Біологічно активна речовина на основі водного екстракту свинячої плаценти

і . Біологічно активна речовина, що включає вільні амінокислоти, пептиди і низькомолекулярні органічні залишки, отримані із свинячої плаценти, при наступному співвідношенні компонентів, % сухої ваги; вільні амінокислоти від 100 до 500 Д 21,6-26,6 пептиди від 1000 до 2000 Д 35,3-43,1 пептиди від 3000 до 5000 Д 16,5-20,1 низькомолекулярні органічні залишки менше за 100 Д решта. 2. Біологічно активна речовина за п. 1, яка відрізняється тим, що її отримано за способом, що включає механічне подрібнення і гомогенізацію плаценти свині, отримання водного екстракту гомогенізату шляхом його розбавлення водою, знебарвлення водної суспензії гомогенізату доданням підкислювача, витримку при перемішуванні, наступним відстоюванням, декантируванням, і консервацією шляхом додання до супернатанту консерванту. 3. Біологічно активна речовина за п. 2, яка відрізняється тим, що водний екстракт гомогенізату розбавлюють дистильованою водою в співвідношенні 0,8-1,2 масових частин води на 1 частину гомогенізату, водну суспензію гомогенізату знебарвлюють доданням до суспензії 0,006-0,007 масових частин лимонної кислоти, витримування здійснюють протягом 70-110 хвилин при перемішуванні, потім відстоюють протягом 10-20 хвилин, декантирують, консервацію здійснюють шляхом додання до супернатанту нипагіну, супернатант з консервантом витримують протягом 45-75 хвилин, після чого з декантированого супернатанта видаляють частки з розмірами більше 3 мкм шляхом фільтрації. 4. Біологічно активна речовина за п. З, яка відрізняється тим, що нипагін додають в кількості 0,10,3 ваг. %. 5. Біологічно активна речовина за п. 4, яка відрізняється тим, що нипагін додають у вигляді 5 % розчину в пропіленгліколі. со С\І со О) Корисна модель відноситься до області косметології, фармації і медицини, зокрема, до біологічно активної речовини на основі водного екстракту свинної плаценти. Відомий спосіб отримання біологічно активної речовини з людської плаценти, що включає механічне подрібнення і гомогенізацію плаценти, отримання водного екстракту і обробку екстракту за допомогою електролізу протягом 1-1,5 години [патент РФ №22119903, МПК7 А61К7/48, 2003р.]. У результаті отримують желеподібну масу. Недоліком цього відомого способу є використання дефіцитної сировини людської плаценти. Крім того, при електролізі водного екстракту плаценти відбувається хімічне розщеплення пептидів, що містяться в екстракті, і появі в суміші продуктів їх розпаду у вигляді окремих амінокислот і не нативних пептидів, внаслідок чого біологічна активність продукту різко падає. Відомий також спосіб отримання плацентарного протеїну, що включає отримання гомогенату тканини плаценти свині, центрифугування, хроматографування, елюювання пов'язаного білка, осадження елюату і повторне центрифугування, при цьому з хроматографій використовують афінну хроматографію на сефарозі з іммобілізованим а> 9132 конго-червоним носієм, елюювання проводять 1,0М розчином хлориду калію з доданням 5% гліцерину, осадження елюату здійснюють при 90%ном насиченні сульфатом амонію, а після центрифугування осадок додатково піддають фракціюванню в 0,1М амоній-бікарбонатному буфері з подальшим збором фракцій, що містять цільовий продукт, і їх діалізом [патент РФ №2007417, МПК5 С07КЗ/02, 1994]. Цей спосіб дозволяє отримати специфічний плацентарний протеїн свині 2 (ППС2), який є плаценто специфічним антигеном і може бути використаний як маклер для ранньої діагностики поросності свині, але не як біологічно активна речовина широкого спектра дії, що застосовується в косметології, фармації і медицині. Відомий спосіб отримання низькомолекулярної фракції з тканин плаценти свині заснований на отриманні низькомолекулярної фракції вагою не більше за 300-350 атомних одиниць за допомогою попереднього подрібнення тканини на кріомлині при температурі від мінус 80°С до мінус 120°С з подальшим кріосублімаційним фракціюванням при температурі від мінус 10°С до мінус 20°С у вакуумних камерах при тиску 0,1мм.рт.ст. і подальшої кріоконденсації на кріогенний панелі, що охолоджується рідким азотом [патент РФ № 2228759, МПК7А61К35/50, 05.20.2004.]. Недоліком цього способу є те, що продукт містить фракції, молекулярна маса яких не перевищує 300-350 атомних одиниць, оскільки більш важкі молекули неможливо витягнути методом низькотемпературної сублімації. Тобто в продукті відсутні біологічно активні речовини, наприклад, пептиді з молекулярною масою вище за 300-350 атомних одиниць, які, як відомо, володіють протизапальною дією, є регулювальниками обмінних процесів. Низька продуктивність способу і використання складних і кріогенних технологій, що дорого коштують, обумовлюють високу вартість кінцевого продукту, що також є серйозною перешкодою для промислового використання цього відомого способу. Відповідно, вказані вище недоліки відомого способу обмежують також можливості застосування біологічно активних плацентарних речовин в косметиці і фармакології. Задачею корисної моделі є отримання біологічно активної речовини з новою по складу