Застосування 4-галогено-4-феніл-6-аміно-3-галогенометил-8н-піримідо[2,1-b][1,4,3]тіаселеназін-8-ону як бактерициду та фунгіциду

Реферат: Застосування 4-галогено-4-феніл-6-аміно-3-галогенометил-8H-піримідо[2,1b][1,4,3]тіаселеназін-8-ону, загальної формули (І): O N H2 N N S Se Hal CHxHal ,I в якому: Hal є СІ, Вr; є одинарним або подвійним зв'язком; х дорівнює 1 або 2, який проявляє фунгіцидну, бактерицидну та бактеріостатичну активність по відношенню до бактерій та грибів, як бактерициду та фунгіциду. UA 72113 U (12) UA 72113 U UA 72113 U Корисна модель належить до органічної хімії, а саме до застосування 4-галогено-4-феніл-6аміно-3-галогенометил-8H-піримідо[2,1-b][1,4,3]тіаселеназін-8-ону, загальної формули (І): O N H2 N N S Se Hal CHxHal ,I в якому: Hal є СІ, Вr; 5 10 15 20 є одинарним або подвійним зв'язком; х дорівнює 1 або 2, який проявляє фунгіцидну, бактерицидну та бактеріостатичну активність по відношенню до бактерій та грибів, як бактерициду та фунгіциду. Відомі бактерицидні конденсовані системи, які містять в своєму складі фрагмент піримідину, але вони характеризуються складним багатоступінчатим синтезом й помірною антимікробною активністю [1,2]. Найбільш близькими за технічною суттю до заявлюваних є селеновмісні похідні тієно[2,3d]піримідину, які характеризуються простотою синтезу та мають високу бактерицидну й бактеріостатичну активність, але є малоактивними по відношенню до грибкових мікроорганізмів [3]. Задачею корисної моделі є пошук речовин класу піримідину, а саме конденсованих селеновмісних піримідинів, які характеризуються низькою токсичністю та мають фунгіцидну, бактерицидну та бактеріостатичну активність по відношенню до всіх прокаріотичних і еукаріотичних мікроорганізмів, а особливо збудників внутрішньо-лікарняних інфекцій. Поставлена задача вирішується синтезом та застосуванням 4-галогено-4-феніл-6-аміно-3галогенометил-8//-піримідо[2,1-6][1,4,3]тіаселен-азін-8-ону, загальної формули (І): O N H2 N N S Se Hal CHxHal ,I в якому: Hal є СІ, Вr; 25 30 35 є одинарним або подвійним зв'язком; х дорівнює 1 або 2, який проявляє фунгіцидну, бактерицидну та бактеріостатичну активність по відношенню до бактерій та грибів, як бактерициду та фунгіциду. Суть корисної моделі досягається наступними прикладами: Приклад 1. Загальна методика одержання та фізико-хімічні характеристики похідних 4-галогено-4феніл-6-аміно-3-галогенометил-8Н-піримідо[2,1-b][1,4,3]тіаселеназін-8-онів 1-3 описано в роботі [4]: 4-Хлоро-4-феніл-6-аміно-3-хлорометил-2,3-дигідро-8H-піримідо[2,1-b][1,4,3]тіаселеназін-8-он (1). 4-Хлоро-4-феніл-6-аміно-3-[(E)-1-хлорометиліден]-2,3-дигідро-8H-піримідо[2,1-b] [1,4,3]тіаселеназін-8-он (2). 4-Бромо-4-феніл-6-аміно-3-[(E)-1-бромометиліден]-2,3-дигідро-8H-піримідо[2,1-b] [1,4,3]тіаселеназін-8-он (3). 1 UA 72113 U 5 10 15 20 25 30 Для дослідження бактерицидної та бактеріостатичної активності синтезованих сполук (1-3) по відношенню до запатентованих музейних штамів мікроорганізмів, які зберігаються на кафедрі мікробіології, вірусології, імунології з курсом інфекційних хвороб медичного факультету ДВНЗ УжНУ використовували 9 культур бактерій різних таксономічних груп: грампозитивні Staphylococcus albus, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Sarcina jlava, Bacillus subtilis ATCC 6633, Candida albicans CCM 885 (музейні культури) та грамнегативні (Klebsiella pheumoniae 5056, Klebsiella oxytoca ATCC 13182, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853), а також E. coli M17. Синьогнійну паличку культивували на м'ясо-пептонному агарі (МЛА), для культивування ентеробактерій використовували середовище Ендо, грампозитивні кокові - на жовтково-яєчному агарі (ЖСА), дріжджоподібні гриби роду Candida вирощували на середовищі Сабуро [5]. Для проведення дослідження були використані методичні вказівки, затверджені МОЗ України Наказом № 167 від 05.04.2007 р. "Визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів" та рекомендації Європейського комітету для тестування чутливості до антимікробних препаратів (EUCAST) [6]. Первинний скринінг антимікробної активності нових хімічних сполук вивчали згідно з методичними вказівками диско-дифузійним методом на середовищі Мюллер-Хінтона. Щільне поживне середовище готували відповідно до інструкції виробника. Чашки Петрі залишали при кімнатній температурі для застигання. Перед інокуляцією чашки підсушували у термостаті при 35 °C протягом 10-20 хв. Диски з антибіотиками й протигрибковими засобами для визначення чутливості дискодифузійним методом використовували стандартизовані. Для приготування бактерійної суспензії з музейних культур використовували стандартний інокулюм. Інокулюм (баксуспензія) використовувся протягом 15 хв. з моменту приготування. Для інокуляції чашок з агаром наносили