Циклопептиди та спосіб їх отримання

1 Циклопептиды формулы (І) UHmo-(Arg-A-Asp-R1-RO, (I) где А представляет собой Gly или Ala, R1 представляет собой 2-карбокси-8-амино-4тиапиперолидин-9-он (Btd), о-аминометил-о'карбоксибифенил (Biph), 2-аминометил-5карбокси-метилтиофен (Act), остаток 6аминогексановой кислоты (Aha) или 2-(1,7диазаспиро[4,4]-нонан-7-ил)-метилпентановой кислоты ((S,S)cnnpo-Pro-Leu) или 2-(3-амино-1пирролид-2-онил)-4-метил-пентановой кислоты Настоящее изобретение описывает циклопептид формулы I L4nmo-(Arg-A-Asp-R1-R2) і где А представляет собой Gly или Ala, R1 представляет собой 2-карбокси-8-амино-4тиапиперолидин-9-он(Btd), о-аминометил-о'карбоксибифенил-(Вірп), 2-аминометил-5карбоксиметилтиофен-(АсЦ, остаток 6аминогексановой кислоты (Aha) или 2-(1,7диазаспиро[4,4]-нонан-7-ил)-метилпентановой кислоты ((S,S)cnnpo-Pro-Leu) или 2-(3-амино-1пирролид-2-онил)-4-метил-пентановой кислоты ((S)Gly[ANC-2]-Leu или (R)Gly[ANC-2]-Leu, причем остаток, если желательно, может быть связан пептидными связями, а R отсутствует или представляет собой Val, a также их физиологически переносимые соли, являющийся ингибитором рецептора итегрина Соединения похожего строения описаны в ((S)Gly[ANC-2]-Leu или (R)Gly[ANC-2]-Leu), причем остатки связаны с предыдущей и последующей аминокислотой пептидными связями, a R2 отсутствует или представляет собой Val, а также их физиологически приемлемые соли, являющиеся ингибиторами рецептора интегрина 2 Циклопептиды формулы (I) по п 1 , представляющие собой (a) L4Hmo-(Arg-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu), (b) L4Hmo-(Arg-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu), (c) L4Hmo-(Arg-Gly-Asp-(S,S)cnHpo-Pro-Leu), (d) L4Hmo-(Arg-Gly-Asp-Act), (e) L4Hmo-(Arg-Gly-Asp-Btd), (f) L4Hmo-(Arg-Gly-Asp-Aha), (g) L4Hmo-(Arg-Gly-Asp-Btd-Val), (h) L4Hmo-(Arg-DAIa-Asp-Btd-Val), 3 Энантиомеры или диастереомеры соединений формулы (I) по п 1 4 Способ получения соединения формулы (I) согласно п 1 или одной из его солей, отличающийся тем, что их выделяют в свободном виде из одного из их функциональных производных путем обработки сольволизирующим или гидрогенолизирующим средством Pharmazie, т40(8), с 532 - 535 (1985) По патенту SU №892871А кл С07С103/32, А61К37/02 известно изобретение, которое относится к синтезу соединения- циклическому аналогу брадикинина, обладающему пролонгированным гипотензивным действием, которое находит применение в биологии и медицине По патенту SU №1048702А кл С07К7/12, 7/64, А61К37/02 известно изобретение, относящееся к новому биологически активному соединению - циклическому аналогу энкефалина, обладающему пролонгированной анальгетической активностью и которое может найти применение в медицине Однако, воздействие указанных выше соединений на живой организм ограничено и кратковременно В основе настоящего изобретения лежит задача обнаружения новых соединений, обладающих ценными свойствами, особенно соединений, которые могут быть использованы для изготовле о (О (О 46699 ния лекарственных средств Было обнаружено, что соединения формулы I и их соли обладают очень ценными свойствами Во-первых, они действуют как ингибиторы интегрина, причем особенно они препятствуют взаимодействиям Рз - и Рб - рецепторов интегрина с лигандами Особенно эффективны данные соединения в случае интегринов avPi, ауРз, civPs, ауРб и (XiivPi Эффективность действия может быть определена, например, по методу, описанному J W Smith в J Biol С п е т , т 265, с 12267 - 12271 (1990) (см приложение) Кроме того, они оказывают противовоспалительное действие Все эти виды воздействия могут быть подтверждены при помощи описанных в литературе методов Эти соединения могут использоваться в качестве активных соединений лекарственных средств при лечении людей или в ветеринарии, особенно для профилактики и при лечении заболеваний кровообращения, тромбозах, инфаркте миокарда, артериосклерозе, воспалениях, кровоизлияниях, стенокардии, опухолях, остеолитических заболеваниях, в частности остеопорозе, для развития кровеносных сосудов и рестеноза после пластических операций на сосудах Кроме того, данные соединения могут быть использованы для улучшения состояния и заживления ран Кроме того, соединения обладают антимикробным и антивирусным действием, препятствуют распространению инфекций, которые передаются, например, при помощи бактерий, грибков, дрожжевых грибков, вирусов Кроме того, эти соединения могут использоваться, например, в качестве вспомогательных антимикробных средств при проведении вмешательств, связанных