Біоактивний концентрат, спосіб його одержання і лікарські склади, які містять цей концентрат

1 Бюаісгивний концентрат, який відрізняється тим, що він містить 10% активної речовини у водному розчині, яка має 7-9% антипалуронідази і протизапальних мукополісахаридних полімерів та додатково 1-3% хондроітинсульфату, має величину рН у діапазоні 4-6, антипалуронідазну активність у діапазоні 450-750 МО/мл, має колір від жовтуватого до ясно-коричневого, і містить звичайні консерванти 2 Спосіб виготовлення бюактивного концентрату шляхом двофазної обробки протягом 24 годин органічної сировини 0,5%-ним розчином фенолу, вакуумною концентрацією об'єднаних екстрактів, депротеїнізацією 96%-ним етанолом, знежирення за допомогою органічного розчинника, наприклад, екстрагуючого розчинника, який відрізняється тим, що хрящі тваринного походження, сполучні тканини - бичачі та овечі трахеї, пупочний канатик, сухожилля молодих тварин, а також кишечники, сім'яники або морські організми піддають двофазній обробці кислим водним розчином, який містить 0,5% фенолу і має рН 2-4 у першій фазі у співвідношенні 1 3,5-4, а у другій фазі - при співвідношенні 1 1,5, причому у обох фазах екстрагування здійснюють протягом 24 годин, перемішуючи протягом ЗО хвилин кожні 3 години при температурі 04°С, після чого одержаний у результаті першої фази екстракт з'єднують з екстрактом, одержаним у другій фазі, і за допомогою розчину Са(ОН)2 регулюють їх рН до величини 4,5-5, а далі осаджують протягом 8 годин при температурі 0-4°С, після чого їх відфільтровують і одержаний розчин концентрують шляхом вакуумного випарювання при мак симальній внутрішній температурі 45°С до одержання співвідношення концентрації 71, зазначений розчин пропускають через аніонообмінну колонку з низькою концентрацією ІОНІВ, а далі його знежирюють за допомогою екстрагуючого розчинника у співвідношенні 1 4 за 6-10 циклів, доки залишок ЛІПІДІВ не буде перевищувати 1-5%, причому останній цикл знежирювання проводять з використанням n-гексану утому ж самому співвідношенні, далі одержаний водний розчин концентрують у вакуумі до досягнення об'єму, що дорівнює 70% об'єму первісного розчину, після фільтрації одержану надосадову рідину оброблюють з метою депротеїнізацм 96%-ним етиловим спиртом, доки не буде досягнуто 50%-ноі концентрації спирту, далі розчин залишають на 12 годин при температурі 0-5°С, після чого фільтрують і спиртовий розчин концентрують для видалення спирту до досягнення об'єму, що дорівнює 70% відносно розчину, призначеного для депротеїнізацм, білковий осад градієнтно оброблюють за допомогою сульфату амонію, та білкову фракцію з низькою молекулярною вагою з'єднують з водним розчином, із якого видалено спирт, шляхом послідовної обробки кінцевого розчину розчинами тринатрійфосфату, хлориду кальцію і їдкого натру видаляють домішки гістаміну до досягнення величини рН 8,5, далі фільтрують і одержаний у результаті розчин пропускають через катюнообмінну колонку з низькою концентрацією ІОНІВ, причому величину рН знову регулюють до значення, що дорівнює 4-6, після чого додають хондроітинсульфат до концентрації 1-3% 3 Спосіб за п 2, який відрізняється тим, що застосована сировина може бути у свіжому, замороженому або консервованому стані та перед використанням її нарізують 4 Спосіб за п 2, який відрізняється тим, що розчин пропускають через катюнообмінну колонку з низькою концентрацією ІОНІВ у потоці, що не пропускає більш, ніж 1/5 об'єму первісного розчину за одну годину, так щоб величина рН повернулась до діапазону 4-6 5 Лікарський склад, який відрізняється тим, що він містить бюактивний концентрат за п 1, зв'язаний з синергічними речовинами, вибраними з групи, яка складається з гепарину, аскорбінової кис О (О (О 46764 лоти, ацетилсаліцилату натрію або лізину, вітаміну більше 2мг метабісульфіту натрію і не більше 5 мг Е, бензилового спирту, пропіленгліколю, Тфенолу подібно струїсгурованої води і рослинних екстрак8 Лікарський склад, який відрізняється тим, що