Амінокислотний склад ферментного препарату каталази штаму f-vv базидіоміцету flammulina velutipes (curt.: fr.) sing.

Амінокислотний склад ферментного препарату каталази штаму F-vv базидіоміцету Flammulina velutipes (Curt.: Fr.) Sing., який містить аланін, валін, лейцин, ізолейцин, пролін, фенілаланін, метіонін, гліцин, серин, треонін, цистеїн, тирозин, аспарагінову кислоту (аспарагін), глутамінову кислоту (глутамін), лізин, аргінін, гістидин, мас. %: аланін 4,52 валін 5,95 2 (19) 1 3 12443 4 consors, С. hirsutus, C. versicolor, Daedaleopsis глутамінова кислота (глутамін) 12,18 styracina, Fomitopsis castaneae, F. cytisina, F. лізин 5,34 pinicola, Irpex lacteus, Lenzites betulina, Pycnoporus аргінін 7,19 coccineus, Schizophyllum commune, Trametes гістидин 3,69. sanguineus, Coprinus macrorhizus, Flammulina Пропонована корисна модель є нова, тому що velutipes, Lentinus edodes, Russula decolorans. Одне відома з амінокислотного складу і вмісту білку нак, дослідження охоплюють достатньо вузьку грибних ферментних препаратів каталази, фермесистематичну групу грибів, надаються характериснтативної активності та продуценту. тики ферментних препаратів різного ступеня очисПриклад конкретного виконання 1. Поверхневе тки, не наводяться дані з активності каталази досвирощування штаму F-vv F. velutipes проводять в ліджених культур [2]. колбах об'ємом 1 або 2 літри. Колби містять 350 чи Найбільш близький за технічною суттю і дося700мл, відповідно, стерильного глюкозожності результату є амінокислотний склад 13 мопептонного середовища наступного складу, г/л: локозсідальних ферментних препаратів базидіаглюкоза 10,0 льних ксилотрофів Corticium laeve Fr. (штам Рпептон 3,0 330); Chaetoporus ambiquus (Bres.) Bond. et Sing. КН2РO4 0,6 (B-062); Fibuloporia mollusca (Pers.) Bond. et Sing. К2НРO4 0,4 (A-020); Tyromyces lacteus (Fr.) Murr. (A-027); MgSO4x7H2O 0,5 Tyromyces revolutus (Bres.) Bond. et Sing. (A-025); СаСІ2 0,05 Tyromyces undosus (Peck.) Murr. (C-070, M-250); ZnSO4x7H2O 0,001 Irpex lacteus (Fr.: Fr.) Fr. (B-059, M-232, M-253); дистильована вода до 1л [7]. Amiloporia lenis (Karst.) Bond. et Sing. (A-004); Інокулюм становить 5-10%. Культивування Hirschioporus laricinus (Karst.) Ryv. (M-81) і Hydnum проводять до максимальних значень каталазної ochraceum Pers. (B-046) та промислового препараактивності (КА) міцелію - протягом 15 діб в термоту - яловичого сичужного ферменту, який викорисстаті при температурі 27,5°С. товують у харчовій промисловості для зсідання Каталазну активність міцелію визначають за молока. Культури грибів вирощували поверхнево методом, який заснований на здатності пероксиду на рідкому сусло-пептонному середовищі, що місводню утворювати з солями молібдену стійкий тило знехмілене пивне сусло (4° по Балінгу) і фезабарвлений комплекс. Інтенсивність забарвлення рментативний пептон (3г/л) до максимальної мовимірюють на спектрофотометрі, на приклад СФлокозсідальної активності культурального 26, при довжині хвилі 410нм супроти нульової фільтрату. Грибні ферментні препарати отримувапроби з дистильованою водою. Каталазну активли шляхом фракціонування сульфатом амонію з ність розраховують за формулою [4]: культурального фільтрату. Кількісний вміст зв'язаЕ=(AК-Ад).V.t.k.