Спосіб одержання хлорофіло-каротинової пасти з репаративно-регенеративними властивостями

Способ получения хлорофилло-каротиновой пасты с репаративно-регенеративными свойствами, включающий экстракцию биомассы микроводорослей органическим растворителем в присутствии водяного пара и отгонку растворителя, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, в качестве микроводорослей используют Microcystis aeruglnosa Kuetz em. EJenk или Chloreifa vulgarls или Spirulina platensis Breb или Scenedesmus sp., а экстракцию проводят в присутствии хвойной лапки при массовом соотношении биомассы микроводорослей и хвойной лапки, равном С > со Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к получению из водорослей биологически активных веществ (БАВ), и может быть использовано для получения лекарственных средств, обладающих регенерационными и антимикробными свойствами. Известен способ получения хлорофилло-каротиновой пасты, который состоит в экстракции биомассы природных популяций планктонных сине-зеленых водорослей, возбудителей "цветения" воды в летний период (представители pp. Microcystls, Aphenizomenon, Anabaena) органическим растворителем при нагревании реакционной массы с помощью водяного пара. Экстракцию проводят в течение 4 часов, после чего растворитель отгоняют. Полученную в результате экстракции хлорофилло-каротиновую пасту используют в качестве кормовой добавки. Установлено также, что данная хлорофилло-каротиновая паста проявляет определенные лечебные бактерицидные свойства и может использоваться в качестве средства, обладающего репарационно-регенеративными свойствами. Однако обнаруженные свойства проявляются у данной пасты в недостаточной степени из-за существенной изменчивости химического состава собранной в водоемах биомассы водорослей, неполного экстрагирования БАВ водорослей и, кроме того, при ее использовании иногда отмечается проявление аллергического эффекта, а при хранении тенденция к изменению S 13945 Физико-химических свойств, в частности, способность к загустеванию по мере хранения, что отрицательно сказывается на ее эффективности. В основу изобретения поставлена зада- 5 ча разработки такого способа получения хпорофипло-каротиновой пасты, который за счет использования новых технологических приемов, обеспечивал бы получение конечного продукта с устойчивыми бактерицид- 10 ными и репарационно-регенеративными свойствами при лечении трофических и травматических повреждений кожи и глубиннорасположенных тканей. Поставленная задача решается в спосо- 15 бе получения хлорофилло-каротиновой пасты, включающем последовательную экстракцию биомассы микроводорослей органическими растворителями, отличающимися по своей полярности, при нагревании 20 вбдяным паром, и удаление растворителей, в котором, согласно изобретению в качестве микроводорослей используют биомассу выращенных в контролированных условиях (т.е. достаточно стабильного химического 25 состава) представителей зеленых и сине-зеланых водорослей (pp. Chlorella, Scenedesmus, Spirullna, Microcystis и др.), а экстракцию проводят в присутствии хвойной лапки при массивом соотношении мик- 30 роводорослей к хвойной лапке, равном 1:5 или 1:10. Проведение экстракции в присутствии хвойной лапки обеспечивает введение в состав хлорофилло-каротиновой пасты, наря- 35 ду с липидами, каротиноидами, производными хлорофиллов, экстрагируемыми из биомассы микроводорослей, большого количества терпенов, а также органических восков, содержащих углеводо- 40 роды парафинового ряда, высшие жирные кислоты и их эфмры, что придает получаемой предлагаемым способом хлорофилло-каротиновой пасте более высокую биологическую активность и бактерицидные свойства, 45 а также гарантирует стабильность состава. П р и м е р 1. В экстрактор загружают 10 кг биомассы микроводорослей (Chlorella - 30%, Scenedesmus - 70%), заливают 9G%ным этиловым спиртом и экстрагируют в те- 50 чение 30 мин при постоянном перемешивании и при комнатной температуре. Затем клеточную массу водорослей отделяют от спиртового экстракта, равномерно смешивают с хвойной лапкой в 55 соотношении 1:5 и экстрагируют смесь фитомассы бензином. После экстракции бензин отгоняют, а на стадии омыления спиртовый и бензиновый экстракты объединяют. Выход омыленной хлорофилло-каротиновой пасты, как исходного сырья для приготовления лечебной формы мази "Альгофин", составляет примерно 4 кг. П р и м е р 2. Бактериостатические и бактерицидные концентрации полученной хлорофилло-каротиновой пасты (ХКП) проверены на широком спектре (29 штаммов) патогенных и условно патогенных микроорганизмов. Работа проведена методом серийных разведений в редких средах с последующим высеванием на твердые среды. Как видно из данных табл. 1, ХКП проявила достаточно широкий спектрі антимикробного