тів, та зі звичайними речовинами для кондицюнудля його кондицюнування як мазі, гелю або суповання його у формі внутрішньом'язових ІН'ЄКЦІЙНИХ зиторіїв, він містить на 100г 3-10г сухої активної розчинів, внутрішньосуглобових ІН'ЄКЦІЙНИХ розчиречовини, яка складається з 10%-ного розчину нів, мазі, гелю та супозиторіїв бюактивного концентрату за п 1, 0,3-0, г ацетилсаліцилату натрію або лізину, 0,4-0,8г аскорбінової 6 Лікарський склад, що містить антипалуронідазкислоти, краще 0,5г, 0,2-0,4г вітаміну Е, 0,2г гепаний бюактивний концентрат за п 1, фенол і метарину, 2-5г рослинного екстракту, емульгованого на бісульфіт натрію, який відрізняється тим, що для основі крему або гелю, що містить 40-75% Твнутрішньом'язового введення 1мл водного розподібно структурованої води, краще 65%, звичайні чину містить 0,1мл 10%-ного розчину бюактивного консерванти і ароматизатори концентрату за п 1, не більше 5мг фенолу і не більше 2мг метаб і сульфіту натрію, має рН 4-6 і 9 Склад за п 8, який відрізняється тим, що для антипалуронідазну активність, що дорівнює не його виготовлення можуть бути використані росменше 45 М О /мл лини Achillea millefohum, Calendula officmahs, Matncana chamomilla, Plantago sp, Hypencum 7 Лікарський склад, який відрізняється тим, що perforatum для внутрішньосуглобового введення він містить на мл водного розчину 15мг/мл сухої активної 10 Склад за п 8, який відрізняється тим, що Тречовини, яка складається з 10%-ного розчину подібно структурована вода становить собою вобюактивного концентрату за п 1, Юмг ацетилсаліду, яка має підвищений енергетичний потенціал і цилату натрію або лізину, 2мг аскорбінової кисловисоку трансмембранну проникну здібність, і, крім ти, 0,2мг гепарину, 2 мг бензилового спирту, 40 мг того, має чітко виражену протизапальну і протиінпропіленгліколю, має рН 4-6, антипалоронідазну фекційну дію активність, що дорівнює не менше 65 М О /мл, не Цей винахід належить до бюактивного концентрату, способу його одержання та лікарських складів для лікування дегенеративних хвороб, ревматизму, артропатій і інших пов'язаних з ними хвороб Комплекс антипалуронідазних речовин виділяли із природних продуцентів, наприклад, дрібної риби, які містять амінокислоти, повні глюциди, глікоген, хондроітинсульфат, фенол, ГІПОТОНІЧНІ речовини з антипалуронідазною активністю, що має мінімальне значення 50 імунізуючих одиниць (І О) на мілілітр Спосіб, за допомогою якого готується зазначений комплекс, включає двофазну обробку морської риби 0,5%-ним розчином фенолу протягом 24 годин, одержані екстракти піддають вакуумній концентрації при максимальній температурі 40°С, далі їх оброблюють рівним об'ємом етанолу з 96%-ною концентрацією, осад видаляють, і одержану надосадову рідину оброблюють целітом, фільтрують, піддають вакуумній концентрації при максимальній температурі 40°С, далі екстракт оброблюють розчинником та після видалення розчинника зазначену надосадову рідину оброблюють фенолом до величини, яка дорівнює 4,5 - 5,5% Також одержували лікарські склади, що містять антипалуронідазний бюактивний екстракт, фенол та метабісульфіт натрію Ці ЛІКИ спираються на комплекс речовин, природно активних елементів, що зв'зані у пропорціях, близьких до нормальних, функціональних елементів, що одержані за допомогою екстрагування з тканин тварин або бюсинтезовані в культурах клітин та мікроорганізмів, причому роль цього комплексу полягає у заміні функції або навіть у відшкодуванні природно існуючого комплексу у спо лучних тканинах, які були розбалансовані під впливом різних причин та зумовили хворобу Процеси екстрагування та кондицюнування установлювали таким чином, щоб втрати та ослаблення активних речовин були б по можливості низькими, та, коли співвідношення компонентів сировини відрізняються від співвідношення, яке потрібне для лікування людини, воно може бути компенсоване за допомогою належного складання суміші екстрактів або завдяки схемі лікування На цей час відомо, що механізми, які викликають хвороби, обумовлені