Стабільний безконсервантний мідріатичний і протизапальний розчин для ін’єкцій

Реферат: Винахід стосується стабільної рідкої композиції фенілефрину і кеторолаку для ін'єкцій, що не містить консервант і не містить антиоксидант. UA 114650 C2 (12) UA 114650 C2 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 I. Галузь техніки, до якої належить винахід Даний винахід стосується стабільних, таких, що не містять консервантів і антиоксидантів, рідких фармацевтичних складів кеторолаку і фенілефрину для введення в інтраокулярні офтальмологічні іригаційні розчини. II. Рівень техніки Офтальмологічна хірургія часто вимагає застосування фізіологічного іригаційного розчину для захисту і підтримки фізіологічної цілісності внутрішньоочних тканин. Приклади офтальмологічних хірургічних операцій, які звичайно вимагають застосування іригаційних розчинів, включають операції з видалення катаракти і заміни кришталика і рефракційної заміни кришталика, операції з пересадки рогівки і вітреоретинальні операції, а також трабекулектомію при глаукомі. При внутрішньоочній операції зіниця пацієнта повинна бути досить розширена, щоб забезпечити огляд операційного поля і обмежити пошкодження, яке може бути пов'язане з операцією. Розширення зіниці (мідріаз) звичайно забезпечують при доопераційному розширенні очної зіниці за допомогою зовнішнього введення мідріатичного засобу. Доопераційне застосування мідріатичних засобів, які, як правило, можна вводити, включають симпатоміметики, такі як агоністи альфа-1 адренергічних рецепторів, і антихолінергічні засоби, такі як антимускаринові засоби. Антихолінергічні засоби можуть бути вибрані у випадку необхідності більш тривалої дії, оскільки вони одночасно забезпечують циклоплегію (параліч війкового м'яза) і мідріаз, наприклад, тропікамід має напівперіод виведення приблизно 4-6 годин. Однак у багатьох операціях альфа-1 адренергетики будуть переважні, тому що вони забезпечують мідріаз, але не викликають циклоплегії. Альфа-1 адренергетики, таким чином, діють менш тривало, викликаючи мідріаз протягом хірургічної операції і дозволяючи зіниці повертатися в нормальний стан незабаром після завершення операції. Під час хірургічної операції, оскільки кінці хірургічних інструментів введені в передню камеру ока, сфінктер зіниці прагне звузитися (міоз), зменшуючи просвіт, що визначається зіницею. Якщо діаметр зіниці не підтримувати на потрібному рівні протягом всієї операції, то зростає ризик пошкодження структур всередині ока, а час, необхідний для проведення операції, часто збільшується. Клінічно значущі зменшення діаметра зіниці пов'язані зі збільшенням операційних ускладнень, які включають розриви задньої стінки капсули, присутність залишкових фрагментів кришталика і витікання скловидного тіла. Багато які хірурги-офтальмологи можуть вводити епінефрин в інтраокулярний іригаційний розчин для підтримки зіниці в розширеному стані. Токсичний синдром переднього відрізка ока (ТСПО) є гострим неінфекційним запаленням переднього сегмента ока. ТСПО — важке ускладнення, яке може бути пов'язане із втручанням в передньому сегменті ока, звичайно операцією з видалення катаракти. Різні контамінанти розглядалися як причини ТСПО. Застосування епінефрину, який містить консерванти, в інтраокулярних іригаційних розчинах є одним з множини чинників, які пов'язують з виникненням ТСПО після хірургічного видалення катаракти. Див., наприклад, http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/mm5625a2.htm (за станом на 9 липня 2012 року). Навіть "безконсервантний" епінефрин, тобто епінефрин, який не містить протимікробний засіб, все ж містить метабісульфіт натрію як антиоксидант, який також розглядався офтальмологами як пов'язаний з вірогідною токсичністю для ендотелію рогівки (Slack, et al., А bisulfite-free intraocular epinephrine solution, Am J Ophthalmol.; 110(1):77-82 (1990)). Фенілефрин є іншим альфа-1 адренергічним засобом, який іноді застосовують зовнішньо до хірургічної операції, щоб викликати мідріаз, але він не схвалений в США для застосування в формах, які не містять консерванти і антиоксиданти, для разових ін'єкцій. Приклади схвалених розчинів фенілефрину HCl включають 0,01 % хлорид бензалконію (AK-DILATE™ виробництва Akorn, доступний в пластмасових флаконах-крапельницях об'ємом 2 мл і 5 мл, і виробництва Falcon Pharmaceuticals і Alcon Laboratories у флаконах-крапельницях багаторазового застосування об'ємом 3 мл і 5 мл) і "безконсервантну" форму, яка не містить протимікробний консервант, але все ж містить 2 мг метабісульфіту натрію як антиоксиданта (Neo-Synephrine® виробництва InterMed Medical Ltd., доступний у флаконі з розпилювачем). Також бажано зменшити післяопераційний біль і подразнення очей для комфорту пацієнта. Внаслідок цього пацієнти можуть до або після операції отримувати нестероїдний протизапальний препарат (НПЗП). Хоча звичайно хірургічне видалення катаракти (наприклад) не пов'язують з післяопераційним болем високої інтенсивності, існує потреба мінімізувати кількість пацієнтів, які входять до невеликої групи пацієнтів, які дійсно відчувають більш сильний післяопераційний біль. Це важливо, тому що такі пацієнти відчувають дискомфорт і можуть мати побоювання з приводу того, що їх операція завершилася невдало, і тому що пацієнти 1 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 можуть потребувати повторного обстеження як запобіжного засобу, щоб гарантувати відсутність важкого ускладнення, що приводить до виникнення болю. Традиційно використовуються різні способи доставки очних засобів, таких як НПЗП, при цьому кожний з них має обмеження. Ці обмеження можуть включати токсичність для рогівки і кон'юнктиви, пошкодження тканин, перфорацію очного яблука, пошкодження зорового нерва, оклюзію центральної артерії і/або вени сітківки, пряму ретинальну токсичність лікарського засобу і системні побічні ефекти. Наприклад, препарати для зовнішнього застосування, які вводять по краплях, часто не досягають цільової ділянки ока внаслідок наявності у оці природної захисної поверхні. У багатьох випадках досить малий процент лікарського препарату, нанесеного на поверхню ока, фактично досягає потрібної терапевтичної ділянки дії. Для досягнення достатньої концентрації лікарського засобу, що надходить в задню частину ока, такі лікарські препарати, як НПЗП, часто вводять