвою "Стереоізомерно збагачені β-лактами з речовину можна відокремити від сполук 24а і 24b, і використанням Candida Antarctica", поданої одноотримані в результаті ізольовані сполуки піддати часно з даною заявкою (ідентифіковану патентним взаємодії з аніліном 10 з одержанням ізольованих повіреним під номером 375462-030US), опис якої діастереомерів у відповідності зі структурними включено тут шляхом посилання. Конкретний приформулами (Іа) і (Іb). Конкретні приклади таких клад використання цього ферменту для поділу реакцій описані в розділі «Приклади». зазначених діастереомерів β-лактамів описаний у Сполуки, що є стереоізомерно збагаченими, розділі «Приклади», як і спосіб синтезу 2-екзо-3власне кажучи, стереоізомерно чистими і/або стеекзо рацемічного β-лактаму 16М. реоізомерно чистими за зазначеними діастереоПриклади синтезу зазначених діастереомерів мерами, можна також синтезувати зі стереоізомеу відповідності зі структурною формулою (Іа) з рно збагачених, власне кажучи, стереоізомерно використанням ферментативних реакцій проілюсчистих і/або стереоізомерно чистих β-лактамів. тровані нижче на Схемах (III) і (IV). Конкретний Такі стереоізомерно збагачені і/або (власне кажуприклад використання ферменту новозим 435, як чи) стереоізомерно чисті β-лактами можна роздіпроілюстровано на Схемі (IV), що подібно фермелити ферментативним шляхом і виділити. В однонту хіразиму, згаданому вище і проілюстрованому му зразковому втіленні (власне кажучи) на Схемі (III) можна використовувати для поділу стереоізомерно чисті β-лактами можна розділити і енантиомерів з рацемических β-лактамів, описавиділити із рацемичної суміші 2-екзо-3-екзо βних у розділі «Приклади». лактаму 14М, використовуючи іммобілізовану ліполазу (доступну від Sigma Chemical Co., № по 37 6.4 Активність антипроліферативних сполук Активні стереоізомерно збагачені сполуки звичайно інгібують проліферацію бажаних клітин, таких як пухлинні клітини, з ІК50 у діапазоні приблизно 20мкМ або менше, якобмірювано в стандартному аналізі клітинної проліферації in vitro. Звичайно, фахівцям у даній області техніки буде зрозуміло, що сполуки, які виявляють більш низькі значення ІК50, наприклад, порядку 10мкМ, 1мкМ, 100нМ, 10нМ, 1нМ або навіть нижче, можуть бути особливо придатними для терапії. Антипроліферативна активність може бути цитостатичною, або вона може бути цитотоксичною. У випадках, де бажана антипроліферативна активність, специфічна для конкретного типу клітин, сполуки можна аналізувати на активність з бажаним типом клітин і піддавати контр-скринінгу на відсутність активності проти інших типів клітин Бажаний ступінь "неактивності" у таких контр-скринінгах або бажане відношення активності до неактивності може варіювати для різних ситуацій і може бути обрано користувачем. Активні сполуки також звичайно інгібують активність Aurora-кінази з ІК50 у діапазоні приблизно 20мкМ або менше, звичайно в діапазоні приблизно 10мкМ, 1мкМ, 100нМ, 10нМ, 1нМ або навіть нижче. ІК50 для Aurora-кінази можна визначити в стандартному аналізі in vitro з ізольованої Aurora-кіназою або у функціональному клітинному аналізі. Придатний ферментативний аналіз, якому можна використовувати для визначення ступеня активності Aurora-кінази, описаний у Fox et al., 1998, Protein Sci. 7: 2249-2255. Пептидну послідовність Kemptide LRRASLG (Bochern Ltd., UK) можна використовувати для Aurora-кінази-А, Aurora-кінази-В і/або Aurora-кінази-С, і реакції можна проводити при 30°C у розчині, що містить 100мМ Hepes (ρ 7,5), 10мМ MgCI2, 25мМ NaCI, 1мМ ДТТ. Значення ІК50 можна визначити, використовуючи нелінійну регресію в наявному у продажі програмному забезпеченні (наприклад, Prism 3,0, GraphPed Software, San Diego, CA). Придатний функціональний аналіз на клітинній основі описаний у розділі «Приклади». 6.5 Застосування антипроліферативних сполук Активні стереоізомерно збагачені сполуки, включаючи їхні різні проліки, солі, гідрати і/або Nоксидні форми, можна застосовувати для інгібу 88660 38 вання Aurora-кіназ, процесів, опосередкованих Aurora-кіназами, і/або клітинної проліферації в ряді випадків. Відповідно до деяких втілень клітину або популяцію клітин обробляють кількістю такої сполуки, ефективної для інгібування активності Aurora-кінази, процесів, опосередкованих Auroraкіназами, і/або проліферації клітини або клітинної популяції. При застосуванні для інгібування клітинної проліферації сполука може діяти цитотоксичним шляхом, убиваючи клітину, або цитостатичним шляхом, інгібуючи проліферацію, але не приводячи до загибелі клітини. У деяких втіленнях ці способи можна практикувати in vivo як терапевтичний підхід до лікування або попередження захворювань або порушень, опосередкованих Aurora-кіназами, і при конкретних проліферативних порушеннях. Таким чином, у конкретному втіленні, стереоізомерно збагачені сполуки, описані тут (а також їхні різні форми, описані тут), можна застосовувати для лікування або попередження проліферативних порушень у тварин, включаючи людей. Цей спосіб у цілому включає введення об'єкту кількості стереоізомерно збагаченої сполуки або її проліків, солі, гідрату або Nоксиду, ефективного для лікування або попередження цього порушення. В одному втіленні об'єкт являє собою ссавця, включаючи, але не обмежуючи ними, велику рогату худобу, коней, кішок, собак, гризунів або приматів. В іншому втіленні об'єкт являє собою людину. Ряд клітинних проліферативних порушень можна лікувати або попереджати сполуками, описаними тут. У деяких втіленнях ці сполуки застосовують для лікування різних раків в уражених об'єктів. Раки звичайно класифікують на основі тканини і типу клітин, від яких утворюються ракові клітини. Карціноми вважають раками, що виникли з епітеліальних клітин, тоді як саркоми вважають раками, що виникли зі сполучних тканин або м'язів. Інші типи раку включають лейкози, що виникають з гематопоетичних клітин, і раки клітин нервової системи, що виникають з нервової тканини. У якості неінвазивних пухлин розглядають аденоми, доброякісні епітеліальні пухлини із залозистою організацією, тоді як хондроми являють собою доброякісні пухлини, що виникають із хряща. У даному винаході описані сполуки, які можна застосовувати для лікування проліферативних розладів, 39 88660 40 що охоплюють карциноми, саркоми, лейкози, пухвидної залози включають рак щитовидної залози, лини нервових клітин і неінвазивні пухлини. тимому і злоякісну тимому; о) саркоми включають, У конкретному втіленні ці сполуки застосовуале не обмежені ними, маркому м'яких тканин, ють для лікування солідних пухлин, що виникають остеосаркому, злоякісну фіброзну гістіоцитому, з