со введением в организм чужеродных материалов, например биоматериалов, имплантантов, катетера, стимулятора сердечной деятельности и т п При этом они оказывают также антисептическое действие Использованные ранее и ниже в тексте описания сокращенные обозначения аминокислотных остатков имеют следующие значения Act - 2-аминометилтиофен-5-уксусная кислота, Aha - 6-аминогексановая кислота, Ala - аланин, Asn - аспарагин, Asp - аспарагиновая кислота, Asp(OR) -р-эфир аспарагиновой кислоты, Arg - аргинин, Biph - о-аминометилбифенил-о'-карбоновая кислота, Btd 8-амино-4-тиапиперолидин-9-он-2карбоновая кислота, Cys - цистеин, Gin - глутамин, Glu - глутаминовая кислота, Gly - глицин, Gly[ANC-2]-Leu-2-(3-aMHHO-1-пиррол ид-2онил)-4-метилпентановая кислота, His - гистидин, Не - изолейцин, Leu - лейцин, Lys - лизин, Met - метионин, Nle - норлейцин, Огп - орнитин, Phe - фенилаланин, Pro - про лин, spiro-Pro-Leu - 2(1,7-диазаспиро[4,4]-нонан-7ил)-4-метил-пентановая кислота, Ser - серии, Thr -треонин, Тгр -триптофан, Туг - тирозин, Val - валин В дальнейшем использованы следующие сокращения ВОС -трет-бутоксикарбонил, CBZ - бензилоксикарбонил, DCCI - дициклогексилкарбодиимид, DMF - диметилформамид, EDCI - г\1-этил-г\Г-(3-диметиламинопропил)карбодиимид, хлористо-водородная соль, Et - этил, FMOC - 9-флуоренилметоксикарбонил, HOBt - 1-гидроксибензотриазол, Me - метил, Mtr 4-метокси-2,3,6триметилфенилсульфонил, OBut - трет-бутокси-, ОМе - метокси-, OEt - этокси-, РОА - феноксиацетил, TBTU 2-(1 Н-бензотриазол-1 -ил)-1,1,3,3тетраметилурониум-тетрафторборат, TFA - три фтору ксусная кислота Поскольку перечисленные выше аминокислоты могут встречаться в нескольких энантиомерных формах, то указанные выше и далее в тексте описания аминокислоты, например, в качестве составных частей соединения формулы I, включают все эти формы, а также их смеси (например, DLформы) Кроме того, аминокислоты, например, входящие в состав соединения формулы I, могут содержать соответствующие известные защитные группы Кроме того, предметом изобретения является способ получения соединения формулы I по Примеру 1 или его соли, отличающийся тем, что указанное соединение переводят в свободное состояние путем обработки его функционального производного сольволизирующим или гидрогенолизирующим агентом, или обрабатывают пептид формулы II H-Z-OH (II) где Z представляет собой -Arg-A-Asp-R1-R2-, A-Asp-R1R2Arg-, -Asp-R1R2-Arg-A-, -R1-R2-Arg-AAsp- или -R2-Arg-A-Asp-R1-, или реакционноспособное производное такого пептида циклизирующим агентом, и/или обрабатывают соединение формулы I, представляющее собой основание или кислоту, кислотой или основанием с целью перевода его в форму соли данного соединения В тексте настоящего описания радикалы A, R1, 2 R и Z имеют значения, определенные для формул I и II, если не оговорено иначе Рад икал (S,S)cnnpo-Pro-Leu обозначает остаток 2-(1,7-диазаспиро[4,4]-6-оксононан-7-ил)-4метилпентановой кислоты и имеет следующую 46699 пример, ВОС или CBZ) структуру Кроме того, предпочтительными являются исходные соединения, которые вместо атомов водорода или гидроксильной группы содержат защит(S.S)spi го-Pro-Leu, ную группу, например, такие соединения, которые N Н О соответствуют формуле I, но вместо оксифенильО ной группы содержат R''O-фенильную группу (где а радикал (S)Gly[ANC-2]-Leu или (R)Gly[ANCR" обозначает защитную группу) 2]-l_eu обозначает остаток 3(S)- или 3(R)-2-(3В молекуле исходного соединения может такамино-1-пиррол ид-2-онил)-4-метилпентановой же находиться несколько - одинаковых или разкислоты личных - защищенных амино- и/или гидроксильных групп Если имеющиеся защитные группы отличаются друг от друга, то во многих случаях может быть проведено селективное отщепление Gly[ANC-2]-Leu HN Выражение "защитная группа для аминогрупН О пы" является общеупотребительным и обозначает О группу, пригодную для того, чтобы защитить (заBiph представляет собой остаток облокировать) аминогруппу от химических преврааминометилбифенил-о'-карбоновой кислоты, а щений, но которая легко может быть удалена поBiphi и Biph2 обозначают его возможные поворосле проведения требуемой химической реакции в тные изомеры другой части молекулы Типичными примерами Для радикалов R1 и R2 все указанные выше таких групп являются, в частности, незамещенные значения являются одинаково предпочтительныили замещенные ацильные, арильные, аралкокми Настоящее изобретение охватывает также симетильные или аралкильные группы Поскольку циклические пента- и тетрапептиды защитные группы удаляются