Спосіб визначення тау-флювалінату в меді та бджолах

Реферат: Спосіб визначення тау-флювалінату в меді та бджолах, що включає екстрагування, осаджування, перерозподіл, випарювання, газохроматографічне визначення залишків пестициду, при якому екстрагування проводять етилацетатом, перерозподіл до гексану проводять без додавання води, доочищення екстракту проводять на хроматографічній колонці розчином гексан:етилацетат у співвідношенні 1:1. UA 80667 U (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ ТАУ-ФЛЮВАЛІНАТУ В МЕДІ ТА БДЖОЛАХ UA 80667 U UA 80667 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до токсикології, а саме до визначення залишків синтетичних піретроїдів в біологічних об'єктах. Визначення тау-флювалінату в бджільництві необхідне при контролі залишкових кількостей піретроїду та діагностиці і профілактиці отруєнь бджіл. Тау-флювалінат - інсектицид з групи синтетичних піретроїдів контактного та кишкового типу з вираженою акарицидною дією. Пестицид належить до третього класу токсичності при пероральному введенні (ЛД50 для щурів - 261 мг/кг), до токсичних речовин за умов інгаляційного введення (ЛК50 (4 г) для щурів > 560 мг/куб. м повітря) і до малотоксичних речовин при нашкірному нанесенні (ЛД50 для кролів > 2000 мг/кг). Відомі методи визначення синтетичних піретроїдів у меді за допомогою газової хроматографії мас-спектрометрії (Albero, В., Sanchez-Brunete, С, & Tadeo, JL. (2004). Analysis of pesticides in honey by solid-phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry. Journal of Agriculture and Food Chemistry, 52,5828-5835), при виконанні яких собівартість проби втричі вища, ніж в розробленій методиці. На сьогодні немає вітчизняних способів якісного та кількісного визначення залишкових кількостей тау-флювалінату в об'єктах бджільництва. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб визначення тау-флювалінату у ґрунті ("Определение остаточных количеств тау-флювалината в воде и почве методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания. МУК 4.1.2456-09" утверждены 02.02.2009 г. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.) За цим способом проводять екстрагування тауфлювалінату з матриці ацетонітрилом, відокремлення матриці центрифугуванням, фільтрацію крізь паперовий фільтр, перерозподіл до води а потім до гексану, випарювання гексану для перерозподілу до ацетону та аналіз на газорідинному хроматографі. Це рішення може бути прототипом. Але цей спосіб не придатний для визначення піретроїду в продукції бджільництва за рядом причин. При використанні запропонованих екстрагентів відсоток вилучення тау-флювалінату з матриці є низьким (20-30 %). Очищення екстракту за даним способом є недостатнім через те, що продукти бджільництва мають у своєму складі багато різних за хімічним складом речовин, які при екстрагуванні переходять до екстракту та при аналізі на приладі знижують чутливість способу. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб визначення тау-флювалінату в меді та бджолах, що включає екстрагування, осаджування, перерозподіл, випарювання шляхом екстрагування етилацетатом, перерозподіл без додавання води, доочищення екстракту на хроматографічній колонці, щоб забезпечити ефективність способу. Порівняльний аналіз з прототипом дає змогу зробити висновок, що спосіб, який заявляється, відповідає критерію "новизна". Спосіб виконується таким чином. Проводиться екстрагування піретроїду із проби, що підлягає аналізу, осадження коекстрактивних речовин з водно-етилацетатного розчину центрифугуванням, перерозподіл тау-флювалінату до гексану і доочищення екстракту на хроматографічній колонці. Після цього проводять елюювання з колонки та ідентифікацію діючої речовини за допомогою газової хроматографії. Метрологічна характеристика методу не поступається відомим способам, (табл.). Для дослідження використовують скляну колонку довжиною 1 м заповнену хроматином NAW-HMDS /0,16-0,20/ з 5 % SE-30. Колонку готують у відповідності до загальної інструкції з газової хроматографії. Нову колонку кондиціонують, не з'єднуючи з детектором, протягом 12-16 годин, при температурі вищій за робочу на 30-40 °C. 3 Основний стандартний зразок тау-флювалінату з концентрацією 100 мкг/см готують 3 розчиняючи 10 мг препарату в 10 см ацетону і доводять до мітки гексаном у мірній колбі на 100 3 3 см . Робочі стандартні розчини в гексані з концентраціями: 1 і 10 мкг/см готують із основного стандартного зразка. Зберігають стандартні розчини в холодильнику у щільно закупореному посуді, що виключає випарювання органічних компонентів протягом одного місяця. Приклад Визначення залишкових кількостей тау-флювалінату в об'єктах бджільництва. Із середньої гомогенізованої проби відбирали наважку: меду - 10 г, бджіл - 5-10 г. Відібрану наважку 3 3 поміщали в конічну колбу з притертою пробкою і екстрагували 10 см води та 30 см етилацетату одну годину на апараті для струшування (або залишали на 16-20 годин, періодично перемішуючи). Далі екстракт центрифугували при 2500 об./хв. впродовж 5 хвилин. Надосадову частину відфільтровували через паперовий фільтр в чисту колбу. Залишок і фільтр промивали 3 5 см етилацетату. 