системно в дуже високих дозах. Такі рівні потрібні для подолання гематоретинального бар'єра, який захищає задню частину ока від молекул деяких лікарських засобів, що надходять зі струмом крові. У випадку хірургічних операцій розчини лікарських засобів для ін'єкцій іноді вводять безпосередньо в задню частину ока. Субкон'юктивальні і навколобульбарні навколоочні ін'єкції використовуються у випадках, коли необхідні більш високі локальні концентрації і коли потрібно ввести лікарські засоби із низькою проникною здатністю. У хірургії катаракти використовуються внутрішньокамерні ін'єкції безпосередньо в передню камеру ока. Кеторолак — НПЗП, який комерційно доступний в формі для очного застосування, що містить консерванти. Acular® виробництва Allergan являє собою розчин кеторолаку трометаміну, який містить 0,01 % хлориду бензалконію як консерванта і доступний у флаконахкрапельницях об'ємом 3 мл і 6 мл. Bedford Laboratories також постачає кеторолаку трометамін в концентрованій формі (15 мг або 30 мг в 1 мл або 60 мг або 300 мг в 10 мл) для ін'єкцій для внутрішньосудинного або внутрішньом'язового введення. Allergan постачає безконсервантний очний розчин 0,45 % кеторолаку трометаміну, в який входить натрій карбоксиметилцелюлоза, хлорид натрію, дегідрат цитрату натрію, в тюбиках одноразового застосування під торговою маркою Acuvail®. Хоча внутрішньокамерна ін'єкція забезпечує швидкий спосіб досягнення концентрації, вона може бути пов'язана з корнеальною токсичністю. Проте, даний спосіб має недолік, який пов'язаний з тим, що ці лікарські засоби швидко виводяться внаслідок природного процесу кровообігу ока. Таким чином, розчини для ін'єкцій швидко втрачають свої терапевтичні переваги, нерідко вимагаючи частих ін'єкцій високих доз, що може супроводжуватися ризиком токсичності. Лікарські форми уповільненого вивільнення, такі як в'язкопружні гелі, що містять мікрокапсули, можна вводити інтраокулярно з метою забезпечення більшої тривалості дії. Однак при досягненні локальної терапевтичної концентрації лікарського засобу може бути присутньою деяка затримка. Отже, існує потреба в способах контрольованої очної доставки під час офтальмологічних операцій. Розчини, які використали в офтальмологічній хірургічній іригації, включають фізіологічний розчин, розчин Рінгера з лактатом і розчин Хартмана (Рінгера з лактатом), але вони не оптимальні внаслідок вірогідної небажаної дії на рогівку і ендотелій. Інші водні розчини, які включають такі речовини, як електроліти, буферні речовини для регуляції pH, глутатіон і/або джерела енергії, такі як декстрозу, краще захищають тканини ока, але не відповідають іншим фізіологічним процесам, пов'язаним з хірургією. Одним із розчинів, що звичайно використовуються для офтальмологічної іригації є розчин з двох компонентів: буферного електроліту і глутатіону, розкритого в патенті США 4550022 (Garabedian et al.), опис якого даним прямо включений за допомогою відсилання. Два компоненти цього розчину змішують безпосередньо перед застосуванням, щоб забезпечити стабільність. Такі розчини готують з метою збереження нормального стану очних тканин в ході хірургічної операції. Інший приклад модифікованого розчину розкритий в міжнародній заявці PCT WO 94/08602 за авторством Gan et al., опис якої даним прямо включений за допомогою відсилання. У цій заявці розкрите включення мідріатичного засобу, такого як епінефрин, в очні іригаційні розчини. Ще один приклад представлений в міжнародній заявці PCT WO 95/16435 за авторством Cagle et al., в якій розкрите включення нестероїдних протизапальних препаратів (НПЗП) в офтальмологічний іригаційний розчин. III. Суть винаходу У даному винаході запропонований стерильний рідкий, такий, що не містить антиоксидантів і консервантів, склад мідріатичного засобу, фенілефрину і протизапального засобу, кеторолаку, для ін'єкцій. Склад відповідно можна вводити в інтраокулярний іригаційний носій і застосовувати для іригації очних тканин під час хірургічної операції. Склад виключає потенційну токсичність, 2 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 яка може бути пов'язана з консервантами і антиоксидантами, але при цьому все ж має достатню стабільність. У одному варіанті здійснення винаходу запропонований стерильний рідкий фармацевтичний склад без антиоксиданта і консерванта, що включає фенілефрин, кеторолак і буферну систему у водному носії, який є стабільним протягом щонайменше шести місяців у випадку зберігання при температурі від 5+/-3 °C до 25+/-2 °C. Переважно склад стабільний протягом щонайменше 24 місяців у випадку зберігання при температурі від 5+/-3 °C до 25+/-2 °C. У одному аспекті винаходу буферна система вибрана з системи натрій-фосфатного буфера і системи натрій-цитратного буфера. Переважно буферна система є системою натрійцитратного буфера, такою як система приблизно 20 мМ натрій-цитратного буфера. У іншому аспекті винаходу склад має pH від 5,8 до 6,8. У іншому аспекті винаходу склад міститься в контейнері одноразового застосування, такому як флакон, який закритий кришкою, через яку можна відбирати вміст, і заздалегідь заповнений шприц. Придатний склад даного винаходу включає від 46 до 76 мМ фенілефрину і від 8,5 до 14 мМ кеторолаку і як один з прикладів може містити приблизно 60,75 мМ фенілефрину і приблизно 11,25 мМ кеторолаку. Склади даного винаходу можуть включати фенілефрин і кеторолак в молярному відношенні фенілефрину до кеторолаку від 1:1 до 13:1 і відповідно можуть включати вказані засоби в молярному відношенні фенілефрину до кеторолаку від 3:1 до 10:1. У іншому варіанті здійснення винаходу запропонований стерильний рідкий фармацевтичний склад без антиоксиданта і консерванта, що включає фенілефрин, кеторолак і буферну систему у водному носії, і інтраокулярний іригаційний носій, в який ін'єктують склад, при цьому після введення фенілефрин присутній в концентрації від 30 до 720 µМ, а кеторолак присутній в концентрації від 44 до 134 µМ. У іншому аспекті винаходу після ін'єктування в інтраокулярний іригаційний носій фенілефрин присутній в концентрації від 240 до 720 µМ, а кеторолак присутній в концентрації від 10 до 270 µМ. У іншому варіанті здійснення винаходу запропонований стерильний рідкий фармацевтичний склад, який по суті складається з фенілефрину, кеторолаку і буферної системи у водному носії, де склад