Спосіб одержання гепаріну

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИН (51)4 А 61 К 31/725 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ (21) 2897057/28-14 (22) 20,03.80 / (31) R 1=705 (32) 21.03.79 (33) HU (46) 07.01.88. Бюл, № 1 (71) Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр, РТ (HU) (72) Иштван Такач, Дьёрдь Керей, Янош Иллеш, Петер Рудольф, Пал Гере, Ласло Чебе и Эржебет Несмелы* (HU) (53) 615.45:615.7 (088.8) (56) Способы получения гепарина. Минмедпром, 1977, вып. 11, с. 8-9. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАРИНА (57) Изобретение относится к фармакологии, точнее к способам получения лекарственных средств. Цель изобретения - повышение биологической активности препарата. Для этого водную суспензию органов животных, содержащих гепарин (концентрация 1,5-17%), насосом подают в устройство, используемое для предварительного автоли за, выдерживают ее там при 30-50°С 2-6 ч, затем проводят термообработку при 82-100 С. Водную суспензию органов в непрерывной системе при слабом потоке в течение 2-6 мин подают в изолированный отрезок трубы. При этом хорошо отделяется отфильтровываемый рьокий осадок, содержащий гепарин. Жидкую фазу, содержащую неактивные, мешающие вещества, отделяют через фильтр. Полученное сырье содержит 23% сухого вещества. При высушивании температуру пара, воздуха и выходящего из устройства влажного воздуха регулируют так, чтобы при температуре на входе 80-180°С и на выходе 50-100 С в течение короткого времени сушки получался гепариновый концентрат с содержанием сухого вещества 90-95%, рыхлой консистенции, с диаметром частиц 0,2-1,6 мм. В этом концентрате ферменты блокированы, он содержит мало микроорганизмов, обеднен жирами и неограниченно сохраняется при необходимых температурах. сэ •чг 1366042 организмов, концентрат обеднен жираИзобретение относится к фармакоми и неограниченно сохраняется при логии, а именно к способам получения необходимых температурах. Из-за незлекарственных средств. начительного содержания воды микроЦелью изобретения является повыорганизмы не могут размножаться. шение биологической активности. Хранение и транспортировка рентабельПоставленная цель достигается тем, ны. что при осуществлении способа получения гепарина, сырье выдерживают П р и м е р 1. 0,1 кг свежей слидля автолиза в течение 0,5-15 ч при зистой оболочки свиного тонкого ки10 10-15 С, затем нагревают при 75 шечника с содержанием сухого вещестЮ 0 ° С , из полученной суспензии отва 16,0 мас.% разбавляют 1,0 л воды, деляют агрегированный при той же темВ воде прежде растворен чистый порошпературе осадок и высушивают при кообразный гепарин в концентрации 80~100°С до содержания сухого вещест- 15 82 IE/мл, Суспензию при перемешивании нагревают до 85 С. Оставляют отстаива 90-95 мас.%. ваться в течение 5 мин и затем денаСпособ осуществляют следующим обтурированное вещество органа отделяют разом. с помощью фильтра. Взятая из 1380 мл Органы животных, содержащие гепа20 фильтрата проба имеет концентрацию рин, предварительно размельчают до гепарина 1,4 IR/мл, т.е. из введенных размера кусков 4-6 мм с помощью про82000 IE гепарина примерно 80000 IE мышленной мясорубки и затем разбавляют связаны денатурированным веществом водой с температурой 18-50 С до коноргана. центрации 1,5-17%. Затем водную сус25 Если свежую слизистую оболочку пензию органов насосом подают в используемое для предварительного автосвиного тонкого кишечника оставить лиза устройство, где она выдерживаетпри комнатной температуре на полтора ся при 30-50 С в течение 2-6 ч. Посдня и затем разбавить 1 л воды, конле этого проводят при 82-100 С термоцентрация гепарина в которой состав3 0 обработку в виде кратковременных кусляет 41 IE/мл, .а затем осуществить денатурацию при 85 С, то получится ков пара. Водную суспензию органов 1440 мл фильтрата с концентрацией в непрерывной системе при слабом погепарина 2,1 IE/мл. Из этой величины токе в течение 2-6 мин подают в изоможно рассчитать, что способность лированный отрезок трубы, при этом 35 связывания гепарина, полученного из хорошо отделяется отфильтровываемый 1,0 кг слизистой оболочки тонкого рыжий осадок, содержащий гепарин. кишечника свиньи, денатурированного Жидкую фазу, содержащую неактивные, вещества органа за счет 1,5-дневного мешающие вещества, отделяют посредставтолиза падает до 38000 IE. вом Силы тяжести, например сигом (фильтром).