різних типів тканин, включаючи, але не обмежулімфосаркому і рабдоміосаркому. ючи ними, раки кістки, молочної залози, шлунковоПовинно бути зрозуміло, що описи проліферакишкового тракту, головного мозку, репродуктивтивних порушень не обмежені станами, описаними них органів, травного тракту, сечових шляхів, севище, але охоплюють інші порушення, що характеризуються неконтрольованим ростом і злоякіснічового міхура, ока, печінки, шкіри, голови, шиї, стю. Крім того, зрозуміло, що проліферативні пощитовидної залози, паращитовидної залози, нирушення включають різні метастатичні форми рок, підшлункової залози, крові, яєчника, ободової описаних тут типів пухлин і раків. Сполуки за дакишки, зародкових клітин/простати, та їхні метаним винаходом можна тестувати на ефективність статичні форми. проти порушень, описаних тут, і установити тераКонкретні проліферативні порушення включапевтично ефективний режим. Ефективність, як ють приведені нижче: а) проліферативні порушендодатково описано нижче, включає зменшення ня молочної залози включають, але не обмежені або ремісію пухлини, зниження швидкості клітинної ними, інвазивний внутрішньопротоковий рак, інвапроліферації, або цитостатичний або цитотоксичзивний часточковий рак, внутрішньопротоковий ний ефект у відношенні клітинного росту. рак, часточковий рак in situ і метастатичний рак 6.6 Комбіновані терапії молочної залози; б) проліферативні порушення шкіри включають, але не обмежені ними, базальСтереоізомерно збагачені сполуки, описані но-клітинну епітеліому, плоскоклітинний рак, злотут, можна застосовувати окремо, у комбінації одна з одною або як доповнення або поєднання з якісну меланому і саркому Капоші; в) проліфераіншими встановленими антипроліферативними тивні порушення дихальних шляхів включають, терапіями. Таким чином, ці сполуки можна застоале не обмежені ними, дрібноклітинний і не дрібсовувати з традиційними терапіями раку, такими ноклітинний рак легені, набряк бронха, плевролегенву бластему і злоякісну мезотеліому, г) проліяк іонізуюче випромінювання у формі γ-променів і феративні порушення головного мозку включають, рентгенівських променів зовні або усередині при але не обмежені ними, гліому стовбура головного імплантації радіоактивних сполук, а також як намозку і гіпоталамуса, мозочкову і церебральну ступне лікування після хірургічного видалення пуастроцитому, медуллобластому, пухлини епендихлини. ми, олігодендрогліому, менінгіоми і пухлини нейВ іншому аспекті ці сполуки можна застосовуроектодерми й епіфізу; д) проліферативні порувати з іншими хіміотерапевтичними агентами, шення чоловічих статевих органів включають, але придатними для порушення або стану, що підляне обмежені ними, рак простати, рак яєчка і рак гає лікуванню. Ці сполуки можна вводити одночасполового члена; e) проліферативні порушення но, послідовно, таким же шляхом або введення жіночих статевих органів включають, але не обіншим шляхом. межені ними, рак матки (ендометрія), раки шийки У деяких втіленнях дані сполуки застосовують матки, яєчника, піхви, вульви, саркому матки, ембіз іншими протираковими або цитотоксичними агеріонально-клітинну пухлину яєчника) проліфератинтами. Різні класи протиракових і протипухлинних вні порушення травного тракту включають, але не сполук включають, але не обмежені ними, алкілуобмежені ними, анальний рак, рак ободової кишки, ючі агенти, антиметаболіти, алкалоїди барвінка ободової і прямої кишки, стравоходу, жовчного малого, таксани, антибіотики, ферменти, цитокіни, міхура, шлунку (шлунковий), підшлункової залози, координовані комплекси платини, заміщені сечоінсулому, рак прямої кишки, тонкого кишечнику і вини, інгібітори тирозинкінази, гормони й антагоніслинної залози; з) проліферативні порушення пести гормонів. Зразкові алкілуючі агенти включачінки включають, але не обмежені ними, печінкоють, як приклад і без обмеження, мехлоротамін, во-клітинний рак, холангіокарциному, змішану пециклофосфамід, іфосфамід, мелфалан, хлорамчінково-клітинну холангіокарциному і первинний буцил, етиленіміни, метилмеламіни, алкілсульфорак печінки; і) проліферативні порушення ока нати (наприклад, бусульфан) і кармустин. Зразкові включають, але не обмежені ними, внутрішньоочантиметаболіти включають, як приклад і без обну меланому, ретинобластому і рабдоміосаркому; меження, аналог фолієвої кислоти метотрексат; к) проліферативні порушення голови і раки вклюаналог піримідину фторурацил, цитозинарабіночають, але не обмежені ними, раки гортані, гіпозид; аналоги пурину меркаптопурин, тіогуанін і фаринксу, носоглотки, ротоглотки і рак губи і поазатіоприн. Зразкові алкалоїди барвінка включарожнини рота, плоскоклітинний рак шиї, ють, як приклад і без обмеження, вінбластин, вінкметастатичний рак біляносової порожнини; л) прористин, паклітаксел і колхіцин. Зразкові антибіотиліферативні порушення типу лімфом включають, ки включають, як приклад і без обмеження, але не обмежені ними, різні Т-клітинні і В-клітинні актиноміцин D, даунорубіцин і блеоміцин. Зразколімфоми, неходжкінську лімфому, Т-клітинну лімвий фермент, ефективний у якості протипухлиннофому шкіри, хвороба Ходжкіна і лімфому центраго агента, включає L-аспарагіназу. Зразкові коорльної нервової системи; м) лейкози включають, диновані сполуки включають, як приклад і без але не обмежені ними, гострий мієлоїдний лейкоз, обмеження, цисплатин і карбоплатин. Зразкові гострий лімфолейкоз, хронічний лімфолейкоз, гормони і сполуки, родинні гормонам, включають, хронічний мієлоїдний лейкоз і злоякісний ретикуяк приклад і без обмеження, адренокортикостероїлоендотеліоз, н) проліферативні порушення щитоди преднізон і дексаметазон; інгібітори ароматази 41 88660 42 аміноглутетимід, форместан і анастрозол; сполуки вигляді розчинів, гелів, мазей, кремів, суспензій і прогестину гідроксипрогестерону капроат, медрокт.