Похідні піразолохіназоліну, спосіб одержання і застосування як інгібіторів кіназ

1. Похідне піразолохіназоліну, представлене формулою (Іа) або (Іb) C2 2 (19) 1 3 80763 4 NHR" або -N(OH)R", в якій R" означає атом водню 16. Спосіб за п. 15, в якому рак вибраний з групи, або лінійну або розгалужену C1-С4-алкільну групу; і що складається з карциноми, плоскоклітинної де A, R і R1 мають вищезгадані значення. карциноми, пухлин кровотворної тканини 7. Сполука формули (Іа) або (Іb) за п. 1, де X мієлоїдного або лімфоїдного походження, пухлин означає групу -S- і R2 означає групу, вибрану з мезенхімального походження, пухлин центральної NHR" або -N(OH)R", в якій R" означає атом водню і периферичної нервової системи, меланоми, або лінійну або розгалужену C1-С4-алкільну групу; і семіноми, тератокарциноми, остеосаркоми, де A, R і R1 мають вищезгадані значення. пігментної ксеродерми, кератоксантоми, 8. Сполука формули (Іb) за п. 1, де R, X і А мають фолікулярного раку щитовидної залози і саркоми вищезгадані значення, і R1 і R2 сполучені через Капоши. двовалентну групу -(CH2)n-NH-, в якій n має 17. Спосіб за п. 12, в якому проліферативне вищезгадані значення. захворювання клітин вибране з групи, що 9. Сполука формули (Іа) або (Іb) за п. 1, де А складається з доброякісної гіперплазії простати, означає групу, вибрану з -(СН2)2 -, -СН2 -С(СН3)2спадкового аденоматозного поліпозу, або -С(СН3)2-СН2-. нейрофіброматозу, псоріазу, проліферації гладких 10. Сполука формули (Іa) або (Іb) за п. 1, де будьклітин стінок судин, пов'язаної з атеросклерозом, яка з вищезазначених груп R1, R', R2, R" і R'" пневмофіброз, артрит, гломерулонефрит і необов'язково заміщена в будь-якому з вільних післяопераційний стеноз і рестеноз. положень однією або декількома групами, 18. Спосіб за п. 12, який забезпечує інгібування незалежно вибраними з галогену, нітро, оксо (=O), ангіогенезу і метастазу пухлин, а також лікування ціано, азидо, алкілу, поліфторвмісного алкілу, відторгнення трансплантата органів і реакції гідроксіалкілу, арилу, арилалкілу, гетероциклілу, «трансплантат проти хазяїна». гетероциклілалкілу, циклоалкілу, алкіларилу, 19. Спосіб за п. 12, який забезпечує лікування алкілгетероциклілу, гідрокси, алкокси, або профілактику алопеції, викликаної поліфторвмісного алкокси, арилокси, радіотерапією або хіміотерапією. арилалкілокси, гетероциклілокси, 20. Спосіб за п. 12, який включає додатково гетероциклілалкілокси, метилендіокси, вплив на ссавця, який потребує лікування, алкілкарбонілокси, алкілкарбонілоксіалкілу, радіотерапії або хіміотерапії в поєднанні з арилкарбонілокси, карбокси, алкоксикарбонілу, щонайменше одним цитостатичним або алкоксикарбонілалкілу, арилоксикарбонілу, цитотоксичним засобом. циклоалкілоксикарбонілу, аміно, аміноалкілу, 21. Спосіб за п. 12, в якому ссавцем, який алкіламіноалкілу, алкіламіноалкілокси, уреїдо, потребує лікування, є людина. алкіламіно, діалкіламіно, ариламіно, діариламіно, 22. Спосіб інгібування активності кінази Aurora-2, форміламіно, алкілкарбоніламіно, в якому приводять у контактування вказану кіназу арилкарбоніламіно, гетероциклілкарбоніламіно, з ефективною кількістю сполуки, визначеної в п. 1. алкоксикарбоніламіно, алкоксііміно, 23. Спосіб інгібування активності циклінзалежних алкілсульфоніламіно, арилсульфоніламіно, кіназ, в якому приводять у контактування вказаних формілу, алкілкарбонілу, арилкарбонілу, кіназ з ефективною кількістю сполуки, визначеної в гетероциклілкарбонілу, циклоалкілкарбонілу, п. 1. гетероциклілкарбонілу, амінокарбонілу, 24. Спосіб одержання сполук формули (І), отже, алкіламінокарбонілу, діалкіламінокарбонілу, який охоплює сполуки формули (Іа) або (Іb), ариламінокарбонілу, алкілсульфонілу, визначених в п. 1, або їх фармацевтично арилсульфонілу, гетероциклілсульфонілу, прийнятних солей, в якому проводять: аміносульфонілу, алкіламіносульфонілу, (1) якщо А являє собою групу -(СН2)2-: діалкіламіносульфонілу, арилтіо і алкілтіо. ст. 1) взаємодію 2-етокси-2-циклогексен-1-ону з 11. Сполука формули (Іа) або (Іb) за п. 1, вибрана діетилоксалатом в присутності (бісіз сполук, визначених в таблицях VI-XXI, можливо, триметилсиліл)аміду літію [LiN(TMS)2] з у вигляді фармацевтично прийнятної солі. одержанням сполуки формули (II) 12. Спосіб лікування проліферативних захворювань клітин, викликаних і/або пов'язаних із зміненою активністю протеїнкінази, шляхом COOEt введення ссавцеві, який потребує лікування, EtO ефективної кількості похідного піразолохіназоліну, O представленого формулою (Іа) або (Іb), як O , (II) зазначено в п. 1. і його обробку похідним гідразину формули (III) 13. Спосіб за п. 12, в якому активність R1-NHNH2, (III) протеїнкінази являє собою активність Aurora-2. де R1 має вищезгадані значення, згідно з 14. Спосіб за п. 12, в якому активність робочими умовами будь-якої зі стадій 2а, 2b або протеїнкінази являє собою активність кінази, 2с; залежної від клітинного циклу. ст. 2а) в присутності нижчого спирту з одержанням 15. Спосіб за п. 12, в якому проліферативне суміші сполук формули (IVa) і (IVb) захворювання клітин вибране з групи, що складається з раку, хвороби Альцгеймера, вірусних інфекцій, аутоімунних захворювань і нейродегенеративних розладів. 