Амінокислотний склад ферментного препарату каталази штаму р-01 базидіоміцету pleurotus ostreatus (jacq.: fr.) kumm.

Амінокислотний склад ферментного препарату каталази штаму Р-01 базидіоміцету Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm., який містить аланін, валін, лейцин, ізолейцин, пролін, фенілаланін, метіонін, гліцин, серин, треонін, цистеїн, тирозин, аспарагінову кислоту (аспарагін), глутамінову кислоту (глутамін), лізин, аргінін, гістидин, мас. %: аланін 3,65 валін 5,21 2 3 12444 4 умов (факторів) живильного чи навколишнього аланін 3,65; середовищ. З'ясовано, що каталаза разом з перовалін 5,21; ксидазами відіграють відповідну захисну роль анлейцин 6,71; тиоксидантної системи організму на несприятливі ізолейцин 5,30; умови життєдіяльності і інфекції при утворенні тококсипролін 0,00; сичних сполук реакцій перекисного окиснення ліпіпролін 5,04; дів [4]. фенілаланін 5,01; Існує зростаючий дефіцит тваринної сировини метіонін 1,60; - основного джерела промислових ензимів, що гліцин 2,46; обумовив вибір ферменту каталази базидіоміцесерин 3,85; тів, як об'єкта дослідження. Проведений нами пертреонін 4,53; винний скринінг активних продуцентів серед велицистеїн 0,54; кої групи базидіоміцетів дозволив отримати штами тирозин 4,93; з високим рівнем каталазної активності в культурі аспарагінова кислота [4]. (аспарагін) 17,68; Відомі фізико-хімічні характеристики позакліглутамінова кислота тинних протеїназ культур базидіоміцетів Coriolus (глутамін) 19,19; consors, С. hirsutus, C. versicolor, Daedaleopsis лізин 5,34; styracina, Fomitopsis castaneae, F. cytisina, F. аргінін 5,56; pinicola, Irpex lacteus, Lenzites betulina, Pycnoporus гістидин 3,40. coccineus, Schizophyllum commune, Trametes Пропонована корисна модель є нова, тому що sanguineus, Coprinus macrorhizus, Flammulina не відома з амінокислотного складу і вмісту білку velutipes, Lentinus edodes, Russula decolorans. Одгрибних ферментних препаратів каталази, ферменак, дослідження охоплюють достатньо вузьку нтативної активності та продуценту. систематичну групу грибів, надаються характерисПриклад конкретного виконання 1. Культивутики ферментних препаратів різного ступеня очисвання штаму Р-01 базидіоміцету Pleurotus тки, не наводяться дані з активності каталази досostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. проводять в колбах ліджених культур [2]. об'ємом 1 або 2 літри. Колби містять 350 чи 700мл, Найбільш близький за технічною суттю і досявідповідно, стерильного глюкозо-пептонного сережності результату є амінокислотний склад 13 модовища наступного складу, г/л: локозсідальних ферментних препаратів (ФП) баглюкоза 10,0; зидіальних ксилотрофів Corticium laeve Fr. (штам пептон 3,0; Р-330); Chaetoporus ambiquus (Bres.) Bond. et Sing. КН2РO4 0,6; (B-062); Fibuloporia mollusca (Pers.) Bond. et Sing. К2НРO4 0,4; (A-020); Tyromyces lacteus (Fr.) Murr. (A-027); MgSO4 7H2O 0,5; Tyromyces revolutus (Bres.) Bond. et Sing. (A-025); СаСl2 0,05; Tyromyces undosus (Peck.) Murr. (C-070, M-250); ZnSO4 7H2O 0,001; Irpex lacteus (Fr.: Fr.) Fr. (B-059, M-232, M-253); дистильована вода до 1 л [7]. Amiloporia lenis (Karst.) Bond. et Sing. (A-004); Інокулюм становить 5-10%. Культивування Hirschioporus laricinus (Karst.) Ryv. (M-81) і Hydnum проводять до максимальних значень каталазної ochraceum Pers. (B-046). Штами грибів вирощуваактивності (КА) міцелію - протягом 15 діб в термоли поверхнево на рідкому сусло-пептонному серестаті при температурі 27,5°С. довищі, що містило знехмілене пивне сусло (4° по Каталазну активність визначають за