порушенням рівноваги при біосинтезі та розпадом нормальних компонентів, від яких залежить належний рух суглобів Клітини В тканинах живого тіла є вбудованими в основну речовину і розвиваються усередині неї Ця основна речовина - загальний склад живих структур - поширює кожен проміжок та ізолює кожну стабільну клітину від м сусідніх клітин Варіації складу позаклітинного середовища мають значний вплив на поведінку клітини, а в свою чергу клітини мають міцний засіб модифікування їх безпосереднього навколишнього середовища Внутрішньоклітинна речовина становить собою комплексний гель, що містить воду, електроліти, метаболіти, розчинені гази, ферменти, мікроелементи, жири, білки, вуглеводи Зазначена речовина має високу в'язкість завдяки численності певних довголанцюгових кислотних мукополісахаридних полімерів, особливо глікозамшогліканів і пов'язаних з ними протеогліканів, посилених на мікроскопичному рівні трьохрозмірною сіткою колагенових фібрил (Cameron, E and Pauling, L - The Encyclopaedia of Ignorance, p 377-385, Pergamon Press, Oxford, 1982) Роль синовіальної рідини, яка знаходиться в 46764 усіх суглобах, полягає не тільки в змазуванні рухливих структур, але й в розсіюванні енергії Зазначена функція виконується за допомогою складу синовіальної рідини, де глікозаміноглікани (ГАК) і протеоглікани (ПГ), наприклад, палуронова кислота і хондроітинсульфат, що зумовлюють високу в'язкість завдяки своїй спіральній структурі, поводяться в'язкоподібно при низьких частотах руху та еластичноподібно при високих частотах руху (Ogston, AG and Stamer, J E (1953) - J Physiol, 199, 124) Еластичність досягається завдяки присутності висококонцентрованої палуронової кислоти при рН 2,5, яка формує в'язково-еластичну пасту у сольовому розчині (Balasz, E А , Chemistry and Molecular Biology of the Intercelluar Matrix, vol II and III, Academic Press, New-York, 1970) У різному ВІЦІ синовіальна рідина поводиться подібним чином, якщо це стосується в'язкості, але поглинання енергії відрізняється при високих частотах руху, причому синовіальна рідина у молодих людей поглинає за рахунок еластичного акумулювання 77% енергії, у той час, як у старих зазначена рідина вбирає тільки 52% Синовіальна рідина у деформованих суглобах (остеоартроз) є в'зкою, але не еластичною Густина зазначеної синовіальної рідини у сім разів нижче, ніж густина у здорової людини похилого віку Концентрація палуронової кислоти у зазначених рідинах є низькою, що зумовлює низькі індекси в'язкості, а концентрація білка є високою Негативний вплив зміни концентрації може зменшити у деяких випадках індекс в'язкості до ЗО разів Крім того, у суглобах, сухожиллях, склоподібному ТІЛІ ока - область рідини (синовіальна рідина, склоподібна рідина) прилягає до твердої матриці (суглобовий хрящ, сухожилля, фасція, склоподібне тіло) В'язко-еластична макромолекулярна сполука палуронова кислота - у рідкої матриці проходить крізь поверхню твердої матриці Реологічно головна відміна між зазначеними двома матрицями полягає в присутності колагенових фібрил у твердої матриці та їх відсутності у рідкої матриці Поверхневий шар, що має товщину 1-2мкм, містить палуронову кислоту і білки Зазначений шар може бути видаленим або знищеним за допомогою дії папуронідази, яка знаходиться в надлишку у внутрішньоклітинній матриці Прошарок з товщиною 10-15мкм містить типові колагенові фібрили, і внутрішньофібрилярний простір заповнюється приблизно однаковою КІЛЬКІСЬтю палуронової кислоти і хондроітинсульфата На основі відомих у цій галузі даних, що стосуються винаходу (Cameron, E and Pauling, L - The Encyclopaedia of Ignorance, p 377 - 385, Pergamon Press, Oxford, 1982 and Balasz, EA and Sweeney, D В - New and Controversial Aspects of Retinal Detachement, p 371, Ed, McPerson, Harpen and Row, New-York) цей винахід спрямований на одержання комплексу інгредієнтів, у яких мукосахаридні полімери і протеоглікани приймають участь у вигляді палуронової кислоти і хондроітинсульфату, а також їх