Спосіб одержання зернового посівного міцелію

1. Спосіб одержання зернового посівного міцелію при вирощуванні плодових тіл їстівного базидіального гриба PIeurotus ostreatus (Fr.) Kumm. в аеробних умовах шляхом інокуляції зернового субстрату маточним міцелієм, який відрізняється тим, що маточний міцелій гриба вирощують на 36655 3 г крейди із розрахунку на 1 кг сухого зерна і перемішують. Ці добавки регулюють значення рН середовища та виконують роль буфера. Крім того, гіпс попереджує склеювання зерна, сприяє кращій аерації субстрату. Підсушене зерно насипають в літрові банки, заповнюючи їх на 2/3 місткості. При цьому в одній банці звичайно міститься 350-400 г зерна. Банки закривають алюмінієвою фольгою і автоклавують при температурі 127оС протягом 1,5 год. Субстрат охолоджують до температури інокуляції ( 24-26оС). Після автоклавування рН середовища становить 6,0-6,5. В стерильних умовах розмножують маточний міцелій PIeurotus ostreastus (Fr.) Kumm. шт. 431 на рідкому живильному середовищі методом глибинного культивування в колбах на качалці. Спочатку вирощують міцелій поверхневим методом на рідкому солодовому суслі (4% СР) в колбах місткістю 500 см 3 при наповненні 100 см 3 протягом 7-8 діб і температурі 24-26оС. Для цього сусло інокулюють міцелієм з пробірки з чистою культурою гриба. Приготовляють рідке живильне середовище, яке містить, г/л: кукурудзяний крохмаль - 40, кукурудзяний екстракт - 30, (NH 4)2SО4 - 1, КН 2РО4 - 0,6, К2НРО4 - 0,6, MgSO 4·7Н2О - 0,3, вода водопровідна до 1 л, або кукурудзяний крохмаль - 40, кукурудзяний екстракт - 15, екстракт ячмінно-солодовий - 15 та мінеральні солі і вода в кількості, як вказано вище. Доводять розчином NaOH значення рН до 6,3-6,5, розливають по 100 і 200 см 3 в качалочні колби місткістю 750 см 3, автоклавують при температурі 127оС протягом 1,5 год., охолоджують. Значення рН після стерилізації - 6,0-6,2. Подрібнений струшуванням вирощений на рідкому солодовому суслі поверхневий міцелій гриба вносять по 50 см 3 в колби зі 100 см 3 крохмалевмісного живильного середовища і культивують на качалці при 200 об/хв, температурі 24-26оС протягом 3-4 діб. Потім одержаним глибинним міцелієм інокулюють живильне крохмалевмісне середовище в качалочних колбах місткістю 750 см 3 при наповненні 200 см 3 в кількості 30-50 см 3 на одну колбу і проводять культивування на качалці при 200 об/хв, температурі 24-26оС протягом 3-4 діб. Частину колб з одержаним маточним міцелієм використовують для інокуляції стерильного зернового субстрату. Іншу частину колб з вирощеним маточним міцелієм зберігають і використовують для інокуляції живильного середовища в качалочних колбах (30-50 см 3 на 200 см 3 середовища) при подальшому розмноженні (4-5 пасажів) глибинного маточного міцелію, який потім знову використовують для інокуляції зернового субстрату. Маточний міцелій зберігають до використання в холодильнику при температурі 2-4оС протягом 1-2 місяців. Розмноженим глибинним маточним міцелієм інокулюють приготовлений стерильний зерновий субстрат в скляних літрових банках. Інокуляцію проводять з дотриманням правил мікробіологічних робіт. Міцелієм із однієї качалочної колби інокулюють 10-15 банок зі стерильним зерновим субстратом. Після інокуляції зернового субстрату міцелієм його інкубують в термостаті або на полицях в кімнаті, де підтримують температур у 24-26оС, відносну вологість повітря 60-70 %. Через 3-4 доби після інокуляції зернового субстрату міцелієм його струшують в банці. Це запобігає склеюванню зерна і прискорює ріст міцелію. Через 6-8 діб після інокуляції зерновий субстрат повністю обростає міцелієм. Одержаний посівний зерновий міцелій готовий до використання. Його можна зберігати в холодильнику або холодильній кімнаті при температурі 2-4оС протягом одного місяця. Приклад 1. Посівний зерновий міцелій одержують при інокуляції субстрату із зерна пшениці глибинним маточним міцелієм, вирощеним на живильному середовищі, яке містить, г/л: кукурудзяний крохмаль - 40, кукурудзяний екстракт - 30, (NH4)2SО4 - 1, КН2РО4 - 0,6, К2НРО4 - 0,6, MgSO 4·7Н2О - 0,3, вода водопровідна до 1 л, рН 6,0. Для приготування зернового субстрату на 10 кг зерна пшениці добавляють 15 л води, суміш варять протягом 20 хв. на слабкому вогні. Після варки воду зливають через сито, зерно підсушують, рівномірно розгорнувши тонким шаром на рівній частині поверхні, добавляють 120 г гіпсу і 30 г крейди і перемішують. Приготовлене таким чином зерно насипають в літрові банки, заповнюючи їх на 2/3 місткості. При цьому в одній банці звичайно міститься 350-400 г зерна. Банки закривають алюмінієвою фольгою і автоклавують при температурі 126оС протягом 1,5 год. Після охолодження до температури 24оС стерильний зерновий субстрат готовий для інокуляції маточним глибинним міцелієм. Для одержання маточного глибинного міцелію спочатку вирощують міцелій поверхневим методом на рідкому солодовому суслі (4% СР) в колбах місткістю 500 см 3 при наповненні 100 см 3 протягом 7 діб і температурі 26оС. Для цього сусло в