Спосіб кількісного визначення вітаміну д2 в рослинних кормах

Изобретение относится к аналитической химии природных соединений s в ч а с т н о с т и к определению витамина D^ в растительных кормах, и я в л я е т с я усовершенствованием способа по а в т , с в . № 1363060, Целью изобретения я в л я ется повышение чувствительности с п о с о ба з а счет дополнительного отделения избытка каротиноидов из э к с т р а к т а неомыляемой фракции. Дополнительное отделение каротиноидов в виде осадка • осуществляется путем центрифугирования при ( - Ю ) - (-20) С 7 С в течение 30-40 мин. Изобретение позволяет в 10 раз снизить содержание каротиноидов в э к с т р а к т е , дает возможность дополнительно концентрировать витамин V і в 5 раз по сравнению с известным ( а в т . с в . № 1363060) и довести ч у в с т в и тельность определений до 0,1 мкг (4 ИЕ) в 1 кг корма. Г Изобретение относится к аналитической химии природных соединений, в ч а с т н о с т и к определению витамина D a в растительных кормах, и я в л я е т с я усовершенствованием способа по а в т . е в , СССР Р і 3 6 3 0 6 0 . Целью изобретения я в л я е т с я повышение ч у в с т в и т е л ь н о с т и способа за с ч е т дополнительного отделения избытка к а ротиноидов из э к с т р а к т а неомьщяемой фракции. П р и м е р . Навеску корма 100 г заливают 4-00 мл этилового спирта, добавляют 100 мл 50%-ного раствора г и д роокиси калия и ведут гидролиз в т е чение АО мин при .60°С в атмосфере инертного г а з а . Витамин J>i экстрагируют гексаном (дважды по 20 мл) из г и д р о л и з а т а , р а з б а в л е н н о г о водой до 40%-ной концентрации э т а н о л а , отмывают водой от щелочи, сушат сернокислым натрием, помещают в центрифужные пробирки и центрифугируют при -15 С в течение 30 мин. Выпавшие кристаллы каротиноидов отделяют фильтрованием и пропускают анализируемый раствор через колонку с окисью алюминия. Колонку промывают 50 мл г е к с а и а и витамин Т)г элюируют 1,5%-ным р а с т в о ром изопропанола в г е к с а н е . Фракцию, содержащую витамин D 2 , отбирают по времени выхода витамина Р^ из колонки, досуха упаривают в атмосфере инертного г а з а и растворяют в. 4 0 0 1000 мкл г е к с а н а . Затем 200-300 мкл пробы вводят в микрокслонку с с е л и к а гелем жидкостного хроматографа высокого давления "Милихром" и витамин 1562849 В л элюируют 40-60%-ным раствором гексана в хлороформе. Детектирование ведут в УФ-спектре при 266 нм, а содержание витамина D2 рассчитывают по площади хроматографического пика Объект анализа Сено люцерновое естественной сушки То же _"_ _п_ Сено люцерновое искусственной сушки То же с учетом степени концентрирования его на хроматографической колонке. Результаты определения витамина D 2 в различных растительных кормах приведены в таблице. Способ определения Введено витамина D 2 s мкг/кг Найдено витамина D^,мкг/кг Предлагаемый Без добавки 5,12 0,02 і То же Известный То же Предлагаемый 1,00 Без добавки 1,00 Без добавки 6,20 5,09 6,10 0,38 Sr ч ' • 0,02 0,02 0,03 0,05 * То же Известный 0,20 Без добавки То же Предлагаемый 0,20 Без добавки 0,57 Не обнаружено 0,56 0,72 То же Известный То же Предлагаемый 0 s 30 Без добавки 0,30 Без добавки 1,01 0,70 0,97 0,14 То же Известный 0,10 Без добавки То же 0,Ю Силос кукурузный 15 мес хранения То же Предлагаемый Без добавки 0,23 Не обнаружено f Не обнаружено 0,49 . 0,10 _п_ То же Известный 0,10 Без добавки _ и_ То же 0,10 -"— _»_ Сено злаковое естественной сушки То же _"_ Сено злаковое искусственной сушки То же _п_ м — — 0,25 _"_ 0,30 За счет дополнительного отделения каротиноидов из неомыляемой фракции 50 в виде осадка путем центрифугирования при -10~20°С в течение 30-40 мин изобретение позволяет в 10 раз снизить содержание каротиноидов в экстракте неомыляемой фракции при определении витамина D^ в растительных кормах. Это дает возможность дополнительно концентрировать витамин D t в 5 раз по сравнению с известным изобре 0,2! Не обнаружено Не обнаружено 0,51 0,04 0,04 0,03 0,02 . 0,04 0,03 0,05 0,03 0,05 0,04 0,05 0,05 тением и довести чувствительность определений до 0,1 мкг (4 И Е ) / 1 кг корма. Достигнутая чувствительность является достаточной для анализа любых растительных кормов, в том числе и с особо малым (менее 0,5 мкг/кг) содержанием витамина П^, что дает возможность широко использовать предлагаемое изобретение в сельскохозяйственном производстве для организа 51562849 6 ции рационалыюго кормггення сельскохощ и й с # тем, ч т о , с целью поныиеэяйственных животных, . • ния чувствительности способа за счет дополнительного отделения избытка к а - ' Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я ротиноидов из экстракта неомыляемой ' •; фракции, перед введением в колонну с Способ количественного определения окисью алюминия экстракт центрифугивитамина Т>г в растительных кормах по руют при -І0-20°С в течение 30-40 мин а в т . с в . К 1363060, о т л и ч а ю * и отделяют каротиноиды в виде осадка. Редактор Л. Гратилло Составитель Н, Пономарева Техред М.Дидык Корректор Л. Бескид Заказ 1062 Тираж 494 Подписное ВНИИГІИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская н а б . , д . 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101