Спосіб отримання статевих продуктів чорного амура

Спосіб отримання статевих продуктів чорного амура, який відрізняється тим, що використовують ацетонований гіпофіз ляща (карася, коропа) самицям в дозі 11-15 мг/кг живої ваги риб, самцям - 30 мг/екз., при двократному його введенні в організм (попередня доза складає 0,1 частину від остаточної), в склад ін'єкції входять гліциланілід в концентрації 2-4 мг/ кг живої ваги риб та біцилін-3 в дозі 60 ОД/ екз. (19) (21) 98041952 (22) 16.04.1998 (24) 15.02.2001 (46) 15.02.2001, Бюл. №1, 2001р (72) Зіньковський Олег Георгієвич, Потрохов Олександр Спиридонович, Євтушенко Микола Юрійович (73) Інститут гідробіології Національної академії наук України 32789 Причинно-наслідковий зв'язок між суттєвими ознаками заявляємого винаходу та технічним результатом полягає в слідуючому: запропонована методика отримання шикування самців і а самиць. При цьому запропонована доза гіпофізу ляща (карася, коропа) як для самиць, так і для самців чорного амура ділиться на дві частини для попереднього ( 10 % від загальної кількості за 2430 год.) та остаточного його ін'єкування. Необхідна кількість гіпофізу вводиться внутрішньом'язово сумісно з антистресовим препаратом (гліциланілідом) та антибіотиком (біцилін-3). Спосіб отримання статевих продуктів чорного амура шляхом застосування гіпофізарного ін'єкування та використання антистресової та протиінфекційної підтримки виконується слідуючим чином: Умови ставового господарства не відповідають вимогам, необхідним для природного розмноження чорного амура. Тому для отримання статевих продуктів використовується метод гормонального стимулювання нересту. Розрахунок необхідної кількості гіпофізу на самицю роблять відповідно до формули: D= l ×O ×K 100 куванням у неї ооцити старшої генерації ще не були підготовлені до запліднення. Перший раз вводять 0,1 частину загальної дози гіпофізу (близько 6 мг/екз.). Повторно загальна доза гіпофізу ін'єкується через 30 годин. Через 12 годин після повторної ін'єкції можна розпочинати отримання текучих статевих продуктів. Робоча та відносна плодючість на одну рибу при масі риб 4,5-6,2 кг складає від 179000489000 до 49700-78900 ікринок. Експерименти по встановленню необхідної дози гіпофізу .для отримання в достатній кількості та з високими показниками еякуляту були проведені на 52 самцях чорного амура. Із зростанням дози гіпофізу на рибу з 10 до 30 мг зростала кількість отриманого еякуляту з 4 до 21 мл, при використанні попереднього ін'єкування самців (0,1 від загальної дози) об'єм молок збільшується до 8-24 мл відповідно. Найбільш тривала рухливість сперматозоїдів та відсоток рухливих сперматозоїдів відмічені для середнього дозування гіпофізу (30 мг/екз. при попередньому ін'єкуванні), котре і можна прийнята як оптимальне. Ацетонований гіпофіз ляща (сазана, карася) призводить до дозрівання статевих продуктів чорного амура. В склад ін'єкції нами запропоновано вводити також гліциланілід (хлоргідрат гліцил /2 бензоіл - 4 - бром/ - аніліду) та біцилін-3. Гліциланілід виявляє антистресову, анестезуючу активність та пригнічує збудження нервової системи риб. Завдяки чому зменшується рівень травмування плідників, ікра дозріває в фізіологічне сприятливих умовах, позбавлених негативного впливу явищ стресу. Включення в склад ін'єкції антибіотика призводить до того, що ікра риб не уражається грибковими та бактеріальними інфекціями в процесі подальшого й інкубування і суттєво зменшується вірогідність інфекційного ураження плідників в післянерестовий період. Транквілізуючий ефект настає через 1-3 хв. і продовжується протягом 8-12 годин. Біцилін-3 діє в організмі риб протягом 2-3 тижнів. Готується 6,5 % фізрозчин: для чого 6,5 г NaCI (х.