3-азиридино-антрациклінові похідні, спосіб отримання та фармацевтична композиція

1 Производные З'-азиридино-антрациклина, которые представляют собой антрациклиновые гликозиды формулы 2 о он о где Ri представляет собой водород или метоксигруппу, F 2 представляет водород, гидроксигруппу или ? представляет ацилокси остаток формулы 3 -O-CORs, где R5 представляет пиридил, F 3 и R4 оба представляют водород или один из R3 ? и R4 представляет водород, а другой представляет гидроксигруппу, йод или группу формулы OSO2CH3, или их фармацевтически приемлемые соли 2 Соединение по п 1, которое представляет собой 3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-Ометансульфонилдаунорубицин, 4-деметокси-3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-Ометансульфонилдаунорубицин , 3'-деамино-3'-(1-азиридинил)даунорубицин, 4-деметокси-3'-деамино-3'-(1 азиридинил)даунорубицин, 3' -деамино-3' - (1 -азиридинил) -4' -Оліетансульфонил-14-никотин-атдоксорубицин 3'-деамино-3'-(1 -азиридинил)-14никотинатдоксорубицин, 3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-Ометансульфонилдоксорубицин, 4-деметокси-3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-'Ометансульфонил- доксорубицин, 3'-деамино-3'-(1-азиридинил)доксорубицин, 4-деметокси-3'-деамино-3'-(1 азиридинил)доксорубицин, 3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'йододоксорубицин, 3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'деоксидоксорубицин 3 Соединение по п 1, которое представляет собой 3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-Ометансульфонилдаунорубицин, 4-деметокси-З'деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-О-метансульфонилдаунорубицин или З'-деамино-З'- (1-азиридинил)4'-О-метансульфонил-14-никотинатдоксорубицин 4 Антрациклиновый гликозид формулы 2 или его фармацевтически приемлемая соль по п 1, обладающие противоопухолевой активностью 5 Способ получения антрациклинового гликозида формулы 2 где Ri представляет собой водород или метокси О го 00 го 43839 группу, F 2 представляет водород, гидроксигруппу или ? представляет ацилокси остаток формулы 3 -O-CORs, где R5 представляет пиридил, F 3 и R4 оба представляют водород или один из R3 ? и R4 представляет водород, а другой представляет гидроксигруппу, йод или группу формулы OSO2CH3, или его фармацевтически приемлемой соли, отличающийся тем, что включает обработку антрациклинового гликозида- общей формулы 6 где R-i, R2, R3, R4 имеют значения, указанные выше, и Rg - гидрокси или атом галогена, растворенного в безводном органическом растворителе, который представляет собой сухой метиленхлорид, метанол или их смесь в объемном соотношении 1 1-1 3, при перемешивании при температуре 0-30°С от 15 до 2 часов силикагелем, и при желании, превращение полученного таким образом антрациклинового гликозида формулы 2 в его фармацевтически приемлемую соль 6 Способ по п 5, отличающийся тем, что размеры частиц силикагеля находятся в интервале от 230 до 400 мешей 7 Способ получения антрациклинового гликозида формулы 2 где Ri представляет собой водород или метоксигруппу, R2 представляет водород, гидроксигруппу или представляет ацилокси остаток формулы 3 -O-CORs, 4 где R5 представляет пиридил, F 3 и R4 оба представляют водорода или один из ? R3 и R4 представляет водород, а другой представляет гидроксигруппу, иод или группу формулы -OSO2CH3, или его фармацевтически приемлемой соли, отличающийся тем, что включает взаимодействие производного формулы 5 О ОН О где R-і, R3 и R4 имеют значения, указанные выше, с производным соли формулы 3 Х+ OCOR5, 3' где Rs имеет значения, указанные выше 8 Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного агента она содержит антрациклиновый гликозид