д., як добре відомо в даній області техніки. сипрогестерон; і антиестрогені сполуки тамоксиСистемні препарати включають ті, що признафен. чені для введення шляхом ін'єкції, наприклад, підЦі й інші застосовні протиракові сполуки опишкірної, внутрішньовенної, внутршньоім'язової, сані в Merck Index, 13th Ed. (O'Neil M.J. et al., ed) підоболонкової або внутріошньочеревинної ін'єкції, Merck Publishing Group (2001) і в Goodman and а також ті, котрі призначені для черезшкірного, Gilmans The Pharmacological Basis of Therapeutics, черезслизистого, перорального або легеневого 10th Edition, Hardman, J.G. and Limbird, L.E. eds., введення. pg. 1381-1287, McGraw Hill, (1996), причому обидві Застосовні для ін'єкцій препарати включають публікації включені тут шляхом посилання. стерильні суспензії, розчини або емульсії активної Додаткові антипроліферативні сполуки, застосполуки у водяних або масляних носіях. Композисовні в комбінації зі стереоізомерно збагаченими ції можуть також містити агенти для препаратів, сполуками, описаними тут, включають, як приклад такі як суспендуючий, що стабілізує і/або диспергуючий агент. Препарати для ін'єкцій можуть бути і без обмеження, антитіла, спрямовані проти рецепредставлені в стандартній лікарській формі, напторів ростових факторів (наприклад, анти-Her2); приклад, у ампулах або контейнерах багаторазоантитіла для активації Т-клітин (наприклад, антитівих доз, і можуть містити додані консерванти. ла анти-СТLА-4); і цитокіни, такі як інтерферон-α і Альтернативно, ін'єкційний препарат може буінтерферон-γ, інтерлейкин-2 і GM-CSF. ти представлений у порошкоподібній формі для 6.7 Препарати і введення відновлення придатним носієм, включаючи, але не При застосуванні для лікування або попереобмежуючи ними, стерильну апірогенну воду, будження таких захворювань активні сполуки і проліфер, розчин декстрози і т.д., перед застосуванням. ки можна вводити окремо, у вигляді суміші однієї У даному випадку активна сполука(и) може бути або більше ніж однієї активної сполуки, або в сувисушена за допомогою будь-якої відомої в даній міші або в комбінації з іншими агентами, придатобласті техніки методики, такої як ліофілізація, і ними для лікування таких захворювань і/або симпвідновлений перед застосуванням. томів, пов'язаних з такими захворюваннями. Для черезслизистого введення в препараті виАктивні сполуки і проліки можна також вводити в користовують змочувальні агенти, придатні для суміші або в комбінації з агентами, придатними бар'єра, який потрібно проходити. Такі змочувальдля лікування інших порушень або захворювань, ні агенти відомі в даній області техніки. такими як стероїди, мембранні стабілізатори. АкДля перорального введення фармацевтичні тивні сполуки або проліки можна вводити як такі композиції можуть приймати форму, наприклад, або у вигляді фармацевтичних композицій, що коржів, таблеток або капсул, виготовлених загальмістять активні сполуки або проліки. ноприйнятими способами з фармацевтично приФармацевтичні композиції, що містять активні йнятними ексципієнтами, такими як сполучні агенсполуки (або їхні проліки) можна робити шляхом ти (наприклад, пептизований кукурудзяний загальноприйнятих процесів змішування, розчикрохмаль, полівінілпіролідон або гідроксипропілнення, гранулювання, розтирання для одержання метилцелюлоза); наповнювачі (наприклад, лактодраже, емульгування, інкапсуляції, включення або за, мікрокристалічна целюлоза або гідрофосфат ліофілізації. Препарати композицій можна готувати кальцію); агенти, що змащують, (наприклад, стеазагальноприйнятим способом, використовуючи рат магнію, тальк або оксид кремнію); розпушувачі один або більше ніж один фізіологічно прийнятний (наприклад, картопляний крохмаль або крохмаль носій, розріджувач, ексципієнт або допоміжну регліколат натрію); або зволожуючі агенти (напричовину, що сприяють обробці активних сполук до клад, лаурилсульфат натрію, лецитин). Таблетки препаратів і які можна використовувати у фармаможуть бути покриті способами, добре відомими в цевтиці [див. Remington 's Pharmaceutical Sciences, th даній області техніки, наприклад, цукрами, плівка15 Ed., Hoover, J.E. ed., Mack Publishing Co. ми або ентеросолюбильними покриттями. (2003)]. Рідкі препарати для перорального введення Активні сполуки або проліки можна включати у можуть приймати форму, наприклад, еліксирів, фармацевтичні композиції як такі або у формі гідрозчинів, сиропів або суспензій, або вони можуть рату, сольвату, або N-оксиду фармацевтично прибути представлені у вигляді сухого продукту для йнятної солі, як описано раніше. Типово такі солі відновлення водою або іншим придатним розчинкраще розчинні у водяних розчинах, ніж відповідні ником перед застосуванням. Такі рідкі препарати вільні кислоти і основи, але можна також одержуможна готувати загальноприйнятими способами з вати солі, що володіють більш низькою розчиннісфармацевтично прийнятними добавками, такими тю, ніж відповідні вільні кислоти і основи. як суспендуючі агенти (наприклад, сироп сорбітоФармацевтичні композиції можуть приймати лу, похідні целюлози або гідрогенізовані харчові форму, придатну практично для будь-якого спосожири); емульгуючі агенти (наприклад, лецитин або бу введення, включаючи, наприклад, місцевий, аравійська камедь); неводні носії (наприклад, мигочний, пероральний, трансбуккальний, системний, далева олія, масляні ефіри, етиловий спирт, назальний, ін'єкційний, черезшкірний, ректальний, Cremophore™ або фракціоновані рослинні олії); і вагінальний і т.д., або форму, придатну для ввеконсерванти (наприклад, метил- або пропіл-парадення шляхом інгаляції або інсуфляції. гідроксибензоати або сорбінова кислота). ПрепаДля місцевого введення препарати активної рати можуть також містити буферні солі, коригуючі сполуки або проліки(проліків) можна готувати у 43 88660 44 патенті США №5164189; у патенті США консерванти, барвні і підсолоджуючі агенти, як №5163899; у патенті США №5088977; у патенті придатно. США №5087240; у патенті США №5008110; і в паПрепарати для перорального введення можна тенті США №4921475. придатно готувати для одержання регульованого вивільнення активної сполуки або проліків, як добАльтернативно, можна використовувати інші ре відомо в даній області техніки. фармацевтичні системи доставки. Ліпосоми й емульсії є добре відомими прикладами носіїв для Для трансбукального введення композиції модоставки, які можна застосовувати для доставки жуть приймати форму таблеток або коржів, вигоактивної сполуки(сполук) або проліків. Деякі оргатовлених загальноприйнятим способом. Для ректального і вагінального шляхів ввенічні розчинники, такі як диметилсульфоксид (ДМСО), можна також використовувати, хоча звидення препарати активної сполуки(сполук) можна чайно ціною більшої токсичності. готувати у вигляді розчинів (для утримуючих Фармацевтичні композиції, якщо бажано, моклізм), супозиторіїв або мазей, що містять загальжуть бути представлені в упакуванні або розподіноприйняті основи супозиторіїв, такі як олія какао льному пристрої, що можуть містити одну або біабо інші гліцериди. льше ніж одну стандартну лікарську форму, що Для назального введення або введення шлямістить активну сполуку(и). Це упакування може хом інгаляції або інсуфляції активну сполумістити, наприклад, металеву або пластмасову ку(сполуки) або проліки можна зручно доставляти фольгу, як, наприклад, блистерне упакування. у формі аерозольного спрея з герметизованих