5 COOEt COOEt N R1 N N N R1 O 80763 6 означає метил, X означає -О- і R2 означає етокси; і, можливо, їх перетворення на інші похідні формули (І); (2) якщо А являє собою групу С(СН3)2-(СН2)2-: ст. 5) взаємодію 2-метокси-4,4-диметил-2циклогексен-1-ону з діетилоксалатом в присутності [LiN(TMS)2] з одержанням сполуки формули (VIII) Me Me O (IVa) , (IVb) , де R1 визначений вище, і розділення суміші на окремі сполуки (IVa) і (IVb); ст. 2b) в присутності оцтової кислоти з одержанням сполуки формули (IVa); ст. 2с) алкілування сполуки формули (IVa), одержаної на стадії 2а або 2b, в якій R1 означає водень, сполуками формули (IVc) R1Y, (IVc) де Y означає відповідну відхідну групу, вибрану з мезилу, тозилу або галогену, з одержанням суміші сполук формули (IVa) і (IVb), в яких R1 визначений вище, і розділення вказаної суміші на сполуки (IVa) і (IVb); ст. 3) взаємодію сполуки формули (IVa), одержаної на будь-якій зі стадій 2а, 2b або 2с, або формули (IVb), одержаної на стадіях 2а або 2с, з ди-третбутилацеталем диметилформаміду з одержанням сполуки формули (Va) або (Vb) COOEt COOEt Me Me N MeO N N N N MeO N R1 R1 , (Vb) , (Va) де R1 визначений вище; і взаємодію сполуки формули (Va) або (Vb) згідно з будь-якою з альтернативних стадій 4а, 4b або 4с; ст. 4а) з гуанідином з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb) O A N R X N N R R2 N R1 O A X N (Ia) , N R2 N N R1 (Ib) , де R-X- означає аміно, R2 означає етоксигрупу і R1 визначений вище; і, можливо, їх перетворення на інші похідні формули (І); ст. 4b) з похідним гуанідину формули (VI) R-NH-C(=NH)NH2, (VI) де R визначений вище, з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb), де R і R1 мають вищезгадані значення, X означає NH-, і R2 означає етокси; і, можливо, їх перетворення на інші похідні формули (І); ст. 4с) з алкілізотіосечовиною формули (VII) R-S-C(=NH)NH2, (VII) де R визначений вище, з одержанням сполуки формули (Іa) або (Іb), де R і R1 мають вищезгадані значення, X означає -S- і R2 означає етокси; і, можливо, їх перетворення на інші похідні формули (І); ст. 4d) з метилізосечовиною з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb), де R1 визначений вище, R COOEt MeO O O , (VIII) ст. 6) взаємодію сполуки формули (VIII) з похідним гідразину формули (III) згідно з будь-якою з попередніх стадій 2а або 2b, з одержанням сполуки формули (ІХа) або (ІХb) COOEt COOEt Me Me N N R1 O R1 N Me N O , (IXb) (IXa) , де R1 вказаний вище; ст. 7) взаємодію сполуки формули (ІХa) або (ІХb) з етилформіатом в основних умовах з одержанням сполуки формули (Хa) або (Хb) COOEt COOEt Me Me N OH N R1 O R1 N Me N OH O , (Xb) (Xa) , ст. 8) взаємодію сполуки формули (Хa) або (Хb) з похідним гуанідину формули (VI) з одержанням сполуки формули (Іa) або (Іb) Me Me Me N O R X N X N O R N N Me N N R2 R2 R1 (Ia) , R1 N (Ib) , де R і R1 мають вищезгадані значення, X означає NH- і R2 означає етокси; і, можливо, їх перетворення на інші похідні формули (І); (3) якщо А являє собою групу -СН2-С(СН3 )2-: Me Me COOEt MeO O O , (XI) 7 80763 8 ст. 9) взаємодію 2-метокси-5,5-диметил-2COOEt циклогексен-1-ону з діетилоксалатом в присутності гідриду натрію з одержанням сполуки формули (XI); N ст. 10) взаємодію сполуки формули (XI) з похідним N Tr гідразину формули (III) згідно з будь-якою з попередніх стадій 2а або 2b, з одержанням N O , (XV) сполуки формули (ХIIa) або (ХIIb) Me Me Me Me COOEt Me ст. 15) взаємодію сполуки формули (XV) з Me COOEt відповідним похідним гуанідину формули (VI), згідно зі стадією 4b, з одержанням сполуки N R1 формули (Іa) або (Іb) N N N N R1 O R O N COOEt N H , N N (XIIb) (XIIa) , де R1 вказаний вище; Tr ст. 11) взаємодію сполуки формули (ХIIа) або (ХПb) з ди-трет-бутилацеталем (Ia) або (Ib) , диметилформаміду з одержанням сполуки де R вказаний вище; X означає NH, R1 означає формули (ХIIIа) або (ХІІІb) тритил і R2 означає етокси; Me Me Me ст. 16) взаємодію вищезазначеної сполуки Me COOEt формули (Іa) або (Іb) в кислих умовах з COOEt одержанням відповідної сполуки формули (Іa) або N Me (Іb), де R1 являє собою водень; Me N N N N Me O R1 N ст. 17) взаємодію вищезазначеної сполуки Me O формули (Іa) або (Іb) з відповідним алкілуючим R1 агентом формули (XVI) в присутності трет, , (XIIIb) (XIIIa) бутилату літію ст. 12) взаємодію сполуки формули (ХIIIа) або Br-(CH2)n-NH-BOC, (XVI) (ХІІІb) з похідним гуанідину формули (VI) з де n означає 2 або 3, з одержанням сполуки одержанням сполуки формули (Іa) або (Іb) формули (Іb) Me Me Me N R X O X N N N , N R N N N R2 (Ia) R1 Me O N R N H R2 R1 N O COOEt N N (Ib) , де R і R1 мають вищезгадані значення, X означає NH- і R2 означає етокси; і, можливо, перетворення їх на інші похідні формули (І); (4) якщо в формулі (Ib) R1 безпосередньо зв'язаний з R2 таким чином, що утворюється тетрациклічна структура: ст. 13) взаємодію сполуки формули (IV), в якій R1 означає водень, одержаної на стадії 2 способу, з трифенілметилхлоридом з одержанням сполуки формули (XIV) COOEt N N ( ) n boc , де n і R мають вищезгадані значення; ст. 18) взаємодію вищезазначеної сполуки формули (Іb) в кислих умовах для перетворення трет-бутоксикарбоніламіногрупи в аміногрупу (зняття захисту) і взаємодію з карбонатом цезію (CS2CO3) з одержанням будь-якої з двох сполук формули (Іb) N Tr , (XIV) де Тr означає тритил (трифенілметил); ст. 14) взаємодію сполуки формули (XIV) з дитрет-бутилацеталем диметилформаміду, згідно зі стадією 3, з одержанням сполуки формули (XV) (Ib) HN R N H N O R N N (Id; n =2) N NH , N H O N N N (Id; n = 3) NH , де