колбах інокулюють міцелієм із пробірок з чистою культурою гриба Pl.ostreatus шт. 431. Приготовляють крохмалевмісне живильне середовище, яке розливають по 100 і 200 см 3 в колби місткістю 750 см 3, автоклавують при температурі 126оС протягом 1,5 год., охолоджують до 28оС. Значення рН після стерилізації - 6,0. Подрібнений струшуванням поверхневий міцелій гриба, вирощений на рідкому солодовому суслі, вносять по 50 см 3 в колби зі 100 см 3 живильного крохмалевмісного середовища і культивують на качалці при 200 об/хв., температурі 24 оС протягом 4 діб. Вирощеним глибинним міцелієм інокулюють живильне крохмалевмісне середовище в качалочних колбах місткістю 750 см 3 при наповненні 200 см 3 по 30 см 3 міцелію на одну колбу. Культивування проводять на качалці при 200 об/хв. при температурі 26оС протягом 4 діб. Накопичення сирої біомаси в культуральному середовищі становить 200 г/л або »20 г АСБ/л. Частину колб з одержаним глибинним маточним міцелієм використовують для інокуляції стерильного зернового субстрату в скляних літрових банках, який приготовляють із зерна пшениці. Глибинний маточний міцелій в колбах, які залишилися, зберігають в холодильнику при температурі 24оС протягом 1-2 місяців, а потім використовують як посівний при вирощуванні наступної партії маточного міцелію. Глибинним міцелієм із однієї качалочної колби (»4-5 г АСБ) інокулюють десять літрових банок з 2 36655 маси становить 250 г/л культурального середовища або »25 г АСБ/л. Міцелієм із культурального середовища однієї качалочної колби інокулюють 15 літрових банок з зерновим субстратом. Пророщення субстрату міцелієм проводять, як в прикладі 1, протягом 6 діб. Дані, що характеризують досягнення технічного результату запропонованим способом в порівнянні з прототипом, наведені в таблиці. зерновим субстратом (»0,4-0,5 АСБ на 1 банку), які розміщують потім на полицях в термостатній кімнаті при температурі 24оС. Вологість повітря підгримують на рівні 70%. Через 4 доби, коли міцелій проріс приблизно 1/3 субстрату, колби струшують і залишають для подальшого обростання субстрату міцелієм. Через 8 діб субстрат повністю обростає міцелієм. Одержаний посівний зерновий міцелій готовий для використання. За необхідності його можна зберігати при температурі 2оС протягом 1-2 місяців. Приклад 2. Посівний зерновий міцелій одержують при інокуляції стерильного субстрату із зерна пшениці маточним глибинним міцелієм, вирощеним, як наведено в прикладі 1. Але при цьому розмноження маточного глибинного міцелію проводять з використанням для інокуляції живильного крохмалевмісного середовища в колбах глибинним міцелієм, що зберігався при температурі 2оС протягом 2 місяців. В одну колбу місткістю 750 см 3 при наповненні 200 см 3 вносять 50 см 3 такого міцелію. Культивування міцелію на качалці проводять при температурі 26оС протягом 3 діб. Накопичення сирої біомаси в культуральному середовищі становить 200 г/л або »20 г АСБ/л. Приготування стерильного зернового субстрату, інокуляцію його маточним глибинним міцелієм і пророщення міцелієм проводять, як в прикладі 1. Приклад 3. Посівний зерновий міцелій одержують при інокуляції субстрату із зерна пшениці маточним міцелієм, вирощеним глибинним методом на живильному середовищі, яке містить, г/л: кук урудзяний крохмаль - 40, кукурудзяний екстракт - 15, екстракт ячмінно-солодовий - 15, (NH4)2SО4 - 2, КН2РО4 0,6, К2НРО4 - 0,6, MgSO4·7Н2О - 0,3, вода водопровідна до 1 л, рН 6,2. Розмноження міцелію із пробірки поверхневим методом та розмноження глибинного міцелію в качалочних колбах при наповненні їх крохмалевмісним живильним середовищем 100 см 3 проводять, як в прикладі 1. Для розмноження маточного міцелію в колбах при наповненні 200 см 3 використовують живильне середовище вказаного вище складу. Його засівають 30 см 3 вирощеного глибинного міцелію. Культивування в колбах на качалці проводять, як в прикладі 2, протягом 3 діб. Накопичення сирої біо Таблиця Найменування показника 1 Тривалість розмноження чистої культури міцелію в пробірках, діб Витрата маточного міцелію на 100-150 банок зернового субстрату Тривалість вирощування маточного міцелію, діб Тривалість обростання міцелієм зернового субстрату в банці, діб 2 Даний спосіб 3 6-8 6-8 100-150 пробірок 10 колб качалочних 7-10 3-4 20-22 6-8 Прототип * Примітка. Розмноження чистої культури міцелію в пробірках проводять один раз на 4-5 циклів розмноження глибинного міцелію. Як видно з таблиці, запропонований спосіб одержання зернового посівного міцелію при інокуляції стерильного зернового субстрату глибинним маточним міцелієм забезпечує значну інтенсифікацію процесу. При цьому досягається також зменшення його трудомісткості. В цілому, спосіб є важливим для розвитку грибоводства, оскільки дозволяє організувати централізоване забезпечення грибоводів маточним глибинним міцелієм для інокуляції зернового субстрату і значно спростити при цьому одержання плодових тіл їсті вного гриба Pleurotus ostreatus. _________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3