Спосіб одержання фібробласто-лімфоцитарних розеток (флр) як модельного аналога тимічної ніші ex vivo

Реферат: Спосіб одержання фібробласто-лімфоцитарних розеток (ФЛР) як модельного аналога тимічної ніші ex vivo полягає у змішуванні і центрифугуванні певного типу клітин для контактної взаємодії. Спочатку проводять культивування та нарощування фібробластів тимусу в системі ex vivo, а потім у співвідношенні 1 до 100 змішують і центрифугують з лімфоїдними клітинами та виявляють фібробласто-лімфоцитарні розетки. UA 80076 U (12) UA 80076 U UA 80076 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до галузі імунології та клітинної біології і може бути застосована для моделювання клітинних взаємодій, що відбуваються в нішах тимусу з метою дослідження ефектів, обумовлених мембранною спорідненістю цих клітин при контакті. Вперше аналогічний метод розеткоутворення було розроблено між мастоїдитами імунізованих щурів та еритроцитами барана. Для цього спочатку проводили стимуляцію мастоцитів шляхом імунізації щурів овальбуміном та антигенами Bordetella pertussis, а потім змішували мастоцити та еритроцити барана [Wallach D., Renoux M.L. Rosette-forming mast cells in rat anaphylaxis. Immunological characteristics of mast cell rosettes / Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. - 1977. - Vol. 55 (1-6). - P. 152-160]. Проте, в даному випадку використовуються клітини іншого типу і утворюються мастоеритроцитарні розетки, які використовують для дослідження функцій мастоцитів. Також відомий і спосіб одержання масто-лімфоцитарних розеток (МЛР), який полягає у виділенні з перитонеального ексудату неімунізованих щурів нестимульованих мастоцитів, котрі піддають центрифугуванню in vitro з тимоцитами щурів (незрілими кортизолзалежними лімфоцитами). При такій взаємодії утворюються масто-лімфоцитарні розетки [Гюллинг Э.В., Никольский И.С., Дюговская А.Л. Масто-лимфоцитарные розетки / Доклады АН УССР, 1978. Сер. Б, № 9. - С. 850-852]. Одержані таким чином МЛР використовують для дослідження результатів взаємодії не фібробластів і лімфоцитів, а мастоцитів та лімфоцитів, що також не відображає клітинні контакти взаємодій в нішах тимусу, і є непридатними для вивчення ефектів мембранної спорідненості клітин в цих структурах. Аналогічні запатентовані способи нами не виявлені. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб одержання фібробластолімфоцитарних розеток (ФЛР) як модельного аналога тимічної ніші ex vivo шляхом змішування підготовлених фібробластів та лімфоцитів, що дозволить створити клітинну модель тимічної ніші для вивчення ефектів, обумовлених мембранною спорідненістю цих клітин. Поставлена задача вирішується тим, що в способі, який полягає у змішуванні і центрифугуванні певного типу клітин для контактної взаємодії, згідно з корисною моделлю, спочатку проводять культивування та нарощування фібробластів в системі ex vivo, а потім у співвідношенні 1 до 100 змішують і центрифугують з лімфоїдними клітинами та виявляють фібробласто-лімфоцитарні розетки. До даного рішення автори прийшли, досліджуючи контактну взаємодію фібробластів, причому можливе їх отримання з тканинних джерел різного походження (тварин і людини), і різних популяцій лімфоцитів в культурі клітин на поверхні та в суспензії. Для цього фібробласти попередньо культивують та нарощують в системі ex vivo, що призводить до їх отримання в необхідній кількості і дозволяє створити клітинну модель тимічної ніші для вивчення ефектів, обумовлених мембранною спорідненістю цих клітин. Спосіб виконується наступним чином. Виділяють фібробласти з тимусу тварин загальноприйнятим методом. Надалі клітини культивують в ростовому середовищі DMEM/F12 з додаванням 10 % ETC, 2 mM Z-глютаміну, 25 mM HEPES-Na солі (Sigma, США) та антибіотиків. Фібробласти в культурі в цілому мають фібробластоїдну морфологію. Для визначення мембранної спорідненості суспензію з сумішшю фібробластів і лімфоцитів у співвідношенні 1:100 центрифугують за 250 g, осад ресуспендують і далі рахують в камері Горяєва. Проводять облік поодиноких фібробластоїдних клітин (що значно більші за розмірами) як в контакті з лімфоцитами (що значно менші за розмірами), так і без нього. Фібробластолімфоцитарною розеткою (ФЛР) вважають асоціацію, що складається з центрально розташованої фібробластоїдної клітини з приєднаними до неї трьома і більше лімфоцитами. Кількість ФЛР (%), що утворені лімфоцитами із тимусу та лімфатичних вузлів з культивованими фібробластами тимусу наведена у таблиці. Таблиця Статистичні показники М мк n Р(Ц) Кількість ФЛР (%), що утворені фібробластами тимусу та лімфоцитами тимусу лімфатичних вузлів 72,4 38,1 39-88 18-62 9 9