R вказаний вище, і, можливо, перетворення на інші похідні формули (І); (5) якщо R2 являє собою об'ємну групу: 9 80763 10 ст. 19) взаємодію 2-етокси-2-циклогексенону з дист. 23) де R2 означає етокси, на сполуки формули трет-бутилацеталем диметилформаміду, згідно зі (Іa) або (Іb), де R2 означає аміногрупу, обробкою стадією 3, з одержанням сполуки формули (XVII) гідроксидом амонію O Me Me O O N OEt N N R1 (XVII) ; ст. 20) взаємодію сполуки формули (XVII) з похідним формули (VII), згідно зі стадією 4с, з одержанням сполуки формули (XVIII) OEt OEt N R1 ; ст. 24) де R2 означає етокси, на сполуки формули (І), де R2 означає групу NHR", R" визначений вище, обробкою аміном формули R"-NH2 (XXII) O O N S R N N OEt N N R1 , де R визначений вище; і подальшу обробку в кислих умовах з одержанням сполуки формули (XIX) O O N O OEt N N N R1 (XIX) ; ст. 21) взаємодію сполуки формули (XIX) із сполукою формули (XX) O O R2 Et ; ст. 26) де R2 означає OH, на сполуки формули (I), де R2 означає групу –NR"R'" або -N(OH)R", a R" і R'" визначені вище, шляхом реакції з похідним формули (XXIII) або (XXIV) R"R'"NH, (XXIII) R"NHOH, (XXIV) в основних умовах і в присутності відповідного конденсуючого агента O (XX) , де R2 являє собою об'ємну групу, з одержанням сполуки формули (XXI) O O N R2 R N OH N R1 O S ; ст. 25) де R2 означає етокси, на сполуки формули (1), де R2 означає групу -ОН, шляхом кислотного або основного гідролізу N S NHR'' N R1 (XVIII) R NH2 N O (XXI) ст. 22) взаємодію сполуки формули (XXI) з похідним гідразину формули (III), згідно зі стадією 1 способу, з одержанням сполуки формули (І), де R і R1 мають вищезгадані значення, X означає -S- і R2 означає об'ємну групу; і, можливо, їх перетворення на інші похідні формули (І). 25. Спосіб за п. 24, в якому сполуки формули (І), які одержують на будь-якій зі стадій 4а, 4b, 4с, 8, 12, 13, 18 і 22, перетворюють на інші сполуки формули (І), при цьому в способі проводять перетворення сполук формули (І): N N O OEt N R1 NR''R''' N R1 ; ст. 27) де R означає водень і X означає -NH-, на сполуки формули (І), де R означає відмінний від водню замісник, як визначено вище, і X означає CONH-, реакцією із сполукою формули R-COCl (XXV) O N H2N N H R N N N ; ст. 28) де R означає водень і X означає -NH-, на сполуки формули (І), де R означає замісник, відмінний від водню, як визначено вище, і X означає NH-CO-NH-, реакцією з ізоціанатом формули R-NCO (XXVI) N H2N O N R N H N N H N ; 11 80763 12 ст. 29) де R означає водень і X означає -NH-, на N N N O Me сполуки формули (І), де R означає арил і X R Me S N O N N S ; означає -NH-, спочатку перетворенням аміногрупи на йод дією ізоамілнітриту і дийодметану або O йодиду цезію в присутності йоду і CuI і потім взаємодією одержаного йодпохідного з ст. 33а) де R означає метил і X означає -О-, на ариламіном формули R-NH2 (XXVII) в присутності сполуки формули (І), де R означає іншу, не ацетату паладію і (2,2'-біс(дифенілфосфіно))-1,1’метальну групу, і X означає -О-, спочатку бінафталіну (BINAP) перетворенням МеО-групи на НО-, потім N взаємодією одержаної сполуки з N N R трифторметансульфорилуючим агентом для H2 N N N N N I ; синтезу відповідного трифторметансульфонату і H подальшою реакцією останнього із сполукою формули R-OH (XXX) ст. 29а) де R означає водень і X означає -NH-, на O N сполуки формули (І), де R означає алкіл, N N O циклоалкіл, циклоалкілалкіл, арилалкіл, S N O N O N HO FC гетероцикліл, гетероциклілалкіл і X означає -NH-, спочатку перетворенням аміногрупи на йод, як N описано на попередній стадії 29, і потім R взаємодією одержаного йодпохідного з алкілом, N O ; циклоалкілом, циклоалкілалкілом, арилалкілом, ст. 33b) де R означає метил і X означає -О-, на гетероциклілом або гетероциклілалкіламіном сполуки формули (І), де R означає необов'язково формули RNH2 (XXVII), де R визначений вище; заміщену алкільну, циклоалкільну, ст. 30) де R означає водень і X означає -NH-, на гетероциклільну, циклоалкілалкільну, сполуки формули (І), де R означає арил і X гетероциклілалкільну групу і X означає -NH-, означає простий зв'язок, спочатку перетворенням спочатку перетворенням МеО-групи на НО-, і потім аміногрупи на йод, як описано на попередній стадії взаємодією одержаної сполуки з 29, і потім взаємодією одержаного йодпохідного з трифторметансульфорилуючим агентом для арилбороновою кислотою формули R-B(OH)2 синтезу відповідного трифторметансульфонату і (XXVIII) в присутності похідного паладію подальшою його реакцією з аміном формули RN NH2 (XXVII), де R означає необов'язково заміщену N N алкільну, циклоалкільну, гетероциклільну, H2 N N N N R I ; циклоалкілалкільну, арилалкільну або гетероциклілалкільну групу ст. 31) де R означає водень і X означає -NH-, на сполуки формули (І), де R означає арилметил і X O N N N O означає простий зв'язок, взаємодією з S N O N O N HO FC арилальдегідом формули R-CHO (XXIX) в присутності ціаноборгідриду натрію (NaBH3CN) 3 3 H 2N N N N R N R N H N N H ; ст. 32) де R означає метил і X означає -S-, на сполуки формули (І), де R означає необов'язково заміщену алкільну, циклоалкільну, гетероциклільну, циклоалкілалкільну, арилалкільну або гетероциклілалкільну групу, спочатку перетворенням RS-групи на RSO2- в окиснювальних умовах і потім взаємодією одержаного сульфонільного похідного з аміном формули R-NH2 (XXVII), де R означає необов'язково заміщену