формулы 2 О где Ri представляет собой водород или метоксигруппу, R2 представляет водород, гидроксигруппу или представляет ацилркси остаток формулы 3 -O-CORs, где Rs представляет пиридил, R3 и R4 оба представляют водорода или один из R3 и R4 представляет водород, а другой представляет гидроксигруппу йод или группу формулы OSO2CH3, или его фармацевтически приемлемую соль 43839 Настоящее изобретение относится к новым антрациклиновым гликозидам, которые обладают противоопухолевой активностью, к способам их получения и к содержащим их фармацевтическим композициям В настоящем изобретении предложены антрациклиновые гликозиды, родственные даунорубицину и доксорубицину, в которых 3-аминогруппа сахарного остатка замкнута в азиридиновое кольцо, и, необязательно, гидроксигруппа у С-4' сахара может быть защищена в форме сультоната В настоящем изобретении предложены также их растворимые в воде производные и фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот В настоящем изобретении предложено соединение, которое является антрациклиновым гликозидом формулы 1 или 2 о где Ri представляет водород или метоксигруппу, F 2 представляет водород, гидроксигруппу ? или представляет ацилоксиостаток формулы 3 -O-CORs где R5 представляет линейный или разветвленный C-i-Cs алкил, моно- или би-циклический арил, предпочтительно фенил, или гетеро моноили би-циклическое кольцо, предпочтительно, пиридил, причем каждая из групп может быть необязательно замещена (а) аминогруппой -NR6R7, где R6 и R7 независимо представляют водород или С1-С4 алкил, или (Ь) карбоксигруппой, R3 и R4 оба представляют водород, или один из R3 и R4 представляет водород, а другой представляет гидроксигруппу или группу формулы -OS2R8, где Rs может быть линейной или разветвленной ал кильной группой, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, например, от 1 до 4 атомов углерода, Rs может представлять, в частности, метил, этил, нпропил или изопропил В другом варианте Rs может представлять арильную группу, такую, как фенил, незамещенный или замещенный 1 - 3 заместителями, каждый из которых может быть независимо линейной или разветвленной алкильной или алкоксигруппой, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, например, 1 - 3 атома углерода, атомом галоида или нитрогруппой Примеры атомов галоида включают фтор, хлор, бром и йод, предпочтительно, фтор или хлор, более предпочтительно, хлор В настоящем изобретении арильная группа представляет моноциклический или бициклический ароматический углеводород, содержащий от 6 до 10 атомов углерода, например, фенил или нафтил Гетероциклическое кольцо представляет 5- или 6-членное насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо, содержащее, по крайней мере, один гетероатом, выбранный из О, S и N, которое необязательно конденсировано со второй 5- или 6-членной, насыщенной и ненасыщенной гетероциклической группой Примеры насыщенных и ненасыщенных гетероциклических колец включают пиразол ильное, имидазолильное, пиридильное, пиразильное, пиримидильное, пиридазинильное, морфолино, тилморфолино, фурильное и тиенильное кольца Предпочтительно, чтобы R2 представлял гидрокси или О-никотинил, R3 представлял гидрокси или -OSCbRs, где Rs представлял бы СгС4алкил, a R4 представлял бы водород Примеры соединений настоящего изобретения включают (1а)3'-диамино-3'-[1-азиридинил]-4-Ометансульфонил-даунорубицин (Ri = ОСН, R4 = Н, R3 = OSO2CH3) (1Ь)4-деметокси-3'-деамино-3'[1-азиридинил]4'-О-метансульфонил—даунорубицин (Ri = R4 = Н, R3 = OSO2CH3) (1с)3'-деамино-3'[1-азиридинил]-даунорубицин (R = ОСНз, R4 = Н, R3=OH) (1 ф4-деметокси-3'-деамино-3'-[1 -азиридинил]даунорубицин (Ri = R4 = Н, R3 = ОН) (2а)3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-Ометансульфонил-14~никотинат-даунорубицин (Ri = ОСНз, R2 = О-никотинил, R4 = Н, R3 =OSO2 CH3) (2Ь)3'-деамино-3'-[1 -азиридинил]-14никотинат-доксорубицин (Ri = ОСНз, R2 - Оникотиноил, R4 = Н, R3 = ОН) (2с)3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-Ометансульфонил-доксорубицин (Ri = ОСНз, R2 ОН, R4 = Н, R3 = OSO2CH3 (2сІ)4-деметокси-3' -деамино-3'-[1 -азиридинил]4'-О-метансульфонил-доксорубицин (Ri = R4 = Н, R2 = ОН, R3 = OSO2CH3) (2е)3'-деамино-3'-[1-азиридинил]доксорубицин (Ri = ОСНз, R4 = Н, R2 = R3 = ОН) (21^4-деметокси-3'-деамино-3'-[1-азиридинил]доксорубицин (Ri = R4 = Н, R2 = R3 - ОН) (2д)3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4' 43839 иододоксорубицин = ОСНз, R2 - ОН, R4 = Н, R3 (2п)3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'деоксидоксорубицин (Ri = ОСН3, R2 - ОН, R3 = R4 = Н) и такие их фармацевтически приемлемые соли, как соли хлористоводородной кислоты (соляной кислоты) Далее, в настоящем изобретении предложен способ получения азиридиноантрациклинового гликозида формулы 1 или 2, как указано ранее, или его фармацевтически приемлемой соли, который включает (а) превращение антрациклина общей формулы 4 ОН R< О ОН О 8 ния (которое можно получить из соединения формулы 1 по способу, описанному в патенте США № 3803124) до получения азиридиноантрациклинового производного формулы 2, где R2 представляет гидроксильную группу, и, при желании, (с) осуществление взаимодействия соединения формулы 5, как определено ранее, с солью производного формулы 3' X+-OCOR5 где Rs имеет указанные ранее значения, при условии, что Rs не представляет остатка, содержащего первичную аминогруппу, а Х+ представляет ион, предпочтительно ион натрия или калия, и, при желании, превращение полученного таким образом соединения формулы 2, в его фармацевтически приемлемую соль, или (d) осуществление взаимодействия соединения формулы 5, как определено ранее, с солью производного формулы 3', где Rs представляет первичную аминогруппу, защищенную чувствительной к кислоте защитной группой, с последующим удалением защитной группы, и, при желании, превращение полученного таким образом соединения формулы 2 в его фармацевтически приемлемую соль В настоящем изобретении предложен другой способ получения азиридиноантрациклинового гликозида формулы 2, как определено ранее, или его фармацевтически приемлемой соли, который включает (а) обработку атрациклина общей формулы 6 ОН N где R-і, R2 и R3 имеют указанные ранее значения, a Rg представляет сульфонатную группу или атом галоида, предпочтительно, атом хлора, в антрациклин формулы 1, причем соединение формулы 4, предпочтительно, растворяют в безводном органическом растворителе в присутствии безводной соли щелочного металла и мягкого основания, и, при желании, (Ь) гидролиз производного формулы 5 О 1 0 ОН О где R-і, R2, R4 имеют указанные ранее значе где R-і, R2, R3, R4 и Rg имеют указанные ранее значения (такие соединения были раскрыты также в WO 93/01201), силикагелем, и, при желании, превращение полученного таким образом соединения формулы 2, в его фармацевтически приемлемую соль Следует отметить, что антрациклины формулы 4 или 6 также могут образовывать азиридиновое кольцо, если их обработать силикагелем Для такой обработки можно использовать мягкие условия, что позволяет получать соединения формулы 2, исходя из чувствительных к основаниям сложноэфирных производных, таких как те, которые имеют формулу 6 В соответствии со способом настоящего изобретения предпочтительные условия реакции получения азиридиноантрациклинов формулы 1 43839 включают растворение соединения формулы 4, как было определено ранее, в безводном органическом растворителе, таком как безводный