Спосіб отримання поліциклічного ефірного антибіотика або його фармацевтично прийнятної катіонної солі

Изобретение касается получения гетероциклических веществ, в частнос ти полициклического антибиотика формулы 9 nnu ОН или его фармацевтически приемлемой соли, проявляющих антикоккидиальную активность, что может быть использовано для лечения инфекционных заболеваний животных. Цель изобретения создание нового, более активного и менее токсичного соединения указанного класса. Синтез ведут контролируемым гидролизом антибиотика ИК-58£52 под действием | f t мол.эквивалента птолуолсульфоновой кислоты на 1 мол. эквивалент антибиотика в среде растворяющей смеси, содержащей 95% ацетонитрила и 5% воды. Если необходимо, свободную кислоту переводят в нужную соль. Новый антибиотик ИК-61,689 более активен, чем ИК-58.852, при меньшей в )0 раз токсичности. 2 табл. (Л O^CHj сн3 1 № СООН 30 Изобретение относится к способу получения нового полициклического эфирного антибиотика ИК-61.689 T(3R, 4S, 5S, 6R, 7S, 22S, 2S, 5S, 6 R ) /22,27-дидеметокси-2,6,22-тридеметил5,11-ди-0-диметил-6-метокси-22-/-(тетрагидро-5-метокси|-6-метил-2Н-пиран-2 ил)-окси-ломомицина AT, который проявляет сильную антикоккидиальную активность и может быть использован для лечения многих инфекционных болезней животных. Цель изобретения - получение ново( го антибиотика, обладающего ценными 3 1510718 * биологически активными свойствами 1,25 ч. Реакционную смесь выливают в и меньшей токсичностью. сепарационкую воронку, нижний масляП р и м е р 1. К раствору 15,0 г ный слой удаляют и смешивают с допол(0,0147 ьмоля) чистого антибиотика ^ нительным количеством смеси ацетонИК-58.852 в смеси ацетонитрил/вода итрил/вода 95:5. Ацетонитрил-водные Ч§5:5) (400 мл) добавляют 3,07 г слои объединяют и обрабатывают насы(0,0161 моля) n-толуолсульфоновой щен'ным водным бикарбонатом (400 м л ) . кислоты. Реакцию контролируют с помоСмесь затем концентрируют до плотного щью тонкослойной хроматографии до тех to сиропа под вакуумом, растворяют в пор, пока не будет достигнут оптималь- смеси диэтиловий эфир/этилацетат ный выход целевого продукта (около 3:1 (21) и промывают насыщенным вод3 ч ) . Реакционную смесь обрабатывают ным бикарбонатом натрия. Органичеизбытком твердого или водного бикарбо- ский слой высушивают над сульфатом ната натрия и выпаривают под вакуумом 15 натрия и концентрируют до полного ко до сухого остатка. Образующееся тверричневого масла. Очистку обычно продое вещество растворяют в диэтиловом водят с помощью противоточной экстракэфире и промывают насыщенным водным ции. При экстракции используют смесь раствором бикарбоната натрия, бикаргексан/этилацетат 1:1 в качестве небонатные промывки экстрагируют диэти- 20 полярной фазы и смесь метанол/вода ловым эфиром и все эфирные слои объе-^ 3:2 в качестве полярной водной фазы. диняют и промывают последовательно Выпаривание органических экстрактов водой и насыщенным хлористым натрием. дает пластичное твердое вещество, коЭфирньа"! раствор высушивают над без-' торое растирают в порошок с нзопрогагводным сульфатом натрия и выпаривают 25 ловым эфиром, получая ИК-61.689 в под вакуумом до сухого остатка. Обраформе натриевой соли, 10 г, т.шт.169зующийся сырой реакционный продукт 170 С. Полученный продукт идентичен содержит ИК-61.689 в качестве главносоединению ИК-61,689, полученному го компонента, но загрязнен исходным способом по примеру 1, как показываИК-53.852 и другими побочными пр оду к-30 ет сравнение данных тонкослойной хр'отами. Сырой продукт очищают хроматоматографии и ЯМР. графией на силикагеле с последующей П р и м е р 3. Дистиллированная рекристаллизацией из изопропилового деионизированная вода (200 мл) добавэфира, получая 4,2 г (32%) UK-61.689 ляется в соляную кислоту до получения в форме натриевой соли, т.