методом, Балінгу) і ферментативний пептон (3г/л) до максиякий заснований на здатності Н2О2 утворювати з мальної молокозсідальної активності культуральсолями молібдену стійкий забарвлений комплекс. ного фільтрату. Грибні ферментні препарати Інтенсивність забарвлення вимірюють на спектотримували шляхом фракціонування сульфатом рофотометрі, наприклад СФ-26, при довжині хвилі амонію з культурального фільтрату. Кількісний 410нм супроти нульової проби з дистильованою вміст зв'язаних амінокислот і білка у молокозсідаводою. КА розраховують за формулою [4]: льних ФП визначали за допомогою амінокислотноЕ=(Aк-Ад) V t k р (мкат/ л), го аналізатора моделі ААА-881, після їх кислотноде Е - активність каталази (мкат/ л), го гідролізу. Не наводяться дані з активності Ак та Ад - екстинкція контрольної та дослідної каталази досліджених культур [7]. проб, В основу корисної моделі покладено завдання V - об'єм проби, що вносили (0,1мл), встановлення амінокислотного складу ферментноt - час інкубації (600с), го препарату каталази штаму Р-01 базидіоміцету k - коефіцієнт мілімолярної екстинкції пероксиPleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm., який відрізду водню, що дорівнює 22,2 103мМ-1 см-1, няється від прототипу ферментативною активніср - коефіцієнт розведення. тю, внутрішньоклітинним походженням, амінокисПриклад конкретного виконання 2. Фракціонулотним складом, продуцентом та дешевий у вання ендогенних ферментів проводять при 60виробництві. 80% насиченні сульфатом амонію у гомогенаті Поставлене завдання вирішується тим, що міцелію. Використовують цей метод завдяки веливстановлено амінокислотний склад ферментного кій розчинності у воді та стабілізуючій дії на білкопрепарату каталази штаму Р-01 базидіоміцету ву молекулу (NH4)2O4 [3]. Фракцію білку, яка утвоPleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm., який містить рила осад, відділяють центрифугуванням на в собі, мас.%: рефрижераторній центрифузі при 5±1°С, відцент 5 12444 6 ровому прискоренні 2000g протягом 15 хвилин. штаму Р-01 Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. Наступним етапом проводять первинну очистку дорівнює Емг=9,7 106мкат/г. отриманої білкової фракції за допомогою діалізу Приклад конкретного виконання 3. Амінокиспроти охолодженої до 5±1°С дистильованої води лотний склад ферментного препарату каталази протягом 24 годин. Для прискорення дифузії, розштаму Р-01 базидіоміцету Pleurotus ostreatus чинник декілька раз замінюють до повного очи(Jacq.: Fr.) Kumm. визначають за допомогою аміщення розчину білків від сульфату амонію. Завдянокислотного аналізатора, наприклад моделі АААки осмосу, молекули розчинника призводять до 881, після кислотного гідролізу білків. Дані аналізу часткового розведення дослідного розчину білків. надано у таблиці, де амінокислоти розташовані Отримані розчини фракцій білків піддають позалежно від природи радикалів (амфотерності) дальшим дослідженням. Зокрема - ліофільній субілкових молекул. Таблиця, також, містить дані шці, наприклад на приладі "Иней-3-2" та визначапро міліграм -процентний вміст білка в препараті. ють КА ФП, які мають вид порошку від світлоДані подаються без зазначення похибки, оскільки сірого до світло-кремового забарвлення, добре представляють точні результати амінокислотного розчинні у воді. аналізу одного зразка ферментного препарату. Каталазна активність ферментного препарату Таблиця Амінокислотний склад ферментного препарату каталази штаму Р-01 базидіоміцету Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. № з/п 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Амінокислота