проведения требуеА является, например, Gly, но может обознамой реакции (или последовательности реакций), чать также Ala, предпочтительно DAIa их вид и размер не имеют особого значения, однаСоединения формулы I, а также исходные мако предпочтительно они содержат от 1 до 20, осотериалы для их получения могут быть синтезиробенно предпочтительно - 1 - 8 атомов С Выражеваны по обычным методикам, описанным в литение "ацильная группа" в данном описании ратуре (например, в таком справочном пособии, понимается в самом широком смысле Он охватыкак Houben-Weyl, Methoden der orgamschen вает ацильные группы, являющиеся производныChemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart), причем ми алифатических, аралифатических, ароматичеусловия проведения реакций являются обычно ских или гетероциклических карбоновых кислот используемыми для проведения реакций такого или сульфокислот, особенно алкоксикарбонильрода При этом возможно использование известные, арилоксикарбонильные и особенно аралкокных, в данном описании подробно не описанных сикарбонильные группы Примерами такого типа вариантов алкильных групп являются алканоильные группы, Структурное звено пептида Gly[ANC-2]-l_eu в такие как ацетильная, пропионильная, бутириль(R)- или (SJ-форме синтезировалось по методике ная группы, аралканоильные группы, такие как R М FreidmgerH др, описанной в J Org Chem , фен и л ацетильная группа, ароильные группы, тат 47, с 104 (1982) Структурное звено спиро-Ргокие как бензоильная или толуильная группы, ариLeu может, например, быть синтезировано по мелоксиалканоильные группы, такие как РОА, алкоктодике, аналогичной описанной Р Ward и др в J сикарбонильные группы, такие как Med Chem , т 33, с 1848 (1990), а синтез Bid можметоксикарбонильная, этоксикарбонильная, 2,2,2но провести по методике U Nagai и др, трихлорэтокси-карбонильная, ВОС, 2Tetrahedron, т 49, с 3577 - 3592 (1993) иодэтоксикарбонильная группы, аралкилоксикарИсходные материалы для синтеза пептида бонильные группы, такие как CBZ ("карбобензокмогут, при желании, быть получены in situ и сразу, си"), 4-метоксибензилоксикарбонильная, FMOC, без изолирования их от реакционной смеси, исарилсульфонильные группы, такие как Mtr Предпользованы для получения соединения формулы почтительными защитными группами для защиты I аминогрупп являются ВОС и Mtr, а также CBZ, Соединения формулы I могут быть получены FMOC, бензильная и ацетильная группы из своих функциональных производных перевоВыражение "защитная группа для гидроксильдом их в свободное состояние путем сольволиза, ной группы" также является общеупотребительособенно гидролиза или гидрогенолиза ным и обозначает группу, пригодную для того, Предпочтительными исходными соединениячтобы защитить гидроксильную группу от химичеми для проведения сольволиза или гидрогенолиза ских превращений, но которая легко может быть являются соединения, которые на месте одной удалена после проведения требуемой химической или нескольких свободных амино- и/или гидрореакции в другой части молекулы Типичными ксильных групп содержат соответственно защипримерами таких групп являются вышеперечисщенные амино- и/или гидроксильные группы, наленные незамещенные или замещенные арильпример, такие, которые вместо атомов Н, ные, аралкильные или ацильные группы, а также связанных с атомом N, содержат защитную групалкильные группы пу, например, такие, которые соответствуют формуле I, но вместо ЫНг-группы содержат NHR'Вид и размер защитных групп не имеют особогруппу (где R' обозначает защитную группу, наго значения, поскольку после проведения требуе мой реакции (или последовательности реакций) защитные группы удаляются, предпочтительными являются группы, которые содержат от 1 до 20, особенно предпочтительно - 1 - 10 атомов С Примерами защитных групп для защиты гидроксильных групп являются, например, бензильная, п-нитробензильная, п-толуолсульфонильная, трет-бутильная и ацетильная группы, особенно предпочтительными являются бензильная и третбутильная группы СООН-группы аспарагиновой и глутаминовой кислот защищаются предпочтительно в форме своих трет-бутильных эфиров (например, Asp(OBut)) Используемые в качестве исходных материалов функциональные производные соединений формулы I могут быть получены по обычным методам синтеза аминокислот и пептидов, как, например, описано в вышеупомянутом справочном пособии и заявках на патенты, а также, например, по методу твердофазного синтеза Mernfield (В FGysm и R В Mernfield, J Am Chem Soc , т 94, с 3102 (1972)) Особенно выгодным является