Інактивована біемульсин-вакцина проти хламідійної та бруцелаовісної інфекції

Інактивована біемульсин-вакцина проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій, до складу якої входить хламідійний компонент, яка відрізняється тим, що додатково містить інактивовану суспензію бактерій штаму Brucella ovis 67/Б в кінцевій концентрації 5 x 1 0 м.к./см3 як бруцелаовісний компонент. Корисна модель відноситься до ветеринарної мікробіології і біотехнології, зокрема, до виготовлення та використання інактивованих біемульсинвакцин проти хламідійної та інших інфекцій при змішаному їх перебігу. Існує інактивована вакцина Abortstop F.A. проти хламідіозу і Q-лихоманки, [Фірма РМ Ьуоп.Франція, 1991]. До складу вакцини входить штам Chlamydia varicte bovine 105 DL5o на курячий ембріон та Coxiella burnetti 105 DL5o на курячий ембріон. Існує інактивована емульсин-вакцина проти інфекційного епідидиміту баранів. [Деклараційний патент України 53940 "Інактивована емульсинвакцина з штаму Brucella ovis 67/Б проти інфекційного епідидиміту баранів". Бабкін А.Ф., Орлов СМ., Галіщев М.Г., Бюл. №2 17.02.2003; Бабкин А.Ф., Орлов С.Н. Результаты изучения инактивированной емульсин-вакцины из штамма Brucella ovis 67/Б против инфекционного эпидидимита баранов //Вет. медицина: Між від. темат. наук. 36. X., 2004. Вип.. - 84. ст.58 - 64]. Існуючі вакцини за цим рішенням не враховують одночасного перебігу хламідійної та бруцелаовісної інфекцій, хоч поєднаний перебіг цих захворювань спостерігається досить часто. [С.В. Мелихов, А.Ф. Бабкин Влияние некоторых факторов на динамику иммунного ответа при латентном течении ассоциированной бруцелаовисной и хламидийной инфекции // Вет. медицина: Між від. темат. наук. 36. - X., 2004. Т.1. Вип.. - 77. - С.211 218]. Прототипом рішення, що заявляється може бути інактивована емульсин-вакцина проти хламідійного аборту овець [Авторское свидетельство СССР № 692128, 22.06.79.], до складу якої входить хламідійний компонент. Зазначена вакцина не забезпечує ефективність профілактичних щеплень, зокрема, профілактику абортів і збереження приплоду в отарах з поєднаним перебігом хламідійної та бруцелаовісної інфекцій. В основу корисної моделі поставлено завдання виготовлення інактивованої біемульсинвакцини, до складу якої входить хламідійний компонент шляхом додавання інактивованої суспензії бактерій штаму Br.ovis 67/Б в кінцевій концентрації 9 3 5х10 м.к./см ., щоб забезпечити ефективність інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій. Вакцинний штам Br.ovis 67/Б депоновано в колекції мікроорганізмів лабораторії вивчення хвороб рогатої худоби Інституту експериментальної і клінічної ветеринарної медицини УААН, де і зберігається за №219. Біемульсин-вакцину готують таким чином. Культуру вакцинного штаму Br.ovis 67/Б вирощують на щільному живильному середовищі МППГГА з 10% сироватки великої рогатої худоби в умовах збільшеної кількості СОг в атмосфері впродовж 3-х діб. Культуру бактерій змивають фізіологічним 0,85% розчином натрію хлориду рН7,2. Суспензію бактерій Brucella ovis інактивують формаліном в кінцевій концентрації 0,4% при 37°С впродовж однієї доби. Стерильність і повноту інактивації суспензії досліджують способом висівів на МППГТБ та МППГГА з сироваткою та вирощуванням в умовах збільшеної кількості СОг при 37°С. Інактивовану суспензію Brucella ovis змішують на швидкісному гомогенізаторі з емульсин-вакциною проти хламідійного