Спосіб відбору сировини для одержання антилептоспірозної плазми

Способ отбора сырья для получения антилептоспирозной плазмы путем скринирования крови людей, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что проводят скринирование крови здоровых лиц с использованием лептоспироз*ного поливалентного эритроцитарного диагностикума и отбирают образцы плазмы с титром антилептоспирозных антител 1:160 1:320, относящихся к иммуноглобулинам класса С. С > Изобретение относится к области медицины, а именно к способам получения иммунных препаратов из крови человека, и может быть использовано в производственной трансфузиологии. При проведении литературного и патентного поиска не найдено сообщений по получению аллогенного антилептоспирозного препарата. Имеются лишь сообщения о способе получения ксеногенной (лошадиной) антилептоспирозной поливалентной сыворотки, ее экспериментальном изучении, а также лечебном применении [1]. Данная работа выбрана в качестве прототипа, каждый имеет ряд существенных недостатков: - способ предусматривает получение ксеногенного (лошадиного) препарата, введение которого приводит к сенсибилизации реципиентов; - одним из основных этапов является гипериммунизация животных; - применение способа связано со зна чительными экономическими затратами. Задачей изобретения является получения аллогенного препарата с высокой специфической активностью и стабильностью. Поставленная задача решается тем, что вгспособе отбора сырья для получения антилептоспирозной плазмы путем скринирования крови людей, согласно изобретению, проводят скринирование крови здоровых лиц с использованием лептоспирозного поливалентного эритроцитарного диагностикума и отбирают образцы плазмы с титром антилептоспирозных антител 1:160 1:320, относящихся к иммуноглобулину класса G. Заявляемый способ представляет собой технологический процесс, который включает следующие этапы: 13292 1. Приготовление лептоспирозного поливалентного зритроцитарного диагностикума повышенной чувствительности. 2 Скрининг крови здоровых лиц в реакции пассивной гемагглютанации с лептос- 5 пирозным поливалентным эритроцитарным диагностикумом повышенной чувствительности Ачтилептоспирозные тела выявлялись с помощью поливалентного высокочувстви- 10 тельного лептоспирозного эритроцитарного диагностикума во всех сыворотках крови по системе АВО в титрах 1:20 до 1:640. Чаще ьсего высокие уровни антител определялись у лиц групповой принадлежности А(Н). 15 3. Отбор индивидуальных образцов до норской плазмы крови с титрами антилептсспирозных антител - 1:160 и выше. 4. Лиофилизация плазмы общеприня том способом [2]. 20 П р и м е р 1. Готовят лептоспирозный поливалентный эригроцитарный дизгностикум повышенной чувствительности. Берут шгам«.1Ы лептоспир; штамм Wijulog, серофуппа Icterohoemorrha- 25 giae. серовар Copenhageenii, штамм Moskva Yсерогруппа grippothyphosa, серовар grippotypho^ae, штаммы Pomona, серогруп-па Pomona, серовар обладающие подвижностью, типичной мор- 30 Фологией, хорошим ростом на питательной среде, агглютинирующиеся типоспецифической иммунной сыаороткой до титра не менее чем 1:10000. Для получения бактериальной массы 35 маточную культуру каждого штамма засевают во флаконы со средой Терских в соотношении 1:10 и выращивают при 28°С в течение 1014 дн. Примеси белка питательной среды удаляют центрифугированием че- 40 рез четырехслойный марлевый фильтр. Взвесь бактерий центрифугируют при 6000 об/мин в течение 40 мин при 80-2°С. Биомассу ресуспендируют в 0,9% растворе натрия хлорида до конечной концентрации 45 50МО мг/мл. Антигены готовят методам ультразвуковой экстракции и смешивают их в разных объемах, получая поливалентный антиген. Для приготовления лептоспирозного 50 поливалентного зритроцитарного диагностикума используют формализированные