синтез по методу FMOC в проточном реакторе, описанный A Jonczyk и J Meienhofer, Peptides, Proc 8th Am Pept Symp, с 73 - 77 (1983), (Eds V J Hruby & D H Rich), Pierce Co , Rockford Для получения в свободной форме соединений формулы I из их функциональных производных используются - в зависимости от вида используемых защитных групп - например, сильные кислоты, целесообразно TFA или перхлорная кислота, а также другие сильные неорганические кислоты, такие как соляная кислота или серная кислота, сильные органические карбоновые кислоты, такие как трихлоруксусная кислота, или сульфокислота, такие как бензолсульфокислота или п-толуолсульфо-кислота Возможно присутствие дополнительно инертного растворителя, однако это не обязательно В качестве инертного растворителя предпочтительно используются органические растворители, например, кислоты, такие как уксусная кислота, простые эфиры, такие как тетрагидрофуран или диоксан, амиды, такие как DMF, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, а также спирты, такие как метанол, этанол, или изопропанол, а также вода Кроме того, могут использоваться смеси вышеперечисленных растворителей TFA предпочтительно берется с избытком и используется без растворителей, перхлорная кислота используется в виде смеси уксусной кислоты и 70%-ной перхлорной кислоты в соотношении 9 1 Температура проведения реакции отщепления составляет целесообразно от 0 до 50°С, предпочтительно от 15 до 30°С (комнатная температура) Отщепление групп ВОС, OBut и Mtr можно провести, например, предпочтительно при помощи TFA в дихлорметане или 3 - 5н HCI в диоксане при 15 - 30°С, а отщепление FMOC производится при помощи 5 - 50%-ного раствора вторичного амина, такого как диметиламин, диэтиламин или пиперидин, в DMF при 15 - 30°С Гидрогенолитически удаляемые защитные группы (например, CBZ или бензильная группа) могут, например, быть отщеплены путем обработки водородом в присутствии катализатора (напри 8 46699 мер, катализатора на основе благородных металлов, таких как палладий, целесообразно на носителе, таком как углеродный носитель) В качестве растворителей при этом пригодны перечисленные выше растворители, особенно, например, спирты, такие как метанол или этанол, или амиды, такие как DMF Реакция гидрогенолиза проводится, как правило, при температуре от примерно 0 до 100°С и давлении от примерно 1 до 200бар, предпочтительно при температуре 20 30°С и давлении 1 - 1 0 бар Гидрогенолиз CBZгруппы хорошо проходит, например, на катализаторе Pd-C с содержанием палладия 5 - 10% в метаноле или при обработке муравьинокислым аммонием (вместо водорода) на палладиевоуглеродном катализаторе в смеси метанол/DMF при температуре 20 - 30°С Соединения формулы I могут также быть получены по реакции циклизации соединений формулы II в условиях осуществления реакции синтеза пептида При этом целесообразно использовать обычные методики синтеза пептидов, например, как описано в Houben-Weyl, T 15/11, с 1 -806(1974) Реакция проводится предпочтительно в присутствии дегидратирующих агентов, например, карбодиимидов, таких как DCC1 или EDC1, а также ангидрида пропанфосфорной кислоты (ср Angew Chem, т 92, с 129 (1980)), дифенилфосфорилазида или 2-этокси-1\1-этоксикарбонил-1,2дигидрохинолина, в инертном растворителе, например, галогенированном углеводороде, таком как дихлорметан, простом эфире, таком как тетрагидрофуран или диоксан, амиде, таком как DMF или диметилацетамид, нитриле, таком как ацетонитрил, или в смеси этих растворителей, при температуре примерно от - 10 до 40°С, предпочтительно от 0 до 30°С Для того, чтобы внутримолекулярная циклизация протекала до образования межмолекулярных пептидных связей, целесообразно проводить реакцию в разбавленных растворах (принцип разбавления) Вместо соединений формулы II могут быть использованы реакционноспособные производные этих соединений, например, такие, в которых реакционноспособные группы временно заблокированы защитными группами Производные аминокислот формулы II могут, например, использоваться в форме активированных сложных эфиров, которые целесообразно получать in situ, например, путем присоединения HOBt или Nоксисукцинимида Исходные соединения формулы II, как правило, являются новыми соединениями Они могут быть получены известными методами, например, описанными выше способами синтеза пептидов и отщепления защитных групп Как правило, сначала синтезируют защищенный сложный эфир пентапептида формулы R'-ZR", например, BOC-Z-OMe или BOC-Z-OEt, а затем проводят его омыление до кислоты формулы