Упакування або розподільний пристрій може суупакувань або небулайзера з використанням припроводжуватися інструкціями із введення. датного пропеленту, наприклад, дихлордифторме6.8 Ефективні дозування тану, трихлорфторметану, дихлортетрафторетану, фторвуглеводнів, діоксиду вуглецю або іншого Активна сполука(и) або проліки або його компридатного газу. У випадку герметизованого аеропозиції, як правило, будуть застосовуватися в кількості, ефективному для досягнення призначеного золю стандартна доза може бути визначена шлярезультату, наприклад, у кількості, ефективному хом надання клапану для доставки відміряної кількості. Можна готувати препарати у вигляді капсул і для лікування або попередження конкретного захворювання, що підлягає лікуванню. Сполука(и) картриджів для застосування в інгаляторі або інможна вводити терапевтично для досягнення тесуфляторі (наприклад, капсули і картриджі, що рапевтичної користі. Під терапевтичною користю складаються з желатину), що містять порошкопомають на увазі усунення або ослаблення причиндібну суміш сполуки і придатну порошкоподібну ного порушення, що підлягає лікуванню, і/або усуоснову, таку як лактоза або крохмаль. Для інтраокулярного введення препарати акнення або ослаблення одного або більше ніж одз причинним тивної сполуки(сполук) або проліків можна готуваного симптому, пов'язаного ти у вигляді розчину, емульсії, суспензії і т.д., припорушенням, так що пацієнт повідомляє про податних для введення в око. Ряд носіїв, придатних ліпшення самопочуття або стану, не виключаючи, для введення сполук в око, відомий у даній області що цей пацієнт може бути усе ще уражений притехніки. Конкретні необмежуючі приклади описані, чинним порушенням. Терапевтична користь також наприклад, у патенті США №6261547; у патенті включає зупинку або уповільнення прогресування США №6197934; у патенті США №6056950; у пазахворювання незалежно від того, чи відбулося тенті США №5800807; у патенті США №5776445; у поліпшення. патенті США №5698219; у патенті США Кількість сполуки, що вводиться, буде залежа№5521222; у патенті США №5403841; у патенті ти від ряду факторів, включаючи, наприклад, конкСША №5077033; у патенті США №4882150; і в паретне показання, що підлягає лікуванню, режим тенті США №4738851. уведення, важкість показання, що підлягає лікуДля пролонгованої доставки препарати активванню, а також вік і масу пацієнта, біодоступність ної сполуки(сполук) або проліків можна готувати у конкретної активної сполуки і т.д. Визначення ефевигляді депонованого препарату для введення ктивного дозування знаходиться в межах компетешляхом імплантації або внутрішньом'язової ін'єкнції фахівців у даній області техніки. ції. Препарат активного інгредієнта можна готуваЕфективні дозування спочатку можна оцінювати з придатними полімерними або гідрофобними ти на підставі аналізів in vitro. Наприклад, первісне речовинами (наприклад, у вигляді емульсії в придозування для застосування у тварин можна сфойнятній олії) або іонообмінними смолами, або у рмулювати як досягнення концентрації активної вигляді помірковано розчинних похідних, наприсполуки в кровообігу або сироватці, що є рівною клад, у вигляді помірковано розчинної солі. Альтеабо більшою ІК50 конкретної сполуки на підставі рнативно для черезшкірного усмоктування можна виміру в аналізі in vitro, такому як аналізи in vitro, використовувати системи черезшкірної доставки, описані в розділі «Приклади». Обчислення дозувироблені у вигляді клейкого диску або пластиру, вань для досягнення таких концентрацій у кровощо повільно вивільняє активну сполуку(и). У даобігу або сироватці з обліком біодоступності конкному випадку можна використовувати підсилювачі ретної сполуки знаходиться в межах компетенції проникності, щоб сприяти черезшкірному проникфахівців у даній області техніки. Для посібника ненню активної сполуки. Придатні черезшкірні можна привести посилання Fingl & Woodbury, пластири описані, наприклад, у патенті США "General Principles" In: Goodman and Gilman's The №5407713; у патенті США №5352456; у патенті Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Chapter 1, pp. США №5332213; у патенті США №5336168; у па1-46, latest edition, Pergamon Press, і посилання, які тенті США №5290561; у патенті США №5254346; у цитуються там. 45 88660 46 Первісні дозування можна також оцінювати на 6.9 Набори підставі даних in vivo, таких як тваринні моделі. Сполуки і/або проліки, описані тут, можуть буТваринні моделі, придатні для тестування ефектити зібрані у вигляді наборів. У деяких втіленнях у вності сполук для лікування або попередження наборі представлена сполука(и) і реагенти для різних захворювань, описаних вище, добре відомі готування композиції для введення. Ця композиція в даній області техніки Кількості дозування будуть може знаходитися в сухій або ліофілізованій форзвичайно знаходитися в інтервалі від приблизно мі або в розчині, зокрема, у стерильному розчині. 0,0001, або 0,001, або 0,01мг/кг/доба до приблизно Коли композиція знаходиться в сухій формі, реа100мг/кг/доба, але можуть бути вище або нижче в гент може включати фармацевтично прийнятний залежності, серед інших факторів, від активності розріджувач для готування рідкого препарату. Насполуки, її біодоступності, режиму введення і різбір може містити пристрій для введення або для них факторів, що обговорювалися вище. Кількість і розподілу композицій, включаючи, але не обмеінтервал дозування можна регулювати індивідуажуючись ними, шприц, піпетку, черезшкірний пласльно для забезпечення рівнів сполуки (сполук) у тир або інгалятор. Набори можуть включати інші терапевтичні плазмі, що є достатніми для підтримки терапевтисполуки для застосування в поєднанні зі сполукачного або профілактичного ефекту. Наприклад, ми, описаними тут. У деяких втіленнях ці терапевсполуку можна вводити один раз на тиждень, кільтичні агенти являють собою інші протиракові і прока разів на тиждень (наприклад, через добу), один типухлинні сполуки. Ці сполуки можуть бути раз на добу або багато разів на добу в залежності, представлені в окремій формі або змішані із спосеред іншого, від режиму введення, конкретного луками за даним винаходом. показання, що підлягає лікуванню, і думки лікуючоНабори будуть включати відповідні інструкції з го лікаря. У випадках локального уведення або виборчого захоплення, такого як локальне місцеве готування і введення композиції, побічні ефекти введення, ефективна локальна концентрація актикомпозицій і будь-яку іншу релевантну інформавної сполуки(сполук) може бути не зв'язана з концію. Інструкції можуть знаходитися в будь-якому центрацією в плазмі. Фахівці в даній області техніпридатному форматі, включаючи, але не обмежуки зможуть оптимізувати ефективні локальні ючись ними, друковану форму, відеокасету, комдозування без непотрібних додаткових експерип'ютерний диск або оптичний диск. ментів. 