алкільну, циклоалкільну, гетероциклільну, циклоалкілалкільну, арилалкільну або гетероциклілалкільну групу N Me S Me N N O N S N R N H N ; ; COOEt COOEt O ст. 33) де R означає метил і X означає -S-, на сполуки формули (І), де R означає групу, відмінну від метальної, і X означає -О-, спочатку перетворенням RS-групи на RSO2-, як на стадії 32, і потім взаємодією одержаного сульфонільного похідного із сполукою формули R-OH (XXX) N ст. 33 с) де R означає метил і X означає -О-, на сполуки формули (І), де R означає арил і X означає -NH-, спочатку перетворенням МеО-групи на -ОН, потім взаємодією одержаної сполуки з трифторметансульфорилуючим агентом для синтезу відповідного трифторметансульфонату і подальшою його реакцією з аміном формули RNH2 (XXVII), де R означає необов'язково заміщений арил, в присутності ацетату паладію і BINАР; ст. 34) де А означає групу -(СН2)2-, на сполуки формули (І), де А означає групу –CH=CH-, дегідруванням в присутності Pd або Pt каталізатора. 26. Сполука формули (Va) або (Vb), як визначено на ст. 3 п. 24, Me Me N N MeO N N MeO R1 (Va) , (Vb) N N R1 13 80763 14 де R1 означає атом водню або необов'язково двовалентну групу (CH2)n -NH-, зв'язану з R2, де n заміщену групу, вибрану з лінійного або означає 2 або 3; розгалуженого C1-С6-алкілу, С3-С6-циклоалкілу, R2 означає групу, вибрану з -NR"R'", -N(OH)R", арилу, арилалкілу, гетероциклілу або OR" або -R", де R" і R"' означають незалежно гетероциклілалкілу. водень або необов'язково заміщену групу, вибрану 27. Бібліотека двох або більше сполук формули з лінійного або розгалуженого C1-С6-алкілу, С3-С6(Іа) або (Іb) циклоалкілу або циклоалкілалкілу, арилу, O арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу, O A A N N або R" і R'" разом з атомом азоту, з яким вони R R2 R R2 N X зв'язані, можуть утворювати 5-6-членну X N N N N N гетероарильну або гетероциклільну групу, яка R1 необов'язково містить один додатковий (Ib) , R1 (Ia) , гетероатом, вибраний з N, О або S; в яких А означає двовалентну групу, вибрану з -СН2-, R означає водень або необов'язково заміщену (СН2)2-, -СН2-С(СН3)2-, С(СН3)2-СН2- або -СН=СН -; групу, вибрану з аміно, лінійного або або їх фармацевтично прийнятних солей. розгалуженого C1-С6-алкілу, С3-С10-циклоалкілу, 28. Фармацевтична композиція, яка містить арилу, арилалкілу, гетероциклілу або терапевтично ефективну кількість похідного гетероциклілалкілу; піразолохіназоліну формули (Іа) або (Іb) за п. 1 і X означає простий зв'язок або двовалентний щонайменше один фармацевтично прийнятний радикал, вибраний з -NR'-, -CONR'-, -NH-CO-NH-, наповнювач, носій і/або розріджувач. О-, -S- або -SO2-, де R' означає водень або 29. Фармацевтична композиція за п. 28, яка необов'язково заміщену групу, вибрану з лінійного додатково містить один або декілька або розгалуженого C1-С6-алкілу, С3-С6хіміотерапевтичних агентів. циклоалкілу, арилу, арилалкілу, гетероциклілу або 30. Продукт або набір, який містить сполуку гетероциклілалкілу, або R і R' разом з атомом формули (Іа) або (Іb) за п. 1 або їх фармацевтичні азоту, з яким вони зв'язані, можуть утворювати 5композиції, як визначено в п. 28, і один або 6-членну гетероарильну або гетероциклільну декілька хіміотерапевтичних агентів, у вигляді групу, яка необов'язково містить один додатковий комбінованого препарату для одночасного, гетероатом, вибраний з N, О або S; роздільного або послідовного застосування при R1, зв'язаний з будь-яким атомом азоту протираковій терапії. піразольного циклу відповідно до формул (Іа) або 31. Сполука формули (Іa) або (Іb) за п. 1 для (Іb), являє собою атом водню або необов'язково застосування як лікарський засіб. заміщену групу, вибрану з лінійного або 32. Застосування сполуки формули (Іa) або (Іb) за розгалуженого C1-С6-алкілу, С3-С6-циклоалкілу, п. 1 для виготовлення лікарського засобу з арилу, арилалкілу, гетероциклілу або протипухлинною активністю. гетероциклілалкілу, або в формулі (Ib) R1 означає Даний винахід належить до похідних піразолохіназоліну, до способу їх одержання, фармацевтичних композицій, які їх містять, і їх застосування як терапевтичних агентів, особливо для лікування раку і захворювань, пов'язаних з проліферацією клітин. Деякі цитотоксичні лікарські засоби, такі, наприклад, як фторурацил (5-FU), доксорубіцин і камптотецини, ушкоджують ДНК або впливають на клітинні шляхи метаболізму, і тому в багатьох випадках спричиняють побічне блокування клітинного циклу. Отже, викликаючи необоротні ушкодження як нормальних, так і пухлинних клітин, зазначені агенти призводять до значної токсичності і побічних ефектів. У зв'язку з цим потрібні сполуки, здатні діяти як високоспецифічні протипухлинні агенти за рахунок селективного пригнічення пухлинних клітин і апоптозу, ефективність яких порівнянна з ефективністю лікарських засобів, що є в цей час, а токсичність нижче. Добре відомо, що прогресія клітинного циклу керується рядом регуляторів контрольних точок, інакше званих точками рестрикції, які регулюються сімейством ферментів, відомих як циклінзалежні кінази (cdk). У свою чергу, самі cdk регулюються на багатьох рівнях, таких, наприклад, як скріплення з циклінами. Узгоджені активація і інактивація різних комплексів циклін/cdk необхідні для нормальної прогресії клітинного циклу. Як критичні G1-S, так і G2-M трансляції регулюються стимуляцією активності різних циклін/cdk. Вважають, що в G1, як