стабільний протягом щонайменше шести місяців у випадку зберігання при температурі від 5+/-3 °C до 25+/-2 °C. Переважно склад стабільний протягом щонайменше 24 місяців у випадку зберігання при температурі від 5+/-3 °C до 25+/-2 °C. У одному аспекті винаходу буферна система вибрана з системи натрій-фосфатного буфера і системи натрій-цитратного буфера. Переважно буферна система є системою натрійцитратного буфера, такою як система приблизно 20 мМ натрій-цитратного буфера. У іншому аспекті винаходу композиція має pH від 5,8 до 6,8. У іншому аспекті винаходу склад міститься в контейнері одноразового застосування, такому як флакон, який закритий кришкою, через яку можна відбирати вміст, і заздалегідь заповнений шприц. У іншому аспекті винаходу запропонована стерильна рідка дозована форма для ін'єкцій, що включає фенілефрин, кеторолак, буферну систему і водний носій, що містяться в контейнері одноразового застосування для ін'єкцій. У іншому аспекті винаходу запропонований стерильний рідкий фармацевтичний склад, який включає фенілефрин, кеторолак, буферну систему і інтраокулярний іригаційний носій, в який включений фенілефрин в концентрації від 30 до 720 µМ і кеторолак в концентрації від 10 до 270 µМ, або переважно фенілефрин включений в концентрації від 90 до 720 µМ, а кеторолак включений в концентрації від 44 до 134 µМ. Цей склад також може не містити консерванта і антиоксиданта. Також розкритий спосіб виготовлення стерильного рідкого фармацевтичного складу без антиоксиданта і без консерванта, що включає фенілефрин, кеторолак і буферну систему у водному носії, який є стабільним протягом щонайменше шести місяців у випадку зберігання при температурі від 5+/-3 °C до 25+/-2 °C. Переважно склад стабільний протягом щонайменше 24 місяців у випадку зберігання при температурі від 5+/-3 °C до 25+/-2 °C. Крім того, розкритий спосіб виготовлення стерильного рідкого фармацевтичного складу, що включає фенілефрин, кеторолак, буферну систему і інтраокулярний іригаційний носій, в яку включений фенілефрин в концентрації від 30 до 720 µМ і кеторолак в концентрації від 10 до 270 µМ, або переважно фенілефрин включений в концентрації від 90 до 720 µМ, а кеторолак включений в концентрації від 44 до 134 µМ. Цей склад також може не містити консервант і антиоксидант. IV. Короткий опис фігур 3 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Далі даний винахід буде описаний більш детально за допомогою прикладів із посиланням на супроводжуючі креслення, де: на фігурах 1-12 представлені результати дослідження стабільності комбінованих складів фенілефрину і кеторолаку в різні часові точки протягом періоду тривалістю 12 місяців, у випадку зберігання при регульованій температурі від 2-8 °C до 60 °C, отримані при вимірюванні процента специфічних домішок, зв'язаних з деградацією активних фармацевтичних компонентів, при змінних концентраціях активних фармацевтичних компонентів, різних буферних системах, з добавкою консерванта ЕДТА і добавкою консерванта ЕДТА з антиоксидантом метабісульфітом натрію. На фігурах 13-14 представлені результати дослідження за оцінкою впливу нашарування азоту на стабільність двох комбінованих складів фенілефрину і кеторолаку, з або без консерванта ЕДТА, в різні часові точки протягом періоду тривалістю один рік, у випадку зберігання при регульованих температурах від 4 °C до 60 °C. На фігурах 15-18 представлені результати дослідження за оцінкою впливу різних антиоксидантів на стабільність комбінованих складів фенілефрину і кеторолаку у часових точках протягом періоду тривалістю один місяць, після зберігання зразків при температурах в межах від 2-8 °C до 60 °C. На фігурі 19 представлений результат дослідження за оцінкою стабільності складу з високою концентрацією фенілефрину протягом періоду тривалістю чотири місяці, у випадку зберігання при температурах від 4 °C до 40 °C. На фігурах 20A і 20B показана активність фенілефрину і кеторолаку відповідно в комбінованому складі фенілефрину і кеторолаку при зберіганні протягом 30 місяців при 2-8 °C. На фігурах 21-25 показані результати дослідження ефективності при різних концентраціях на приматах, які не стосуються людини, в якому фенілефрин і кеторолак оцінювали при роздільному введенні і в комбінації, за допомогою інтраокулярної іригації в збалансованому сольовому розчині (BSS) в процесі операції факоемульсифікації з витяганням і заміною кришталика, зі спостереженням показників мідріазу (фігури 21 і 22) і опалесценції (фігури 23-25). На фігурах 26-28 показані результати дослідження на приматах, що не стосуються людини, в якому оцінювали вплив комбінованого складу фенілефрину і кеторолаку на мідріаз (фігура 26) і опалесценцію (фігура 27-28) при введенні за допомогою інтраокулярної іригації в BSS в процесі операції факоемульсифікації з витяганням і заміною кришталика. На фігурі 29 показані результати дослідження зі зміною доз, в якому оцінювали вплив різних концентрацій фенілефрину і кеторолаку в комбінованих складах на мідріаз при введенні в BSS в процесі операції факоемульсифікації з витяганням і заміною кришталика у примата, що не стосується людини. V. Докладний опис У даному винаході запропоновані стерильні склади іригаційних розчинів для періопераційного місцевого застосування на очних тканинах, включаючи внутрішньоочне і зовнішнє застосування, які включають фенілефрин як мідріатичний засіб і кеторолак як протизапальний засіб. Вказані склади не містять консервантів і антиоксидантів, але при цьому демонструють несподівано хорошу стабільність. Переважно їх фасують в контейнери одноразового застосування для ін'єкцій, при цьому їх можна ін'єктувати в більший об'єм інтраокулярного іригаційного носія до і використати під час внутрішньоочних операцій, таких як операції з видалення катаракти і заміни кришталика, і рефракційної заміни кришталика. Визначення "Консервант", при використанні в даному описі, означає протимікробний засіб, який додають в фармацевтичний продукт для збереження стабільності і запобігання розкладанню внаслідок росту мікроорганізмів. Звичайні протимікробні консерванти, які можуть бути включені в фармацевтичні композиції, включають сорбінову кислоту і її солі, бензойну кислоту і її солі, пропіонат кальцію, нітрит натрію (і нітрат натрію, який перетворюється в нітрит натрію "in situ"), сульфіти (діоксид