7. Приклади Краще сполука(и) буде забезпечувати терапеДалі винахід визначений з посиланням на привтичну або профілактичну користь, не викликаючи ведені нижче приклади, у яких описане одержання значної токсичності. Токсичність сполуки(сполук) різних сполук, описаних тут, способи аналізу їхньої може бути визначена з використанням стандартбіологічної активності і способи їхнього застосуних фармацевтичних методик. Співвідношення вання. Фахівцям у даній області техніки буде очедози між токсичним і терапевтичним (або профілавидно, що багато модифікацій, як у матеріалах, ктичним) ефектом ЛД50/ЕД50 складає терапевтичтак і в методах, які можна використовувати, вхоний індекс (ЛД50 являє собою дозу, летальну для дять в обсяг винаходу. 50% популяції, і ЕФ50 являє собою дозу, ефектив7.1 Одержання 4-(4-метилпіперазин-1-іл)-3ну для 50% популяції). Сполуки, що виявляють метилнітробензолу високі терапевтичні індекси, є кращими. Реакція: Методика: Гомогенну суміш 4-фтор-3метилнітробензолу 1 (20г, 129ммоль) і Nметилпіперазину 3 (25,82г, 258ммоль) у Nметилпіролідоні (NMP) (10мл) кип'ятили зі зворотним холодильником (120°С) в атмосфері N2 протягом 24 годин. Реакційну суміш після охолодження до кімнатної температури наливали на насичений розчин NaCI (100мл). Отриману в результаті тверду речовину руйнували ультразвуком протягом приблизно 30 секунд, фільтрували, промивали крижаною водою (2x10мл) і висушували у високо му вакуумі з одержанням 4-(4-метилпіперазин-11 іл)-3-метилнітробензолу 5 (28г, 92%). Н ЯМР (CD3OD): δ 8,02 (m, 2H), 7,13 (d, 1H, J=9,3Гц), 3,08 (m, 4H), 2,66 (m, 4H), 2,38 (s, 6H); РХМС (рідинна хромато-мас-спектрометрія): чистота: 99%, MS + (m/e): 236 (MH ). 7.2 Одержання 4-(4-метилпіперазин-1-іл)-3метиланіліну Реакція: 47 88660 48 Методика: Гетерогенну суміш 4-(4метилпіперазиніл)-3-метилнітробензолу 5 (20г, 85ммоль), 10% Pd/C (1,3г) у метанолі (1,2 літри) гідрогенізували [Н2] при 40фунт/кв. дюйм (275,79кПа) протягом 3 годин. Паладієвий каталізатор фільтрували через шар целіту, промивали метанолом (3x50мл), і об'єднаний фільтрат концентрували з одержанням 4-(4-метилпіперазин-1-іл) 1 3-метиланіліну 7 (15г, 86%). Н ЯМР (CD3OD): δ 6,83 (d, 1Н, J=8,7Гц), 6,59 (d, 1Н, J=2,7Гц), 6,54 (dd, 1Н, J=8,4 і 2,7Гц), 2,84 (t, 4H, J=4,8Гц), 2,60 (bm, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,20 (s, 3H); РХМС: чистота: + 99,9%, MS (m/e): 206 (МН ). 7.3 Одержання 3-аза-4-оксотрицикло[4.2.1.0(2,5)]нон-7-ену Реакція: Методика: Частина 1: Розчин 2,5норборнадієну 47 (25,0мл, 0,246моль) у СН2СІ2 (110мл, свіжий) прохолоджували в лазні лід/NaCI (-10°С). До цього розчину додавали по краплях розчин Csl (21,4мл, 0,246моль) у СН2СІ2 (45мл свіжа пляшка) з такою швидкістю, щоб підтримувати температуру нижче 5°С (додавання зайняло приблизно 1,25год). Після завершення додавання реакційну суміш перемішували протягом 1 години при 0-5°С, а потім витягали з охолодної лазні і давали нагрітися до 20°С. Реакційну суміш гасили водою (60мл) і енергійно перемішували протягом декількох хвилин. Органічний шар відокремлювали, промивали розсолом і висушували Na2SO4. У результаті концентрування одержали яснокоричневу олію. Частина 2: Суміш Na2SO3 (24,5г), води (70мл) і СН2СІ2 (30мл) прохолоджували в лазні лід/NaCI. Олія з Частини 1 розбавляли до 100мл СН2СІ2 і додавали по краплях до вищевказаної суміші з такою швидкістю, щоб підтримувати температуру нижче 15°С (додавання зайняло приблизно 1,75год). Моніторинг рН реакційної суміші проводили за допомогою рН-метра і підтримували лужним (рН 7-10) шляхом доведення 10% NaOH (мас/об) (скільки необхідно). Після завершення додавання реакційну суміш перемішували протягом 1 години при 5-10°С (кінцевий рН дорівнював 8,5). Реакційну суміш наливали в ділильну лійку і відокремлювали шар СН2СІ2. Ця органічна фаза являла собою густу і желеподібну тверду суспензію. її розбавляли водою (приблизно 400мл) з одержанням більш вільно текучого розчину. Водяний шар додатково екстрагували СН2СІ2 (4x100мл). (Альтернативно тверді речовини можна відокремити від СН2СІ2 за допомогою центрифугування. Потім ці тверді речовини можна розбавити водою (майже до повного розчинення) і екстрагувати СН2СІ2). Водяний шар додатково екстрагували СН2СІ2 (10x100мл). Моніторинг екстрактів СН2СІ2 проводили за допомогою ТСХ на присутність продукту. Об'єднані органічні екстракти промивали розсолом, висушували MgSO4 і фільтрували через целіт. У результаті видалення розчинника одержали бажаний продукт, рацемічний 2-екзо-3-екзо 3-аза-4-оксо-трицикло[4.2.1.0(2,5)]нон-7-ен 14r1 у 1 вигляді білої твердої речовини (20,5м, 62%). Н ЯМР (ДМСО-d6): δ 8,01 (bs, 1Н), 6,22 (dd, J= 3,3 і 5,4Гц, 1Н), 6,12 (dd, J=3,3 і 5,4Гц, 1Н), 2,88 (dd, J=1,5 і 3,3Гц, 1Н), 2,79 (bs, 1H), 2,74 (bs, 1H), 1,58 (d, J=9,3Гц, 1Н) і 1,47 (d, J=9,3Гц, 1Н). 7.4 Одержання 4-оксо-3-третбутоксикарбонілаза-трицикло [4.2.1.0(2,5)]нон-7eну Реакція: Методика: Гомогенну суміш 3-аза-4-оксотрицикло[4.2.1.0(2,5)]нон-7-ену (14r1; рацемічний 2-екзо-3-екзо; 10,0г, 74ммоль), (ВОС)2О (16,1м, 74ммоль) і ДМАП (1,1г) у СН2СІ2 перемішували в атмосфері N2 при кімнатній температурі протягом 24 годин. До цієї реакційної суміші додавали EtOAc (100мл), а потім Н2О (100мл) і додатково перемішували протягом 1 години. Органічний шар відокремлювали і промивали Н2О (2x100мл). Ор ганічний шар висушували над безводним Na2SO4 і видаляли розчинник при зниженому тиску з одержанням 4-оксо-3-трет-бутоксикарбонілазатрицикло[4.2.1.0(2,5)]нон-7-ену (16r1; рацемічний 1 2-екзо-3-екзо) (16,5г, 70%); Н ЯМР (ДМСО-d6): δ 6,29 (dd, J=3,3 і 5,4Гц, 1Н), 6,19 (dd, J= 3,3 і 5,4Гц, 1Н), 3,77 (d, J=4,5Гц, 1Н), 3,13 (bs, 1H), 3,08-3,04 (m, 1H), 2,93 (bs, 1H), 1,45 (s, 9H). РХМС: 95%. 