фрагменти, гепарин і аскорбінова кислота, причому вони усі становлять собою речо вини, які сертифіковані недавніми дослідженнями і які сприяють відновленню нормальних функцій сполучних тканин у випадку дегенеративних хвороб Зазначені хвороби, змінюючи основну речовину, де клітини є вбудованими, погіршують спорідненість, яка існує між нею і зазначеними клітинами Умова для "нормального" балансу полягає для кожної частини - основної речовини і клітини - в зберіганні и власної функції, оскільки будь-яка зміна, наприклад, зменшення в'язкості у основної речовини шляхом деполімеризації палуронової кислоти за рахунок дії палуронідази, що виділяється клітинами у надлишку, приводить до виникнення хвороби Іншою альтернативою відновлення балансу є асоціація антиферменту, що має назву антипалуронідази (палуронідаза, є, зрештою, ферментною групою, яка має такі самі функції, що і сполучні структури), яка припиняє або обмежує деполімеризацію палуронової кислоти нарівні з хондроітинсульфатом, гепарином та аскорбіновою кислотою Вже ВІДОМІ деякі спроби одержання ЛІКІВ на основі антипалуронідази, що екстрагується із джерел, у яких вона міститься, наприклад, бичача трахея, бичачі і овечі сім'яники, пупковий канатик, дрібна морська риба та ІНШІ Хоч зазначені спроби мали важливе значення на той час (Патент №RO/82273-1982 і Технічні звіти, що зроблені Інститутом ХІМІЧНИХ та Фармацевтичних досліджень, - Бухарест, № 84740/1977 і № 5160/1979), все ж вони становили собою елементарну альтернативу, яка вирішувала лише частково проблему розробки способу одержання і складу виготовлених ЛІКІВ ЗГІДНО З ЦИМ винаходом бюактивний концентрат становить собою активну речовину - 10%-ний водний розчин, який містить 7-9% антипалуронідази і протизапальних мукополісахаридних полімерів і, крім того, до 1-3% відновленого і антипалуронідазного хондроітинсульфату, рН якого дорівнює 46, а антигіалуронідазна активність складає 450-750 і О/мл, причому колір розчину може бути від жовтуватого до яснокоричневого, у люфілізованому стані зазначний водний розчин містить принаймні 93% активної речовини, що містить 65-84% мукополісахаридних полімерів і 9-28% хондроітинсульфату, має колір від жовтуватого до яснокоричневого, крім того, цей розчин містить звичайні консерванти Спосіб виготовлення бюактивного концентрату включає двофазну обробку хрящевих сполучних тканин тваринного походження, наприклад, бичачої і овечої трахеї, пупкового канатика, сухожилля молодих тварин, кишечників, СІМ'ЯННИКІВ, або морських організмів кислим водним розчином, який містить 0,5% фенолу, має рН 2-4, у першій фазі в співвідошенні 1 3,5-4, а в другій фазі - в співвідношенні 1 1,5, у обох фазах період екстрагування дорівнює 24 години при перемішуванні кожні 3 години протягом ЗО хвилин при температурі в діапазоні 0-4°С, далі одержаний у першій фазі екстракт поєднують з екстрактом, одержаним у другій фазі, і за допомогою розчину Са(ОН)г регулюють суміш до рН 4,5-5 при температурі 0-4°С протягом 8 годин, далі фільтрують і одержаний розчин концентрують за допомогою вакуумного випарювання при максимальній температурі 45°С, 46764 доки не досягають співвідношення концентрації, що дорівнює 7 1, після чого розчин пропускають через аніонообмінну колонку з низькою концентрацією ІОНІВ, а далі його знежирюють екстрагуючим розчинником у співвідношенні 1 4 протягом 610 циклів, доки КІЛЬКІСТЬ залишкових ЛІПІДІВ не буде перевищувати 1-5% Останній цикл знежирення виконують за допомогою п-гексану при такому самому співвідношенні, потім одержаний у результаті цього водний розчин піддають вакуумній концентрації до досягнення об'єму, який дорівнює 70% від первісного розчину, після фільтрації одержану надосадову рідину з метою депротешозування обробляють 96%-ним етанолом, доки не досягають 50%-ноі концентрації етанолу, далі лишають у холодному МІСЦІ при температурі 0-5°С на період 12 годин, після чого фільтрують і концентрують етаноловий розчин для відділення алкоголю, доки не буде досягнуто