Спосіб одержання мукополісахарідів

Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к получению мукополисахаридов путем деполимеризации гепарина, обладающих биоло гическими свойствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови. Изобретение позволяет упростить процесс и повысить их антикоагулянтную активность за счет того, что гепарин обрабатывают нитритом натрия в водной среде в присутствии соляной или уксусной кислоты при рН 2,2-2,75 и массовом соотношении гепарина и нитрита натрия 1 :(0,158~0,172) с последующими нейтрализацией раствора и высаждением целевого продукта этанолом. Целевой продукт может быть дополнительно обработан боргидридом или перманганатом калия при массовом соотношении де пол имеризованного гепарина и боргидрида калия, 4 7 7 или деполимеризованного гепарина и перманганата калия 20:1 при рН 8,5 2 з.п. ф-лы, 2 табл Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к получению мукополисахаридов путем деполимеризации гепарина, обладающих биологическими свойствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови Целью изобретения является упрощение процесса получения мукополисахаридов и повышение их антикоагулянтной активности П р и м е р ! . Растворяют 60 г гепарина, имеющего отношение показателя ЮинаВесслера, характеризующего способность активных продуктов вызывать ингибирова ние фактора Ха-крови ингибированием антитромбином III (AT Ml), к показателю, характеризующему способность активных продуктов ингибировать общую коагуляцию крови или плазмы (УСП) (ЮВ/УСП), близкое к 1, и показатель УСП 160 Е/мг, в 3 л дистиллированной воды при 4°С Добавляют нитрит натрия в количестве, достаточном для получения 0,05 М раствора (10,35 г; массовое соотношение гепарин'нитрит натрия 1 0,172), затем рН доводят до 2,5 при помощи чистой соляной кислоты, раствор при 4°С взбаптывают в течение 10 мин Далее рН доводят до 7 5 при помощи 5 н раствора соды Добавлением 5 объемов чистого эта .г''1 V' 1658820 течение 15ч В течение этого перемешиванола (15500 мл) продукты реакции осаждания рН смеси постоянно поддерживают на ют. Образовавшийся осадок извлекают при уровне 8,5 при помощи 5н. раствора соды. помощи центрифугирования. Его промываЧерез 15ч добавляют 0,2 объема спирта ют этанолом и сушат при 60°С под глубоким вакуумом. Собирают 60 г продукта, облада- 5 (90мл) с тем, чтобы удалить КМпО4, который ющего следующими характеристиками: по* не участвовал в реакции. казатель УСП 17 Е/мг, показатель ЮВ 240 Реакционную смесь отстаивают в течеЕ/мг. ние 1 ч. 'Образовавшийся осадок МпОг удаляют центрифугированием. Осаждением В качестве исходного материала используют гепарин, имеющий показатель 10 этанолом извлекают продукты реакции, промывают и сушат. Таким обрзэом получаУСП 165 Е/мг, а отношение ЮВ/УСП порядют 35 г продукта, обладающего следующими ка 1. Растворяют 3 г гепарина в 150 мл характеристиками: показательУСП 12 Е/мг, дистиллированной воды при 4°С, затем допоказатель активности ЮВ 270 Е/мг. бавляют 517 мг нитрит натрия в реакционную среду (массовое соотношение 15 П р и м е р 4. Растворяют 3 г гепарина в гепарин:нитрит натрия = 1:0,172). После 150 мл дистиллированной воды при 4°С. Доокончания обработки, проведенной в соотбавляют 517 мг нитрита натрия для получеветствии с приведенным описанием, извления 0,05 М раствора. рН устанавливают на кают 2,8 г продукта с показателем УСП 24 значении 2,2 добавлением чистой кислоты Е/мг и показателем активности ЮВ 250 20 HCI и перемешивают раствор при 4°С в теЕ/мг. чение 10 мин. Затем рН доводят до 7,5 при помощи 5 н. гидроокиси натрия. ДобавлениИспользуют 50 г гепарина с показатеем 5 объемов чистого этанола осаждают лем УСП 158 Е/мг и отношением ЮВ/УСП, полученный продукт. Образовавшийся осаблизким к 1. Указанное количество гепарина растворяют в 2500 мл дистиллированной 25 док отделяют центрифугированием, промыводы и при 4°С добавляют 8,625 г нитрит вают этанолом и сушат при 60°С под натрия (массовое соотношение гепавакуумом. Получают 2,8 г продукта. рин:нитрит натрия = 1:0,172). После заверИспользуя те же самые