49 88660 50 7.5 Одержання і виділення стереоізомерно чистих діастереомерів з (±) рацемічного (2-екзо-3Методика: У круглодонну колбу, обладнану екзо)-N4-(3-амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2гумовою перегородкою і магнітною мішалкою, заіл)-5-фтор-N2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1вантажували рацемічний N-BOC-β-лактам 16М іл)феніл]-2,4-піримідиндіаміну (2,0г) при позитивному тиску азоту. До цього додаРацемічну суміш сполуки, зазначеної в заговали етилацетат (25мл), а потім 30% аміак у воді ловку, одержували з 2-екзо-3-екзо рацемата 2(25мл) і перемішували при кімнатній температурі амінобіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-3-карбоксаміда, як протягом 3 годин. Шар етилацетату відокремлюописано нижче. вали і промивали 5%-ним водяним розчином Реакція: NaHCО3 (20мл), висушували над безводним Na2SO4 і випарювали розчинник з одержанням 1,10г рацемічного N-BOC-карбоксиаміду 28М. Реакція: Методика: У круглодонну колбу, обладнану вхідним отвором для N2 і магнітною мішалкою, завантажували рацемічний N-BOC лактам 28М (2,00м, 7,9ммоль), а потім обробляли 20% ТФО в СН2СІ2 при кімнатній температурі протягом 2 годин. Отриманий у результаті розчин концентрували при зниженому тиску. Сліди ТФО видаляли у високому вакуумі протягом декількох годин з одержанням проміжної сполуки, солі ТФО (30М, рацемічний). Отриману в результаті рацемічну сіль ТФО 30М обробляли 2,4-дихлор-5фторпіримідином 10 (1,58г, 9,51ммоль) у Ме ОН:Н2О (20:10мл) у присутності NaHCO3 (1,33г, 15,84ммоль) при кімнатній температурі протягом 48 годин. Реакційну суміш розбавляли Н2О (25мл), насичували NaCI і екстрагували EtOAc (3x50мл). Після висушування над безводним Na2SO4 розчинник випарювали, і залишок піддавали хроматографії (силікагель, СН2СІ2, потім 2-4% 2Н NH3/MeOH у СН2СІ2) з одержанням 1,3г рацемічного продукту реакції нуклеофільного ароматичного монозаміщення (РНАМ3) 36r1. Реакція: Методика: Запаяну пробірку, завантажену рацемічним продуктом РНАМ3 36r1 (1,1г, 8ммоль), аніліном 7 (0,90г, 4,4ммоль), ТФО (0,6мл) і метанолом (9мл), перемішували при 100°С протягом 24 годин. Отриманий у результаті грузлий гомогенний розчин концентрували, і залишок піддавали хроматографії (силікагель, СН2СІ2, потім 2-5% 2Н NH3/MeOH у СН2СІ2) з одержанням очікуваного 2екзо-3-екзо рацемічного похідного 2,4піримідиндіаміну 60r1 (1,12г; чистота: 95%): Виділення енантіомерів: Діастереомери розділяли і виділяли з рацемата 60r1 за допомогою хіральної препаративної хроматографії ВЕРХ на Phenomenex Chirex 3020, стовпчик 250x10мм, елюіруючи 35:63:2 (об:об:об) суміш гексан:дихлорметан:метанол при швидкості струму 6мл/хв. Енантіомер, елююючий через 9,44хв., позначили як енантіомер Е1, а енантіомер, елююючий через 12,74хв., позначили як енантіомер Е2. 7.6 Ферментативне одержання стереоізомерно чистого (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміну із застосуванням хіразима 7.6.1 Одержання стереоізомерно чистого NВос-β-лактаму Реакція: 51 88660 52 Методика: Суху запаяну пробірку, завантажену 4-оксо-3-трет-бутоксикарбонілазатрицикло[4.2.1.0(2,5)]нон-7-еном (16r1; рацемічний 2-екзо-3-екзо) (4,0г, 17,02ммоль), зв'язаним/іммобілізованим на смолі хіразим L-2, тип Б, c.f. (8,0г, отриманий від BioCatalytics Inc., Pasadena, CA) і диізопропіловим ефіром (80мл), обережно струшували в інкубаторі при 60°С протягом 60 годин. (За ферментативним поділом N-BOC β-лактаму 16r1 стежили за допомогою протонного ЯМР. Об'єднання длрет-бутилової групи енантіомерно чистого N-ВОС лактаму 16а і N-BOC карбонової кислоти 26b спостерігали у співвідношенні 1:1). Отриману в результаті реакційну суміш фільтрували, і тверду смолу промивали диізопропіловим ефіром (2x40мл). Фільтрат концентрували з одержанням суміші енантіомерно чистого N-ВОСβ-лактаму 16а і N-BOC карбонової кислоти 26b (сумарна маса: 4,0г). Реакція: Методика: У круглодонную колбу, обладнану гумовою перегородкою і магнітною мішалкою, завантажували суміш енантіомерно чистого N-BOCβ-лактаму 16а і N-BOC карбонової кислоти 26b (4,0г) при позитивному тиску азоту. До цієї суміші додавали етилацетат (50мл), а потім 25%-ний водяний гідроксид амонію (50мл) і перемішували при кімнатній температурі протягом 3 годин. Хід реакції спостерігали за допомогою ТСХ. Етилацетатний шар відокремлювали і промивали 5%-ним насиченим розчином NaHСО3 (40мл), висушували над безводним Na2SO4 і випарювали розчинник з одержанням 2,00г (7,93ммоль з теоретичного 8,51ммоль; вихід 93%) бажаного енантіомерно чистого N-BOC карбоксаміду 28а з енантіомерним надлишком більше 99%, як визначено за допомогою хіральної ВЕРХ. З водяного розчину, що містить N-ВОС карбоксилат амонію, після підкислення холодної 1Н НСІ із наступною екстракцією СН2СІ2 регенерували N-BOC карбонову кислоту 26b (1,8г, 7,11ммоль з теоретичного 8,51ммоль, 1 вихід 84%). Н ЯМР (ДМСО-d6): 7,26 (bs, 1Н), 6,66 (bs, 1H), 6,13 (m, 2H), 3,59 (t, 1H, J=6,9Гц), 2,80 (s, 1H), 2,54 (s, 1H), 2,31 (d, 1Н, J=8,1Гц), 2,00 (d, 1H, J=8,7Гц), 1,36 (s, 9H), 1,30 (d, 1H, J=8,1Гц); РХМС: MS (m/z): 254 (МН+); [α]D -76,78° (с 1,0, МеОН). 7.6.2 Одержання стереоізомерно чистого продукту РНАМ3 Реакція: Методика: У круглодонную колбу із вхідним отвором для N2 і магнітною мішалкою завантажували енантіомерно чистий N-BOC карбоксамід 28а (2,00г, 7,93ммоль), а потім обробляли 20% ТФО в СН2СІ2 при кімнатній температурі протягом 2 годин. За ходом реакції стежили за допомогою ТСХ. Отриманий у результаті розчин концентрували при зниженому тиску. Сліди ТФО видаляли у високому вакуумі протягом декількох годин з одержанням енантіомерно чистої проміжної сполуки, солі ТФО 1 30а, при кількісному виході. Н ЯМР (DMSO-d6): 8,10 (bs, 2Н), 7,92 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,29 (m, 1H), 6,18 (m, 1H), 4,38 (bs, 1H), 3,06 (d, 1Н, J=7,2Гц), 2,97 (s, 1H), 2,87 (s, 1H), 2,43 (d, 1H, J=7,5Гц), 2,10 (d, 1H, J=6Гц), 1,36 (d, 1H, J=8,7Гц); LCMS: MS (m/z): 152 (MH+). Отриману в результаті сіль ТФО 30а обробляли 2,4-дихлор-5-фторпіримідином 34 (1,58г, 9,51ммоль) у МеОН:Н2О (20:10мл) у присутності NaHCO3 (1,33г, 15,84ммоль) при кімнатній температурі протягом 48 годин. Реакційну суміш розбавляли Н2О (25мл), насичували NaCI і екстрагували EtOAc (3x50мл). Після висушування над безводним Na2SO4 розчинник випарювали, і залишок під 53 88660 54 давали хроматографії (силікагель, СН2СІ2, потім 2визначено за допомогою хіральної ВЕРХ; [α]D + 4% 2н. NН3/МеОН у СН2СІ2) з одержанням 2,02г 61,10° (с 1,0, МеОН). 