об'єму 70% у порівнянні з водним розчином, який піддавали депротешозуванню, білковий осад градієнтно оброблюють сульфатом амонію, і білкову фракцію з низькою молекулярною вагою об'єднують з водним розчином, із якого видаляли алкогольні і пстамшові домішки шляхом послідовної обробки кінцевого розчину тринатрійфосфатом до досягнення рН 8,5, далі фільтрують і одержаний розчин пропускають через катюнообмінну колонку з низькою концентрацією ІОНІВ, величину рН повертають до рівня 4-6, а далі додають хондроітинсульфат до одержання концентрації, що дорівнює 1-3% Сировина може бути у свіжому, замороженому або консервованому стані Проходження розчину через слабі катіони здійснюють у потоці, який за одну годину пропускає не більше 1/5 частини первісного об'єму розчину Лікарські склади містять бюактивний концентрат у вигляді розчину або у люфілізованому стані, зв'язаний з синергічними речовинами, такими як гепарин, ацетилсапіцилат натрію або лізину, аскорбінова кислота, вітамін Е, Т-подібно структурована вода, бензиловий спирт, пропіленгліколь, екстракти рослин (Achillea, Calendula, Matncana, Plantago, Hypercum), і звичайні наповнювачі, які виготовлені у формі внутрішньом'язового ІН'ЄКЦІЙНОГО розчину, внутрішньосуглобового ІН'ЄКЦІЙНОГО розчину, мазі, гелю і супозиторіїв При внутрішньом'язовому введенні зазначений склад містить в 1мл водного розчину 0,1мл 10%-ного розчину бюактивного концентрату або 11мг люфілізованого бюактивного концентрату, не більше 5мг фенолу і 2мг метабісульфіту натрію, причому його рН 4-6, а антипапуронідазна активність становить мінімально 45 і О/мл При внутрішньосуглобовому введенні зазначений склад містить в 1мл водного розчину 15мг/мл сухої активної речовини, що містить 10%-ний розчин бюактивного концентрату або 16,5мг люфілізованого бюактивного концентрату, Юмг ацетилсаліцилату натрію або лізшу, 2мг аскорбінової кислоти, 0,2мг гепарину, 20мг бензилового спирту, 40мг пропіленгліколю причому його рН 4-6, а антипалуронідазна активність становить мінімально 65 І О/мл і доза що вводиться, дорівнює 2мл, можливо також застосування інших типів консервантів, наприклад, 2мг метабісульфату натрію, 5мг фенолу, за умо 8 вою, що властвості активних речовин або якість кінцевого продукту не треба змінювати При умовах використання зазначеного складу у формі мазі, гелю або супозиторіїв цей склад включає на 100г 3-10г сухої речовини,що містить 10%-ний розчин бюактивного концентрату або 4-12г ліпофілізованого бюактивного концентрату, 0,3-0,5г ацетилсаліцилату натрію або лізину, 0,2-0,4г вітаміну Е, 0,4-0,8г аскорбінової кислоти, краще 0,5г, 0,2г гепаршу,2,5г рослинного екстракту, емульгованого у кремову або гельову основу.яка містить 4075г"І"-подібно структурованої води, краще 65г, звичайні консерванти і ароматизатори Рослинами, які використовують для цієї ЦІЛІ, можуть бути Achillea millefohum, Calendula Officmahs, matncana Chamomilla, Plantago sp, Hypencum Perforatum Т-подібно структурована вода становить собою воду, яка має підвищений енергетичний потенціал, високу трансмембранну проникну здатність і чітко виражений протизапальний та протиінфекційний ефект(Патент RO № 109835 В 1/1995, автори Manzatu loan I lomta- Manzatu Vasile) Розчин, запропонований цим винаходом, дозволяє, ліквідувати деякі недоліки, які виявлено у цитованих роботах, оскільки він є ключовим елементом для досягнення високоефективної екстрагування антиполуронідази нарівні з хондроітинсульфатом, у співвідношенні, яке аналогічне існуючому у основній речовині, отже і у суглобах також Якщо сировині, яку використовують при екстрагуванні, бракує необхідної пропорції хндроітинсульфату, в кінцевий продукт додають цей комплекс, що одержують із іншої сировини шляхом інтенсивної утилізації Таким чином, одержують такі ліки ІН"ЄКЦІЙНИЙ розчин сам по собі або який містить люфілізований порошок для внутрішньом"язового введення, ІН"ЄКЦІЙНИЙ розчин сам по собі або який містить ліофілізовании порошок для внутрішньосуглобового введення, мазь