циклін D/cdk4, так і циклінЕ/сdk2 медиюють початок S-фази. Прогресія через S-фазу вимагає активності комплексу циклін A/cdk2, хоч для початку мітозу потрібна активація комплексів циклін A/cdc2 (cdkl) і циклін B/cdc2. Для довідки загального характеру по циклінам і циклінзалежним кіназам див., наприклад, [Kevin R. Webster et al, in Exp. Opin. Invest. Drugs, 1998, Vol. 7 (6), 865-887]. У пухлинних клітинах регулятори контрольних точок дефектні, що частково зумовлено припиненням регулювання активності cdk. Наприклад, в пухлинних клітинах спостерігається змінена експресія цикліну Ε і циклінзалежних кіназ і показано, що делеція р27 КІР гена інгібітору cdk у мишей призводить в результаті до підвищення числа випадків раку. 15 80763 16 включаючи астроцитому, нейробластому, гліому і Збільшення доказів підкріплює уявлення про шванному; інші пухлини, включаючи меланому, те, що циклінзалежні кінази є ферментами, семіному, тератокарциному, остеосаркому, лімітуючими швидкість прогресії клітинного циклу і ксеродерму пігментну, кератоксантому, як такі являють собою молекулярні мішені для фолікулярний рак щитовидної залози і саркому терапевтичного втручання. Конкретно, пряме Капоши. інгібування кіназної активності комплексів Завдяки ключовій ролі кіназ клітинного циклу, cdk/циклін має бути корисним для рестрикції таких як Aurora або cdks, в регуляції проліферації нерегульованої проліферації пухлинних клітин. клітин, вказані похідні піразолохінолінів також Додатковими протеїнкіназами, про які відомо в застосовні в лікуванні безлічі проліферативних даній галузі техніки, що вони залучені до росту захворювань клітин, таких, як, наприклад, пухлинних клітин, є Aurora кінази, конкретно доброякісна гіперплазія простати, спадковий Aurora-2. аденоматоз, поліпоз, нейрофіброматоз, псоріаз, Виявлено, що Aurora-2 надпродукується в ряді проліферація гладких клітин стінок судин, пухлин різного тину. її карта генного локусу при пов'язана з атеросклерозом, пневмофіброз, 20q13, хромосомна область часто артрит, гломерулонефрит і післяопераційний екстракопійована при багатьох видах раку, що стеноз і рестеноз. включають рак молочної залози [Cancer Res. 1999, Сполуки за винаходом можуть бути застосовні 59 (9) 2041-4] і товстої кишки. в лікуванні хвороби Альцгеймера, про це свідчить Ампліфікація 20q13 відповідає поганому той факт, що cdk5 бере участь у фосфорилуванні прогнозу у хворих на рак молочної залози без tau-протеїну [J. Biochem. 117, 741-749, 1995]. ураження лімфатичних вузлів, а підвищена Сполуки за даним винаходом як модулятори експресія Aurora-2 свідчить про поганий прогноз і апоптозу можуть також бути застосовні в лікуванні зменшену тривалість життя хворих на рак ракових захворювань, вірусних інфекцій, в сечового міхура [J. Natl. Cancer Inst, 2002, 94 (17) профілактиці розвитку СНІД у ВІЛ-інфікованих 1320-9]. Для довідки загального характеру про осіб, аутоімунних захворювань, роль Aurora-2 в аномальній функції центросом при нейродегенеративних розладів. ракових захворюваннях див. також [Molecular Сполуки за винаходом можуть бути застосовні Cancer Therapeutics, 2003, 2, 589-595]. для інгібування розвитку кровоносних судин і Задачею винаходу є одержання сполук, які метастазування пухлини, а також в лікуванні застосовні в лікуванні захворювань, пов'язаних з відторгнення трансплантатів органів і повторної проліферацією клітин, викликаних і/або пов'язаних імунної хвороби. із зміненою активністю протеїнкінази, наприклад, Сполуки за винаходом можуть також діяти як інгібуючою активністю Aurora 2, і активністю кінази, інгібітори інших протеїнкіназ, наприклад, залежної від клітинного циклу. Ще однією задачею протеїнкінази С в різних ізоформах: Met, РАК-4, винаходу є одержання сполук, які володіють РАК-5, ZC-1, STLK-2, DDR-2, Bub-1, PLK, Chk1, інгібуючою активністю у відношенні протеїнкіназ. Chk2, HER2, rafl, MEK1, МАРК, EGF-R, PDGF-R, Автори даного винаходу виявили, що деякі FGF-R, IGF-R, PI3K, weel кінази, Src, Abl, Akt, піразолохіназоліни володіють інгібуючою МАРК, ILK, MK-2, IKK-2, Cdc7, Nek- i, отже, бути активністю у відношенні протеїнкіназ, і, отже, ефективними в лікуванні захворювань, пов'язаних застосовні в терапії як протипухлинні засоби і не з іншими протеїнкіназами. володіють токсичністю і побічною дією, Сполуки за винаходом придатні для лікування вищезазначеними недоліками, що асоціюються з і профілактики алопеції, викликаної радіотерапією наявними протипухлинними засобами. Більш або хіміотерапією. конкретно, піразолохіназоліни за винаходом Таким чином, перший варіант здійснення застосовні в лікуванні безлічі видів раку, винаходу належить до способу лікування включаючи (але не обмежуючись ними) проліферативних захворювань клітин, викликаних карциноми, такі, як карцинома сечового міхура, і/або пов'язаних із зміненою протеїнкіназною молочної залози, товстої кишки, нирок, печінки, в активністю, наприклад, активністю Aurora-2 і тому числі дрібноклітинний рак легені, рак активністю кінази, залежною від клітинного циклу, стравоходу, жовчного міхура, яєчників, шляхом введення ссавцем, які потребують підшлункової залози, шлунка, шиї, щитовидної лікування, ефективної кількості похідного залози, простати, і шкіри, включаючи піразолохіназоліну, представленого формулою (Іа) плоскоклітинну карциному, пухлини кровотворної або (Іb) тканини мієлоїдного або лімфоїдного