1 (91%) бажаного продукту РНАМ3 36а. Н ЯМР 7.6.3 Одержання стереоізомерно чистого (DMSO-d6): 8,25 (d, 1Н, J=7,2Гц), 8,07 (d, 1H, (1R,2R,3S,4S)-N4-(3J=3,3Гц), 7,71 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,29 (m, 2H), амінокарбонілбіцикло[2,2,1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фтор3,99 (t, 1H, J=7,8Гц), 2,85 (s, 1H), 2,75 (s, 1H), 2,49 N2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4(d, 1H, J=0,9Гц), 2,11 (d, 1H, J=8,7Гц), 1,39 (d, 1H, піримідиндіаміну J=8,7Гц); РХМС: чистота: 95%, MS (m/z): 283 Реакція: + (МН ). Енантіомерна чистота була більше 99%, як Методика: У суху реакційну колбу, обладнану магнітною мішалкою, делегматором і входом N2, завантажували енантіомерно чистий продукт PHAM3 36а (2,25г, 8ммоль), анілін 7 (1,80г, 8,8ммоль), ТФО (1,12мл) і ізопропанол (18мл), і отриману в результаті реакційну суміш перемішували при температурі утворення флегми протягом 8-10 годин. Після охолодження реакційної суміші до кімнатної температури додавали етилацетат (20мл). Отриману тверду речовину фільтрували і промивали етилацетатом (2x5мл) з одержанням сполуки 60а у формі кислої солі. Потім отриману в результаті тверду речовину розчиняли у воді, і водяну суміш доводили до рН 9 водяним NaHCO3, що викликав випадання твердої речовини в осад. Тверду речовину фільтрували із суміші, промивали водою і висушували з одержанням 3,3г (93%) 1 Н ЯМР похідного 2,4-піримідиндіаміну 60а. (DMSO-d6): 8,85 (s, 1H), 7,83 (d, 1H, J=2,7Гц), 7,68 (s, 1H), 7,47 (s, 2H), 7,36 (d, 1H, J=7,8Гц), 7,18 (s, 1H), 6,89 (d, 1H, J=8,7Гц), 6,32 (m, 1H), 6,25 (m, 1H), 4,11 (t, 1H, J=7,8Гц), 3,32 (s, 3H), 2,86 (s, 1H), 2,76 (m, 4H), 2,49 (m, 4H), 2,46 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (d, 1H, J=8,4Гц), 1,39 (d, 1H, J=9Гц); РХМС: + чистота: 100%, MS (m/z): 452 (М ); >99% еи, як RT визначено за допомогою хіральної ВЕРХ; [α]D +101,2° (с 1,0, МеОН). Виявлено, що хіральние 1 аналітичні дані, Н ЯМР і LCMS, ідентично енантіомеру, позначеному Е1. 7.7 Ферментативне одержання стереоізомерно чистого (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2,2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміну з використанням ферменту новозим 435 Методика: Гомогенну суміш енантіомерно чистого 3-аза-4-оксо-трицикло[4.2.1.0(2,5)]нон-7-ену 14а (1,1г, 8,2ммоль), (ВОС)2О (2,76г, 12,3ммоль) і DMAP (100мг) у СН2СІ2 перемішували в атмосфері 7.7.1 Одержання стереоізомерно чистого βлактаму Реакція: Методика: Іммобілізовану ліполазу (8,0г від Sigma, номер по каталогу L4777), β-лактам 14r1 (рацемічний: 2-екзо-3-екзо) (4,0г, 7,4ммоль) і воду (0,13мл, 7,4ммоль) додавали в 250мл диізопропілового ефіру в герметичній колбі. Цю суміш дегазували азотом протягом 20 хвилин, і колбу запаювали і інкубували протягом 14 дiб при 70°С. Суміш прохолоджували до кімнатної температури, фільтрували через целіт і промивали 300мл диізопропілового ефіру. Об'єднаний фільтрат концентрували до сухого стану, і залишок кристалізували з диізопропілового ефіру з одержанням енантіомерно чистого β-лактаму 14а у вигляді безбарвних голок (1,22г, 61%). Енантіомерна чистота була більше 99%, як визначено за допомогою хіральної ВЕРХ. 7.7.2 Одержання стереоізомерно чистого 2-NВос-аміно-3-амінокарбоніл-біцикло[2,2.1]гепт-5-ену Реакція: Ν2 при кімнатній температурі протягом 3 годин з одержанням енантіомерно чистого N-BOC лактаму 16а, що використовували далі без виділення. До цієї реакційної суміші додавали 20мл 25% водяно 55 88660 56 го гідроксида амонію, і перемішування продовжуМетодика: Енантіомерно чистий N-BOC карбовали ще протягом 4 годин. Додавали воду, і реакксамід 28а (2,51г) розчиняли в 10мл дихлорметана ційну суміш екстрагували дихлорметаном й обробляли 10мл ТФО. Суміш перемішували про(2x50мл). Об'єднану органічну фазу промивали тягом 1 години при кімнатній температурі і конценводяної НСІ (5%), висушували над сульфатом натрували до сухого стану при зниженому тиску. Затрію і концентрували до сухого стану при знижелишок суспендували в толуолі і знову ному тиску з одержанням енантіомерно чистого Nконцентрували до сухого стану. Отриману в реBOC карбоксаміда 28а (2,51г) у вигляді білої тверзультаті тверду речовину розчиняли в метанодої речовини, що використовували в наступній лі:воді (30мл:3мл) і обробляли 1,5г бікарбонату стадії без подальшого очищення. натрію. Додавали 5-фтор-2,4-дихлорпіримідин 34 7.7.3 Одержання стереоізомерно чистого про(3г, 17,9ммоль), і суміш перемішували протягом 2 дукту PHAM3 (1R,2R,3S,4S)-N4-(3доби при кімнатній температурі. Летучі речовини амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-2-хлорвидаляли у вакуумі, і залишок суспендували в роз5-фтор-4-амінопіридину солі. Осад фільтрували, висушували і піддавали Реакція: колоночній хроматографії (силікагель, дихлорметан-метанол, 20:1) з одержанням бажаного енантіомерно чистого продукту PHAM3 36а у вигляді білої твердої речовини (1,7г, 74%). 7.7.4 Одержання стереоізомерно чистого (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміну Реакція: Методика: Гомогенну суміш аніліну 7 (400мг, 1,95ммоль), енантіомерно чистого продукту PHAM3 36а (400мг, 1,41ммоль) і 0,2мл ТФО в 4мл ізопропанолу в запаяній пробірці перемішували при 100°С протягом 20 годин. Суміш прохолоджували до кімнатної температури, розбавляли 2мл діетилового ефіру, і отриманий у результаті осад фільтрували і промивали діетиловим ефіром. Залишкові тверді речовини розчиняли у воді й обробляли 25%-ним водяним розчином гідроксиду амонію. Отриманий у результаті осад фільтрували, промивали водою і висушували з одержанням 527мг (83%) бажаного продукту, похідного 2,4піримідиндіаміну 60а, у вигляді білуватої твердої речовини. Чистоту визначили за допомогою РХМС як більше 97%, і енантіомерну чистоту визначили з використанням хіральної ВЕРХ як більше 99%. 1 Хіральні аналітичні дані, Н ЯМР і РХМС аналізи були ідентичні для енантіомера, що був позначений як Е1. 7.8 Одержання стереоізомерно чистих сполук з використанням (R)-метил-параметоксибензиламіну в якості хіральної допоміжної речовини 7.8.1 Одержання 2-екзо-3-екзо рацемічних амінів Реакція: Методика: Гомогенну суміш 4-оксо-3-третбутоксикарбонілаза-трицикло[4.2.1.0(2,5)]нон-7ену (16М; рацемічний 2-екзо-3-екзо) (9,2г, 40ммоль) і (R)-метил-4-метоксибензиламін 13 (18, 24г, 48ммоль) у сухому ТГФ (75мл) перемішували при кімнатній температурі протягом 48 годин. Реакційну суміш концентрували, суспендували в гексанах (5мл), руйнували ультразвуком, і тверду речовину відокремлювали фільтруванням з одер жанням суміші діастереоізомерів 20а і 20b (12мг). Альтернативно, очищення можна проводити, використовуючи колоночну хроматографію (силікагель, гексани, потім 5%, 10%, 20% і 50% EtOAc у гексанах). 