ч.) розчиняють в 100 мл дистильованої води. В готовий розчин вносять біцилін-3 з розрахунку 60 ОД на 1 мл фізрозчину, при цьому на 1 рибу готують 1 мл розчину біциліну-3. Паралельно готують розчин гліциланіліду з розрахунку 2040 мг/мл фізрозчину. В порцеляновій ступці подрібнюють ацетонований гіпофіз в необхідній кількості згідно з загальноприйнятою методикою і добавляють 1 мл розчину біциліну-3 на 1 екз. риб і розчин гліциланіліду з розрахунку 0,1 мл на кг живої ваги риби ( доза гліцнланіліду складає 24 мг/кг живої ваги риби). Концентрація гліциланіліду в фізрозчині змінюється в залежності від температури води; в якій знаходяться риби, від 40 мг/мл при температурі 18-20° С до 20 мг/мл при температурі 25° С та вище. Ін'єкції плідникам чорного амура проводять в носилках. Суспензію гіпофізу вводять в м'язи спини дещо нижче основи спинного плавника, або під грудний плавник. Місце проколу затискують і на місці ін'єкції проводять масаж. Після ін'єкування риби втримуються н невеликих земляних садках площею 200-300 м2 та , де l - довжина тіла риби, мала, см; О - обхват тіла, см; К - коефіцієнт, який залежить від розмірів тіла риби та температури води; D - кількість мг гіпофізу на рибу. В наших експериментах на самицях чорного амура з метою визначення необхідної дози гіпофізу для отримання дозрілої ікри ми змінювали коефіцієнт К від 1 до 3. При умовах практично рівних показників росту (табл. 1) кращі результати отримані при коефіцієнті 2-3 (робоча плодючість складала 215-278 тис. ікринок на рибу). В той час в останньому випадку життєздатність як ікри, так і передличинок нижча, ніж в першому варіанті розрахунку доз гіпофізу. Таким чином, при сприятливих температурних умовах оточуючого середовища (21-24° С) доцільно застосовувати коефіцієнт К, що дорівнює 2,0. В несприятливих умовах (18-20° С) з метою дозрівання статевих продуктів коефіцієнт К збільшують до 2,3. В перерахунку на кг живої ваги риб доза гіпофізу складала 11-15 мг/кг в залежності від температурних умов. Отже, для отримання дозрілої ікри чорного амура необхідна слідуюча доза гіпофізу в залежності від змін температури води (табл. 2,3): Необхідний ефект після ін'єкування можна отримати тільки при використанні цілком дозрілих самиць, у яких в ооцитах, що дозрівають, відбулись відповідні переднерестові ядерні перетворення. На більш ранніх стадіях дозрівання самиці не відповідають позитивно на гіпофізарну ін'єкцію. Нажаль, по зовнішніх ознаках неможливо відрізнити цілком дозрілу самицю від ще недостатньо дозрілої. Через це введення повної дози гіпофізу застосовують в два етапи. Перший, умовно попередньої дози, котра достатня, щоб стимулювати дозрівання самиці, якщо перед ін'є 2 32789 глибиною 0,8-1,0 м, або ж у ваннах. Однак, у ваннах помічається більший травматизм риб. Самці та самиці витримуються роздільно. Так як при розведенні чорного амура спостерігаються деякі труднощі з отриманням еякуляту від самців, співвідношення самців до самиць може бути 2:3, Ікру та молоки отримують звичайним способом в емальовані або ж пластмасові миски і аптечні стаканчики. При цьому слід спершу отримувати ікру, а потім молоки. Запліднення ікри проводять не пізніше, ніж через 20-30 хв. після її отримання. В кожну миску з ікрою додають молочко від 2-3 самців в кількості 2-3 см3 на 1 кг ікри і ретельно