сірки, бісульфіт натрію, гідросульфіт калію і і хелатоутворювач етилендіамінтетраацетат натрію, який також називається едетат динатрію, ЕДТА або Na2 ЕДТА. "Антиоксидант", при використанні в даному описі, стосується речовини, яка переважно реагує з киснем і, таким чином, захищає фармацевтичний продукт, в який її додають, від розкладання внаслідок окислення. Приклади водо- або маслорозчинних антиоксидантів, які можуть бути включені в фармацевтичну композицію, включають бісульфіт натрію, сульфіт натрію, метабісульфіт натрію, тіосульфіт натрію, формальдегідсульфоксилат натрію, L- і Dаскорбінову кислоту, ацетилцистеїн, цистеїн, тіогліцерин, тіогліколеву кислоту, тіомолочну кислоту, тіосечовину, дитіотреїтол, глутатіон, пропілгалат, бутильований гідроксіанізол, 4 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 бутильований гідрокситолуол, третинний бутилгідрохінон, аскорбілпальмітат, нордигідрогваяретову кислоту і альфа-токоферол. "Безконсервантний" розчин стосується розчину, який не містить хлорид бензалконію або інший протимікробний засіб. "Безантиоксидантний" розчин стосується розчину, який не містить метабісульфіт натрію або інший засіб, який був включений через єдину функцію або застосування як антиоксиданта, хоча безантиоксидантний розчин може включати рН-регулюючу буферну систему, один компонент якої може мати антиоксидантну активність. "Кеторолак" означає кеторолак в формі солі, такої як кеторолаку трометамін [(+/-)-5-бензоїл2,3-дигідро-1H-піролізин-1-карбонова кислота:2- аміно-2(гідроксиметил)-1,3-пропандіол (1:1)]. "Фенілефрин" означає фенілефрин в формі солі, такої як фенілефрину HCl [(-)-м-гідроксі-а[(метиламіно)метил]бензилового спирту гідрохлорид]. "Специфічні домішки", відносно даного фармацевтичного компонента, стосуються речовин, які утворюються внаслідок розкладання компонента, що виражається в процентах від повної концентрації фармацевтичного компонента в композиції. При використанні в даному описі відносно даного винаходу "загальний вміст специфічних домішок" стосується загальної кількості всіх специфічних домішок, що утворюються внаслідок розкладання активних фармацевтичних компонентів кеторолаку і фенілефрину в композиції, вираженого в процентах від повної концентрації фармацевтичного компонента в композиції. Будь-яку специфічну домішку, яка присутня на рівні нижче мінімальної межі кількісного виявлення, наприклад 0,1 %, аналізу, що використовується для вимірювання специфічних домішок, не включають в підсумовування при визначенні загального вмісту специфічних домішок. У фігурах, які супроводжують приклади в даному описі, посилання на специфічні домішки для компонента означає, що для компонента не було ніяких специфічних домішок, які були присутніми на рівні вище мінімальної межі кількісного виявлення, наприклад, 0,1 %, для речовини, що аналізується. "Стабільний" стосується рідкого фармацевтичного складу, який в кінці вказаного терміну зберігання містить менше 5 % загальних специфічних домішок. У одному варіанті здійснення стабільний рідкий склад стабільний при температурі від 5+/-3 °C (тобто 2-8 °C) до 25+/-2 °C (тобто 23-27 °C) протягом щонайменше шести місяців. У переважному варіанті здійснення стабільний рідкий склад стабільний при температурі від 5+/-3 °C до 25+/-2 °C протягом щонайменше одного року. У переважному варіанті здійснення стабільний рідкий склад стабільний при температурі від 5+/-3 °C до 25+/-2 °C протягом щонайменше 24 місяців. У переважному варіанті здійснення стабільний рідкий склад стабільний при температурі від 5+/3 °C до 25+/-2 °C протягом щонайменше 30 місяців. У переважному варіанті здійснення винаходу стабільні склади згідно з винаходом містять менше 1,0 % загальних специфічних домішок після закінчення даного терміну зберігання. Термін "приблизно", як мається на увазі, означає, що в концентрації компонента описаної композиції може бути варіація, яка може складати до 5 %, 10 %, 15 % або до 20 % включно від вказаного значення. Наприклад, фраза "склад, що містить приблизно 20 мМ цитрату натрію", як мається на увазі, означає, що склад може містити від 16 мМ до 24 мМ цитрату натрію. Термін "стерильний" стосується фармацевтичного продукту, який був оброблений в асептичних умовах і який не містить життєздатних бактерій, грибів або інших мікроорганізмів. Фармацевтичні засоби У даному винаході запропоновані стабільні рідкі безконсервантні і безантиоксидантні фармацевтичні склади комбінації двох активних фармацевтичних інгредієнтів (АФІ) — фенілефрину як мідріатичного засобу і НППЗ кеторолаку як протизапального засобу. Кеторолак "Кеторолак" в переважному складі даного винаходу міститься у вигляді солі кеторолаку трометаміну [(+/-)-5-бензоїл-2,3-дигідро-1H-піролізин-1-карбонової кислоти:2-аміно2(гідроксиметил)-1,3-пропандіолу (1:1)]. Кеторолак є представником піроло-пірольної групи нестероїдних протизапальних засобів. Кеторолак HCL являє собою рацемічну суміш R-(+) і S-(-) енантіомерів, які можуть існувати в трьох кристалічних формах, однаково розчинних у воді. Цей засіб змінює колір після тривалого впливу світла, і, таким чином, для упаковки композицій даного винаходу може відповідно застосовуватися світлозахисна упаковка (наприклад, додаткова упаковка або використання флаконів з жовтого скла). Фенілефрин "Фенілефрин" означає фенілефрин в формі солі, такої як фенілефрину HCl [(-)-м-гідроксі-а[(метиламіно)метил]бензилового спирту гідрохлорид]. Фенілефрин є симпатичним агоністом альфа-рецепторів. Фенілефрин HCl легко розчинний у воді і спирті. Водні носії 5 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 АФІ додають у водний розчинник як носій, і автори винаходу вирішили, що солюбілізуючі агенти не потрібні. Водний носій є відповідно водою для ін'єкцій (WFI), яка є стерильним препаратом дистильованої води, що не містить розчинених речовин. У альтернативі можуть використовуватися інші водні носії, які безпечні для внутрішньоочних тканин і які не впливають небажаним чином на стабільність композиції, такі як деіонізована вода, або після первинної оцінки потенційного впливу на стабільність сольовий розчин або збалансований сольовий розчин такий, як описано нижче. Буферні системи Композицію даного винаходу доводять до pH від 5,8 до 6,8 і переважно до приблизно 6,3. При необхідності можуть бути додані гідроксид натрію і соляна кислота