р (мкат/л), них амінокислот і білка у молокозсідальних ферде Е - активність каталази (мкат/л), Ак та Ад ментних препаратах визначали за допомогою аміекстинкція контрольної та дослідної проб, V - об'єм нокислотного аналізатора моделі ААА-881, після їх проби, що вносили (0,1мл), t - час інкубації (600с), кислотного гідролізу. Не наводяться дані з активk - коефіцієнт мілімолярної екстинкції пероксиду ності каталази досліджених культур [7]. водню, що дорівнює 22,2.103мМ-1.см-1, р - коефіціВ основу корисної моделі покладено завдання єнт розведення. встановлення амінокислотного складу ферментноПриклад конкретного виконання 2. Фракціонуго препарату каталази штаму F-vv базидіоміцету вання ендогенних ферментів проводять при 60Flammulina velutipes (Curt.: Fr.) Sing., який відріз80% насиченні сульфатом амонію у гомогенаті няється від прототипу ферментативною активнісміцелію. Використовують цей метод завдяки велитю, внутрішньоклітинним походженням, амінокискій розчинності у воді та стабілізуючій дії на білколотним складом, продуцентом та дешевий у ву молекулу (NH4)2SO4 [3]. Фракцію білку, яка виробництві. утворила осад, відділяють центрифугуванням на Поставлене завдання вирішується тим, що рефрижераторній центрифузі при 5±1°С, відцентвстановлено амінокислотний склад ферментного ровому прискоренні 2000g протягом 15 хвилин. препарату каталази штаму F-vv базидіоміцету Наступним етапом проводять первинну очистку Flammulina velutipes (Curt.: Fr.) Sing., який містить отриманої білкової фракції за допомогою діалізу в собі, мас.%: проти охолодженої до 5±1°С дистильованої води аланін 4,52 протягом 24 годин. Для прискорення дифузії, розвалін 5,95 чинник декілька раз замінюють до повного очилейцин 5,36 щення розчину білків від сульфату амонію. Завдяізолейцин 5,79 ки осмосу, молекули розчинника призводять до оксипролін 0,00 часткового розведення дослідного розчину білків. пролін 6,20 Отримані розчини фракцій білків піддають пофенілаланін 7,32 дальшим дослідженням. Зокрема - ліофільній суметіонін 1,71 шці, наприклад на приладі "Иней-3-2" та визначагліцин 3,93 ють каталазну активність ферментних препаратів серин 3,84 (ФП), які мають вид порошку від світло-сірого до треонін 5,67 світло-кремового забарвлення, добре розчинні у цистеїн 0,96 воді. тирозин 6,02 аспарагінова кислота (аспарагін) 14,33 5 12443 6 Каталазна активність ферментного препарату Вміст у ферментних білках основних, позитивштаму F-vv Flammulina velutipes (Curt.: Fr.) Sing. но заряджених амінокислот аргініну (Арг) та гістидорівнює Емг=12,8.106мкат/г. дину (Гіс) є значно нижчим, ніж попередніх і не Приклад конкретного виконання З. Кількісний може суттєво впливати на природу протеїну. вміст зв'язаних амінокислот і білка у ферментному Таким чином, отриманий грибний ферментний препараті каталази визначають за допомогою аміпрепарат каталази штаму F-vv базидіоміцету нокислотного аналізатора, наприклад моделі АААFlammulina velutipes (Curt.: Fr.) Sing. має індивіду881, після їх кислотного гідролізу. Амінокислотний альні характеристики вмісту амінокислот і білка. склад отриманого ферментного препарату надано Внаслідок проведеного дослідження встановлено у таблиці, де амінокислоти розташовані залежно кількісне співвідношення амінокислот грибного від природи радикалів (амфотерності) білкових ферментного препарату каталази, яке свідчить молекул. Таблиця, також, містить дані про міліграм про його кислу природу. Це споріднює грибний - процентний вміст білка в препараті. Дані подаферментний препарат каталази штаму F-vv базиються без зазначення похибки, оскільки представдіоміцету Flammulina velutipes з ферментами тваляють точні результати амінокислотного аналізу ринного походження і відкриває перспективи його одного зразка ферментного препарату. використання у харчовій і фармацевтичній промисловостях. Таблиця Джерела інформації, які використані при укладанні заявки Амінокислотний склад ферментного препарату 1. Бухало А.