змішують їх пером так, щоб еякулят якісно розподілився між ікрою, потім додають 50-60 см3 води і перемішують протягом 30-40 сек. При проведенні цих маніпуляцій сперматозоїди проникають в середину ікринок, де і відбувається запліднення. Після цього ікру переносять в інкубаційні апарати. Не рекомендується використання молок одного самця при заплідненні ікри через те, що одна сперма може бути низької якості. Застосування способу пояснюється слідуючими прикладами: ПРИКЛАД 1. Для попереднього ін'єкування з метою отримання статевих продуктів відібрано 5 самиць чорного амура з середньою довжиною тіла (1) 66 см та обхватом тіла 44 см. Доза необхідного гіпофізу для цієї групи риб складає 50 мг. Для приготування суспензії гіпофізу беруть 5 мл розчину біциліну-3 в концентрації 60 ОД/мл на 6,5 %-ому фізрозчині (загальна кількість біциліну-3 складає 300 ОД, або 1/2 флакону). Гіпофіз подрібнюється в порцеляновій ступці, додають 5 мл розчину біциліну-3 й 2,5 мл свіжопри готованого 3 %-ого розчину гліциланіліду. Потім приготовлену суміш набирають в шприц і кожному плідникові вводять по 1,5 мл суспензії. ПРИКЛАД 2. Для проведення остаточної ін'єкції гіпофізу відібрано 2 плідника чорного амура з середньою довжиною тіла (1) 66 см і обхватом тіла 44 см. Необхідна кількість гіпофізу для цієї групи риб складає. 114 мг. Гіпофіз подрібнюють в порцеляновій ступці, додають 2 мл 6,5 % фізрозчину і 1,0 мл свіжоприготованого 3%-ого роччину гліі(иланіліду. Потім приготовану суміш набирають в шприц і кожному плідникові вводять по 1.5 мл суспензії. ПРИКЛАД 3. Для попереднього ін'єкування з метою отримання статевих продуктів відібрано 5 самців чорного амура. Доза необхідного гіпофізу для цієї групи риб складає 15 мг. Для приготування суспензії гіпофізу беруть 5 мл розчину біциліну-3 в концентрації 60 ОД/мл на 6,5 %-ому фізрозчюгі (загальна кількість біциліну-3 складає 300 ОД. або 1/2 флакону). Гіпофіз подрібнюється в порцеляновій ступці, додають 5 мл розчину біциліну-3 і 2,5 мл свіжоприготовленого 3 %-ого розчину гліциланіліду. Потім приготовлену суміш набирають в шприц і кожному плідникові вводять по 1,5 мл суспензії. ПРИКЛАД 4. Для проведення остаточної ін'єкції гіпофізу з метою отримання сперми відібрано 5 самців чорногоамура. Необхідна кількість гіпофізу для цієї групи риб складає 135 мг. Гіпофіз подрібнюють в порцеляновій ступці, додають 5 мл 6,5 % фізрозчину і 2,5 мл свіжоприготовленого 3 %-ого розчину гліциланіліду. Потім приготовану суміш набирають в шприц і кожному плідникові вводять по 1,5 мл суспензії. Приклади приведені для ін'єкування риб при температурі води 20° С. Таблиця 1. Вплив різних доз гіпофізу на робочу плодючість плідників та життєздатність личинок чорного амура. 3 Таблиця 2. о Розрахунок дози гіпофізу на самицю в залежності від розмірів риб та при температурі води 19-21 С, в мг сухої речовини гіпофізу 32789 4 Таблиця 3. о Розрахунок дози гіпофізу на самицю в залежності від розмірів риб та при температурі води 22-25 С, мг сухої речовини гіпофізу 32789 5 32789 Таблиця 4. Вплив різних доз гіпофізу, що вводили самцями, на кількість та якість отриманого еякулянту ____________________________________________ ДП “Український інститут промислової власності” (Укрпатент) Бульв. Лесі Українки, 26, Київ, 01133, Україна (044) 254-42-30, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид.арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ Вул. Горького, 180, Київ, 03680 МСП, Україна (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 6