для доведення композиції до цього pH. Потрібний pH переважно підтримують за допомогою буферної системи. Однією з таких придатних систем є цитратний буфер, що містить моногідрат лимонної кислоти і безводний цитрат натрію, і іншою придатною системою є натрій-фосфатний буфер, що містить двоосновний фосфат натрію і одноосновного фосфат натрію. Будь-яка буферна система може використовуватися при придатній концентрації в межах 10-100 мМ і переважно може мати концентрацію 20 мМ. Як описано нижче в прикладі 1, цитрат натрію є переважним буфером для застосування в безконсервантній композиції. Лимонна кислота в цитратному буфері, яка має здатність утворювати хелати двовалентних катіонів і, таким чином, може також запобігати окисленню, забезпечує антиоксидантний ефект нарівні з буферним ефектом. Проте, її присутність не знижує стабільність, як у випадку інших антиоксидантів (приклад 3 нижче). При використанні в даному описі термін "безантиоксидантний" виключає застосування інших антиоксидантів, але не виключає застосування буферної речовини, такої як лимонна кислота, яка входить в буферну систему. Відсутність інших допоміжних речовин У іншому аспекті винаходу, в доповнення до відсутності в складі яких-небудь консервантів або антиоксидантів, композиція відповідно до даного винаходу також не містить ніяких допоміжних речовин крім буферної системи. Наприклад, не використовуються ніякі солюбілізуючі агенти, такі як етанол (тобто композиція не містить солюбілізуючих агентів). Переважні композиції даного винаходу складаються по суті з двох АФІ і буферної системи у воді для ін'єкцій, що дає дуже чисту композицію зі зниженим потенціалом токсичності для внутрішньоочних тканин. Контейнери одноразового застосування У іншому аспекті винаходу комбінована композиція фенілефрину і кеторолаку згідно з даним винаходом міститься в кількості, достатній для одноразового застосування в ході внутрішньоочної операції, в контейнері, який дозволяє виконувати таке одноразове застосування і не дозволяє виконувати багаторазове введення. Таким чином, достатня кількість лікарської композиції, виготовленої відповідно до даного винаходу, яка дорівнює або лише трохи перевищує (тобто не більш ніж на 25 %) кількість лікарської композиції, яку потрібно додавати в стандартний контейнер інтраокулярного іригаційного носія, міститься в контейнері одноразового застосування, який дозволяє вводити лікарську композицію при ін'єкції. Наприклад, необхідна кількість комбінованої лікарської композиції фенілефрину і кеторолаку для одноразового застосування може бути вміщена в скляний флакон, закритий ковпачком або іншою кришкою, яка включає мембрану, через яку може бути введена голка для підшкірних ін'єкцій з метою відбору лікарської композиції, або може бути вміщена в заздалегідь заповнений шприц. Одним із прикладів системи придатної тари і закупорювання є 5 мл флакон типу 1 USP з боросилікатного скла або флінта з 20 мм сірою пробкою West з бутилкаучуку і знімним 20 мм ковпачком. Перед закупорюванням контейнера може бути потрібно, залежно від результатів, описаних в прикладі 2 нижче, піддати лікарську композицію, виготовлену відповідно до даного винаходу, нашаруванню азоту (тобто витісненню повітря з простору над продуктом у флаконі азотом перед закупорюванням флакона). Також можуть використовуватися інші способи видалення повітря і його витіснення інертним газом, такі як пропущення інертного газу через розчин. Інтраокулярні іригаційні носії Комбіновану лікарську композицію фенілефрину і кеторолаку (тобто комбінований лікарський продукт) переважно вводять в мішок, пляшку або інший контейнер з інтраокулярним іригаційним розчином до застосування за допомогою інтраокулярної або зовнішньої іригації або лаважа. Придатні інтраокулярні іригаційні розчини включають сольовий розчин, Рінгер лактат, збалансований сольовий розчин або будь-який інший іригаційний розчин, який сумісний з водною композицією і безпечний для очних тканин. Один з придатних інтраокулярних іригаційних носіїв включає одну або більше і переважно всі з наступних допоміжних речовин: 6 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 достатню кількість електролітів для отримання збалансованого фізіологічного сольового розчину, джерело клітинної енергії, буферну речовину і акцептор вільних радикалів. Один з придатних розчинів (вказаний в прикладах нижче як "збалансований сольовий розчин" або "BSS") включає: електроліти від 50 до 500 мМ іонів натрію, від 0,1 до 50 мМ іонів калію, від 0,1 до 5 мМ іонів кальцію, від 0,1 до 5 мМ іонів магнію, від 50 до 500 мМ хлорид-іонів і від 0,1 до 10 мМ фосфатів, бікарбонат як буфер в концентрації від 10 до 50 мМ, джерело клітинної енергії, вибране з декстрози і глюкоза, в концентрації від 1 до 25 мМ, і глутатіон як акцептор вільних радикалів (тобто антиоксидант) в концентрації від 0,05 до 5 мМ. У одному прикладі придатного способу розведення і введення комбінованої лікарської композиції даного винаходу застосовується композиція даного винаходу, описана як склад 2 в таблиці 2 нижче. Аліквота 4,5 мл цього розчину, що містить 4,0 мл як встановлену кількість для одноразового застосування і 0,5 мл надлишку, міститься в стерильному закритому флаконі одноразового застосування і призначена для змішування з іригаційним розчином для введення протягом внутрішньоочної операції. З флакона шприцом відбирають 4 мл і змішують з 500 мл BSS шляхом введення в 500 мл мішок або пляшку з BSS, з отриманням кінцевої концентрації 483 μМ фенілефрину і 89 μМ кеторолаку в іригаційному розчині для місцевого введення в око. У іншому аспекті винаходу може бути запропонований стерильний рідкий фармацевтичний склад для іригації, в якій фенілефрин і кеторолак вже змішані з інтраокулярним іригаційним носієм так, що він розведений до такої концентрації кожного активного фармацевтичного компонента, яка необхідна для місцевого введення у внутрішньоочні тканини в ході операції, і міститься в стерильному мішку, пляшці або іншому іригаційному контейнері одноразового застосування. Наприклад, такий склад для іригації може включати фенілефрин в концентрації від 30 до 720 µМ і кеторолак в концентрації від 10 до 270 µМ або переважно може включати фенілефрин в концентрації від 90 до 720 µМ і кеторолак в концентрації від 44 до 134 µМ. У одному варіанті здійснення