і гель для зовнішнього локального використання і супозиторії для анального введення Ці ЛІКИ застосовують згідно зі схемою лікування,яка дозволяє однржувати деякі синергічні ефекти, які зумовлюють підвищення дії кожного компоненту окремо Завдяки своїй дії бюактивний концентрат захищає від дезорганізації нормально утвореної макромолекулярної структури і стимулює процеси тканинного та навколосуглобного реструктурування при запальних хворобах на штерстиціальному та навколосуглобному рівні, а також на рівні суглобового хряща, позитивно впливає на динаміку ІОНІВ кальцію у протизапальних, регенеративних, бюстимулювальних, дермо- і тканинновідновлнавальних ефектах й стимулює метаболізм видужуючих пацієнтів Усі П'ЯТЬ лікарських складів спрямовані проти причини хвороби за рахунок відновлювання клітинних і внутрішньоклітинних механізмів, і у той же час зупиняють збільшення КІЛЬКОСТІ гіалуронідази і починають процес відновлення тканин Зазначені ліки легко приймати і вони не мають побічних ефектів Спосіб їх одержання може бути використаним 46764 у промисловому масштабі з низькими витратами енергії та з регенерацією застосованих речовин Запропонований процес екстракції окрім того факту, що він є високоефективним, у першій фазі при рН 2-4 виключає багато виявлених недоліків, оскільки у цей процес включені селективні очищувальні фази, такі як видалення гістаміну, що є необхідною операцією, оскільки деякі групи попередніх продуктів дали неадекватні результати у пстамшовій пробі, а це потребує їх видалення через їх гіпотензивну дію Крім того, для зменшення високого іонного навантаження було включено деіонізацію за допомогою іонообмінної колонки після повторних операцій концентрування В кінцевому варіанті найбільш важливим процесом, введеним у потік екстрагування, є одержання паралельного потоку екстрагування для регенерації ВІДХОДІВ, таким чином забезпечуючи більш високий вміст амінокислот і хондроітинсульфату, що не здійснювалось у раніш наведених роботах Зрештою, додаток гепарину і аскорбінової кислоти дає можливість, крім того, одержати ІН'ЄКЦІЙНИЙ розчин, потрібний для внутріщньосуглобового використання, а також ВІДПОВІДНІ мазь, гель і супозиторії Нижче наводяться чотири приклади здійснення винаходу Приклад 1 Для одержання бюактивного концентрату сировина, яку піддавали процесу екстрагування, містить як хрящі тваринного походження, сполучні тканини - бичачі та овечі трахеї, пупочний канатик, сухожилля молодих тварин, кишечники, сем'янники, так і дрібну морську рибу Сировина, з якої починається процес, становить собою дрібну морську рибу (анчоус) у КІЛЬКОСТІ 20кг у свіжому, замороженому або законсервованому та знесолюваному стані, яку після розморожування або знесолювання нарізають на шматки розміром 2-6мм та екстрагують при температурі 3-5°С за допомогою 75 літрів водного розчину, який містить 0,5% фенолу і має рН 2-4 Величину, рН регулюють, застосовуючи нормальний розчин НСІ, у феноловому розчині перед додаванням нарізаної сировини Перше екстрагування протягом 24 годин виконують у придатних скляних, або емальованих литих залізних баках, періодично перемішуючи сировину при 90-120об /хв протягом ЗО хвилин кожні З години Одержаний розчин сепарують шляхом центрифуговання з застосуванням, як фільтруючого матеріалу, тканини, що має більш ніж 100стібків/см , а друге екстрагування за допомогою ЗО літрів 0,5%-ного фенолового розчину при рН 2-4, що регулюється аналогічно тому, як описано вище, виконують протягом 24 годин, також роблячи періодичне перемішування Перший та другий екстракти з'єднюють і фільтрують, використовуючи креповий папір (промисловий фільтр), причому морська паста становить собою відходи процесу Екстрагований і відфільтрований таким чином розчин регулюють до величини рН 5 за допомогою розчину Са(ОН)2, а далі осаджують протягом 8 годин при температурі 0-4°С 10 Фільтрування повторюють за допомогою промислового фільтра для видалення осаду і обов'язково надлишку ІОНІВ хлору Фільтрат, що має