действия. Наиболее чувствительными к антимикробному действию оказалась группа патогенных кокков, за ними следуют шигеллы и возбудители токсикоиифекции, тифозно-паратифозные бактерии. Наиболее устойчивыми оказались капсульные бактерии. П р и м е р 3. В реактор загружают 10 кг микроводорослей (Chlorella - 25%, Sxenedesmus - 75%) и без спиртовой экстракции и добавления хвойной лапки проводят з аналогичных условиях экстракцию биомассы бензином и последующее омыление. В связи с плохим контактом клеток с гидрофобным растворителем (хвойная лапка увеличивает поверхность контакта клеток с растворителем и повышает экстрагируемостьБАР), а спирт дополни гель экстрагирует комплекс каротиноидов, хлорофиллов и их производных, выход ХКП при использовании этого типа обработки составлял лишь 0,1 кг готовой продукции. П р и м е р 4. Спектр фармакологического действия ХКП проверен на ранах различного происхождения: раны простые резаные, раны с размозженными краями, раны стерильные; раны инфицированные микрофлорой, которая моделирует природное, почвенное и пылевое загрязнение; ожоги термические; ожоги химические (кислотные, щелочные, фенольные); радиационные язвы, трофические язвы, которые были получены у экспериментальных животных (кролей, собак) при использовании феноменов Артюса-Шварцмана и Сахарова. Контролем служили аналогичные животные, которых лечили линиментом Вишневского. Эффективность влияния последнего при лечении ран принималась за 100%. Результаты заживления ран представлены в табл. 2. Эффективность лечения ран различного типа с помощью ХКП составляла 170 - 180% по отношению к контролю. ХКП одинаково эффективна при закрытых и открытых методах лечения. 13945 6 дения и степени инфицирования (раны про Таким образом, предлагаемый способ стые. с разможженными краями, инфициропозволяет получить ХКП с репарационно-реванные, термические и химические ожоги, генеративными свойствами и сильным бакязвы трофические и радиационные), а также терицидным действием. Способ включает использование двухстадийной экстракции 5 на широком спектре патогенной и условнопатогенной микрофлоры. биомассы микроводорослей (Chiorella, Scenedesmus, Spirullna, Mlcrocystls) с поТехнология получения ХКП разработана следующей отгонкой растворителей. Для Институтом гидробиологии НАН Украины лучшей экстракции биологически активных веществ из клеточной массы водорослей ис- 10 совместно с Украинской Ассоциацией "Северо-Восток". пользуют прием нанесения ее на измельченную хвойную лапку. Лекарственная форма мази, приготовленная на ее основе, имеет кодовое назваЭффективность действия ХКП успешно проверена на ранах различного происхожние "Альгофин". 15 Таблица 1 Спектр и концентрация антимикробного действия ХКП Название штаммов микроорганизмов Действующие концентрации ХКП, % бактериостатические бактерицидные Staphylococcus cltrlcus 0,001 0,01 Staphylococcus albus 0,001 0,01 Staphylococcus aureus №209 0,01 0,1 Staphylococcus haemolytlcus 0,002 0,02 Staphylocbccus nonhaemolltlcus 0,001 0,02 Streptococcus faecalls Salmonella typhl 0,001 0,01 0,03 0,3 Salmonella paratyphl A 0,03 0,3 Salmonella paratyphl В 0,03 0.3 Salmonella paratyphl Breslau 0,03 0.3 Salmonella paratyphl Gertnerl 0,02 0,2 Proteus neorganll Salmonella paratyphl Slnpestlfer Salmonella pillorum 0.04 0,4 0,03 0,3 0,1 Schldella flexnerl 0,01 0,02 Schlgella dysenterlal (Shiga) 0,03 Escherlchla coll 0,001 0,3 • 0,01 Vibrio cholerae Bacterium rhusiopathiae suis 0,04 0,4 0,05 0,5 Chromobacterlum prodlglosum 0,04 0,4 Pseudomonas aeruglnosa 0,04 0,4 Proteus vulgarls Bacterium Frldlenderl 0,03 0,002 0.04 0,003 0,3 Corynebacterlum dlphthetlae Bacillus subtilis 0,2 0,02 0,4 0,03 8 13945 Продолжение табл. 1 Название штаммов микроорганизмов Действующие концентрации ХКП, % бактериостатические бактерицидные Bacillus megaterlum 0,002 0,02 Bacillus mesenterlcum 0,002 0,02 Bacillus anthracls 0,04 0,4 Bacillus macroldes 0,03 0,4 Candida 0,002 0,02 Таблица 2 Среднее время заживления ран, сут, М+-щ_ Средняя скорость заживления ран, кв.мм - контроль 19.2+-1.18 -ХКП 16,8+-2,19 18,62+-1,36 24,80+ -2,73 - мазь Вишневского 18,6+ -2,43 21,40+-1,91 26,7+ -2.71 14,7+-1,63 -ХКП 17,2+-1,94 23,8+ 1,27 - мазь Вишневского 21,4+-1,76 19,7+-1,33 51,42+-3,68 12,41+-1,39 -ХКП 22,63+-2,72 - мазь Вишневского 31,09+-4,76 20,67+ -2,42 18,47+-3,29 Виды ран и использованные препараты М+-т Простые раны: Инфицированные раны: контроль Раны у животных, сенсибилизированные по Шварцману контроль Раны у животных, сенсибилизированные по АртюсуСахарову - контроль 69,33+ -4,72 - ХКП 34,61+-2,83 - мазь Вишневского 54,71+ -3,91 Упорядник Замовлення 4131 Техред М.Моргентал 11,72+-1,88 19,39+-1,76 16,37+-1,44 Коректор М. Керецман Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м, Ужгород, вул.ГагарІна, 101