комбінація фенілефрину і кеторолаку змішана зі збалансованим сольовим розчином, таким як описаний вище, як внутрішньоочний іригаційний носій. Цей фармацевтичний склад для іригації відповідно може бути повністю безконсервантним і безантиоксидантним або необов'язково може включати тільки антиоксидант, який звичайно додають в інтраокулярний іригаційний носій, що не містить лікарського засобу, наприклад, глутатіон у збалансованому сольовому розчині, описаному вище, але без консерванта. Приклади складів Як описано вище, стабільні рідкі фармацевтичні склади даного винаходу включають фенілефрин і кеторолак в буферному водному носії. Придатні концентрації фенілефрину в комбінованих лікарських композиціях даного винаходу змінюються в межах від 10 мМ до 500 мМ і переважно від 45 мМ до 112 мМ. Придатні концентрації кеторолаку в комбінованих лікарських композиціях даного винаходу змінюються в межах від 2 мМ до 75 мМ і переважно від 8,5 мМ до 24 мМ. Буферна система, така як натрій-цитратна буферна система, бажано включена в концентрації від 10 до 100 мМ і переважно приблизно 20 мМ. Два зразкові склади відповідно до даного винаходу представлені в таблицях 1 і 2 нижче. У кожному випадку в процесі виготовлення складу при необхідності можуть бути додані гідроксид натрію і/або соляна кислота для доведення pH до приблизно 6,3. Таблиця 1 Приклад складу 1 Компонент (USP), який додається в воду для ін'єкцій Фенілефрину HCl Кеторолаку трометамін Моногідрат лимонної кислоти Дигідрат цитрату натрію Переважна концентрація Придатні концентрації Типова концентрація розведеної дози (µМ) мг/мл 18,33 мМ 90 мг/мл 13,7-22,9 мМ 68-112 Переважна 720 Придатна 360-1080 4,24 11,25 3,2-5,3 8,5-14 89 44-134 0,24* 0,12-1,20** 5,48* 2,74-27,4** * Відповідає 20 мМ цитратному буферу ** Відповідає 10 мМ - 100 мМ цитратному буферу 7 UA 114650 C2 Таблиця 2 Приклад складу 2 Компонент (USP), який додається в воду для ін'єкцій Фенілефрину HCl Кеторолаку трометамін Моногідрат лимонної кислоти Дигідрат цитрату натрію Переважна концентрація мг/мл мМ 12,37 60,75 4,24 11,25 0,24* 5,48* Придатні концентрації мг/мл мМ 9,2-15,5 45-76 3,2-5,3 8,5-14 0,12-1,20** 2,74-27,4** Типова концентрація розведеної дози (µМ) Переважна Придатна 483 240-720 89 44-134 * Відповідає 20 мМ цитратному буферу ** Відповідає 10 мМ - 100 мМ цитратному буферу 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Кількості фармацевтично активних компонентів, включених в склад, можуть бути виражені в молярних відношеннях. Молярне відношення фенілефрину до кеторолаку може змінюватися в межах від 1:1 до 13:1 і більш бажано може змінюватися в межах від 3:1 до 10:1. Зразкове молярне відношення фенілефрину і кеторолаку, як представлено складом 1 в таблиці 1 вище, становить 8:1 фенілефрину до кеторолаку. Інше зразкове молярне відношення фенілефрину до кеторолаку, як представлено складом 2 в таблиці 2 вище, становить 5,4:1 фенілефрину до кеторолаку. Після розведення складу даного винаходу в інтраокулярному іригаційному носії для місцевого застосування концентрація дози фенілефрину може складати від 3 до 7200 µМ, більш бажано від 30 до 720 µМ, більш переважно від 90 до 720 µМ, ще більш переважно від 240 до 720 µМ і найбільш переважно приблизно 483 µМ. Після розведення складу даного винаходу в інтраокулярном іригаційному носії для місцевого застосування концентрація дози кеторолаку може складати від 3 до 900 µМ, більш бажано від 10 до 270 µМ, більш переважно від 44 до 134 µМ, ще більш переважно від 30 до 90 µМ і найбільш переважно приблизно 90 µМ. Способи застосування Стабільні рідкі склади даного винаходу можуть застосовуватися після змішування з інтраокулярним іригаційним носієм в ряді офтальмологічних процедур. Вони включають операції з видалення катаракти і заміни кришталика і рефракційної заміни кришталика, операції з пересадки рогівки і вітреоретинальні операції, а також трабекулектомію при глаукомі. У одному з прикладів придатного способу розведення і введення комбінованої лікарської композиції даного винаходу застосовується склад даного винаходу, описаний як склад 2 в таблиці 2 вище. Запропонований стерильний флакон одноразового застосування об'ємом 5 мл, що містить 4,5 мл композиції, з якого 4 мл композиції відбирають шприцом і змішують з 500 мл BSS за допомогою ін'єктування в мішок на 500 мл або пляшку з BSS, з отриманням кінцевої концентрації 483 μМ фенілефрину і 89 μМ кеторолаку. Цей розчин застосовують для іригації через передню камеру ока при постійній концентрації протягом всієї операції. Таким чином, в даному прикладі лікарський продукт протягом операції вводять тільки внутрішньокамерно. Активні фармацевтичні засоби включають в розведених концентраціях в інтраокулярний іригаційний носій. Концентрації засобів визначені відповідно до опису винаходу для прямого, місцевого застосування на очних тканинах протягом хірургічної операції. Застосування розчину може бути виконане періопераційно, тобто під час операції, до і під час операції, під час і після операції, або до, під час і після операції. Потрібно зазначити, що при використанні в даному описі і в прикладеній формулі винаходу форми однини "a", "an" і "the" (в оригінальному тексті) включають множинні посилання, якщо з контексту прямо не слідує інше. Таким чином, наприклад, посилання на "допоміжну речовину" (an excipient) включає множину таких допоміжних речовин і їх еквіваленти, відомі фахівцям в даній галузі, і т.