Ала Вал Лей Іле О-про Про Фен Мет Глі Сер Вміст амінокислот, мг% 3,65 5,21 6,71 5,30 0,00 5,04 5,01 1,60 2,46 3,85 З групи неполярних, гідрофобних амінокислот на увагу заслуговує оксипролін (О-про), який на відміну від ФП прототипу не виявлено у складі білка каталази штаму Р-01 гливи звичайної. Вміст в ФП гліцину (Глі) з полярних, гідрофільних амінокислот, пояснюється, скоріше всього, внесенням у живильне середовище ферментативного пептону, що має у складі до 2,22% цієї амінокислоти від вмісту азоту. Високий вміст негативно заряджених аспарагінової (Асп) і глутамінової (Глу) амінокислот у ферментних білках може свідчити про їх кислу природу. Але це припущення вірне в тому разі, коли в білках вони не знаходяться у вигляді глутаміну і аспарагіну, що при кислотному гідролізі довести не можливо. Побічним показником переваги у структурі білків ФП кислих амінокислот може бути те, що 0,1%-ний водний розчин препарату мав рН, який дорівнював 5,30. Вміст у досліджених білках основних, позитивно заряджених амінокислот аргініну (Арг) та гістидину (Гіс) є значно нижчим, ніж попередніх і не може суттєво впливати на природу протеїну. Таким чином, отриманий грибний ферментний препарат каталази штаму Р-01 базидіоміцету Pleurotus ostreatus має індивідуальні характеристики вмісту амінокислот і білка. Внаслідок проведеного дослідження встановлено кількісне співвідношення амінокислот грибного ферментного препарату каталази, яке свідчить про його кислу природу. Це споріднює грибний ферментний пре № з/п 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. Амінокислота Тре Цис Тир Асп Глу Ліз Арг Гіс % білка в ФП Вміст амінокислот, г% 4,53 0,54 4,93 17,68 19,19 5,34 5,56 3,40 57,0671 парат каталази штаму Р-01 базидіоміцету Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. з ферментами тваринного походження і відкриває перспективи його використання у харчовій і фармацевтичній промисловостях. Джерела інформації: 1. Бухало А.С., Соломко Е.Ф., Митропольская Н.Ю. Базидіальні макроміцети з лікарськими властивостями //Укр. ботан. журн. -1996. -53, №3. С.192-201. 2. Денисова Н.П. Протеолитические ферменты базидиальных грибов, таксономические и экологические аспекты их изучения: Автореф. дис. д-ра биол. наук. -Л., 1991. -31с. 3. Дудка И.А., Вассер С.П., Элланская И.А. Методы экспериментальной микологии. Справочник. -К.: Наук. думка, 1982. -550с. 4. Патент 39243 А України. Спосіб визначення каталазної активності базидіоміцетів /Федотов О.В., Гавриленко Г.В. Заявка №2000116560, від 21.11.00, кл. 7C12N9/58, Бюл. №5, від 15.06.01. 5. Патент 46461 А України. Штам соматичних структур їстівного базидіоміцета Pleurotus ostreatus (Jacg.: Fr.) Kumm. P-01 - продуцента плодових тіл і міцелію з антиокисними властивостями /Федотов О.В., Вовк Н.В. Заявка №2001075193, від 20.07.01, кл. 7 C12N1/14, A01G1/04, Бюл. №5, від 15.05.02. 6. Соломко Э.Ф., Дудка И.А. Перспективы использования высших базидиомицетов в микробиологической промышленности //ВНИИСЭНТИ: Об 7 12444 8 зорная информация. Сер. 3. -М., 1985. -48с. 8. Eriksson K.-E., Blanchette R.A., Ander P. 7. Федотов О.В. Активні продуценти молокозMicrobial and enzymatic degradation of wood and гортаючих ферментів серед гіменоміцетів, їх біоwood components. Berlin, Heidelberg: Springierлогічні особливості та перспективи застосування: Verlag, 1990. Автореф. дис. к-та біол. наук. -К., 1995, -20с. (про9. Tardif A. La Mycotherapie ou Les proprietes тотип). Medicinales des Champignons. -Paris,2000. –167р. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601