R'-ZОН, например, BOC-Z-OH, после этого проводят отщепление защитной группы R, получая в результате свободный пептид формулы H-Z-OH (II) Основания формулы I при помощи кислоты могут быть переведены в соответствующие адди 10 46699 тивные соли Для проведения такой реакции исбензиловый спирт, полиэтиленгликоль, глицеринпользуются, в частности, кислоты, образующие триацатат и другие глицериды жирных кислот, физиологически переносимые соли Так, могут желатин, соевый лецитин, углеводы, такие как быть использованы неорганические кислоты, налактоза или крахмалы, стеарат магния, тальк, пример, серная кислота, азотная кислота, галогецеллюлоза, вазелин Для перорального приема новодородныя кислоты, такие как хлористоводонаиболее пригодными формами являются таблетродная кислота или бромистоводородная кислота, ки, драже, капсулы, сиропы или капли, опредефосфорные кислоты, такие как ортофосфорная ленный интерес представляют специальные табкислота, сульфаминовая кислота, а также органилетки с оболочкой или капсулы, с материалом ческие кислоты, в частности, алифатические, алиоболочки или капсулы, устойчивым к действию циклические, а рал и фати чес кие ароматические желудочного сока Для ректального применения или гетероциклические одно- или многоосновные пригодны суппозитории, для парентерального карбоновые, сульфо- или серные кислоты, наприприменения - растворы, например, масляные или мер, муравьиная кислота, уксусная кислота, проводные растворы, а также суспензии, эмульсии пионовая кислота, пивалиновая кислота, диэтиили имплантаты Для топикального применения луксусная кислота, малоновая кислота, янтарная пригодны, например, растворы, которые могут кислота, пимелиновая кислота, фумаровая кислоприменяться в форме глазных капель, а также та, малеиновая кислота, молочная кислота, винсуспензии, эмульсии, кремы, мази комприматы ная кислота, яблочная кислота, бензойная кислоДля применения в качестве разбрызгиваемых аэта, салициловая кислота, 2или 3розолей пригодны аэрозольные препараты, софенилпропионовая кислота, лимонная кислота, держащие активное соединение в виде раствора глюконовая кислота, аскорбиновая кислота, никоили суспензии в газе-носителе или смеси газовтиновая кислота, изоникотиновая кислота, метанносителей (например, СОг или фторированные и или этан сульфо кислота, этандисульфокислота, 2хлорированные углеводороды) Активное соедио кс и этан сульфо кислота, бен зол сульфо кислота, пнение при этом целесообразно использовать в толуолсульфокислота, нафталин-моно-и -димикронизированной форме, причем дополнительсульфокислота, лауринсерная кислота Соли фино может присутствовать также один или нескользиологически непереносимых кислот, например, ко физиологически переносимых растворителей, пикраты, могут быть использованы для выделения например, этанол Растворы для распыляемых и/или очистки соединений формулы I аэрозолей могут использоваться при помощи обычных ингаляторов Новые соединения могут С другой стороны, кислоты формулы I путем также быть лиофилизированы, и полученные проведения реакции обмена с основанием могут лиофилизаты могут быть использованы, наприбыть превращены в физиологически переносимые мер, для приготовления препаратов для распысоли металлов или аммония В качестве таких ляемых аэрозолей Инъекции могут производитьсолей наибольшее значение имеют натриевые, ся в форме болюса или в форме непрерывной калиевые, магниевые, кальциевые и аммониевые инфузии (например, внутривенной, внутрибрюсоли, а также замещенные аммониевые соли, нашинной, внутримышечной, подкожной или внутрипример, диметил-, диэтил- или диизопропиламмооболочечной) Указанные препараты могут подниевые соли, моноэтанол-, диэтанол- или триэтавергаться стерилизации и/или содержать ноламмониевые соли, циклогексили вспомогательные компоненты, такие как консердициклогексиламмониевые соли, дибензилэтиванты, стабилизаторы и/или смачивающие агенты, лендиаммониевые соли, а также, например, соли эмульгаторы, соли для регулирования осмотичеЫ-метил-О-глюкамина или соли аргинина или лиского давления, буферы, красители и/или аромазина тизаторы Если желательно, они могут также содержать одно или несколько других активных Новые соединения формулы I и их физиолосоединений, например, один или несколько витагически переносимые соли могут быть использоминов ваны для получения фармацевтических препаратов, в которых они смеете с по крайней мере одним наполнителем или вспомогательным комСоединения по настоящему изобретению мопонентом и, если желательно, с одним или негут применяться, как