д. Публікації, що обговорюються в даному описі, приведені виключно заради їх змісту до дати подачі даної заявки. Ніщо в даному описі не треба вважати допущенням того, що даний винахід не має права передувати такій публікації внаслідок пріоритету винаходу. Крім того, приведені дати публікації можуть відрізнятися від фактичних дат публікації, що може вимагати незалежного підтвердження. Всі цитати включені в дану заявку за допомогою відсилання. Приклади Приклади 1-5 8 UA 114650 C2 5 10 15 20 У дослідженнях, описаних в наступних прикладах 1-5, присутність специфічних домішок (RS) і активність вимірювали з допомогою високоефективної рідинної хроматографії з УФдетектором (ВЕРХ-УФ) як підтвердження стабільності, при цьому виявлення збільшення процента специфічних домішок вказувало на присутність продуктів деградації. У цих дослідженнях для ВЕРХ-УФ використали колонку Zorbax XDB-C8, 5 µм, 4,6 мм × 150 мм з об'ємною швидкістю 1,2 мл/хв. Рухомі фази А і В були наступними: рухома фаза А: 650 мл 1,1 мг/мл 1-октансульфонової кислоти, pH 3,0:50 мл води Milli-Q:300 мл метанолу. Вода Milli-Q: 300 мл метанолу; рухома фаза В: 300 мл 1,1 мг/мл 1-октансульфонової кислоти, pH 3,0:50 мл води Milli-Q:650 мл метанолу. Розчинником, що використовується, була рухома фаза A. Використовували градієнт від 100 % А до 100 % В за 40 хвилин. Використовували УФ-детектор 280 нм. Приклад 1 Порівняння стабільності складів залежно від використання консерванта і антиоксиданта і використання різних буферів Дослідження проводили з метою порівняти різні комбіновані склади двох активних фармацевтичних інгредієнтів (АФІ): фенілефрину HCl (PE) і кеторолаку трометаміну (KE), кожний в однаковій концентрації, 5 мМ або 1 мМ, у водному розчині. Використали дві різні буферні системи для підтримки розчину при трьох різних pH: 20 мМ натрій-фосфатний буфер (двоосновний фосфат натрію і одноосновний фосфат натрію) з pH 7,4; 20 мМ натрій-цитратний буфер (моногідрат лимонної кислоти і безводний цитрат натрію) з pH 6,5; і 20 мМ натрій цитратний буфер з pH 5,5. Розробили чотири безконсервантні і безантиоксидантні склади вказаних АФІ, кожний фасували у множину флаконів по 1 мл для зберігання і аналізу таким чином: Таблиця 3 Позначення складу pH Буфер F1 7,4 Фосфат Na F2 6,5 Цитрат Na F3 5,5 Цитрат Na F4 4,5 Концентрація АФІ 5 мМ KE 5 мМ PE 5 мМ KE 5 мМ PE 5 мМ KE 5 мМ PE 1 мМ KE 1 мМ PE Цитрат Na 25 Потім були приготовані додаткові склади без консервантів або антиоксидантів (контрольна група) або з додаванням консерванта етилендіамінтетраацетату натрію (який також називається едетатом динатрію або ЕДТА) або ЕДТА плюс антиоксидант метабісульфіт натрію, таким чином: 30 Таблиця 4 Група дослідження Група 1 (G1) Група 2 (G2) Група 3 (G3) 35 Умови дослідження F1 F1+0,05 % в/об ЕДТА F2 F2+0,05 % в/об ЕДТА F3 F3+0,05 % в/об ЕДТА F1+0,05 % в/об F2+0,05 % в/об F3+0,05 % в/об ЕДТА + 0,05 % ЕДТА + 0,05 % ЕДТА + 0,05 % в/об в/об в/об метабісульфіту Na метабісульфіту Na метабісульфіту Na F4 F4+0,05 % в/об ЕДТА F4+0,05 % в/об ЕДТА + 0,05 % в/об метабісульфіту Na Потім зразки різних складів в кожній з цих груп зберігали в світлозахищених умовах при регульованій температурі 2-8 °C, 25 °C, 40 °C або 60 °C. Зразки кожного складу відбирали в різні часові точки протягом 12 місяців і аналізували на розкладання АФІ, яке визначали за вмістом специфічних домішок для кожного АФІ. Результати даного дослідження представлені в таблицях фігур 1-12, при цьому були зроблені наступні висновки. 9 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 За результатами оцінок стабільності після одного місяця зберігання: 1. Контрольна група (G1) продемонструвала, що обидва АФІ були стабільні в Na фосфатному буфері при pH 7,4 і в Na цитратному буфері при pH 6,5 і pH 5,5. Контрольна група показала деяке розкладання при 60 °C, що найбільш виявилося при pH 4,5 (цитрат Na). 2. Група G2 порівняно з групою G1 продемонструвала, що ЕДТА інгібує розкладання PE при більш високих температурах. 3. Група G3 несподівано продемонструвала, що метабісульфіт Na значно посилював розкладання АФІ, особливо KE, при підвищених температурах. Більше того: через один місяць деякі зразки G3, що зберігалися при 40 °C і 60 °C, стали жовтуватими. За результатами оцінок стабільності після шести місяців зберігання: 4. Несподівано виявилося, що ЕДТА не впливав істотним чином на стабільність будь-якого АФІ, особливо в цитратному буфері при pH 6,5. 5. Найбільше збільшення процента специфічних домішок через 6 місяців спостерігалося в зразках, що витримуються при 60°C. 6. Обидва АФІ виявилися стабільними при 4 °C і 25 °C, з невеликим збільшенням процента специфічних домішок при 40 °C, особливо в цитратному буфері при pH 6,5. 7. Через 6 місяців зразки при 40 °C і 60 °C ставали яскраво-жовтими, але без видимого утворення осаду або кристалізації. Приклад 2 Вплив нашарування азоту на стабільність Далі проводили дослідження з метою визначити вплив нашарування азоту (тобто витіснення повітря з простору над продуктом у флаконі азотом перед закупорюванням флакона). Оцінювали склад F2 з прикладу 1 (5 мМ кеторолаку, 5 мМ фенілефрину в натрій цитратному буфері, доведеному до pH 6,5 у водному розчині) без додавання консерванта або антиоксиданта (група 1, G1) або з доданням 0,05 % в/об ЕДТА як консерванта (група 2, G2). Специфічні домішки для кожного АФІ вимірювали в різних часових точках після зберігання зразків протягом одного року при температурах в межах від 4 °C до 60 °C. Результати даного дослідження показані на фігурах 13 і 14 і демонструють, що застосування нашарування азоту порівняно з присутністю повітря, що містить кисень, значно зменшувало розкладання обох АФІ, особливо при підвищених температурах 40 °C і 60 °C. У випадку використання нашарування азоту присутність або відсутність ЕДТА вносила малу відмінність в стабільності АФІ. Приклад 3 Вплив різних антиоксидантів на стабільність Далі проводили дослідження з метою оцінити ефект додавання альтернативних антиоксидантів в склад F2 з прикладу 1 (5 мМ кеторолаку, 5 мМ фенілефрину в натрій цитратному буфері, доведеному до pH 6,5 у водному розчині), який також включав 0,05 % в/об ЕДТА як консерванта (група 2, G2). Антиоксидантами, що оцінюються, були 0,1 % (A1) аскорбінова кислота, 0,1 % L-цистеїну HCl моногідрат (A2), 0,1 % L-глутатіон, відновлений (A3) і 0,1 % монотіогліцерат (A4). Специфічні домішки для кожного АФІ вимірювали в різних часових точках після зберігання зразків протягом одного місяця при температурах в межах від 2-8 °C до 60 °C. Результати даного дослідження показані на фігурах 15-18 і демонструють, що у часовій точці через один місяць кожний із вказаних чотирьох антиоксидантів несподівано підвищував розкладання кожного АФІ, особливо при підвищених температурах 40 °C і 60 °C. Приклад 4 Оцінка стабільності фенілефрину при більш високих концентраціях Для оцінки, чи могла бути збільшена концентрація фенілефрину в комбінованому складі фенілефрину HCl і кеторолаку трометаміну без небажаного впливу на стабільність фенілефрину, приготували водну композицію 450 мМ фенілефрину в кальцій-цитратному буфері, доведеному до pH 6,5, без додавання консервантів, антиоксидантів або інших допоміжних речовин, і досліджували