об'єм приблизно 95 літрів, концентрують шляхом, вакуумного випарювання при внутрішній максимальній температурі 45°С Співвідношення концентрації дорівнює 7 1, і, таким чином одержують 13,5 літрів концентрату суспензії коричнево-жовтого кольору Після концентрування величину рН регулюють до значення, що повинно знаходитися у діапазоні 4-6, і деякі іони видаляють шляхом пропущення фільтрату крізь аніонообмінну колонку з низькою концентрацією ІОНІВ Розчин пропускають через іонообмінну колонку з швидкістю приблизно 2л/г, для того, щоб після виходу з колонки він мав рН 4-6 Цей одержаний розчин знежирюють екстрагуючим розчинником, використовуючи повторні цикли і застосовуючи для кожного пропуску Зл розчинника при тривалості процесів перемішування і спокою 2 години Зазначений процес повторюють 6-10 разів, а ефективність контролюють так, щоб по закінченні процесу залишок ЛІПІДІВ не перевершував 1-5% Екстракт ЛІПІДІВ у екстрагуючому розчиннику сепарують шляхом осадження у придатних контейнерах, а далі його дистилюють з метою регенерації розчинника у співвідношенні 70-75% Знежирення також можна виконувати за допомогою дихлоретану, трихлоретилену або n-гексану Знежирення в останьому циклі найкраще виконувати n-гексаном, використовуючи приблизно Зкг цього розчинника Знежирений водний розчин концентрують у вакуумі до приблизно 9л, щоб видалити сліди розчинника Надосадову рідину фільтрують за допомогою промислового паперового фільтра для видалення осаду, який формується у процесі концентрації з подальшою обробкою етиловим спиртом для депротеїнізацм У відфільтрований надосадовий розчин додають 96%-ний етиловий спирт, який вводять тонким струменем при перемішуванні, доки концентрація спирту не досягне 50% Далі його залишають у холодному МІСЦІ при температурі 0-5°С протягом 12 годин Формований осад відфільтровують при центрифугованні (3000об/хв) через тканину, яка має мінімально 100 стібків/см2 Осад, який знаходять на фільтрі центрифуги, промивають, використовуючи приблизно Злітри 50%-ного спиртового розчину Одержані таким чином спиртові розчини з'єднують та піддають вакуумній концентрації для регенерації спирту У результаті одержують приблизно 7л водного розчину, що містить антипалуронідазу Білковий осад, одержаний у фазі знежирення, фракціонують за допомогою сульфату амонію і одержані в результаті першої фази депротешозування низькомолекулярні білкові фракції з'єднують з концентрованим розчином, одержаним у результаті першої фази депротеїнізацм Зазначений розчин очищають з метою видалення домішок гістаміну, оброблюють 350г тринатрійфосфату, 200г хлориду кальцію і приблизно 300мл 20%-ного роз 11 46764 12 чину їдкого натру Тринатрійфосфат і хлорид нтрованого розчину або люфілізованого порошку кальцію додають у формі 30%-ного водного розчиапірогенною водою, яка містить 20мг/мл бензилону Розчин їдкого натру додають з метою регулювого спирту і 40мг/мл пропіленгліколю (Rote Liste вання величини рН до 8,5 і залишають його на 24 1993, Publishing House Cantor години при температурі 0-5°С, далі фільтрують Aulendort/Wurttemberg, Germany) Як активні синецентрифугуванням через тканину із стібками, яка ргічні речовини додають 10мг/мл ацетилсапіцила2 має 100 стібків/см , та розчин зберігають Приблиту натрію або лізину, 2мг/мл аскорбінової кислоти і зно 9л одержаного таким чином розчину пропус0,2мг/мл гепарину кають через катюнообмінну колонку з низькою Коефіцієнт розбавлення концентрованого концентрацією ІОНІВ, де він регенерується за дорозчину або люфілізованого порошку вибирають помогою 0,5%-ного розчину їдкого натру Перед таким, щоб ІН'ЄКЦІЙНИЙ розчин мав концентрацію пропущенням розчину іонообмінну колонку оброб1,5% активної речовини і антипалуронідазну актилюють 0,5%-ною фенолятною водою Процес повність мінімально 65І О /мл вторюють, доки не буде досягнутий припустимий Зазначений розчин, який необхідно упакувати рівень тесту на гістамін у флакони, по-перше для прояснення фільтрують крізь фільтри, які мають пори з