метиленхлорид, в присутствии безводной щелочной соли металла, например, безводного карбоната или бикарбоната натрия или калия, при перемешивании, при температуре от 0 до 30°С, предпочтительно при комнатной температуре, и в течение от 15 минут до 2 часов, предпочтительно, около 30 минут В другом способе соединения формулы 4 растворяют в смеси таких органических растворителей, как сухой метиленхлорид и метанол, в соотношении от 1 1 до 1 3 по объему, затем этот раствор обрабатывают силикагелем, предпочтительно 230 - 400 мешей, при перемешивании при температуре от 0 до 30°С, предпочтительно, при комнатной температуре, в течение промежутка времени от 15 минут до 2 часов, предпочтительно, около 30 минут В аналогичном процессе условия реакции для превращения соединений формулы 6, как определено ранее, в азиридиноатрациклины формулы 2, предпочтительно, включают растворение соединений формулы 6 в безводном органическом растворителе, например, в сухом метиленхлориде и метаноле, и обработку полученного раствора силикагелем, предпочтительно, 230-400 мешей, при перемешивании при температуре от 0 до 30°С предпочтительно, при комнатной температуре в течение промежутка времени от 15 минут до 2 часов, предпочтительно, в течение около 30 минут Такой полярный растворитель, как метанол, в способе обработки силикагелем используют для удаления антрациклина из силикагеля В другом способе получения азиридиноантрациклннового гликозида формулы 2 или его фармацевтически приемлемой соли, где F 2 представ? ляет группу формулы 3, в которой R5 не представляет остатка, содержащего первичную аминогруппу, предпочтительные условия реакции включают осуществление взаимодействия соединения формулы 5 с производным соли кислоты формулы 3', как было определено ранее, в безводном полярном растворителе, предпочтительно ацетоне или диметилформамиде, при температуре от 20 до 60°С, предпочтительно, при комнатной температуре, в течение от 4 до 15 часов, предпочтительно, от 5 до 12 часов Условия реакции для получения азиридиноантрациклинового гликозида общей формулы 2, где F 2 представляет группу формулы 3, в которой Rs ? представляет первичную аминогруппу, включают осуществление взаимодействия соединений формулы 5, как было определено ранее, с производным соли кислоты формулы 3', в которой аминогруппа защищена группой, чувствительной к кислоте, например, аминогруппа защищена Шиффовым основанием, в полярном растворителе, таком как ацетон или диметилформамид, при температуре от 20 до 60°С, предпочтительно, при комнатной температуре, в течение от 4 до 15 часов, предпочтительно от 5 до 12 часов, затем полученное N-защищенное-сложноэфирное производное деблокируют, растворяя его, например, в 10 метиленхлориде, и добавляя дистиллированную воду и водную соляную кислоту, предпочтительно, примерно такой же объем воды, что и метиленхлорида, а соляную кислоту в количестве, соответствующем примерно трем эквивалентам 0,1 н НСІ Полученную смесь интенсивно перемешивают при температуре от О до 20°С, предпочтительно, около 15°С, в течение промежутка времени от 30 минут до 2 часов, предпочтительно, от 45 до 90 минут, выделяют, и водную фазу сушат вымораживанием до получения растворимой соли соляной кислоты С-15 сложноэфирного производного формулы 2 Предпочтительно, защищать первичную аминогруппу группой метилендифенила В следующем аспекте в настоящем изобретении предложены Фармацевтические композиции, содержащие антрациклиновый гликозид формулы 1 или 2, или его фармацевтически приемлемую соль в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем Можно использовать обычные носители и разбавители Композиции можно выполнять и вводить обычными способами Подходящие способы введения включают