правило, аналогично другим сколькими другими активными соединениями, гоизвестным промышленно выпускаемым пептидам, товятся в виде пригодных дозированных форм особенно аналогично соединениям, описанным в Приготовленные таким образом композиции могут патенте США NA4472305, например, дозами прииспользоваться в качестве лекарственных средств мерно от 0,05 до 500мг, особенно от 0,5 до 100мг для лечения людей или в ветеринарии В качестве на дозировочную единицу Суточная доза препанаполнителей могут использоваться органические рата составляет, например, примерно от 0,01 до или неорганические материалы, пригодные для 2мг на 1кг веса тела Конкретные дозировки для энтерального (например, перорального или рекопределенных пациентов зависят от различных тального), парентерального (например, внутрифакторов, например, от эффективности данного венные инъекции) или локального (например, токонкретного соединения, от возраста, веса, общепикального, дермального, офтальмического или го состояния здоровья, пола, питания пациента, назального) применения или для применения в времени и способа приема, скорости секреции, форме разбрызгиваемых аэрозолей для ингалякомбинации лекарственных средств и тяжести ции и не взаимодействующие с новыми соединезаболевания, лечение которого проводится ниями, например, вода или изотонический солеПредпочтительным является парентеральный вой раствор, низшие спирты, растительные масла, способ применения 11 46699 12 Кроме этого, новые соединения формулы I гут использоваться реакции присоединения, такие могут использоваться в качестве лигандов интегкак присоединение по Michael или реакция обрарина при изготовлении хроматографических колозования дисульфидного мостика с полимерным нок для очистки интегринов методом аффинной тиолом хроматографии Выше и далее в тексте настоящего описания При этом лиганд, т е производное пептида все температуры указаны в °С В нижеследующих формулы I, закрепляется на полимерном носителе примерах термин "обычная доработка" обозначает при помощи анкерных функциональных групп, следующее при необходимости, к реакционной образующих ковалентные связи с носителем смеси добавляют воду, нейтрализуют, экстрагируют эфиром или дихлорметаном, разделяют фаВ качестве полимерного носителя могут исзы, осушают органическую фазу сульфатом напользоваться известные в химии пептидов твертрия, фильтруют, упаривают и подвергают очистке дые полимерные фазы, предпочтительно с гидметодом хроматографии на силикагеле и/или перофильными свойствами, например, сшитые рекристаллизации RT - время задержки (минут) полисахара, такие как целлюлоза, сефароза или при жидкостной хроматографии высокого давлеSephadex®, акриламид, полимеры на основе пония (HPLC) составляло для системы А лиэтиленгликоля или Tentakelpolymere® Lichrosorb® RP select В (250 х 4, 5мкм) или систеДля использования в качестве анкерных мы В Lichrosorb® RP 18 (250 х 4, 5мкм), растворифункциональных групп, образующих связи с потель (система А) 0,3% TFA в воде, градиент конлимерным носителем, пригодны предпочтительно центрации изопропанола 0 - 80% об , 50мин при линейные алкиленовые цепочки, содержащие 2 скорости подачи 1 мл/мин Детектирование осуще12 атомов С, одним концом связанные непосредствляли на длине волны 215нм Растворитель ственно с полимером, на втором конце которых (система В) элюент А - 0,1% TFA вводе, элюент В находится функциональная группа, которая может - 0,1% TFA в смеси ацетонитрил / вода (9 1), граобразовать связь с функциональной боковой групдиент 20 - 90% В, 50мин при скорости подачи пой данного пептида, например, гидроксильная, 1 мл/мин М + = молекулярный пик в масс-спектре, аминогруппа, меркаптогруппа, малеинимидогрупполученный по методу "бомбардировки быстрыми па или -СООН-группа атомами" (FAB), причем приведенные значения При этом пептид непосредственно или с помолекулярного веса на единицу молекулярной мощью второй анкерной функциональной группы массы превышают расчетные значения может быть связан с анкерной группой полимера Кроме того, боковые цепи определенных амиПример 1 нокислотных остатков, входящих в состав пептида Раствор 0,4г H-Arg(Mtr)-Gly-Btd-ONa [наприформулы I, могут быть модифицированы таким мер, полученный из FMOC-Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd-Oобразом, чтобы они содержали группы, которые Wang, где -O-Wang обозначает полученный по могут образовать связи с анкерными группами модифицированной методике Mernfield остаток 4полимера, например, NH2, SH-, ОН- или СООНоксиметил-феноксиметил-полистирольной