эритроциты барана. Сенсибилизацию эритроцитов барана пооводят поливалентным антигеном о тече- 55 ниє 1 '»аса при t = 40°С. Лептоспирозный поливалентный эритроцитарный диагностикум используют для выделения антител в реакции пассивной гемагглютинации в челоееческой плазме. Рабочая концентрация диагностикума 1 %, Титр выявленных в образце плазмы антилептоспирозных антител составляет 1:160. В реакции с цистеином установлено, что антилептоспирозные антитела относятся к иммуноглобулинам класса G. Плазму крови данного донора подвергают лиофильному высушиванию. П р и м е р 2. Готовят лептоспирозный эритроцитарный диагностикум повышенной чувствительности способом, описанным в примере 1. Образец плазмы крови донора исследуют на наличие антилептоспирозных антител в реакции пассивной гемагглютинации. Титр выявленных антилептоспирозных антител составляет 1:256. Плазму крови данного донора лиофильно высушивают. П р и м е р 3. Лептоспирозный эритроцитарный диагностикум повышенной чувствительности и выявление антилептоспирозных антител проводят аналогично примерам 1 и 2. Титр выявляемых антилептоспирозных антител составляет 1:320. Плазму крови данного донора лиофильно высушивают. Протективное действие антилептоспирозной плазмы исследовали In vivo на 27 морских свинках (табл. 1), весом 190-200 г., которых предварительно заражали внутрибрюшинно культурой лептоспор в дозе 2 • 10 клеток, относящейся к серогруппо fcterohaemorrhagiae. Сухую человеческую плазму с титром антилептоспирозных антител в дозе 1:160 вводили животным подкожно на вторые, третьи и четвертые сутки после заражения (I гр). В качестве контроля использовали аналогичные группы морских свинок, которым вводили нормальную человеческую плазму (II гр), антилептоспирозный воловий гаммаглобулин (III гр), только культуру летоспир (IV гр) и интактная группа (V гр). Дозы препаратов рассчитывали в соответствии с массой тела животных и титрами антилептоспирозных антител в препаратах. В результате проведенных исследований оказалось, что наибольшей протективной активностью обладала сухая человеческая антилептоспирозная плазма (табл. 1). Плазма крови с титром 1:160 - 1:320 антилептоспирозных антител выявляется у здоровых лиц в % случаев. Плазма крови с титрами антилептоспирозных антител, уровень которых ниже, чем 1:160 не может считаться антилептоспирозной, так как она обладает низкой специфической активностью. Плазма крови с титром антилептоспирозных антител, превышающим 1:320, 13292 теризуются уровнем титров антилептогпирозных антител 1:160 - 1:320, относящихся к иммуноглобулинам класса G, стабильно сохраняющую специфическую активность в встречается крайне редко, поэтому ее отбор в качестве специфического препарата нереален. получить а ллогенную антилептоспирозную 5 течение 2 лет при температуре +20% - 2° плазму в лиофилизировэнной форме, харак(табл. 2). Заявляемый способ позволил впервые Т а б ли ца 1 Протективная эффективность антилептоспирозной плазмы Группы животных Количество животных (морские свинки) Вводимый препарат всего Опыт ( Человеческая (сухая) антилептоспироз пало выжило 6 1 5 ная плазма Конт II Нормальная человеческая плазма 3 2 1 роль II! Антилептоспирозный воловий гамма-гло 6 3 3 булин IV Без введения препаратов 6 6 V Интактные животные 6 6 Таб лица 2 Специфическая активность сухой антилептоспироэной плазмы в процессе хранения Образцы Титр антилептоспирозных антител (обратные величины) исходные данные 1 3 6 9 12 18 24 1 160 160' 160 160 160 160 160 160 2 3 160 160 160 160 160 160 160' 160 256 256 256 256 256 320 320 320 320 320 320 320 320 320 320 5 256 320 320 256 4 256 320 320 320 320 Упорядник Замовлення 4108 срокі і хранения, мес Техред М.Моргентал Коректор н. Король Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Гагаріна, 101