парэнеральное введение- для парентерального введения жидкую композицию можно приготовить, используя активное соединение и стерильный разбавитель или носитель, в котором активное соединение либо может раствориться, либо в нем получают его суспензию Парентеральную композицию можно приготовить в форме стерильного твердого вещества, которое необходимо снова растворить перед употреблением в таком подходящем носителе, как физиологический раствор, стерильная вода или другие стерильные носители Соединения настоящего изобретения пригодны для терапевтического лечения организмов человека и животных Они полезны как противоопухолевые агенты, особенно для лечения лейкемии или аденокарциномы толстой кишки Терапевтически эффективное количество соединения вводят пациенту, у которого имеется опухоль, для улучшения состояния пациента Можно вводить такое количество соединения, которого достаточно для ингибирования роста опухоли Вводимые дозы можно оценить, зная интервалы доз для доксорубицина и даунорубицина, модифицированные относительно активности, демонстрируемой соединениями настоящего изобретения в тестах против опухолей ин витро и ин виво Обычно, подходящие дозы попадают в интервал от 1 до 200мг/м2 площади поверхности тела, предпочтительно, от 1 до 100мг/м2, в зависимости от характера и степени серьезности заболевания, которое нужно лечить, и от общего состояния пациента Нижеследующие примеры иллюстрируют изобретение Пример 1 Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-0метансульфонилдаунорубицина (Ri = ОСНз, R4 Н, R3 = OSO2CH3) 3'-М-(2-хлорэтил)-4'-Ометансульфонилдаунорубицин (4а, Ri = ОСНз, R4 = Н, R3 = OSO2CH3, R9 = СІ) (0,33г, 0,05ммоля), 12 11 43839 полученный по способу WO/93/012001, растворяводного бромистого водорода (15мл) Полученную ют в смеси 10мл безводного метиленхлорида и смесь выдерживают при 30°С в течение 20 часов, 20мл метанола, и перемешивают с силикагелем затем экстрагируют Н-бутанолом (50мл) Органи(Мегск, 200 - 400 мешей, 2г) при комнатной темпеческий растворитель удаляют при пониженном ратуре в течение 30 минут Полученный раствор давлении, а остаток, растворенный в сухом ацефильтруют, концентрируют досуха и сырой матетоне (200мл), обрабатывают никотинатом калия риал обрабатывают с помощью флешхромато(2г) при кипении с обратным холодильником в теграфии на колонке с силикагелем, используя в чение часа Растворитель удаляют при пониженкачестве злюента смесь метнленхлорида и метаном давлении, а сырой материал обрабатывают нола (95 5 по объему), до получения указанного в хроматографически на колонке с силикагелем, заглавии соединения 1а (выход 0,22г) используя в качестве элюирующей системы смесь метиленхлорида и метанола (95 5 по объему) до ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск) с исполучения указанного в заглавии соединения 2а пользованием в качестве элюента системы мети(0,35г), Т плавления 148 - 149°С (с разложением) ленхлорид метанол (93 2 по объему) дает Rf = + 0,65 Масс-спектр с полевой десорбцией м/z [М ] ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск), с ис631 пользанием в качестве элюирующей системы метиленхлорида и метанола (10 1 по объему) дает 2Н-ЯМР (400МгГц, CDCI) 5 Rf = 0,37 Масс-спектр с полевой десорбцией M/Z 1,16, 1,25 (м, 2Н, водороды азиридина), 1,36 (М+) 752 (д, J=6,4I~4, ЗН, СНз-51), 1,52 (м, 1Н, Н-31), 1,73 (м, Пример 4 2Н, водороды азиридина), 1,80 (м,1Н, Н-2'экв), 2,09 (м, 1Н, Н-2'акс), 2,12 (м, 1Н, Н-8акс), 2,31 (м, Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-О1Н, Н-8экв), 2,39 (с, ЗН, СОСН3), 2,98 (д, J = метансульфонилдоксорубицина 19,2Гц, 1Н, Н-10акс), 3,21 (дд, J = 1,7, 19,2Гц, 1Н, (2с Ri = ОСНз, R2 = ОН, R4 = Н, R3 = Н-Юэкв), 3,22 (с, ЗН, CH3SO2), 