композицією нативних пептидів плаценти, що володіє високою біологічною активністю при відносно простій технології і невисокої вартості продукту. Поставлена задача також вирішується тим, що біологічно активна речовина включає вільні амінокислоти, пептиди і низькомолекулярні органічні залишки, переважно при наступному співвідношенні компонентів, % сухої ваги: вільні амінокислоти від 100 до 500Д 21,6-26,6 пептиди від 1000 до 2000Д 35,3-43,1 пептиди від 3000 до 5000Д 16,5-20,1 низькомолекулярні органічні залишки менше за 100Д решта. Отримують біологічно активну речовину способом, що є об'єктом незалежної заявки на корисну модель і включає механічне подрібнення і гомогенізацію плаценти свині, отримання водного екстракту гомогенізату і консервацію екстракту, 4 водний екстракт гомогенізату отримують шляхом його розбавлення водою, водну суспензію гомогенізату знебарвлюють доданням до суспензії підкислювача, витримують при перемішуванні, потім відстоюють, декантирують, а консервацію здійснюють шляхом додання до супернатанту консерванту. Переважно водний екстракт гомогенізату отримують шляхом його розбавлення дистильованою водою в співвідношенні 0,8-1,2 масових частин води на 1 частину гомогенізату, водну суспензію гомогенізату знебарвлюють доданням до суспензії 0,006-0,007 масових частин лимонної кислоти, витримують протягом 70-110 хвилин при перемішуванні, потім відстоюють протягом 10-20 хвилин, декантують, консервацію здійснюють шляхом додання до супернатанту нипагіну, супернатант з консервантом витримують протягом 45-75 хвилин, після чого з декантованого супернатанта видаляють частки з розмірами більше Змкм шляхом фільтрації. У якості консерванту засіб може містити похідні ефіру парагідроксибензойної кислоти, наприклад, розчини нипагіну (метилпарагідроксибензоату) у пропіленгліколі, поліетиленоксиді, д и мети л сульфоксиді або в інших розчинниках, амідосечевину та інші фармацевтичне прийнятні у якості консерванту речовини. Переважно, у якості консерванту засіб містить 2-5% розчин нипагіну в пропіленгліколі. Більш детально корисна модель описана за допомогою приведеного нижче прикладу. Приклад Розморожену і ретельно відмиту від крові тканину плаценти свині в кількості 10кг очистили від слизу, подрібнили ножицями до часток розміром приблизно 50х 50мм і гомогенізували за допомогою електром'ясорубки. Отриманий гомогенізат залили 10л охолодженої до 15°С дистильованою водою, ретельно перемісили до отримання однорідної суспензії і додали 70г лимонної кислоти для знебарвлення суспензії. Для екстракції водорозчинних пептидів суспензію плаценти витримали в ємності протягом 1,5 годин при повільному перемішуванні, після чого дали відстоятися протягом 15 хвилин. Біологічно-активно речовину у вигляді супернатанту в кількості 10л декантували і додали до нього 0,5кг розчину, який містить 20г нипагіну (як консерванту), що розчинений в 0,5кг пропіленгліколю. Суспензію ретельно перемішали і витримали протягом 1 години. Отриманий водний екстракт плаценти відфільтровували за допомогою мембранних фільтрів типу "Миллипор" з діаметром пір 1 -Змкм. Отримали 10л чистого пептидного екстракту плаценти. Водний екстракт розлили по ємностях і вмістили на зберігання в морозильну камеру з температурою мінус 28°С. Отриманий водний екстракт плаценти є прозорою, злегка жовтуватою, рідиною з характерним слабким запахом, має рН від 3.8 до 4.5. Сухий залишок складає не менше за 6 і не більше за 7%. 9132 Отриманий водний екстракт плаценти досліджували з допомогою гель-проникаючої високоефективної рідинної хроматографії (ГПВЕРХ) За даними гель-хроматографи був визначений фракційний склад (по молекулярній масі) водного екстракту плаценти свині Прилади і матеріали Для визначення фракційного складу водного екстракту плаценти використали рідинний хроматограф Woters "Alhense", з програмним забезпеченням Міленіум 32, версія 51 Умови аналізу - колонка TSK SW 2000, розміром 7,5х600мм, - рухлива фаза фосфатний буферний розчин з сульфатом натрію - ацетонітрил (90 10), дегазована будь-яким зручним способом - швидкість рухливої фази 1 мл/хв , - об'єм проби 20мкл Приготування рухливої фази 32,21г натрію фосфорнокислого однозаміщеного двохводного вміщують в мірну колбу МІСТКІСТЮ 1л, розчиняють в 500мл води, доводять об'єм водою до мітки і перемішують (розчин А) 71,64г натрію фосфорнокислого двохзаміщеного дванадцативодного вміщують в мірну колбу МІСТКІСТЮ 1л, розчиняють в 500мл води, доводять об'єм водою до мітки і перемішують (розчин Б) 32,22г натрію сірчанокислого десятиводного вміщують в мірну колбу МІСТКІСТЮ 1л, розчиняють в ЗООмл води, додають 312,5мл розчину А і 187,5мл розчину Б, перемішують, додають ЮОмл ацетонітрилу, перемішують і доводять об'єм розчину во Комп ютерна верстка Н Лисенко дою до мпки. Результати аналізу представлені в таблиці Таблиця Фракційний склад (по молекулярній масі) водного екстракту плаценти за даними гель-хроматографи (А, =254нм) Час витримки речовин на колонці (хвилини) Площа під хроматограф, ПІКОМ Площа під Орієнтовна молекухроматоглярна маса, (дальраф ПІКОМ тон) (в%) 18 576 2075501 18 29 3000