Тест-засіб для ідентифікації компонентів екстемпоральних лікарських засобів на основі фільтрувального паперу, модифікованого хромогенним реагентом заліза (ііі) хлоридом

Реферат: Тест-засіб, призначений для ідентифікації екстемпоральних лікарських засобів (ЕЛЗ), які здатні утворювати комплекси з іонами заліза (III), включає в основу фільтрувальний папір, модифікований хромогенним реагентом (розчином заліза (III) хлоридом). Як хромогенний реагент містить розчин заліза (III) хлориду у водному розчиннику в концентрації 0,389 моль/л, відомий як реактив заліза (III) хлориду розчин Р1 за Державною фармакопеєю України (ДФУ). UA 96243 U (12) UA 96243 U UA 96243 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до фармації, зокрема до способів хімічного аналізу, а саме до внутрішньоаптечного контролю якості екстемпоральних лікарських засобів ЕЛЗ. Тест-засоби є ефективними, простими та дешевими аналітичними інструментами, що обумовлює їх широке використання в екологічній, медичній [1] і, як наслідок, фармацевтичній галузях діяльності людини. На сьогоднішній день застосування тест-засобів для внутрішньоаптечного контролю якості лікарських засобів дозволяє економити час та реагенти, що витрачаються на проведення процедури контролю, не потребують використання складного обладнання та дозволяють з прийнятним рівнем достовірності ідентифікувати досліджувану речовину в зразку, що аналізується. Тест-методи для аналізу речовин органічної та неорганічної природи засновані на використанні "кольорових" хромогенних реакцій взаємодії іммобілізованих на сорбуючому носії (основі) хромогенних реактивів з досліджуваними зразками. Про наявність в зразку досліджуваного іону чи функціональної групи судять по появі, зникненню чи зміні забарвлення тест-засобу. Відомий тест-засіб для виявлення речовин-відновників [2] на основі фотографічних плівок, що містять хромогенний реагент - комплекс заліза (III) з 2,2'-дипирідилом або 1,10фенантроліном та регулятором рН-хлорною кислотою. Відомий тест-засіб для фотометричного та візуально-тестового виявлення первинних ароматичних амінів у фармацевтичних препаратах [3] на основі фотографічних плівок, що містять хромогенний реагент - ванілін та N-диметиламінобензальдегід і регулятор рН хлористоводневу кислоту. Основним недоліком даних тест-засобів є те, що для виготовлення їх в умовах аптечних закладів потрібно проводити попередню обробку фотографічних плівок. У випадку першого тест-засобу виникає необхідність у придбанні реагентів з 2,2'-дипирідилу та 1,10-фенантроліну, які не використовуються безпосередньо для проведення внутрішньоаптечного контролю ЕЛЗ. За прототип вибрано відомий тест-засіб для колориметричного виявлення та визначення відновників, зокрема кислоти аскорбінової в рідинах організму [4] на основі фільтрувального паперу, що містить хромогенний реагент - заліза (III) хлорид в комплексі з одною із хелатоутворюючих речовин: етилендіамінтетраоцтовою кислотою, транс-1,2-циклогександіамін -N, N,N',N'-тетраоцтовою кислотою, діетилентриамін-N, N,N',N", N'''-пентаоцтовою кислотою, триетилентетрамін-N, N,N',N'",N""-гексаоцтовою кислотою та солями лужних металів; з додаванням індикатору з групи: о-фенантроліну, 4,7-дифеніл-1,10-фенантроліну, 2,2'дипіридину, купроїну, неокупроїну або 2,2',2"-терпіридину; буферного розчину; барвника та дисперсійної речовини: полівінілпірролідону, гідроксипропілцелюлози або поліетиленгліколю. Істотним недоліком для виготовлення та застосування даних тест-засобів в умовах аптечних закладів є необхідність, за методикою виготовлення, використовувати нанесення реагентів в два шари, з обов'язковим використанням вакууму. Також варто зазначити, що приготування даного тест-засобу вимагає застосування великої кількості реагентів, що не використовуються в повсякденній практиці провізора-аналітика, як наслідок - необхідність їх окремого придбання для виготовлення даних