4,09 (кв, и-6,4Гц, OSO2CH3) 1Н, Н-51), 4,10 (с, ЗН, ОСНз), 4,44 (с, 1Н, ОН-9), 3'-1\1-(2-хлорэтил)-4'4,75 (с, 1Н, Н-41), 5,28 (м, 1Н, Н-7), 5,55 (д, J = метансульфонилдоксорубицин (6а Ri = ОСНз, R2 3,4Гц, 1Н, Н-Г), 7,41 (д, J = 8,1 Гц, 1Н, Н-3), 7,80 = ОН, R9 = СІ, R3 = OSO2CH3, R4 = H), полученный (дд, J = 7,7, 8,1 Гц, 1Н-Н-2), 3,05 (д, J = 7,7Гц, 1Н, по способу патента Великобритании 9114549, Н-1), 13,30 (с, 1Н, ОН-11), 14,00 (с, 1Н, ОН-6) превращают в указанное в заглавии соединение 2с по способу примера 1 ТСХ на пластинах Пример 2 Kieselgel F254 (Мегск) с использованием в качеПолучение 4-деметокси-3'-деамино-3'-[1стве элюирующей системы метиленхлориде и азирндинил]-4'-О-метансульфонилдаунорубицина ацетона (3 2 по объему) дает Rf = 0,35 Масс(1 b R1 = R4 = Н, R3 = OSO2CH3) спектр с полевой десорбцией м/z (М+) 647 4-деметокси-І\І-(2-гидроксизтил)даунорубицин Пример 5 (4b R1 = R4 = H, R3 = OSO2CH3, Rg = OH, 0,3r, Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'0,5ммоля) растворяют в смеси метиленхлорида иододоксорубицина (10мл) и метанола (5мл), и встряхивают при комнатной температуре с Зг силикагеля в течение 30 (2g Ri = ОСНз, R2 = ОН, R4 = Н, R3 = 1) минут Затем органический раствор отфильтровы3'-1\1-(2-хлорэтил)-4'-иододоксорубицин (6b Ri вают, а растворитель удаляют при пониженном = ОСНз, R2 = ОН, R9 = СІ, R3 = I, R4 = H, получендавлении-остаток обрабатывают с помощью ный по способу патента Великобритании 9114549, флеш-хроматографии на колонке с силикагелем, превращают в указанное в заглавии соединение используя в качестве системы элюента смесь ме2д по способу примера 1 тиленхлорида и метанола (95 5 по объему), до ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск) с исполучения указанного в заглавии соединения 1в пользованием в качестве элюирующей системы (0,1 Зг) ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск) с метиленхлорида и ацетона (9 1 по объему), дает использованием в качестве элюируюшей системы R f =0,45 метиленхлорида и метанола (20 1 по объему) Масс-спектр с полевой десорбцией м/z (М+) дает Rf = 0,42 Масс-спектр с полевой десорбцией 679 м/z (М+) 601 Пример 6 Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'Пример 3 деокендаксорубицина Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-Ометансульфонил-14-никотинатдоксорубицина (2h R1 = ОСНЗ, R2 = ОН, R3 = R4 = Н) 3'-1\1-(2-хлорэтил)-4'-деоксидоксорубицин (6с (2а Ri = ОСНз, R2 = О-никотиноил, R4 = H, R3 Ri = ОСНз, R2 = ОН, R9 = СІ, R3 = R4 = H) получен= OSO2CH3) ный по способу патента Великобритании 9114549, 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-Опревращают в указанное в заглавии соединение метансульфонилдаунорубицин (1а, 0,63г, 2п по способу примера 1 ТСХ на пластинах 1ммоль), полученный по способу примера 1, расKieselgel F245 (Мегск), с использованием в качетворяют в смеси 6мл безводного метанола и 13мл стве элюирующей системы метиленхлорида и диоксана, добавляют 0,5мл зтилортоформата, и ацетона (20 1 по объему), дает Rf = 0,33 Массзатем полученную смесь обрабатывают раствоспектр с полевой десорбцией м/z (М+) 553 ром брома (1г) в 5мл безводного метнленхлорида при 10°С в течение 1,5 часов Затем реакционную Биологическая активность смесь осаждают смесью этилового эфира (100мл) 3'-деамино-3'-[1-азиридинил 3-4'и петролейного эфира (50мл) Осадок собирают и О~метансульфонилдаунарубицин (1а), 4снова растворяют в смеси ацетона (15мл) и 0,25н деметокси-3'-деамнно-3'-[1-азиридинил]-4'-О 14 13 43839 метансульфонилдаунорубицин (1в), контрольных х 100 3'-деамино-3'-[1-азиридинилъ-4'-ОЖивотные метансульфонил-14-никотинатдоксорубицин (2а) и Для оценки противоопухолевой активности 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-Оиспользовались