Спосіб кількісного визначення вітаміну д2 в рослинних кормах

СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК (19) Ш) 1 (51) 4 G 01 N 30/06 , ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4085852/23-25 (22) 04.07.86 (46) 30.12.87. Бюл. № 48 (71) Научно-исследовательский институт животноводства Лесостепи и Полесья УССР (72) Н.А. Романов, В,В. Мирось и Т.Л. Осипова (53) 543.544(088.8) (56) Cohen H., Lapointe М. J. Food Chemistry, 1978, № 26, V. 5, p. 12I0-I2I3. Двинская Л.М. Определение D-вита-* минной обеспеченности сельскохозяйственных животных,- В кн: Жирорастворимые витамины и методы их определения в биологических субстрактах. Боровск, 1979, с, 47-54. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА DJ В РАСТИТЕЛЬНЫХ КОРМАХ . (57) Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения витамина 0г в природных соединениях методом колоночной хроматографии. Целью изобретения является повышение чувствительности и сокращение времени анализа. Исследуемый образец гидролизируют спиртовым раствором щелочи, осуществляют "экстракционное выделение неомыленной фракции и отделяют примеси на хроматографических колонках. Предваритель-* ное отделение каратонидов осуществляют на колонке с окисью алюминия. Фракцию, содержащую витамин D 2 , отбирают по времени выхода витамина D 2 из колонки, растворяют в гексане, подают в микроколонку с силикагелем и элюируют смесью 40-60%-ного раствора гексана в хлороформе. Выделенный на второй колонке витамин D 2 детектируют в УФ-спектре, ? табл. . £ со о Зі о [РОФ-К1 'аи ї.і.-и« 1 1363060 Изобретение относится к аналити"Результаты определения витамина ческой химии и может бьзть использоваD- в искусственных растворах (п=10) но для количественного определения приведены в табл. 1. витамина D z в природных соединениях П р и м е р 2. Определение витаметодом колоночной хроматографии. мина D 2 в сене люцерновом и злаковом. Цель изобретения - повышение чувНавеску корма 25 г заливают 100 мл ствительности и сокращение времени этилового спирта, добавляют 25 мл анализа. 50%-ного раствора гидроокиси калия Способ осуществляется следующим 10 и ведут гидролиз в течение 40 мин образом. при 60°С в атмосфере инертного газа. Исследуемый образец гидролизуют Витамин D 4 экстрагируют гексаном спиртовым раствором щелочи, осущест(дважды по 20 мл) из гидролизата, вляют экстракционное выделение неоразбавленного водой до 40% эталона, мыленной фракции и отделяют примеси отмывают водой от щелочи, сушат с на хроматографических колонках. Предсернокислым натрием и пропускают чеварительное отделение каротиноидов рез колонку с окисью .алюминия. Колоносуществляют на колонке с окисью алюку промывают 50 мл Гоксана и элюируминия. Фракцию, содержащую витамин ют витамин D 2 1,5%-ным раствором изоD^ , отбирают по времени выхода витапропана в гексане. Фракцию, содержа20 мина D a из колонки, растворяют в щую витамин D 2 , отбирают по времени гексане, додают в микроколонку с сивыхода витамина D 2 из колонки, упариликагелем и элюируют смесью Д0-60%-но вают досуха в атмосфере инертного гаго раствора гексана в хлороформе. Выза и растворяют в 500-1000 мкл гекделенный на второй колонке витамин ' 25 сана. 200-300 мкл пробы вводят в D 2 детектируют в УФ-спектре. микроколонку с силикагелем жидкостного хроматографа высокого давления П р и м е р I. Определение вита"Милихром" и элюируют Еитамин D^ мина D в искусственных растворах с 40-60%-ным раствором гексана в хлодобавками и без добавок эргостерина, роформе. Детектирование ведут в каротина, витаминов А и Е. 30 УФ-спектре при 266 нм. 50 мл стандартного раствора витаРезультаты определения витамина мина D 2 с добавками и без добавки D 2 в сене люцерновом и злаковом эрТостерина, каротина, витаминов А (п=Ю) приведены в табл. 2. и Е пропускают через колонку с окиАналогично определяют витамин 0 2 сью алюминия (длина колонки 500 мм, 35 в других растительных кормах» при ! диаметр 8 мм). Колонку промывают этом относительное стандартное от50 мл гексана и элюируют витамин П г клонение не превышает 0,05. 1,5%-ным раствором изопропанола в гексане. Фракцию, содержащую витамин Р2,отбирают по времени выхода витаФ о р м у л а ' и з обр ет е н и я 40 мина D 2 из колонки, упаривают досуха Способ количественного определев атмосЛере инертного газа и раствония витамина D2 в растительных корряют Б 500-1000 мкл гексана. 200мах, включающий гидролиз образца 300 мкл пробы вводят в микроколонку спиртовым раствором щелочи, экстракс селикагелем жидкостного хроматогра45 ционное выделение неомыляемой фракфа высокого давления "Милихром" и ции, многократное отделение примесей элюируют витамин 0 2 40-60%-ным растна хроматографических колонках в повором гексана в хлороформе. токах органических элюентов и спектДетектирование ведут в УФ-спектре рофотометрическое детектирование выпри 226 нм. Чувствительность опредеделенного витамина D2 , о т л и ч а ления витамина D2 0,5 мкг (20 ИЕ) В ю щ и й с я тем, что, с целью повылитре; определению не мешают эргостешения чувствительности и сокращения рин, каротин, витамины А и Е в значивремени анализа, выделенную при пер--; тельных избытках. Расчет содержания вом разделении фракцию витамина D2 витамина D 2 ведут по площади хроматорастворяют в гексане, а последующее графического пика с учетом степени отделение примесей осуществляют в поконцентрирования его на хроматографитоке 40-60%-ного раствора гексана в ческой колонке. хлороформе. 1363060 Т а б л и ц а Концентрация витамина D. , мкг/л Сопутствующее вещество 0,50 Нет 0,100 Нет 0,100 Эргостерин Концентрация сопутствующего вещества, мкг/л Sr 0,50 0,03 0,98 0,01 100,0 0,99 0,01 . 1000,0 Витамин А 100,0 Витамин Е 100,0 _ Каротин • 1 Т а б л и ц а Найдено витамина П 2 » мкг/кг Объект анализа Введено витамина D2 мкг/кг Сено люцерновое Без добавки 4,04 0,01 То же 2,50 6,60 0,02 Сено злаковое Без добавки 0,653 0,02 То же 0,50 1,184 2 0,02 Редактор И. Рыбченко Заказ 6397/33 Составитель А, Толстых Техред А.Кравчук Sr Коррректор Г. Решетник Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретение и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4