С., Соломко Е.Ф., Митропольская каталази штаму F-vv базидіоміцету Flammulina Н.Ю. Базидіальні макроміцети з лікарськими власvelutipes (Curt.: Fr.) Sing. тивостями // Укр. ботан. журн. - 1996. - 53, №3. С.192-201. 2. Денисова Н.П. Протеолитические ферменты Вміст Вміст амібазидиальных грибов, таксономические и экологи№ Аміноаміно- № Аміноно-кислот, ческие аспекты их изучения: Автореф. ... дис. д-ра з/п кислота кислот, з/п кислота мг % биол. наук. - Л., 1991. - 31с. мг % 3. Дудка И.А., Вассер С.П., Элланская И.А. 1. Ала 4,52 11. Тре 5,67 Методы экспериментальной микологии. Справоч2. Вал 5,95 12. Цис 0,96 ник. - К.: Наук. думка, 1982. - 550с. 3. Лей 5,36 13. Тир 6,02 4. Патент 39243 А України. Спосіб визначення 4. Іле 5,79 14. Асп 14,33 каталазної активності базидіоміцетів / Федотов 5. O-про 0,00 15. Глу 12,18 О.В., Гавриленко Г.В. Заявка № 2000116560, від 6. Про 6,20 16. Ліз 5,34 21.11.00, кл. 7C12N9/58, Бюл. №5, від 15.06.01. 7. Фен 7,32 17. Арг 7,19 5. Патент 64129 А України. Штам соматичних 8. Мет 1,71 18. Гіс 3,69 структур їстівного базидіоміцета Flammulina 9. Глі 10. Сер 3,93 % білка в ФП 55,8326 3,84 З групи неполярних, гідрофобних амінокислот на увагу заслуговує оксипролін (O-про), який, на відміну від ФП прототипу, не виявлено у складі білка каталази штаму F-vv зимового опенька. Високий вміст гліцину (Глі) з полярних, гідрофільних амінокислот, в ФП пояснюється, скоріше всього, внесенням у живильне середовище ферментативного пептону, що має у складі до 2,22% цієї амінокислоти від вмісту азоту. Досліджені білки ФП можна було б віднести до кислих вже тільки за кількістю негативно заряджених аспарагінової (Асп) і глутамінової (Глу) амінокислот. Але це припущення вірне в тому разі, коли в білках вони не знаходяться у вигляді глутаміну і аспарагіну, що при кислотному гідролізі довести не можливо. Побічним показником переваги у структурі білків ФП кислих амінокислот може бути те, що 0,1%-ний водний розчин препарату мав рН, який дорівнював 6,20. Комп’ютерна верстка В. Мацело velutipes (Curt.: Fr.) Sing. F-vv - продуцента плодових тіл і міцелію з антиокисними властивостями/ Федотов О.В., Горяшник Ю.В. Заявка №2003020945, від 04.02.2003, кл. 7C12N1/14, A01G1/04, Бюл. №2, від 16.02.04. 6. Соломко Э.Ф., Дудка И.А. Перспективы использования высших базидиомицетов в микробиологической промышленности // ВНИИСЭНТИ: Обзорная информация. Сер.3. - М., 1985. - 48с. 7. Федотов О.В. Активні продуценти молокозгортаючих ферментів серед гіменоміцетів, їх біологічні особливості та перспективи застосування: Автореф. дис. ... к-та біол. наук. - К., 1995, - 20с. (прототип). 8. Eriksson K.-E., Blanchette R.A., Ander P. Microbial and enzymatic degradation of wood and wood components. Berlin, Heidelberg: SpringierVerlag, 1990. 9. Tardif A. La Mycotherapie ou Les proprietes Medicinales des Champignons. - Paris, 2000. - 167p. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601