пл.175^ рН 2,5. Натриевая соль ИК-61.689 176°C;r o 4j^=+19,3°(c = 0,5, МеОН); (0,30 г) растворяется в 100 мл дихлорС—13 ЯМР (CDClj); м.д.: 179,15; метана и промывается нейтральной дтис107,45; 103,18; 97,74; 96,96; 86,92; тиллированной водой и концентрирует84,60; 84,20; 82,27; 82,01; 80,88; ся путем сушки под вакуумом до дости80,20; 79,86; 74,80; 74,55; 73,07; жения 0,225 г (76,85%) свободной кис4 0 70,06; 67,71; 66,89; 59,11; 56,81; поты в виде небелого твердого вещест45,40; 39,82; 38,93; 36,46; 33,81; ва (тр.133-143). Его инфракрасный •> 33,71; 33,54; 33,42; 33,13; спектр (КВг)показывает широкую полосу 32,44; 32,26; 30,56; 27,58; 26,90; слабой абсорбции карбоновой кислоты. 26,84; 26,11; 23,23; 18,40; 17,53; -с Инфракрасный спектр натриевой соли 16,99; 12,13; 11,04; 10,42. "ИК-61.689 показал резкий сильный пик П р и м е р 2. Неочищенный ферв отношении карбоксилата при 1600 см™, ментационный экстракт (метилизобутилИК-58.852:(3R, 4S, 5S, 6R, 7S t 22S/2S, кетон) (11), содержащий антибиотик 5S, 6R/) - 22,27-дидеметокси-2,6 22ИК-58.852 (примерно 25 г ) , конценттридеметил-5,11-ди-0-деметил-6-меток- рируют под вакуумом до 680 г. Плотное си-5,22-бис/тетрагидро-5-метокси-6темное масло добавляют к смеси ацеметил-2К-пиран-2-ил) окси/-лоиомицин А. тонитрил/вода 95:5 (5.61) и образуюАнтибиотик ИК-61.689 проявляет инщуюся молокообразную эмульсию обрабагибирующее действие на рост большого тывают n-толуолсульфоновой кислотой количества грам-положительных микро(78,2 г) за один прием. По мере того, 'Организмов, В табл.1 суммированы рекак идет реакция, эмульсия постепенно зультаты опытов in vitro. Для этих разделяется на два четких слоя, котоопытов каждый организм инокулировали рые энергично перемешивают в течение в ряд тест-пробирок, содержащих пита 1510718 тельную среду и различные концентраСогласко методиге изучения процесса ции антибиотика ИК-61.689 для опреПереваривания пищи у жвачных in vitro деления минимальной концентрации соеизменения, происходящие в пище под действием микроорганизмов, измеряютдинения в мкг/мл, которая ингибирует ся более быстро и с большей точностью рост организма на 24 ч (МИК). для оценки рациона животных (Патецт Даннные по эффиктивности антибиоВеликобритании J 1197826). Эта метоP тика ИК-6 1 .689 и его солей против кокдика включает использование устройсткидиальных инфекций у цыплят получены ва, в котором пищеварительные процесследующим образом. Группы из 3-510 сы животных проводятся и изучаются дневных неинфицированных белых петушin vitro. Корм животных, инокулум коз леггорнов кормят рационом, содеррубца и различные промоторы роста жащим антибиотик ИК-61.689 или его вводятся и выводятся из лабораторного натриевую и/или калиевую соль, равустройства в тщательно контролируемых номерно распределенные в корме. После условиях и происходящие изменения невыдерживания на этом рационе в течепрерывно фиксируются в ходе потребление 24 ч каждого цыпленка инокулируния пищи микроорганизмами. Возрастают per os ооцистами испытуемых видов ние содержания пропионовой кислоты Eimeria. Другие группы из 3-5-дневных в жидкости рубца свидетельствует, что цыплят кормят таким же рационом, но 20 нужный результат в процессе пережевыбез антибиотика ИК-61.689 или его сования пищи вызван промотором роста, лей. Их также инфицируют через 24 ч включенным в состав корма. Изменения и. используют