аборту овець, кіз та свиней. со СО о о 00 О) 8006 Виготовлений препарат контролюють на стерильність способом висівів на МППГГБ та МППГГА з сироваткою, на середовище Кітт-Тароцці і культивуванням при 37°С, а також на середовище Сабуро і культивуванням при 22-24°С впродовж 10 діб. Імуногенні властивості інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій пояснюється наступними прикладами. Приклад 1 Нешкідливість і імуногенність вакцини досліджено на морських свинках, яких щепили підшкірно біемульсин-вакциною в дозі 0,5см3. Першу групу (5 голів) вакцинували інактивованою біемульсин-вакциною серія №2, другу групу (6 голів) - інактивованою біемульсин-вакциною серія №4, контрольна група (6 голів) залишилася інтактною. Імуногенність вакцини визначали серологічними дослідженнями на 14 та ЗО добу. В сироватці крові 5 морських свинок, щеплених інактивованою біемульсин-вакциною, на 14 добу виявлено антитіла в РТЗК з бруцелаовісним антигеном в титрі 1:8-1:32 (середньогеометричний титр 4,2±0,90 log2). В РІД з нерозведеною сироваткою позитивно реагували також всі щеплені тварини. На ЗО добу після щеплення активність гуморальної імунної відповіді зросла до титрів 1:16-1:128 (середньогеометричний титр 5,2±1,11Іодг) в РТЗК, з бруцелаовісним антигеном. В РЗК з хламідійним антигеном реагували всі 5 тварин щеплених, інактивованою біемульсинвакциною серія №2, - на 14 добу в тирі 1:32-1:256 (середньогеометричний титр 4,2±0,09log2), на ЗО добу після щеплення виявлено антитіла в тирі 1:32-1:256 (середньогеометричний титр 7,0±1,50log2). В другій групі морських свинок, щеплених біемульсин-вакциною серія №4, на 14 добу в РТЗК з бруцелаовісним антигеном виявлено титр антитіл 1:4 у 3 тварин (середньогеометричний титр 0,33±0,36log2). На ЗО добу відмічали зростання титрів до 1:8-1:16 (3,5±0,54log2). З хламідійним антигеном в РЗК на 14 добу реагували всі морські свинки в титрі 1:4-1:16 (середньогеометричний титр 2,66±0,54log2), на ЗО добу титр становив 1:4-1:32 (середньогеометричний титр 3,88±0,91log2) в тому числі в титрі 1:16 у чотирьох тварин (66,6%), (Табл.1). ЗГІДНО ТУУ. 10.02.01.270.91 на виготовлення та контроль інактивованої емульсин-вакцини проти хламідійного аборту овець, кіз та свиней серія вакцини вважається імуногенною, якщо забезпечила на ЗО добу після щеплення у 50% морських свинок утворення хламідійних антитіл в РЗК в титрі 1:16 і вище. В наведеному прикладі щеплення двох серій інактивованої біемульсин-вакцини морським свинкам при дослідженні на ЗО добу стимулювала титри антитіл з хламідійного антигеном в РЗК 1:16 і вище у 66,6-100%, тобто за активністю хламідійного компоненту біемульсин-вакцина вважається імуногенною. Імуногенність бруцелаовісного компоненту біемульсин-вакцини, крім серологічних досліджень перевіряли прямим зараженням дослідних і контрольних тварин на 35 добу після щеплення вірулентним штамом Brucella ovis 65939 підшкірне в дозі 2млрд.м.