инбредные DBA/2 и C57BI/6, гибметансульфонилдоксорубицин (2с), были тестиридные C57BL/6 х DBA/2 (B6D2F1) и BALB/c x рованы ин витро на двух человеческих клеточных DBA/2 (CD2F1) взрослые самки мыши Животным линиях, LoVo (аденокарцинома ободочной кишки было по 2 - 3 месяца, их вес составлял 20 - 22г, человека) и LoVo/DX (аденокарцинома, устойчисодержались в обычных лабораторных условиях вая к доксорубицину), в сравнении с доксорубициВ экспериментах с ксенотрансплантатом опухоли ном человека использовали швейцарских мышей Nu/Nu в возрасте 4-6 недель, весом 20 - 25г, котоЦитотоксическая активность приводится в вирых содержали в клетках с подстилкой из фильтде ИК50, т е концентрация, ингибирующая 50% ровальной бумаги, корм и подстилку стерилизоваобразования колоний, рассчитываемая на основали, а воду подкисляли Колонию мышей нии кривых концентрация реакция Показателем подвергали обычному тестированию на отсутстустойчивости, R J является отношение ИК50 для вие антител к ряду патогенов, включая гепатит устойчивых клеток к ИК50 для чувствительных клемышей, вирус Сендай и Mycoplasma pulmoms ток Соединения 1а, 1в, 2а и 2с демонстрируют Всех животных поставляли Charles River (Calco, высокую активность против обоих клеточных лиComo, Italy) и Harlan Nossan (Correzzana, Milano, ний, и низкий показатель устойчивости (таблица Italy) 1) Лейкозы Соединения 1а, 1в, 2а и 2с оценивали также Сублинию P388/DX Johnson поддерживали ин виво против Р388 мышиной лейкемии, устойчипосредством еженедельных и/п пассажей на мывой к доксорубицину (105 клеток/мышь транспланшах BD2F1 в дозе 106 клеток на мышь В эксперитируют внутривенно мышам BD2F1) в сравнении с менте мышам той же линии инъецировали по 105 доксорубнцином клеток в/в Соединения 1а, 1в, 2а и 2с демонстрируют также поразительно более высокую активность, Лейкоз мышей L1210 (первоначально получем доксорубицин (таблица 11) ченный из NCI) и сублинии, резистентные к L-PAM (L1210/L-PAM, первоначально полученный из Таблица 1 NCI), к cDDP (L1210/CDDP, первоначально полуЦитотоксическая активность in vitro (1С м ) соченный из NCI), и к DX (L1210/DX) поддерживали единений Іа, їв, 2а, 2с на LoVo и LoVo/DX клетках посредством еженедельных и/п пассажей на мыпо сравнению с активностью доксорубицина шах DBA/2N в дозе 106 клеток на мышь Животных с резистентными опухолями лечили И К50 (нг/мл) Соединение следующим образом LoVo LoVo/DX R\{Z) мышам L1210/L-PAM вводили и/п 7,5мг/кг L1а 13 22 1,7 РАМ через 48 часов после трансплантации опухо1в 27 26 0,9 ли 2а 14 40 2,9 мышам L1210/CDDP вводили и/п 5мг/кг цис2с 2,7 24 9,2 платина через 96 часов после трансплантации доксорубицин 82,5 4975 60,3 опухоли мышам L1210/DX вводили и/п бмг/кг DX через Анализ колоний 4 часа обрабатки 48 часов после трансплантации опухоли (1) ИС50 — концентрация, ингибирующая 50% В эксперименте мышам CD2F1 в/в инъецирообразования колоний 5 вали по 10 клеток (2) R J — показатель устойчивости = (ИС50 Солидные опухоли человека LoVo/DX)/(HK50 LoVo) Карциному молочной железы МХ1 (первонаТаблица 2 чально полученную из Национального института Противоопухолевая активность соединений рака [NCI], NHI, Bethesda, MD), карциномы яичника 1а, 1 в, 2а и 2с против лейкемии P388/DX по сравА2780 (любезно предоставленные д-ром Ozols, нению с доксорубицином Национальный институт рака, NHI, Bethesda, MD) и Н207 (первоначально полученную из каталога 1 T/CUJ од " АТСС), и мелкоклеточную карциному легких № Соединение % (мг/кг) 592 трансплантировали п/к бестимусным мышам, 1а 2,2 190 используя 15 - 20мг опухолевой взвеси Для экс1в 3,8 240 периментов опухоли вырезали и их фрагменты 2а 2,5 200 имплантировали п/к в область левого бока 2с 1,8 195 Введение