1 UA 80667 U 5 10 15 20 Після цього тау-флювалінат реекстрагували в ділильній лійці із водно-етилацетатного 3 розчину гексаном двічі, використовуючи при цьому по 15 см екстрагенту. Потім гексановий екстракт концентрували у випарювальній чашці до 0,5 см. Упарений екстракт переносили у приготовлену хроматографічну колонку для додаткового очищення екстракту. При цьому використовували скляну хроматографічну колонку з діаметром 7-8 мм. В нижню звужену частину колонки вводили тампон із білої вати, насипали шар безводного сірчанокислого натрію - 0,5 см, оксиду алюмінію - 2 см (2 ступінь активності за Брокманом) і шар безводного 3 сірчанокислого натрію - 0,5 см. Колонку перед внесенням екстракту промивали 5 см розчину гексан-етилацетат у співвідношенні 1:1. Після всмоктування аналізованого екстракту проводили 3 елюювання тау-флювалінату: 10 см розчину гексан-етилацетат у співвідношенні 1:1. Наступним етапом способу були ідентифікація та кількісне визначення тау-флювалінату. Очищений екстракт досліджували за допомогою газової хроматографії. Для ідентифікації тау-флювалінату використовували газовий хроматограф з детектором по захопленню електронів. Температура випарювача - 270 °C, термостата колонок - 245 °C, термостата детектора 310 °C. Газ-носій - азот особливої чистоти (або аргон вищої категорії очищення). Швидкість 3 3 подачі газа на колонку - 30 см за хвилину, на продування детектора - 70-100 см за хвилину. -12 Робоча шкала електрометра від 5 до 20×10 А. У випарювач хроматографа вводили 1-4 мкл стандартного або дослідного розчину. Час утримування тау-флювалінату - 5,3 хв. Мінімально детектована кількість тау-флювалінату - 2,0 нг. Якісну ідентифікацію тау-флювалінату здійснювали за часом утримання. Кількісне визначення у пробі проводили методом порівнювання висоти або площі піка стандартного і дослідного розчину. Математичні розрахунки проводили за формулою: X 25 Упр(мл)  Ст (нг )  Нпр  100 Ур  н(мкл)  Нст  М(г)  К . Де: X - кількість пестициду в пробі в мг на кг; Упр(мл) - об'єм екстракту в см3; 30 Ст (нг ) - кількість пестициду в нг введена у випарювач хроматографа зі стандартним розчином; Нпр - висота піка аналізованої проби в см; Ур  н(мкл) - кількість екстракту введеного в хроматограф в мкл; Нст - висота піка стандарту в см; М(г ) - маса проби, взятої для екстракції (в г або см3); 35 40 100 - коефіцієнт для внесення поправки на втрати пестициду при К екстракції і підготовки проби для дослідження, де К - визначуваність препарату в % (тау-флювалінат - 60 %). Таким чином, спосіб визначення Тау-флювалінату в об'єктах бджільництва є ефективним, та не трудомістким. Його використання спрощує процедуру аналізу та підвищує точність визначення тау-флювалінату при меншому часі екстракції та кращому очищені екстракту. Спосіб може використовуватись в лабораторіях безпеки та якості продукції при вивченні залишкових кількостей Тау-флювалінату в об'єктах бджільництва та при діагностиці отруєнь піретроїдами. Таблиця Спосіб визначення тау-флювалінату в меді та бджолах Статистичні показники Межа визначення, мг/кг К-сть паралельних проб Розмах варіювання, % М±m, % об'єкти, що аналізували мед бджоли 0,01 0,05 5 5 55-65 47-60 60,28±1,72 54,48±2,13 45 2 UA 80667 U Продовження таблиці Стандартне відхилення, % Медіана, % 3,8 60 4,77 54 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Спосіб визначення тау-флювалінату в меді та бджолах, що включає екстрагування, осаджування, перерозподіл, випарювання, газохроматографічне визначення залишків пестициду, який відрізняється тим, що екстрагування проводять етилацетатом, перерозподіл до гексану проводять без додавання води, доочищення екстракту проводять на хроматографічній колонці розчином гексан:етилацетат у співвідношенні 1:1. Комп’ютерна верстка І. Мироненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3