в качестве контрольной в содержании пропионовой кислоты группы на инфекцию. Еще одну группу выражаются в процентах от содержания из 3-5-дневных цыплят кормят тем же 25 пропионовой кислоты в контрольной рационом без антибиотика ИК-61.689 и жидкости рубца. Проводились длительне инфицируют коккидиа. Они испольные исследования процесса кормления зуются в качестве обычного контроля. in vivo, которые показали значимую Результаты обработки оценивают через корреляцию между возрастанием содерпять дней в случае E.acervulina и 30 жания пропионовой кислоты в жидкости шесть дней для всех других видов. рубца и улучшением показателей животных. Параметр, используемый для измерения антикоккидиальной активности, Жидкость рубца отбирают из фистулы представляет собой величины поражения коровы, которую кормят коммерческим от 0_до 4 для E.tenella (j.E.Lyuch, 35 рационом для откармливания и сеном. "A NEW Method for the Primary Eva- Жидкость рубца немедленно фильтруют luation of Anticoccidial Activity"); и 10 мл добавляет в 50-миллиметровую и от О до З для других видов по моконическую колбу, содержащую 400 мг дификации системы подсчета, разрабо40 стандартного субстрата (68 % зернотанной J.Jchuson u W.U.Reid (Antiвого крахмала + 17% целлюлозы + 15% coccidial Drugs - Sesion Scoring экстракта из соевых бобов), 10 мл Techuigues in Battery and Floor Pen буфера рН 6,8 и испытуемое соединение. Experiment in Chin). Колбы наполняют азотом, не содержаОтносительные величины получают 45 щим кислорода, в течение примерно делением величины поражения каждой 2 мин. и инкубируют во встряхиваемой испытуемой группы на величину пораводяной бане при 39 С в течение прижения у контрольной инфекционной мерно 16 ч. Все опыты повторяют три группы. раза. Антибиотик ИК-61.689 и его катионПосле инкубирования 5 мл образца ные соли обнаруживают высокую актив- 50 смешивают с 1 мл 25% метафосфорной ность против коккидиальных инфекций кислоты. Через 10 мин добавляют домашней птицы. При введении в корм 0,25 мл муравьиной кислоты и смесь цыплят в количествах 15 - 120 ч/млн центрифугируют при 1500 об/мин в те* ' эти соединения эффективны при конт55 чение 10 мин. Образцы затем анализы-1 роле -инфекций, вызываемых Eimeria руют с помощью газожидкостной хромаtenella, E.acervalina, E.maxima, тографии по методике D.W.Kellog. E.brunetti u E.uecatrix. Высоту пиков для уксусной, пропио-j Рацион животных обычно непосредстновой и масляной кислот определяют венно определяется при их кормлении. 8 151071 8 для образцов из необработанной и обэтого корма. Носитель облегчает равработанной инкубационных колб. номерное распределение активного маПри исследовании по данной метотериала в корме, с которым смешивадике in vitro антибиотик ИК-61.689 ется премикс. Это обстоятельство явпри содержании 20 микрограмм на милляется важным, так как требуется тольлиметр дает увеличение на примерно ко небольшая концентрация данного 80% производства пропионовой кислоты сильнодействующего агента. Существен1 по сравнению с полученным в контрольно, чтобы соединение было полностью ном растворе без добавки антибиотика JQ смешано в премиксе и затем с кормом. ИК-61.689. Соединения, которые стимуАгент может быть диспергирован или лируют производстве ПКР Спропионовой растворен в подходящем масляном нокислоты рубца), улучшают утилизацию сителе, таком как соевое масло, кукупищи у таких жвачных, как крупный рузное масло, хлопковое масло и т.