смолы, группы путем проведения реакции отщепления группы FMOC пиперидином в DMF и отщепления смолы в Примерами аминокислотных остатков, бокоTFA / CH2CI2 (1 1)] в 15мл DMF разбавляют 85мл вые цепочки которых могут непосредственно высдихлорметана и прибавляют 50мг ІЧаНСОз После тупать в роли анкерных групп, являются, наприохлаждения на смеси сухого льда с ацетоном мер, Arg или Asp прибавляют 40мкл дифенилфосфорилазида ВыПримерами анкерных групп, которые могут держивают в течение 16 часов при комнатной образовывать связи со свободными КН2-группами, температуре раствор концентрируют Концентрат являются такие группы, как, например, -СО-СпН2пфильтруют (колонки Sephadex G10 в смеси изоNH2, -СО-СпН2п-ОН, -CO-CnH2n-SH или -СО-СпН2ппропанол / вода 8 2) и подвергают очистке по СООН группы, где п = 2 - 12, причем длина алкиобычной методике жидкостной хроматографии ленового радикала не имеет особого значения и, в высокого давления Получают цикло-(Агд(М1т)-С1уданном случае, он может быть заменен соответAsp-Btd) ствующим арильным или алкиларильным радикалом По аналогичной методике проведения реакции Концевыми анкерными группировками, котоциклизации получают соответствующие линейные рые может образовывать связи со свободной кипептиды слотной группой, являются, например, -СО-СпН2п4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu), SH, -CO-CnH2n-OH, -CO-CnH2n-NH2, -CO-CnH2n4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu), СООН, -NH-CnH2n-SH, -NH-CnH2n-OH, -NH-CnH2n4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S,S)cnHpo-Pro-Leu), NH2 или -NH-CnH2n-COOH, где n и алкиленовая 4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph1), цепочка имеют значения, определенные в преды4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph2), дущем абзаце 4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Act), Материалы для очистки интегринов методом 4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd-Val), аффинной хроматографии могут успешно быть 4Hmo-(Arg(Mtr)-DAIa-Asp-Btd-Val), получены при проведении процесса в условиях, 4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Aha), известных специалистам и обычно используемых 4Hmo-(Arg(Mtr)-DAIa-Asp-Btd), для проведения реакции конденсации аминокис4Hmo-(Arg(Mtr)-DAIa-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu), лот, и указанных выше при описании синтеза со4HKno-(Aig(Mtr)-DAIa-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu), единений формулы I 4Hmo-(Arg(Mtr)-DAIa-Asp-(S,S)cnHpo-Pro-Leu), В случае тиолсодержащих анкерных групп мо4HKno-(Arg(Mtr)-DAIa-Asp-Biph1), 13 46699 14 MHmo-(Arg(Mtr)-DAIa-Asp-Biph2), ной температуры, отделяют на фильтре твердую фазу и дважды промывают примерно 10мл буMHmo-(Arg(Mtr)-D Ala-Asp-Act) ферного раствора с рН7, после чего три раза проПример 2 мывают 10мл воды Получают цикло-(Агд(М1т)-С1уРаствор 0,28г MHmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd) [поAsp(0(CH2)3-CO-NH-(CH2)3-nonHMep)-Btd) лученный по реакции циклизации в соответствии с Примером 1] в 8,4мл TFA, 1,7мл дихлорметана и Пример 5 0,9мл тиофенола выдерживают в течение 4 часов По аналогии с Примером 2 путем проведения при комнатной температуре, после чего конценреакции отщепления Mtr-группы из циклотрируют и после разбавления водой подвергают (Arg(Mtr)-Gly-Asp(O(CH2)3-CO-NH-(CH2)3-nonHMep)сушке вымораживанием После гель-фильтрации Btd) получают 4Hmo-(Arg-Gly-Asp(O(CH2)3-CO-NHс использованием Sephadex G10 (уксусная кисло(CH2)3-nonHMep)-Btd) та / вода 1 1) и последующей очистки методом Пример 6 препаративной жидкостной хроматографии высоАналогично методике, описанной в Примере 4, кого давления по описанной методике получают путем проведения реакции конденсации Полимер+ 4Hmo-(Arg-Gry-Asp-Btd), RT = 13,2 М 527 О(СН2)з-г\1Н2 (выпускается промышленно) и цикло(Arg-Gly-Asp-Biph1) получают следующую полиАналогично получают мерную фазу (Arg-Gly-Asp-(NH-(CH2)3-OH34Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu)Полимер)-Вірп1) 4Hmo-(Arg-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu), RT = 4,8, М+525, Аналогично путем проведения реакции кониз 4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu)денсации цикпo-(Arg-Gry-Asp-Btd-Val) и Полимер4Hmo-(Arg-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu), RT = 6,3, O(CH2)3-NH2 получают (Arg-Gly-Asp-(NH-(CH2)3-OM+525, nonHMep)-Btd-Val) из цикло-(Агд(М1т)-С1у-А5р-(3,3)спиро-РгоПриведенные ниже Примеры описывают фарLeu)^HKno-(Arg-Gly-Asp-(S,S)cnHpo-Pro-l_eu), RT = мацевтичские