розміром 0,45мк, а Одержаний розчин відфільтровують Додають далі з метою стерилізації - крізь фільтри з порами, хондроітинсульфат, якщо необхідно досягнути що дорівняють 0,22мк, після чого його асептично концентрацію, яка дорівнює 1-3% Одержують пакують у коричневі флакони об'ємом 2мл приблизно 9л концентрованого розчину приблизно 10%-ноі активної речовини, яка має рН 4-6 Ці флакони містять 15мг/мл активної речовини, яка складається з 10-13мг/мл антипалуронідаКонцентрований розчин аналізують і визначази і протизапальних мукополісахаридних полімеють суху речовину і палуронідазну активність рів, до 2-5мг/мл відновлюваного З цього концентрованого розчину або люфіліхондроітинсульфату, 2мг/мл аскорбінової кислоти і зованого порошку шляхом розбавлення дистило0,2мг/мл гепарину і має рН 4-6 ваної апірогенної води може бути виготовлено п'ять лікарських засобів, а саме ІН'ЄКЦІЙНИЙ розчин Інший спосіб кондицюнування може бути реадля внутрім'язового введення, ІН'ЄКЦІЙНИЙ розчин лізовано, застосовуючи 0,5% водного фенолового для внугрішньосуглобового введення, мазь або розчину і 0,2% метабісульфіту натрію гель для місцевого застосування або супозіторм Приклад 4 Приклад 2 Лікарський склад для зовнішнього локального застосування - мазь, гель або супозиторії - одерЛікарський склад для внутрішньом'язового жують на основі мазів, гелю або супозиторіїв, вивведення одержують шляхом розбавлення концеходячи із розрахунку на 100г 3-10г сухої активної нтрованого розчину або люфілізованого порошку речовини, що містить 10%-ний розчин бюактивноапірогенною водою, яка містить не більше 5мг/мл го концентрату або 4-12г люфілізованого бюактивфенолу і не більше 2мг/мл метаб і сульфіту натрію ного концентрату, який складається з 7-9г антипаКоефіцієнт розбавлення запроваджують таким, луронідази і протизапальних мукополісахаридних щоб ІН'ЄКЦІЙНИЙ розчин містив у 1мл водного розполімерів, до 1-Зг хондроітинсульфату, 0,4г вітамічину 0,1мл 10%-ного розчину бюактивного конценну Е, 0,5г аскорбінової кислоти, 0,5г ацетилсапіцитрату або 11мг люфілізованого бюактивного конлату натрію або лізину, 0,2г гепарину, 2 - 5г росцентрату та мав би антипалуронідазну активність линних екстрактів (Achillea millefohum, Calendula не менше 45І О /мл officmahs, Matncana chamomilha, Plantago sp, Спочатку розчин для прояснення відфільтроHypencum perforatum) Необхідно згадати, що освують крізь фільтри, що мають пори з величиною нову мазі, гелю або супозиторіїв готують, викорис45мк, а далі крізь фільтри з порами величиною товуючи 60-75% "І" - подібно структурованої води 0,22мк для стерилізації Основа мазі також містить звичайні консерванти Зазначені лікарські склади асептично пакують та ароматичні речовини "І" - подібно структуровау коричневі флакони ємністю 1мл Ці стандартні на вода є об'єктом винаходу, який захищається флакони містять 10мг/мл активної речовини, яка у патентом № RO 109835 В Зазначена вода має свою чергу містить 7-9мг антипалуронідази і прозбільшений енергетичний потенціал, високу тизапальних мукополісахаридних полімерів та дотрансмембранну проникну здібність і чітко вираданого до 1-Змг переважно відновленого хондроіжену протизапальну і протиінфекційну дію Цю тинсульфату, звичайні консерванти і має рН 4-6 воду одержують шляхом пропущення відфільтроПри застосуванні люфілізованого бюактивного ваної водопровідної води через активуючі електконцентрату у флаконах об'ємом Юмл, які містять ромагнітні поля 110мг люфілізованого бюактивного кооцентрату і до 25мг придатного консерванту, ці флакони еквіПРОМИСЛОВЕ ЗАСТОСУВАННЯ валентні 10 стандартним флаконам після розбавЗазначені п'ять лікарських засобів використолення дистильованою водою вують як частину схеми лікування, включаючи схему застосування п'яти або у деяких випадках Приклад З тільки двох ЛІКІВ, що рекомендовано лікарем у різЛікарський склад для внутрішньсуглобового них випадках введення одержують шляхом розбавлення конце 13 46764 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71 14