Полученное сырье содержит 40 Этот пример показывает что, в све23% сухого вещества. Целесообразно жих органах животных концентрация применять фильтровальное устройство связывающих гепарин белков выше, чем с постоянно обновляющейся фильтротаковая гепарина, вальной поверхностью. Выделенное П р и м е р 2, Две порции по 2 кг сырье можно хранить без охлаждения 45 свежей микозы тонкого кишечника рази замораживания, если оно высушиваетбавляют 3 л воды каждую. Температуру ся тотчас по мере того, как оно осажпервой порции устанавливают 15 С, втодается. При высушивании температура рой порции 55 С. Через 6 ч автолиза пара, воздуха и выходящего из устобе порции нагревают до 93 С и через ройства влажного воздуха регулирует- 5о 5 мин отфильтровывают. ся так, что при входной температуре Из автолизированной при 15 С сус80-180°С и температуре на выходе пензии микозы получают 1,40 кг дена50-100°С в течение относительно короттурированного материала с содержанием кого времени сушки получается гепасухого вещества 23,3%; фильтрат риновый концентрат примерно с 92%-ным 55 (3580 мм) содержит 0,73% сухого весодержанием сухого вещества и рыхлой щества; гепариновая активность фильконсистенции с диаметром частиц 0,2трата составляет менее 1,25 1Е/мл, 1,6 мм. В этом концентрате ферменты Из автолизированной при 55 С сусблокированы, он содержит мало микропензии микозы получают 1,02 кг дена 1366042 * жащего гепарин коагулята, который турироваиного материала с содержасодержит меньше жира, чем исходный нием сухого вещества 23,9%; фильтрат материал, хотя во время фильтрации (3870 мл) содержит сухого вещества 2,37%; іепариновая активность фильтчасть жира снова связывается с больрата также менее 1,25 1Е/мл„ шей поверхностью осадка. Коагулят содержит 23,4% сухого вещества. П р и м е р з . Две порции по 2 кг свежей микозы тонкого кишечника разФильтрат имеет гепариновую активЬавляют 3 л воды каждую, ность менее чем 0,9 IE/мл и содержит Обе порции приготовленной суспен- то 0,88% сухого вещества.Фильтрат содержит только жир, нерастворимый и растзнн микозы автолизируют при 30 С в воренный белок, немного пептидов и течение 6 ч затем температуру перполипептидов, неорганические соли и вой порции поднимают до 75°С, а втонекоторые прочие инертные компоненты, рой порции - до 100°С. Через 5 мин 15 Во время переработки отбирают обе автолизированные суспензии отпробы В, С и Д по 10 кг. фильтровывают. Пробу В прессуют на фильтр-пресс Из нагретой до 75 С автоматизидо толщины слоя 1,5 см. Получают рованной суспензии получают 1,1 кг 7,4 кг продукта с содержанием сухого денатурированного материала с содержанием сухого вещества 22,2%; фильт- 20 вещества 30,3%. С повышением толщины слоя подается степень действия пресрат (3900 мл) имеет содержание суса. хого вещества 2,08%, гепариновая Пробу С разделяют на две равные активность фильтрата менее 1,25 1Е/мл, части (С, и С 2 ) . Пробу С, высушивают Из нагретой до 100 С автоматизи25 в течение полутора дней при 90 С при рованной суспензии получают 1,2 кг толщине слоя 0,5 см в вентилируемом денатурированного материала с содерсушильном шкафу. Получают 1,31 кг жанием сухого вещества 23,4%; фильтвысушенного продукта с содержанием рат (3770 мл) содержит 1,63% сухого сухого вещества 88%. Его размельчают вещества, гепариновая активность фильтрата менее 1,25 IE/мл. П р и м е р 4 , Б этом примере показывается, что при периодическом способе работы слизистуют оболочку тонкого кишечника можно высушивать после денатурирования без потерь, 260 кг осаждающейся в машине при очистке кишок,содержащей 6,4% сухого вещества, водной кашицы слизистой оболочки тонкого кишечника собирают и гомогенизируют, Для дальнейших сравнительных измерений берут пробу 10 кг (проба А ) . Затем суспензию в пригодном для прямого ввода пара аппарате в течение короткого времени нагревают до 85 С. При достижении целевой температуры перемешивание замедляется. Смесь оставляют стоять в течение 15 мин при 85°С, причем процесс денатурации протекает полностью. Из аппарата скоагулированный в форме рыхлого осадка материал подается на сито с шириной отверстий 1,2 мм. Желтые, содержащие гепарин, частицы отделяются.После отфильтровывания отфильтрованный материал оставляют стоять в течение 1 ч или перемешивают иногда для лучшего обезвоживания.