7.8.2 Одержання 2-екзо-3-екзо рацемічних продуктів PHAM3 із наступним поділом ізомерно чистих сполук шляхом кристалізації Реакція: 57 88660 58 Методика: гетерогенну суміш діастереоізомерів 20а і 20b (6,0г, 17ммоль), ТФО (20мл) у СН2СІ2 перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин. ТСХ використовували для моніторингу ходу реакції. Отриману в результаті реакційну суміш концентрували до сухого стану і підсушували у високому вакуумі протягом декількох годин з одержанням суміші діастереоізомерів проміжних сполук 22а і 22 b. Потім цю суміш піддавали взаємодії з 2,4-дихлор-5-фторпіримідином 34 (3,4г, 20ммоль) у присутності NaHCО3 (5,7г, 68ммоль) у МеОН/Н2О (50мл кожного) при кімнатній температурі протягом 24 годин. Потім реакційну суміш розбавляли NaCI-насиченою водою (50мл) і екстрагували СН2СІ2. З екстракту після висушування над безводним Na2SO4 з наступним видаленням розчинника при зниженому тиску одержали залишок, що піддавали хроматографії (силікагель, СН2СІ2, потім 2% 2н. NН3/МеОН у СН2СІ2). У результаті хроматографічного очищення одержали суміш діастереоізомерів 38а і 38b (4,0г) (відношення 1:1 можна спостерігати при чіткому поділі на РХМС зі зверненою фазою). З отриманих у результаті 4,0 грамів після кристалізації з використанням EtOAc:гексанів (30:150мл; об/об) одержали кристалічну речовину проміжної сполуки 38а, структуру якої підтверджували за допомогою рентгенокристалографії; хімічна чистота: 96% і % ди: 96%. [α]D -36,7° (с, 0,18 МеОН). Маткову рідину, що містить інший ізомер, мав малий % ди (70-80%), що оцінили як діастереоізомер 38b. 7.8.3 Одержання стереоізомерно чистого продукту, включаючи хіральну допоміжну речовину Реакція: Методика: Суміш діастереоізомера 38а (1,42г, 3,4ммоль), аніліну 7 (0,834г, 4,0ммоль) і ТФО (700мг) у МеОН (10мл) нагрівали в запаяній пробірці при 100°С протягом 24 годин. Отриманий у результаті залишок піддавали хроматографії (силікагель, СН2СІ2, потім 2% 2н. NH3/MeOH у СН2СІ2) з одержанням продукту 40а у вигляді безбарвної твердої речовини, хімічна чистота: 96%. 7.8.4 Відщіплення хіральної допоміжної речовини Виявлено, що відщіплення хіральної допоміжної речовини від 40а утруднено, тому відщіплення хіральної допоміжної речовини від проміжних сполук 38а і 38b з наступної другою реакцією нуклеофільного ароматичного заміщення з аніліном 7 проводили, як описано нижче. 7.8.5 Відщіплення хіральної допоміжної речовини від стереоізомерно чистого проміжної сполуки 38а і одержання стереоізомерно чистого (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміну Реакція: Методика: Продукту PHAM3 із хіральною допоміжною речовиною 38а давали можливість вза ємодіяти з дихлордиціанохіноном (3 еквіваленти) у СН2СІ2:Н2О при кімнатній температурі з одержан 59 88660 60 1 ням бажаного продукту PHAM3 36а. Цей продукт Н ЯМР аналізи вказують на те, що дані для проPHAM3 очищали колоночною хроматографією і дукту 60а збігаються з енантіомером, позначеним знайшли, що він є таким же, як сполуки 36а, отриЕ1. мані ферментативним шляхом, що підтвердили 7.8.6 Відщеплення хіральної допоміжної речохіральну аналітичну ВЕРХ, РХМС і 1Н ЯМР. Крім вини від проміжної сполуки 38b і одержання стетого, взаємодія продукту PHAM3 36а з аніліном 7 у реоізомерно чистого (1S,2S,3R,4R)-N4-(3МеОН:ТФО при 100°С у запаяній пробірці протяамінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторгом 24год дало бажаний продукт 60а. Цей продукт N2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4очищали колоночною хроматографією й аналізупіримідиндіаміну вали за допомогою 1Н ЯМР, РХМС і хіральної анаРеакція: літичної ВЕРХ. Хіральна аналітична ВЕРХ, РХМС і Методика: Продукту PHAM3 38b давали можливість взаємодіяти з дихлордиціанохіноном (3 еквіваленти) у СН2СІ2:Н2О при кімнатній температурі з одержанням бажаного продукту PHAM3 36b (після відщіплення хіральної допоміжної речовини). Цей продукт PHAM3 очищали колоночною хроматографією і знайшли, що він являє собою інший діастереоізомер, ніж той, котрий був отриманий ферментативним шляхом, і це підтвердили хіральною аналітичною ВЕРХ. Крім того, взаємодія продукту PHAM3 36b з аніліном 7 у МеОН:ТФО при 100°С у запаяній пробірці протягом 24год дало бажаний продукт 60b. Цей продукт очищали колоночною хроматографією й аналізували за допомо1 гою Н ЯМР, РХМС і хіральною аналітичною ВЕРХ. 1 Хіральна аналітична ВЕРХ, РХМС і Н ЯМР аналізи вказують на те, що дані для продукту 60b ідентичні енантіомеру, позначеному Е2. [α]DRT -102,00° (с, 1,0 МеОН). 7.9 Одержання солей НСІ Солі НСІ рацемата 60r1 і стереоізомерно чистого 60а були отримані як описано нижче. 7.9.1 Одержання гідрохлориду рацемічного N4-(3-амінокарбонілбіцикло[2,2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5фтор-N2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]2,4-піримідиндіаміну До розчину 2-екзо-3-екзо рацемічного N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміну (60r1) (0,140г, 0,3ммоль) у МеОН (3мл) при 0°С додавали НСІ (4М, діоксан, 0,170 мл, 0,681ммоль) по краплях, а потім перемішували при 0°С протягом 1год і при кімнатній температурі протягом 15 хвилин. Прозорий гомогенний розчин фільтрували, концентрували і повторно розчиняли в EtOH. До етанольного розчину додавали етилацетат для осадження бажаного продукту, що виділяли з одержанням солі біс-гідрохлорид 2-екзо-3екзо рацемічного N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміну (сполуки 60r1-2НСІ). РХМС: чистота: 98%; MS (m/e): 453 (МН+). 7.9.2 Одержання солі гідрохлорид стереоізомерно чистого (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен2-іл)-5-фтор N2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміну Способом, подібним вищеописаному, у результаті взаємодії 2 еквівалентів НСІ (4М, діоксан) зі стереоізомерно чистим (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміном (60а) одержали сіль бісгідрохлорид стереоізомерно чистого (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен2-іл)-5-фторN2-[3-метил-4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл]-2,4піримідиндіаміну (сполуки 60а-2НСІ). РХМС: чис+ тота: 97%; MS (m/e): 453 (МН ); [α]D +46,3° (с, 0,04 МеОН). 7.10 Одержання (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-(1,3-оксазол-2-іл)феніл]-2,4-піримідиндіаміну (1R,2R,3S,4S)-N4-(3амінокарбонілбіцикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-іл)-5-фторN2-[3-(1,3-оксазол-2-іл)феніл]-2,4-піримідиндіамін 1 (сполуки 90а) одержали, як описано вище. Н ЯМР (ДМСО-d6): 9,36 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 9,92 (d, 1Н, J=3Гц), 7,79 (d, 1Н, J=7,8Гц), 7,68 (s, 1H), 7,42 (m, 4H), 7,18 (s, 1H), 6,29 (m, 1H), 6,13 (m, 1H), 4,21 (t, 1H, J=4,8Гц), 2,86 (s, 1H), 2,77 (s, 1H), 2,55 (d, 1H, J=8,1Гц), 2,14 (d, 1H, J=8,4Гц), 1,39 (d, 1H, J=8,7Гц); РХМС: чистота: 98%, MS (m/e): 407 + (МН ). 7.11 Інгібування клітинної проліферації in vitro Сполуки 60r1, 60r2, 60r1-2НСІ, 60а, 60b і 60аНСІ тестували на ряді різних типів пухлинних клітин на їхню здатність до інгібування проліферації, використовуючи стандартні антипроліферативні аналізи in vitro. Різні протестовані клітинні лінії включали: А549 (рак легені); ASPC-1 (аденокарцинома підшлункової залози); ВХРС-3 (аденокарцинома підшлункової залози); CaOV-3 (аденокарцинома яєчника); COLO 205 (аденокарцинома ободової і прямої кишки); DU145 (рак простати);