тест-смужок. Основною відмінністю тест-засобу, що заявляється, від уже відомих є використання як хромогенного реагенту стандартних розчинів заліза (III) хлориду [5], приготованих у відповідності до вимог ДФУ, без додавання хелатоутворюючих комплексів та індикаторів. В основу корисної моделі поставлена задача розробки та виготовлення тест-засобу для ідентифікації ЕЛЗ в умовах аптечних закладів на основі фільтрувального паперу, що має достатню точність та призначений для аналізу препаратів, що містять в своєму складі фенольний гідроксил, імідну групу або здатні утворювати комплекси із іоном заліза (III). Поставлена задача вирішується тим, що тест-засоби на основі фільтрувального паперу, модифікованого хромогенним реагентом, відповідно до корисної моделі, як хромогенний реагент містять розчин заліза (III) хлориду з концентраціями 0,074 моль/л в спиртовому розчиннику, відомого як реактив заліза (III) хлориду розчин Р3 за Державною фармакопеєю України (ДФУ) або розчин заліза (III) хлориду з концентраціями 0,37 моль/л у водному розчиннику, відомий як реактив заліза (III) хлориду розчин Р1 за ДФУ, для кожної із концентрації іммобілізація проводилась двома способами: вертикальне закріплення, з використанням хроматографічної камери та горизонтальне закріплення, з використанням чашки Петрі. Способи отримання тест-засобів, які були використані в корисній моделі, що заявляється, відрізняються простотою, не потребують використання складного обладнання, дорогих реагентів та великих затрат часу. Розчин заліза (III) хлориду - широко розповсюджений в аптечній практиці реактив, що використовується для аналізу лікарських препаратів, які здатні утворювати з реагентом 1 UA 96243 U 5 забарвлені речовини та містять в своєму складі фенольний гідроксил, заміщену імідну групу або 3+ здатні утворювати комплекси з Fe . В таблиці 1 наведено результати дослідження можливості виявлення ЕЛЗ за допомогою різних модифікацій тест-засобу, що заявляється. Для кожного конкретного препарату, дослідження проводили в діапазоні застосування 70-130 % відносно мінімальної концентрації, що використовується в ЕЛЗ за визначеною методикою [6], отримані результати характеризуються 100 % достовірністю відтворення результатів. Таблиця 1 Взаємодія тест-засобу, що заявляється з досліджуваними зразками № Діапазон Досліджуваний застосування, зразок *10-2 моль/л Аналітичний ефект Приклад 1 Приклад 2 Приклад 3 Приклад 4 насичене синьонасичене синьосиньо-фіолетове синьо-фіолетове фіолетове фіолетове 1 Амідопірин 1,54-2,86 забарвлення, забарвлення, забарвлення, яке забарвлення, яке швидко зникає швидко зникає зникає з часом зникає з часом насичене червоне червоне насичене червоне червоне 2 Антипірин 2,8-5,2 забарвлення забарвлення забарвлення забарвлення синє забарвлення, синє забарвлення, блакитне блакитне що з часом що з часом забарвлення, забарвлення, переходить в переходить в 3 Метамізол натрію 2,1-3,9 переходить у переходить у червоно-буре і червоно-буре і фіолетове, яке фіолетове, яке зникає при зникає при зникає з часом зникає з часом висушуванні висушуванні слабке рожеве рожево-жовте слабке рожеве рожево-жовте 4 Бензоат натрію 4,9-9,1 забарвлення забарвлення забарвлення забарвлення Саліцилова насичене синє насичене синє 5 10,5-18,85 синє забарвлення синє забарвлення кислота забарвлення забарвлення синьо-фіолетове червоно-фіолетове синьо-фіолетове фіолетове 6 Саліцилат натрію 8,75-16,25 забарвлення забарвлення забарвлення забарвлення насичене фіолетове фіолетове насичене фіолетове фіолетове забарвлення, яке забарвлення, яке забарвлення, яке забарвлення, яке зникає з часом, зникає з часом*, зникає з часом, зникає з часом*, 7 Фенілсапіцилат 13,1-24,3 переходить в переходить в переходить в переходить в червоне при червоне при червоне при червоне при додавання 1 к. р-ну додавання 1 к. р-ну додавання 1 к. р-ну додавання 1 к. р-ну NH4OH NH4OH NH4ОН NH4OH Піридоксину рожеве-червоне