Получают 62 кг содер 3 0 35 40 45 50 55 путем помола и обозначают в виде пробы С,( . Другую половину пробы С (пробу С г ) не высушивают. Пробы А, В, С ^ и С 4 | экстрагируют. Для того, чтобы облегчить количественное сравнение, из каждой пробы перерабатывают столько, чтобы соответствовало 468 г сухого вещества. Поэтому на переработку берут"из пробы А 7,31 кг, из пробы С 2 (содержанием сухого вещества 23,4%) 2,0 кг и из пробы См 532 г. Для того, чтобы сделать сравнимыми экстракционные меры, устанавливают равные содержания сухого вещества и соотношения компонентов. Объем устанавливается с помощью водопроводной воды равным 8,0 л. Для пробы А необходимо 60,0 мл, пробы С 2 1000 мл и пробы С м 7470 мл водопроводной воды. К водной смеси при постоянном перемешивании добавляют 385 г сульфата аммония, затем смесь нагревают до 60°С. Значение рН устанавливают с помощью гидроокиси натрия равным 10,0. С целью установления экстракционного равновесия температуру поддерживают при 60°С еще в течение двух часов. Спустя 2,5 ч при переме 366042 шивании рН снижают до 8,2 с помощью Осушительное устройство имеет форму добавки твердого хлористого аммония. лежащего цилиндра, оснащенного внутЗатем смесь кипятят, после кипячения ри лопастями мешалки и роликами, и в течение 5 мин оставляют стоять в нагревается снаружи паром, внутри течение 10 мин и затем выпавшее вегорячим воздухом. Горячий воздух щество органа отделяют на металличесготовится в специальном подогревателе ком сите с размером ячеек 1 мм эксвоздуха, в котором засосанный из октракционного бульона. ружающей среды воздух подогревается до 142 С за счет обогрева паром. Из вещества органа берут пробу, 10 Температура выходящего влажного возсодержание сухого вещества в которой духа устанавливается при 80 С. определяется для того, чтобы можно было рассчитать, сколько экстракциИсходное вещество подается со онного бульона остается в остатке скоростью 600 л/ч в устройство. Посоргана. ле функционирования в течение 6 ч приготовляют 178 кг почти обезжиренВ отдельных пробах содержание геного продукта с содержанием микропарина и соотношения балластных веорганизмов 10-10 г и содержанием ществ следующие. сухого вещества 90%. По крайней мере Проба А, Содержание гепарина 80% продукта получается в пределах 126000 IE; соотношение балласта 20 размера зерен 1,6-0,2 мм. Продукт 52,2 кг вещества органа, MIE (милнеограничено хранится при комнатной лион Международных единиц), температуре. Проба С 2 . Содержание гепарина 148000 IE; соотношение балласта Из фильтрата отбирают повторяющи13,5 кг вещества органа, MIE. еся каждые полчаса пробы и определяют содержание в них сухого вещества, Проба С„ . Содержание гепарина содержание гепарина и др. компоненты. 162000 IE, соотношение балластных Среднее содержание сухого вещества веществ 3,7 кг вещества органа, MIE. составляет 1,41%, гепариновая активП р и м е р 5. Выделяющаяся в маность 0,92 1Е/мл. шине для очистки кишок, содержащая ЗО в среднем 6,3% сухого вещества слиПредлагаемый способ получения гезистая оболочка тонкого кишечника парина позволяет получать новый, сос помощью нагнетательного насоса держащий гепарин, концентрат сырья поддерживается в виде потока в изос содержанием сухого вещества 90 лированном отрезке трубы. В устройст95%, который может храниться без изве устанавливается время пребывания менения состава и содержания биоло1,5 ч и температура 41 С. гически активного вещества длительное время при комнатной температуре. Таким образом, автоматизированную суспензию непрерывно перерабатывают. В скоростном подогревателе суспензия Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я 40 нагревается путем непосредственного введения пара до 90 С и затем в терСпособ получения гепарина путем моизолированном спиралеобразном отреобработки предварительно измельчензке трубы при слабом потоке термо-щ ных органов животных водой, о т л и обрабатывается в течение 7,5 мин, Коч а ю щ и й с я тем, что, с целью агулированные частицы удаляются пос- 45 повышения биологической активности, редством разгрузочной спирали и отсырье выдерживают для автолиза деляются на фильтрующем барабане. Блав течение 0,5-15 ч при 10-15 С, загодаря разгрузочной спирали содержатем нагревают при 75-100 С, из полущее гепарин сырье непрерывно удаляетченной суспензии отделяют агрегиро50 ванный при той же температуре осася из фильтрующего звена. док и высушивают при 80-100 С до Отделенный продукт подводят через содержания сухого вещества 90 дозирующую систему в связанное с 95 мас.%. фильтратами осушительное устройство. ВНИИГШ Заказ 6684/58 Тираж 655 Подписное Произв.-полигр. пр-тне, г. Ужгород, ул. Проектная, 4