п., рогатый скот и овцы, а также оказы^ или в летучем органическом растворивают аналогичное действие на монотеле и затем смешан с носителем. Предгастрических животных, таких как почтительно, чтобы пропорция активносвиньи. Антибиотик ИК-61,689 может го материала в концентрате могла измебыть введен в животное путем включе-i няться в широком интервале, так как ния в корм как в форме свободной кис- 2Q количество агента в готовом корме молоты, так и'в форме соли, например жет корректироваться путем смешивания натриевой или калиевой соли, или соответствующей пропорции премикса с их смеси. Альтернативно неочищенный кормом для получения нужной концентили высушенный ферментационный бульон, рации терапевтического агента. содержащий антибиотик ИК-61.689, мо- 25 Высокоэффективные концентраты может быть введен в корм в нужной конгут быть получены производителем корцентрации. Антибиотик ИК-61.689 момов на белковых носителях, таких, как жет также применяться в нужной дозе соевое масло и другие пищевые продукпри использовании соответствующего ты для изготовления концентрированустройства длительной выдачи препа30 ных добавок, которые пригодны для нерата, предназначенного для отмеривапосредственного кормления птицы. Б ния постоянных доз лекарств. таких случаях птица получает обычный рацион. Альтернативно такие конПри использовании для лечения кокцентрированные добавки можно вносить кидиоза домашней птицы предлагаемый прямо в корм птипы для получения сбаантибиотик применяют орально в под- 35 лансированного готового питания, соходящем носителе. Наиболее удобно держащего терапевтически эффективное просто вводить препарат в питьевую количество соединения. воду или в корм птицы, так что тераСмеси получают по стандартным мепевтическая доза агента проглатыватодикам, например, в двухкорпусном ется с ежедневной дозой воды или 40 смесителе, чтобы достичь гомогенности* корма. Агент можно непосредственно отмерять в питьевую воду, предпочтиПрименяемые дозы предлагаемрго антельно в форме жидкого водорастворитибиотика могут изменяться в зависимого концентрата (такого, как водный мости от различных обстоятельств. раствор водорастворимой соли), или 45 Постоянное применение в низкой дозе прямо добавлять в корм в чистом виде в течение периода роста, т.е. в перили в форме премикса или концентрата. вые 6-12 недель жизни цыплят, являетПремикс или концентрат терапевтичеся эффективной профилактической мерой. ского агента на носителе обычно исПри лечении установленной инфекции пользуют для введения агента в корм, могут быть необходимы более высокие Подходящими носителями могут быть дозы. Применяемая в корме лоза обычжидкие или твердые, как требуется, но находится в интервале 15-120 ч./млн. такие как вода, различные пищевые про При применении в питьевой воле дозы дукты, нопример соевое масло, льнядолжны быть такими, чтобы обеспечить ное масло, кукурузные початки и минету же" ежедневную дозу приема, т.е. ральные смеси, какие обычно исполь15-120 ч./млн, с учетом коэффициента, зуются в кормах для птицы. В особенравного отношению среднего ежедневности эффективным носителем является ,ного потребления пищи к среднему ежесам корм птицы, т.е. мапая порция дневному потреблению воды. 7 9 Ю 1510718 UK 61.689 представляет равную эффективность с ИК-58.852 как антикокидиальный агент широкого спектра. Однако он значительно менее токсичен. В табл.2 представлены данные о токсичности каждого компонента» Эти величины L D y 0 показывают, что ИК-61.689 примерно в 10 раз менее г токсичный, чем ИК-58.852'и поэтому имеет примерно в 10 раз лучшее терапевтическое соотношение. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Способ получения полициклического эфирного антибиотика формулы I: сн3 • осн