походження, включаючи лейкемію, гостру лімфоцитну лейкемію, гостру лімфобластну лейкемію, Вклітинну лімфому, Т-клітинну лімфому, лімфому Ходжкіна, неходжкінську лімфому, волосатоклітинну лімфому і лімфому Буркета; пухлини кровотворних органів мієлоїдного походження, включаючи гостру і хронічну , мієлогенні лейкемії, мієлодиспластичний синдром і промієлоцитарну лейкемію, пухлини де мезенхімального походження, включаючи R означає водень або необов'язково заміщену фібросаркому і рабдоміосаркому; пухлини групу, вибрану з аміно, лінійного або центральної і периферичної нервової системи, 17 80763 18 розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С10-циклоалкілу, мезенхімального походження, пухлини циклоалкілалкілу, арилу, арилалкілу, центральної і периферичної нервової системи, гетероциклілу або гетероциклілалкілу; меланому, семіному, тератокарциному, X означає простий зв'язок або двовалентний остеосаркому, ксеродерму пігментну, радикал, вибраний з NR'-, -CONR'-, -NH-CO-NH-, кератоксантому, фолікулярний рак щитовидної О-, -S- або -SO2-, де R' означає водень або залози і саркому Калоши. необов'язково заміщену групу, вибрану з лінійного У ще одному переважному варіанті або розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С6вищеописаного способу, проліферативне циклоалкілу, циклоалкілалкілу, арилу, арилалкілу, захворювання клітин вибирають з групи, що гетероциклілу або гетероциклілалкілу, або R і R' складається з доброякісної гіперплазії простати, разом з атомом азоту, з яким вони зв'язані, можуть спадкового аденоматозу, поліпозу, утворювати 5-6-членну гетероарильну або нейрофіброматозу, псоріазу, проліферації гладких гетероциклільну групу, яка необов'язково містить клітин стінок судин, пов'язаної з атеросклерозом, один додатковий гетероатом, вибраний з Ν, Ο або пневмофіброзу, артриту, гломерулонефриту і S; післяопераційного стенозу і рестенозу. Крім того, R1, зв'язаний з будь-яким атомом азоту спосіб за винаходом належить до інгібування піразольного циклу згідно з формулами (Іа) або розвитку кровоносних судин і метастазування (Іb), являє собою атом водню або необов'язково пухлини, а також до лікування відторгнення заміщену групу, вибрану з лінійного або трансплантата органів і повторної імунної хвороби. розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С6-циклоалкілу, Способи за винаходом можуть також належати до арилу, арилалкілу, гетероциклілу або інгібування клітинного циклу або інгібування гетероциклілалкілу, або в формулі (Ib) R1 означає активності комплексів cdk/циклін. двовалентну групу -(CH2)n-NH-, зв'язану з R2, де n Крім вищезгаданого, способи за винаходом означає 2 або 3; належать до лікування і профілактики алопеції, R2 означає групу, вибрану з -NR"R", -N(OH)R", викликаної радіотерапією або хіміотерапією. -OR" або -R", де кожний з R" і R'" незалежно Даний винахід також належить до похідних означає водень або необов'язково заміщену групу, піразолохіназолінів, представлених формулою (Іа) вибрану з лінійного або розгалуженого С1-С6або (Іb) алкілу, С3-С6-циклоалкілу або циклоалкілалкілу, арилу, арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу, або R" і R'" разом з атомом азоту, з яким вони зв'язані, можуть утворювати 56-членну гетероарильну або гетероциклільну групу, яка необов'язково містить один додатковий гетероатом, вибраний з Ν, Ο або S; , А означає двовалентну групу, вибрану з -СН2-, -(СН2)2-, -СН2 -С(СН3)2-, -С(СН3)2 -СН2- або -СН=СНде ; R означає водень або необов'язково заміщену або його фармацевтично прийнятної солі. групу, вибрану з аміно, лінійного або Ще один варіант здійснення винаходу розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С10-циклоалкілу, належить до способу лікування проліферативних циклоалкілалкілу, арилу, арилалкілу, захворювань клітин, викликаних і/або пов'язаних із гетероциклілу або гетероциклілалкілу; зміненою активністю протеїнкіназ, подібно X означає простий зв'язок або двовалентний активності кінази, залежної від клітинного циклу, радикал, вибраний з NR'-, -CONR'-, -NH-CO-NH-, шляхом введення ссавцям, які потребують О-, -S- або -SO2-, де R' означає водень або лікування, ефективної кількості похідного необов'язково заміщену групу, вибрану з лінійного піразолохіназоліну, представленого формулою (Іа) або розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С6або (Іb) циклоалкілу, циклоалкілалкілу, арилу, арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу, або R і R' разом з атомом азоту, з яким вони зв'язані, можуть утворювати 5-6-членну гетероарильну або гетероциклільну групу, яка необов'язково містить один додатковий гетероатом, вибраний з Ν, Ο або S; . R1, зв'язаний з будь-яким атомом азоту піразольного циклу згідно з формулами (Іа) або У переважному варіанті здійснення (Іb), являє собою атом водню або необов'язково вищеописаних способів, проліферативне заміщену групу, вибрану з лінійного або захворювання клітин вибране з групи, що розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С6-циклоалкілу, складається з ракових захворювань, хвороби арилу, арилалкілу, гетероциклілу або Альцгеймера, вірусних інфекцій, аутоімунних і гетероциклілалкілу, або в формулі (Ib) R1 означає нейродегенеративних захворювань. двовалентну групу -(CH2)n-NH-, зв'язану з R2, де n Конкретні види раку, які можна лікувати, означає 2 або 3; включають карциному, плоскоклітинну