зразки при зберіганні при температурах в межах 4 °C і 40 °C протягом 4 місяців. Результати даного дослідження представлені на фігурі 19. Така композиція з високою концентрацією фенілефрину була стабільна при температурі від 4 °C до 30 °C протягом 4 місяців. Приклад 5 Оцінка тривалої стабільності комбінації фенілефрину і кеторолаку Дослідження тривалої стабільності виконували для складу з фіксованою комбінацією фенілефрину HCl (12,37 мг/мл) і кеторолаку трометаміну (4,24 мг/мл) в 20 мМ натрій 10 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 цитратному буфері, доведеному до pH 6,5, без додавання яких-небудь консервантів або антиоксидантів. Зразки складу фасували в 5 мл скляні флакони типу 1 USP, закривали 20 мм пробками Daiko D777-1, покритими плівкою Flurotec®, і зберігали в перевернутому положенні і обгорнутими в фольгу для захисту від світла, а потім витримували в умовах тривалого зберігання (5±3 °C) і прискореного старіння (25±2 °C/60±5 % RH). Кожний флакон містив 4,5 мл розчину, включаючи 0,5 мл надлишок. Не було виявлено ніякої вимірної зміни зовнішнього вигляду продукту, pH розчину або активності при вимірюванні після закінчення 30 місяців зберігання при вказаних умовах. У вказаній часовій точці через 30 місяців зберігання при 5 °C і 25 °C привело в загальній складності до утворення 1,17 % і 1,36 % специфічних домішок відповідно. Графічне представлення виміряної активності фенілефрину HCl і кеторолаку трометаміну для цієї композиції, витриманої при вказаних умовах зберігання від 2 °C до 8 °C, представлені на фігурі 20A і фігурі 20B відповідно. Як видно з цих фігур, протягом 30 місяців не спостерігали ніякого істотного зниження активності (в кожній часовій точці досліджували по три флакони). Приклади 6-9 У наступних прикладах 6-9 представлені результати in vivo досліджень комбінованих складів фенілефрину HCl і кеторолаку трометаміну відповідно до даного винаходу, які розводили при ін'єктуванні в іригаційний розчин, що потім використали для інтраокулярної іригації в ході операції з видалення і заміни кришталика. У цій серії досліджень оцінювали наступні склади: (a) фенілефрин HCl окремо (PE), (b) кеторолаку трометамін окремо (KE), (с) комбінацію фенілефрину HCl і кеторолаку трометаміну (PE-KE) або (d) без активних фармацевтичних інгредієнтів (контроль середовищем розведення), в кожному випадку приготовані у водному розчині, що містить 20 мМ натрій цитратний буфер, доведений до pH 6,5, без додавання консервантів або антиоксидантів, в кожному випадку представлені в аліквотах по 2,5 мл. У кожному випадку аліквоту композиції вводили в збалансований сольовий розчин (BSS, Baxter Healthcare, код продукту 1A7233) як іригаційний носій до певної кінцевої концентрації для введення, як описано нижче. У дослідженнях також використали пропаракаїн HCl (0,5 %, Bausch & Lomb), тропікамід (1,0 %, Bausch & Lomb) і ципрофлоксацин HCl (3 %, Alcon) в кількості, описаній нижче. Мідріатичні і протизапальні властивості засобів, що тестуються, оцінювали в моделі операції факоемульсифікації у людини на африканській зеленій мавпі. До операції проводили визначення базових показників і оцінок на обох очах у кожної мавпи з метою визначити діаметр зіниці, цілісність кришталика і райдужної оболонки, товщину рогівки, опалесценцію в передній камері ока і кількість клітин за допомогою якісного біомікроскопічного дослідження і кількісної фотометрії опалесценції при використанні системи Kowa FM-500. Операцію факоемульсифікації із заміною кришталика штучною лінзою з поліметилметакрилату (PMMA) проводили з використанням факоемульсифікаційної машини Storz Premier. Процедуру проводили тільки на правом оці, щоб мінімізувати варіацію від положення операції, використовуючи ліве око як контроль, і мінімізувати наслідок будь-якої можливої втрати зору, викликаної операцією. Піддослідні тварини були поміщені в лежаче положення під анестезією кетаміном/ксилазином, посиленою однією краплею пропаракаїну зовнішньо. У роговій оболонці правого ока зробили невеликий розріз за допомогою списоподібного скальпеля 20 G MVR, через який в передню камеру ока вводили 0,4-0,6 мл віскоеластику (2 % гідроксипропілметилцелюлоза, EyeCoat, Eyekon Medical) з допомогою ін'єктора для віскоеластику. Розріз рогівки зробили за 1,0 мм до лімба, використовуючи 2,65 мм прямий очний двосторонній скальпель. Іригацію проводили за допомогою факоемульсифікаційної насадки для видалення віскоеластику і введення перфузата, що тестується. Після іригації протягом в загальній складності чотирьох хвилин іригацію зупинили і знову наповнили передню камеру віскоеластиком. Виконали капсулорексис і факоемульсифікаційний наконечник повторно ввели в передню камеру ока із застосуванням енергії факоемульсифікації для руйнування кришталика з подальшою аспірацією і видаленням фрагментів кришталика. Іригацію продовжували протягом деякого часу після видалення кришталика, щоб стандартизувати інтраокулярну доставку перфузата між всіма групами лікування (в загальній складності 14 хвилин іригації протягом цієї частини факоемульсифікації). Після процедури факоемульсифікації і іригації імплантували інтраокулярну оптичну лінзу з PMMA (ІОЛ) і виконали додаткову іригацію протягом двох хвилин, після чого на розріз рогівки наклали два шви 12.0 нейлоновою ниткою. Іригацію рідиною або контрольним середовищем, що тестується, як описано нижче, проводили в загальній складності протягом 20 хвилин при об'ємній швидкості 20 мл/хв. до, під час і після факоемульсифікації і заміни кришталика. 11 UA 114650 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 У цих дослідженнях лазерну фотометрію опалесценції проводили на початку, через 4,5, 24, 48 годин і через 1 тиждень після початку операції, використовуючи Kowa FM-500 (Kowa Company, Tokyo, Japan). Kowa FM-500 вимірює розсіяння лазерного випромінювання для кількісного визначення опалесценції вологи передньої камери ока. Лазер направляють в передню камеру і молекули білка, що потрапили в передню камеру в процесі запальної реакції, проходять через фокус, розсіюючи випромінювання лазера. Це світлове розсіяння визначають кількісно за допомогою фотопомножувача в фотонах на мілісекунду. У кожній точці спостереження вимірювання проводили, поки не було отримано сім прийнятних свідчень (відмінність між двома фоновими вимірюваннями