исходные, осушения обработки получают 46 г продукта, ществляют реакцию при рН равном 2,5; 2, 6 обладающего следующими характеристика- 30 и 2,75. Выход продукта 2,8 г. Характеристими: показатель УСП 13 Е/мг, показатель акки полученных продуктов сведены в табл. 1. тивности ЮВ 270 Е/мг. П р и м е р 5. Растворяют 10 г торгового гепарина (соотношение YW/USP около 1; П р и м е р 2. При окружающей температитр USP 160ед/мг)в 1 д дистиллированной туре растворяют 47 г продукта, полученного в примере 1, в 1200 мл дистиллированной 35 воды при 4°С. Добавляют нитрита натрия воды. При перемешивании добавляют 7 г NaNO2 в количестве достаточном для полборгидрида калия. Перемешивание продолучения 0,02 М раствора, т.е. 1,58 г (соотножают в течение 2 ч при окружающей темпешение гепарина и нитрита натрия 1:0,138), ратуре, а затем добавляют в реакционную затем доводят рН до 2,5 с помощью чистой среду уксусную кислоту для того, чтобы сни- 40 соляной кислоты Перемешивают при 4°С в зить рН до 4,0 и разрушить тем самым не течение 10 мин и доводят рН до 7,5 с поиспользованный боргидрид калия. Смесь мощью 5 н. щелочи натрия. Путем добавлееще перемешивают в течение 30 мин, затем ния 5 обьемов чистого этанола (т.е. 5 л) рН увеличивают до 7,5 при помощи 5 н. осаждают продукты реакции. Рекуперируют раствора соды. В реакционную смесь до- 45 осадок центрифугированием, затем промыбавляют 5 объемов спирта. Образовавшийвают чистым этанолом и сушат при 60°С под ся осадок собирают, просушивают, глубоким вакуумом. промывают чистым этанолом и сушат под Получают 10 г продукта, имеющего слевакуумом при 60°С Получают 46,5 г продукдующие характеристики: , та, обладающего следующими характери- 50 Титр USP 15 м е./мг стиками: показатель УСП 17 Е/мг, Титр Юина-Весслера 253 ед/мг показатель активности ЮВ 250 Е/мг. Титр АРТТ 11 ед/мг П р и м е р 3. Растворяют 40 г продукта, Сравнительные данные по свойствам полученного по примеру 1, в 400 мл дистилпродуктов, полученных предлагаемым и излированной воды при окружающей темпе- 55 вестным способами, приведены в табл. 2. ратуре. Значение рН обеспечивают на Упрощение процесса достигается за уровне 8,5 при помощи 5 н. раствора соды, счет получения продуктов, которые непосзатем добавляют 2 г пермангэната калия редственно могут быть использованы в теKMnOfl,растворенного в 40 мл воды Реакцирапевтии без дополнительной очистки. онную смесь подвергают перемешиванию в 1658820 соотношении гепарина и нитпитз натрия 1'(0,138-0,172) с последующими нейтрализацией раствора и еысэждением целевого продукта этанолом 5 2. Способ п о п 1 , о т л и ч а ю щ и й с я Формула изобретения тем, что целевой продукт дополнительно обра1. Способ получения мукополисахарибатывают боргидридом калия при массовом дов обработкой гепарина деполимеризуюсоотношении деполимеризованного гепащим агентом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, рина и боргидрида калия 47:7. цепью упрощения процесса и получения це3. Способ по п.1, о т л и ч а ю щ и й с я левого продукта с повышенной энтикоагу- 10 тем, что целевой продукт дополнительно лянтной активностью, в качестве обрабатывают перманганатом калия при деполимеризующего агента используют массовом соотношении деполимеризованнитрит натрия, а обработку проводят в водного гепарина и перманганата калия 20:1 ной среде в присутствии соляной или уксус15 при рН 8,5 ной кислоты при рН 2,2-2,75 и массовом Т аблица1 В известном способе целевой продукт требует очистки с помощью адсорбционной хроматографии. Показатель ЮВ УСП 2.2 305 12.5 Значение показателя при рН 2,5 2,6 250 210 24 45 I 2,75 152 57 Т а б л и ц а2 Показатели Мол. масса Показатель ЮВ, Е/мг Количество молекул целевого продукта, ингибирующих AT III, % Редактор И. Дербак Целевой продукт по предлагаемому способу 1800-8000 152-305 < * 10 Целевой продукт по известному способу 4300-6500 2500-3000 100 Составитель Т Мартинская Техред М Моргентал Корректор М Демчик Заказ 1724 Тираж 327 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб , 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул Гагарина, 1 01