карциному, R2 означає групу, вибрану з -NR"R''', -N(OH)R", пухлини кровотворної тканини мієлоїдного або -OR" або -R", де кожний з R" і R'" незалежно лімфоїдного походження, пухлини 19 80763 20 Більш того застосування як протипухлинного означає водень або необов'язково заміщену групу, агента всіх можливих ізомерів і їх сумішей і як вибрану з лінійного або розгалуженого С1-С6метаболітів, так і фармацевтично прийнятних алкілу, С3-С6-циклоалкілу або циклоалкілалкілу, біопопередників (які інакше називаються арилу, арилалкілу, гетероциклілу або проліками) сполук формули (І) також охоплюються гетероциклілалкілу, або R" і R''' разом з атомом даним винаходом. азоту, з яким вони зв'язані, можуть утворювати 5Проліки являють собою будь-які ковалентно 6-членну гетероарильну або гетероциклільну зв'язані сполуки, які вивільняють активну вихідну групу, яка необов'язково містить один додатковий лікарську речовину формули (І) in vivo. гетероатом, вибраний з Ν, Ο або S; У випадках, якщо сполуки можуть знаходитися А означає двовалентну групу, вибрану з -СН2-, в таутомерних формах, наприклад, у вигляді -(СН2)2-, -СН2 -С(СН3)2-, -С(СН3)2 -СН2- або -СН=СНкетоенольних таутомерів, кожна таутомерна ; форма розглядається як включена у винахід, або їх фармацевтично прийнятних солей. незалежно від того, чи існує вона в рівновазі з Даний винахід також включає способи синтезу іншим таутомером або переважно в одній формі. похідних піразолохіназоліну, представлених У даному описі, якщо не обумовлене інше, під формулами (Іа) або (Іb), які, якщо не вказане інше, терміном «лінійний або розгалужений С 1-С6-алкіл» можна для зручності об'єднати в групи і визначити мається на увазі будь-яка з груп, таких як, як сполуки формули (І). Фармацевтичні композиції, наприклад, метил, етил, н-пропіл, ізопропіл, някі містять похідні піразолохіназоліну формули (І), бутил, ізобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, також включені в даний винахід. н-гексил і ним подібні. Більш повна оцінка винаходу і багато які його Якщо інше не обумовлене, під терміном «С3переваги будуть більш зрозумілі з наступного С10-циклоалкіл» автори мають на увазі нижче докладного опису. циклоаліфатичну групу, таку як циклопропіл, Деякі гетероциклічні сполуки відомі з рівня циклобутил, циклопентил і циклогексил, а також техніки як інгібітори протеїнкіназ. Наприклад, про будь-яку містечкову циклоалкільну групу, яка 2-карбоксамідопіразоли і 2-уреїдопіразоли і їх містить до 10 атомів вуглецю. похідні повідомляють як про інгібітори протеїнкіназ Термін «арил» включає карбоциклічні або в [міжнародних заявках WO 01/12189, WO гетероциклічні вуглеводні з 1-2 циклічними 01/12188, WO 02/48114 і WO 02/70515]. залишками, або конденсованими, або пов'язаними Конденсовані біциклічні сполуки, які один з одним простими зв'язками, в яких включають піразольні залишки і володіють щонайменше один з циклів є ароматичним; при інгібуючою активністю у відношенні кіназ, також наявності будь-який ароматичний гетероциклічний описані у [WO 00/69846, WO 02/12242, а також у вуглеводень іменується також «гетероарильною WO 03/028720 і в ще неопублікованій заявці на групою», містить 5-6-членный цикл з 1-3 патент США 60/381092 (подана 17 травня 2002p.), гетероатомами, вибраними з Ν, Ο або S. всі від імені заявника]. Арильними групами за винаходом є, Конденсовані трициклічні похідні, які володіють інгібуючою активністю у відношенні наприклад, феніл, біфеніл, a- або b-нафтил, кіназ також описані в двох заявках, що дигідронафтил, тієніл, бензотієніл, фурил, розглядаються, [РСТ/ЕРОЗ/01594 і бензофураніл, піроліл, імідазоліл, піразоліл, PCT/US03/04844 (обидві з пріоритетом від 19 тіазоліл, ізотіазоліл, оксазоліл, ізоксазоліл, лютого 2002, згідно із заявками, поданими в США піридил, піразинил, піримідиніл, піридазиніл, No. 60/357918 і No. 60/357960, відповідно) і індоліл, ізоіндоліл, пуриніл, хіноліл, ізохіноліл, включені в дану заявку як посилання]; жодна з дигідрохінолініл, хіноксалініл, бензодіоксоліл, вказаних заявок конкретно не описує похідні, що інданіл, інденіл, триазоліл і ним подібні. належать до даного винаходу. Якщо інше не обумовлене, термін Крім того, конденсовані поліциклічні похідні «гетероцикліл» включає 5-6-членні насичені, піримідину як інгібітори протеїнкіназ описані в частково ненасичені або повністю ненасичені [міжнародних заявках WO 98/58926 і WO 98/28281, гетероцикли з 1-3 гетероатомами, вибраними з Ν, поданих від імені Celltech Therapeutics Ltd; але О або S. Крім повністю ненасичених гетероциклів, ніякі конкретні піразолохіназоліни за даним раніше віднесених до ароматичних гетероциклів і винаходом не наводяться в них як приклади, хоча охоплюваних терміном «арил», прикладами вони включені в загальні формули обох заявок]. насичених або частково ненасичених гетероциклів На закінчення, в [WO 96/40142 (поданої від за винаходом є піран, піролідин, піролін, імені Pfizer Inc.)] повідомляється про піримідинові імідазолін, імідазолідин, піразолідин, піразолін, похідні з конденсованими гетероциклічними тіазолін, тіазолідин, дигідрофуран, кільцями для лікування гіперпроліферативних тетрагідрофуран, 1,3-діокосолан, піперидин, захворювань. піперазин, морфолін і ним подібні. Сполуки формули (І) за винаходом можуть З всього вищесказаного фахівцеві в даній мати асиметричні атоми вуглецю і, отже, можуть галузі