лекарственных препаратов доксорубицин 16,9 106 Все лекарственные растворы приготавливали непосредственно перед употреблением Растворы Соединения суспендируют в Твин 80 (10%) и вводили в/в в объеме 10мг/кг веса тела Схемы вводят внутривенно через день после транспланлечения представлены в каждой таблице тации опухоли Оценка противоопухолевой активности и ток(1) ОД = оптимальная доза сичности (2) Среднее время выживания обработанных В экспериментах с моделями лейкозов активмышей/среднее время выживания ность лекарственных препаратов определяли пу 43839 16 15 тем сравнения медианы срока выживания (МСВ) в метру, D = большему диаметру) Ингибирование экспериментальной группе с тем же показателем в роста опухоли (ИРО%) рассчитывали согласно контрольной группе, и результаты, выраженные уравнению как УПЖ%, были следующими средний вес опухоли в экспериментальной группе ИРО% = хЮО (2) средний вес опухоли в контрольной группе МСВ в экспериментальной группе СВ в экспеВ экспериментах с солидными опухолями чериментальной группе ловека излеченными считались мыши, не имевМСВ в экспериментальной группе УПЖ% = 100-100 шие опухоли спустя 90 дней после ее имплантаМСВ в контрольной группе ции Количество выживших в течение длительного Токсичность оценивалась на основании маквремени (ВДВ) относится к мышам, которые выроскопических находок при вскрытии и потери вежили в течение периода времени более 60 дней са со дня имплантации опухоли Таблица 3 Противоопухолевая активность 4В экспериментах с солидными опухолями акдеметокси-3-дезамино-3'[1-азиридинил]-4'-Отивность оценивалась как ингибирование роста метансульфонил даунорубицина (1Ь) и 3опухоли через неделю после последнего введения т т дезамино-З [1-азиридинил}-4 -О-метансульфонил лекарственного препарата Рост опухоли оценидоксо-рубииина (2с) в отношении чувствительных вали с помощью кронциркуля фиксировали два и резистентних мышиных лейкозов диаметра и рассчитывали вес опухоли по следующей формуле d2x D/2 (где d = меньшему диа1Ь Опухоль од' 1 P388/DX L1210 L1210/L-PAM L1210/CDDP L1210/DX 2с УПЖ% (мг/кг/день) 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 А2780 Н207 МХ1 N592 Схема лечения в/в q4dx3 в/в q4dx3 в/ в q7dx3 в/в q7dx3 (мг/кг/день) 1,8 1,4 1,4 1,8 1,8 1044 101 71 48 66 1 — Опухолевые клетки инокулировали в/в на день 0 2 — Оптимальная доза Соединения суспендировали в Твине 80 в концентрации 10% и инъецировали в/в через один день после трансплантации опухоли 3 — Увеличение продолжительности жизни Опухоль1 од' 3 УПЖ%3 95 43 57 34 22 4 — 1/40 выживших в течение длительного времени Таблица 4 Противоопухолевая активность в отношении ксенотрансплантатов опухолей человека по сравнению с 4-деметокси-3-дезамино-3'[1азиридинил]-4'-О-метансульфонил доксорубицином (1Ь) Доза/ общая доза (мг/кг) ИРО2% Токсичность3 Излеченные мыши4 ЛЗРО", дни 2,5/7,5 99 0/7 0/7 20 2,5/7,5 99 0/8 2/8 45 2,66/8 99 1/8 1/8 60 2,25/9 100 0/6 1/6 47 1 —Опухолевую взвесь инокулировали п/к 2 — Ингибирование роста опухоли спустя одну неделю после последнего введения лекарственного препарата 3 — Количество мышей, умерших вследствие токсичности,/общее количество мышей 4 — Мыши, не имевшие опухоли на 90 день, через 90 дней после имплантации опухоли 5 — Задержка роста опухоли у экспериментальных мышей — задержка роста опухоли у кон трольных мышеи ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМАЯ КОМПОЗИЦИЯ Для приготовления соединений для инъекций применяли следующую процедуру Соединение 1Ь (2мг) растворяли в 1мл смеси кремофора и этанола 65 5 (по объему) при встряхивании, затем добавляли физиологический раствор (4 мл) и раствор встряхивали в течение 2 минут ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90