к. Діагностичний забій провели через 35 діб після зараження. Бактеріологічними дослідженнями імунітет у щеплених тварин в першій групі встановлено у 4 з 5 морських свинок (80%), в другій групі у всіх 6 щеплених морських свинок (100%). В контрольній групі інфікованих морських свинок постінфекційну бруцелаовісну серопозитивність виявили в 83,3 % в РТЗК в титрі 3,33±0,25 log 2 і 100% в РІД. Культуру заражаючого штаму реізольовано у 4 з 6 (66,6%) тварин контрольної групи з індексом інфікованості 17,1%, (Табл.2). Приклад 2 В досліді на 15 баранах віком 9 місяців провели випробування імуногенності інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекції серія №2. Вакцину інокулювали підшкірне в області паху в дозі 1,0см3, контрольним 4-м баранам вакцину не вводили. При дослідженні на 16 добу поствакцинальні бруцелаовісні антитіла виявлено в РТЗК у 7 тварин з 11 в титрі 1:8 (1,91±0,19log2). Проте досліджені через 10 місяців після щеплення в РТЗК з бруцелаовісним антигеном всі тварини були серонегативні, хоч в РІД позитивно реагували 9 з 11 баранів. З хламідійним антигеном в РЗК реагували всі тварини на ЗО добу, титр антитіл 1:8-1:16 (2,82±0,28log2), через 10 місяців, -1:16-1:32 (3,43±0,51Іод2), (Табл.З). Приклад 3. Ступінь імунітету проти бруцелаовісної інфекції у щеплених баранів перевірили прямим зараженням культурою Brucella ovis. Через 10 місяців щеплених і контрольних баранів заражали суспензією 3-х добової культури Brucella ovis штам 65-і в концентрації 10млрд.м.к./см шляхом аплікації по 0,1см3 на кон'юнктиву очей та по 0,8см3 на слизову припуцію. Через 3 місяця після зараження провели діагностичний забій тварин і бактеріологічні висіви на живильні середовища з лімфатичних вузлів і статевих залоз. У щеплених баранів після контрольного зараження культуру Brucella ovis не реізолювано. В контрольній групі всі барани позитивно реагували в РІД та в РТЗК з бруцелаовісним антигеном в титрі 1:4-1:8(2,27±0,22log2). У контролі культуру заражаю чого штаму реізольовано з лімфатичних вузлів двох з 4-х баранів, (Табл.З). Інактивована біемульсин-вакцина проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій створює достатньо напружений імунітет, як проти хламідійного (100%) так і проти бруцелаовісного (80-100%) збудників і рекомендується для застосування при поєднаному перебігу зазначених інфекцій у овець. 8006 Таблиця 1 Інактивована біемульсин-вакцина проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій Гуморальний імунітет, ЗО доба Інактивована біемульсин-вакцина проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій тварин у ДОСЛІДІ Хламідійна інфекція Brucella ovis інфекція КІЛЬКІСТЬ РТЗК Реагувало ГОЛІВ РЗК РІД Реагувало ГОЛІВ титр Реагувало ГОЛІВ 5 Серія №2 5 5 5,2±1,11 log2 5 Серія №4 6 6 3,5±0,54 Іод2 6 + 6 0 0 0 0 7,0±1,50log2, ( > 1 16-100%) 3,83±0 91 Іод2, ( > 1 1666,6%) 0 6 Контроль титр 0 Таблиця 2 Інактивована біемульсин-вакцина проти хламідійної та бруцелаовісної інфекції Серія інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекції №2 №4 КІЛЬКІСТЬ тварин у ДОСЛІДІ Brucella ovis інфекція Заразилось Імунітет % ГОЛІВ % 5 6 4 6 80 100 1 0 Серопозитивнють 6 (100%) Ізольовано культур 4 (66,6%) 20 0 6 Контроль ГОЛІВ Таблиця З Інактивована біемульсин-вакцина проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій Гуморальний імунітет, через 10 МІСЯЦІВ Bmcella ovis інГрупа фекція тваХламідійна інфекція тварин рин у РТЗК РІД ДОСЛІДІ ГОЛІВ % ГОЛІВ % ГОЛІВ % Група 1 3,43±0,51 11 100 Щеплені 0 0 9 81,82 log 2 тварини Група 2 4 - - Контроль КІЛЬКІСТЬ Комп ютерна верстка М Мацело Bmcella ovis інфекція (пряме зараження) Імунітет Заразилося ГОЛІВ % ГОЛІВ % 11 100 0 0 Підписне Серопозитивнють 4 (100%) Ізольовано культур 2 (50%) Тираж 28 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул Урицького, 45, м Київ, МСП 03680 Україна ДП ' Український інститут промислової власності', вул Глазунова, 1 м К и ї в - 4 2 , 01601