суспензію бактерій на поверхню чашки Петрі з поживним 3 середовищем Мюллер-Хінтона в об'ємі 1-2 см . При відкриті чашки підсушували при кімнатній температурі протягом 10-15 хв. Після цього наносили диски на поверхню поживного середовища за допомогою стерильного пінцета. Відстань від диска до краю чашки і між дисками була 15-20 мм. Диски рівномірно контактували з поверхнею агару. Відразу після аплікації дисків чашки Петрі поміщали в термостат догори дном і інкубували при температурі 35 °C протягом 1824 год. Таблиця 1 Антимікробна активність сполук (1-3) та стандартних розчинів порівняння (4-7)* щодо грампозитивних та грамнегативних мікроорганізмів Вид бактерій Сполука 1 2 Грампозитивні мікроорганізми St. aurеus АТСС 25923 Staphylococcus albus Sarcinaflava Cand. albicans CCM885 Bacillus subtilis 6633 Грамнегативні мікроорганізми Kl. pneumoniae 5056 Kl. Oxytoca ATCC 13182 Ps. aeruginosa ATCC 27853 Esch. Coli M-17 3 4 5 6 7 8 0 5 23 4 9 11 0 29 5 2 5 0 31 10 11 7 21 12 12 17 2 0 5 29 10 7 1 30 15 5 0 24 14 29 Примітка: як стандартні розчини порівняння використовували диски антибіотиків: 4 - пеніцилін, 5 - цефатоксим, 6 - нистатін, 7 - клотримазол. 35 Облік результатів. Після інкубації чашки поміщали догори дном на темну матову поверхню так, щоб світло падало на них під кутом 45°. В залежності від діаметрів зон затримки росту мікроорганізмів штами відносили до високочутливих (більше 25 мм), помірно стійких (до 15 мм) або стійких (резистентних - зона затримки росту бактерій відсутня). Діаметр зон затримки росту виміряли з точністю до 1 мм, використовуючи для цього лінійку Ні Antibiotic Zone Scale - С виробника Himedia. 2 UA 72113 U 5 При вимірюванні зон затримки росту орієнтувалися на зону повного пригнічення видимого росту. Результати дії розчинів сполук (1-3) та стандартних розчинів порівняння на ряди бактерій, результати якої представлено в таблиці 1. Як видно із таблиці 1, всі сполуки (1-3) виявили високий антимікробний ефект по відношенню до росту і розмноження грам-негативних мікроорганізмів Escherichia coli М - 17 та грам-позитивних грибків Cand. albicans CCM 885. Аналіз токсичності сполук (1-3) в порівнянні з сполуками прототипу [3] та препаратами порівняння (таблиця 2) вказує на низьку токсичність сполук (1-3), що обумовлює актуальність розробки комплексних лікарських препаратів на основі сполук (1-3). 10 Таблиця 2 Токсичність сполук (1-3), препаратів порівняння та сполук прототипу [3] Токсичність Сполуки Сполука 1 Сполука 2 Сполука 3 Клотримазол Пеніцилін LD 50 (mg/kg) (внутрішньовенне введення) 15 20 25 30 188 210 270 80 2884 Прототип Прототип І [3] II [3] 121 176 Таким чином, позитивний ефект корисної моделі полягає в розширенні асортименту антимікробних й протигрибкових препаратів, які мають високу активність по відношенню до прокаріотних і еукаріотних мікроорганізмів як музейних, так і свіжовиділених штамів. Корисна модель може бути використана для створення нових протигрибкових препаратів та засобів дезинфекції, як антисептики для боротьби з патогенними мікроорганізмами, збудниками госпітальних інфекцій. Джерела інформації: 1. El-Feky S.A., Abd El-Samii Z.K., Jaeda M.I. Thieno[2,3-d]pyrimidines as potential antimicrobial agents. // Zhonghua Yaoxue Zazhi.-1993. - Vol. 45. - № l.-P. 15-20. 2. Russo F., Santagati N.A., Venturini R., Spampinato S. Synthesis and pharmacological activity of 2-alkylthiosubstituted thieno[2,3-d]pyrimidin-4-ones and 5H-pyrimido[5,4-b]indol-4one.//Pharmazie.-1990-Bd.45. - № 7. - S. 493-495. 3. Патент України № 53671 на корисну модель, МПК С07 D 293[00, C12 Q 1|18. Солі тієно[3',2':5,6]піримідино[2,1-b][1,4,3]тіаселеназин-12-ію, що мають антимікробну активність. /Кривов'яз А.О., Коваль Г.М., Сливка М.В., Лендєл В.Г./ Заявл. 30.04.2010. Опубліковано 11.10.2010, Бюл. № 19, 8с. -Прототип. 4. Кривов'яз А.О. Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата хімічних наук: 02.00.03. -Київ, 2005.-146с. 5. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - М.: Медицина, 1982.-264 с. 6. EUCAST disk diffusion antimicrobial susceptibility testing method summary. Version 1.0. // European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. - Режим доступу до журн.: www.eucast.org (26.06.2009). 35 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Застосування 4-галогено-4-феніл-6-аміно-3-галогенометил-8H-піримідо[2,1-b][1,4,3]тіаселеназін8-ону, загальної формули (І): O N H2 N N S Se Hal 40 CHxHal ,I 3 UA 72113 U в якому: Hal є СІ, Вr; 5 є одинарним або подвійним зв'язком; х дорівнює 1 або 2, який проявляє фунгіцидну, бактерицидну та бактеріостатичну активність по відношенню до бактерій та грибів, як бактерициду та фунгіциду. Комп’ютерна верстка Л. Купенко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4