коомпозиции 14,6, М+565, Пример А Стеклянные ампулы для инъекций из цикло-(Агд(М1:г)-СІу-А5р-Вірп1)-цикло-(АгдРаствор ЮОг одного из циклопептидов форGly-Asp-Biphl), RT= 20,7, M+538, мулы I и 5г вторичного кислого фосфата натрия в Зл бидистиллированной воды доводят до рН6,5 из цикло-(Агд(М1т)-СІу-А5р-Вірп2)-цикло-(Агд2Н-раствором соляной кислоты, фильтруют в стеGly-Asp-Biph2), RT= 20,8, M+538, рильных условиях, разливают в стеклянные ампуиз qHKno-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Act)-LiHKno-(Arg-Glyлы для инъекций, в стерильных условиях лиофиAsp-Act), RT= 14,3, M+547, лизируют и запаивают ампулы Каждая из циклo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd-Val)-циклo-(Argстеклянная ампула для инъекций содержит 5мг Gly-Asp-Btd-Val), из 4Hmo-(Arg(Mtr)-DAIa-Asp-Btdактивного соединения Val)-4Hmo-(Arg-DAIa-Asp-Btd-Val), из qHmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Aha)-qHmo-(ArgПример В, Суппозитории Gry-Asp-Aha) Растапливают смесь 20г активного соединения формулы I со ЮОг соевого лецитина и 1400г Пример 3 масла какао, разливают в формы и дают остыть 80мг L(Hmo-(Arg-Cly-Asp-Btd) пять-шесть раз Каждый суппозиторий содержит 20мг активного растворяют в 0,1 М растворе HCI, после каждого соединения растворения подвергая сушке вымораживанием После заключительной очистки методом жидкостПример С, Раствор ной хроматографии высокого давления получают Готовят раствор 1 г активного соединения MHmo-(Arg-Gly-Asp-Btd) x HCI формулы I, 9,38г NaH2PO4 х 2Н2О, 28,48г Na2HPO4 х 12Н2О, и 0,1 г бензалкониумхлорида в 940г бидиПо аналогичной методике получают стиллированной воды Устанавливают рН6,8, доиз L(Hmo-(Arg-Gly-Asp-Aha)-L(Hmo-(Arg-Glyводят объем раствора до 1л и стерилизуют расAsp-Aha) x HCI, твор облучением Полученный раствор может из L(Hmo-(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)-L(Hmo-(Arg-Glyбыть использован в форме глазных капель Asp-Btd-Val) x HCI, из L(Hmo-(Arg-DAIa-Asp-Btd-Val)-L(Hmo-(ArgПример D Мазь DAIa-Asp-Btd-Val) x HCI, Смешивают 500мг активного соединения формулы I с 99,5г вазелина в антисептических из L(Hmo-(Arg-DAIa-Asp-Btd-Val) путем обраусловиях ботки уксусной кислотой - L(Hmo-(Arg-DAIa-AspBtd-Val) x НзС-СООН, Пример Е Таблетки из L(Hmo-(Arg-Gly-Asp-Aha) путем обработки Смесь ЮОг циклопептида формулы I, 1кг лак0,01Н раствором азотной кислоты - цикло-(Агдтозы, 600г микронизированной целлюлозы, 600г Gly-Asp-Aha)xHNO3 кукурузного крахмала, ЮОг поливинилпирролидона, 80г талька и Юг стеарата магния по обычной Пример 4 методике прессуют в таблетки таким образом, Для приготовления аффинной фазы суспенчтобы каждая таблетка содержала 10мг активного дируют 0,9г СІ-(СН2)з-СО-МН-(СН2)з-Полимер [посоединения лучают путем проведения реакции конденсации СІ-(СН2)з-СООН с І\ІН2-(СН2)з-Полимером] в 10мл Пример F Драже 0,1 М буферного раствора на сонове фосфата наПрессуют таблетки, как описано в Примере Е, трия с рН7 и прибавляют к нему при температуре после чего покрывают их по обычной методике 4°С 1 эквивалент 4Hmo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp(ONa)оболочкой из сахарозы, кукурузного крахмала, Btd) Перемешивают в течение 4 часов при равталька, траганта и красителя номерном нагреве реакционной смеси до комнатПример G Капсулы 15 46699 16 По обычной методике заполняют твердые жеFAB IC50 1 2 латиновые капсулы активным соединением форА R R + мулы I так, чтобы каждая капсула содержала 5мг аурз / VN (M + N) активного соединения Gly (S)-Gly[ANC-2] Leu 30 525 Пример Н Разбрызгиваемые композиции для ингаляции Gly Btd 40 527 Растворяют 14г активного соединения формуGly (R)Gly[ANC-2] Leu 0,2 525 лы І в Юл изотонического раствора NaCI и разливают раствор в обычные устройства для мелкокаGly Biph 200 538 пельного разбрызгивания, снабженные насосом Gly Biph 200 538 Раствор может впрыскиваться в рот или в нос Одно качание (примерно 0,1мл) соответствует Gly Act 1,9 482 дозе примерно 0,14мг Связывание витронектина (VN) с рецептором Gly|ANC-2|-Leu=2-(3-aMHHO-1 -пиррол ид-2определяли согласно методу, описанному Смитом онил)-4-метилпентановая кислота, и сотр в J Biol Chem , 265, 1267 - 71 (1990) Btd = 8-амино-4-тиапиперолидин-9-он-2ІСбб-значение (концентрация нмоль/л), сооткарбоксикислота, ветствующая 50%-ному ингибированию связываBiph = о-амино-метилбифенил-ония витронектина с рецептором), характеризует карбоксикислота, активность соединений формулы 1 Act = 2-аминометилтиофен-5-уксусная кислоUHmo-(Arg-A-Asp-R1-R2) (1) та ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71