насичене рожеве рожеве-червоне насичене рожеве 8 0,7-1,3 гідрохлорид забарвлення забарвлення забарвлення забарвлення бірюзове слабке синє бірюзове слабке синє забарвлення, з забарвлення, забарвлення, з забарвлення, з 9 Резорцин 6,3-11,7 часом зникає, переходить в часом зникає, часом зникає, переходить в помаранчеве переходить в переходить в помаранчеве після помаранчеве після помаранчеве після після додавання 1 додавання 1 к. pдодавання 1 к. p- додавання 1 к. р-ну к. p-HyNH4OH HyNH4OH HyNH4OH NH4OH слабке жовто-рожеве жовто-рожеве слабке жовто-рожеве жовто-рожеве Норсульфазол10 9,1-16,9 забарвлення, що забарвлення, що забарвлення, що забарвлення, що натрій буріє з часом буріє з часом буріє з часом буріє з часом Сульфацилслабке жовто-рожеве жовто-рожеве слабке жовто-рожеве жовто-рожеве 11 13,8-25,6 натрій забарвлення забарвлення забарвлення забарвлення * - подвійне нанесення досліджуваного зразка 10 В таблиці 2 подано дані про витрати часу на виробництво різних модифікацій тест-засобу, що заявляється. 2 UA 96243 U Таблиця 2 Затрати часу на приготування тест-засобу, що заявляється № Тест-засіб Підготовка, хв* Іммобілізація, хв Висушування, хв 1. 2. 3. 4. Приклад 1 Приклад 2 Приклад 3 Приклад 4 10 10 10 10 2 3 1,5 3 45 10 30 5 Кінцева обробка **, хв 2 2 2 2 Σ, хв 59 25 43,5 20 * - приготування реагенту та основи ** - розрізання прямокутника ФП на тест-смужки та упаковка 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель ілюструється наступними прикладами. Приклад 1. З фільтрувального паперу листового марки Ф (середньої фільтрації, для загально лабораторних робіт) вирізають прямокутники розміром 50*80 мм. Реагент заліза (III) хлорид розчин Р1 [5] вносять в чашку Петрі. Прямокутники фільтрувального паперу поміщають в чашку Петрі з попередньо приготованим розчином хромогенного реагенту для іммобілізації на 2 хвилини, після цього висушують в захищеному від світла місці до повного випаровування розчинника. Отриманий тест-засіб має рівномірне жовтогаряче забарвлення. Отримані прямокутники, після повного висихання розрізаються на тест-смужки розміром 5*50 мм і зберігають темній ємності, що щільно закривається. Приклад 2. Тест-засіб готують так, як у Прикладі 1. Однак замість реагенту заліза (III) хлорид розчин Р1 використовують реагент заліза (III) хлорид розчин Р3 [5]. Тест-засіб залишають в чашці Петрі на 3 хвилини. Отриманий тест-засіб має рівномірне лимонне забарвлення. Приклад 3. З фільтрувального паперу листового марки Ф (середньої фільтрації, для загально лабораторних робіт) вирізають прямокутники розміром 50*100 мм. Реагент заліза (III) хлорид розчин Р1 [5] вносять в хроматографічну камеру. Прямокутники фільтрувального паперу широкою стороною поміщають в хроматографічну камеру з попередньо приготованим розчином хромогенного реагенту для іммобілізації на 1,5 хвилини (реагент піднімається на 30 мм), після цього висушують в захищеному від світла місці до повного випаровування розчинника. Довжина покритої шаром реагенту частини тест-засобу має складати не більше 35 мм. Отриманий тестзасіб має жовте забарвлення. Отримані прямокутники, після повного висихання розрізаються на тест-смужки розміром 5*50 мм і зберігають темній ємності, що щільно закривається. Приклад 4. Тест-засіб готують так, як у Прикладі 3. Однак замість реагенту заліза (III) хлорид розчин P1 використовують реагент заліза (III) хлорид розчин Р3 [5]. Тест-засіб залишають в хроматографічній камері на 3 хвилини. Отриманий тест-засіб має лимонне забарвлення. Приклад 5. Виявлення лікарського препарату за допомогою тест-засобу, що заявляється реалізують на наступному прикладі. На відповідно приготовану тест-смужку за допомогою скляної палички наносять 1 краплю досліджуваного зразку 0,2 % водного розчину піридоксину гідрохлориду. З'являється рожеве забарвлення, інтенсивність якого перевіряють через 1-2 хвилини. Паралельно проводять холостий дослід-порівняння: на аналогічну тест-смужку за допомогою скляної палички наносять краплю води Р, через 1-2 хвилини не повинно бути видимих змін забарвлення тест-засобу. Як видно з таблиці 1 для проведення процедури внутрішньоаптечного контролю ЕЛЗ, які 3+ містять речовини із різними функціональними групами, що реагують з катіоном Fe придатні всі 4 модифікації тест-засобу, що заявляється. Найоптимальнішою з точки зору зручності проведення аналізу є тест-засіб описаний в Прикладі 4. Він має 15 мм смужку вільного від реагенту паперу, що мінімізує контакт реагенту з поверхнею шкіри аналітика, як наслідок піт та сторонні речовини з рук аналітика не потрапляють на тест-засіб та не заважають проведенню аналізу. Дані таблиці 2 свідчать, що використання під час приготування даної модифікації реагенту заліза (III) хлорид розчин Р3, що є спиртовим розчином значно скорочує час висихання тест-засобу, що в свою чергу, скорочує процес виробництва тест-засобу даної модифікації до 20 хвилин. 3 UA 96243 U 5 10 15 20 Таким чином застосування тест-засобів, що заявляються дозволяє зекономити час аналізу, мінімізує витрати реагентів та досліджуваних зразків, а також спрощує саму процедуру проведення внутрішньоаптечного контролю ЕЛЗ. Джерела інформації: 1. Золотов Ю.А. Химические тест-методы анализа / Золотов Ю.А., Иванов В.М., Амелин В.Г. - М.: Едиториал УРСС, 2002. - 304 с. 2. Логинова Л.П., Коновалова О.Ю. Метрологические характеристики обнаружения восстановителей с реагентами, иммобилизованными в желатиновой плёнке / Л.П. Логинова, О.Ю. Коновалова // Вісник Харківського національного університету. - Сер. химия. - 2007. - № 770, Вип. 15(38). - С. 90-98. 3. Коновалова О.Ю., Логинова Л.П. Особенности протекания индикаторной реакции на первичные ароматические амины в желатиновой пленке / О.Ю. Коновалова, Л.П. Логинова // Методы и объекты химического анализа. - 2008. - Т.3 - № 2. - С. 147-156. 4. Пат. US4303409 А Сполучені Штати Америки, US 06/140,675. Method, composition and test strip for colorimetric analysis of ascorbic acid / Yasunao Ogawa, Kaoru Ishitobi.; заявник та правонаступник Shionogi & Co., Ltd. - US 06/140,675; заявл. 15.04.1980; опубл. 01.12.1981. 5. Державна Фармакопея України / Державне підприємство "Науково-експертний фармакопейний центр". - 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001. - 556 с. Доповнення 1. - Харків: РІРЕГ. 2004. - 520 с. Доповнення 2. - Харків: РІРЕГ, 2008. - 608 с. 6. Євтіфєєва О.А. Стандартизація підходів до оцінки хімічних методів ідентифікації речовин, які входять до складу екстемпоральних лікарських препаратів / Євтіфєєва О.А. // Управління, економіка та забезпечення якості в фармації. - 2010. - № 1. - С. 19-24. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 30 35 40 1. Тест-засіб, призначений для ідентифікації екстемпоральних лікарських засобів (ЕЛЗ), які здатні утворювати комплекси з іонами заліза (III), що включає в основу фільтрувальний папір, модифікований хромогенним реагентом (розчином заліза (III) хлоридом), який відрізняється тим, що як хромогенний реагент містить розчин заліза (III) хлориду у водному розчиннику в концентрації 0,389 моль/л, відомий як реактив заліза (III) хлориду розчин Р1 за Державною фармакопеєю України (ДФУ). 2. Тест-засіб за п. 1, який відрізняється тим, що в якості хромогенного реагенту містить розчин заліза (III) хлориду у спиртовому розчиннику в концентрації 0,074 моль/л, відомий як реактив заліза (III) хлориду розчин Р3 за ДФУ. 3. Тест-засіб за п. 1 або п. 2, який відрізняється тим, що отриманий шляхом замочування фільтрувального паперу в розчині хромогенного реагенту в горизонтальному положенні в чашках Петрі. 4. Тест засіб за п. 1 або п. 2, який відрізняється тим, що отриманий шляхом занурення фільтрувального паперу в розчин хромогенного реагенту в хроматографічній камері у вертикальному положенні. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4