техніки ясно, що будь-яка сполука за існувати у вигляді індивідуальних оптичних винаходом, в якій X являє собою простий зв'язок, ізомерів, у вигляді рацемічних сумішей або у повинна розглядатися, як таке, що містить групу R, вигляді будь-яких інших сумішей, які містять безпосередньо зв'язану з піримідиновим переважаючу кількість одного з двох оптичних залишком. ізомерів, мається на увазі, що всі вони Згідно з вказаними вище значеннями охоплюються об'ємом даного винаходу. замісників і, якщо не вказане інше, будь-яка з 21 80763 22 фосфорною, оцтовою, трифтороцтовою, вищезгаданих груп R, R', R1, R" і R''' необов'язково пропіоновою, гліколевою, молочною, щавлевою, може бути заміщена в будь-кому з її вільних малоновою, яблучною, малеїновою, винною, положень однією або декількома групами, лимонною, бензойною, коричною, мигдалевою, наприклад, 1-6 групами, незалежно вибраними з метансульфоновою, ізетиновою і саліциловою галогену, нітро, оксо (=О), ціано, азидо, алкілу, кислотами, а також солі з неорганічними і поліфторвмісного алкілу, гідроксіалкілу, арилу, органічними основами, наприклад, з гідроксидами, арилалкілу, гетероциклілу, гетероциклілалкілу, карбонатами або гідрокарбонатами лужних і циклоалкілу, алкіларилу, алкілгетероциклілу, лужноземельних металів, особливо натрію, калію, гідрокси, алкокси, поліфторзаміщеного алкокси, кальцію або магнію, ациклічними або циклічними арилокси, арилалкілокси, гетероциклілокси, амінами, переважно метиламіном, етиламіном, гетероциклілалкілокси, метилендіокси, діетиламіном, триетиламіном, піперидином і ним алкілкарбонілокси, алкілкарбонілоксіалкілу, подібними. арилкарбонілокси, карбокси, алкоксикарбонілу, Згідно з першим варіантом здійснення алкоксикарбонілалкілу, арилоксикарбонілу, винаходу, що належить до сполук формули (Іа) циклоалкілоксикарбонілу, аміно, аміноалкілу, або (Іb), переважними похідними є такі, в яких X алкіламіноалкілу, алкіламіноалкілокси, уреїдо, означає групу -NH- і R2 означає групу, вибрану з алкіламіно, діалкіламіно, ариламіно, діариламіно, NHR", -N(OH)R", -OR" або -R", де R" означає форміламіно, алкілкарбоніламіно, необов'язково заміщену групу, вибрану з С3-С6арилкарбоніламіно, гетероциклілкарбоніламіно, циклоалкілу або циклоалкілалкілу, арилу, алкоксикарбоніламіно, алкоксііміно, арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу; алкілсульфоніламіно, арилсульфоніламіно, і R, R1 і А такі, як визначено вище. формілу, алкілкарбонілу, арилкарбонілу, Переважними також є сполуки формули (Іа) гетероциклілкарбонілу, циклоалкілкарбонілу, або (Іb), в яких X означає групу -О- і R2 означає гетероциклілкарбонілу, амінокарбонілу, групу, вибрану з -NHR", -N(OH)R", -OR" або -R", де алкіламінокарбонілу, діалкіламінокарбонілу, R" означає необов'язково заміщену групу, вибрану ариламінокарбонілу, алкілсульфонілу, з С3-С6-циклоалкілу або циклоалкілалкілу, арилу, арилсульфонілу, гетероциклілсульфонілу, арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу; аміносульфонілу, алкіламіносульфонілу, і R, R1 і А такі, як визначено вище. діалкіламіносульфонілу, арилтіо і алкілтіо. Переважними також є сполуки формули (Іа) У цьому відношенні під терміном «атом або (Іb), в яких X означає групу -S- і R2 означає галогену» автори мають на увазі атом фтору, групу, вибрану з -NHR", -N(OH)R", -OR" або -R", де хлору, брому або йоду. R" означає необов'язково заміщену групу, вибрану Використовуючи термін «перфторвмісний з С3-С6-циклоалкілу або циклоалкілалкілу, арилу, алкіл», автори мають на увазі будь-яку з арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу; вищезазначених лінійних або розгалужених С1-С6і R, R1 і А такі, як визначено вище. алкільних груп, які заміщені більш ніж одним Ще більш переважними з вищезгаданого класу атомом фтору, наприклад трифторметил, сполук (Іа) або (Іb) є ті ж похідні, в яких А означає трифторетил, 1,1,1,3,3,3-гексафторпропіл і ним групу -(СН2)2-. подібні. Згідно з ще одним варіантом здійснення Використовуючи терміни «алкокси, арилокси, винаходу, який належить до сполук формули (Іа) гетероциклілокси» і похідні від них, наприклад або (Іb), клас переважних сполук представлений «перфторвмісна алкоксигрупа», автори мають на такими похідними, в яких X означає групу -NH- і R2 увазі будь-яку з вищезазначених алкільних, означає групу -NHR" або -N(OH)R", де -R" означає арильних або гетероциклільних груп, зв'язаних з атом водню або лінійну або розгалужену С1-С4іншою частиною молекули через атом кисню (-О-). алкільну групу; і де A, R і R1 такі, як визначено З всього вищесказаного фахівцеві в даній вище. галузі техніки ясно, що будь-яку групу, назва якої є Ще один клас переважних сполук формули (Іа) складною, таку, наприклад, як арилалкіл або або (Іb) за винаходом представлений похідними, в гетероциклілалкіл, потрібно розглядати по яких X означає групу -О- і R2 означає групу -NHR" частинах, з яких вона утворена, наприклад, як або -N(OH)R", де -R" означає атом водню або алкільну групу, яка додатково заміщена арилом лінійну або розгалужену С1-С4-алкільну групу; і де або гетероциклілом, де алкіл, арил або A, R і R1 такі, як визначено вище. гетероцикліл такі, як визначено вище. Ще один клас переважних сполук формули (Іа) Аналогічно, будь-які з термінів, такі як, або (Іb) за винаходом представлений похідними, в наприклад, алкілтіо, алкіламіно, діалкіламіно, яких X означає групу -S- і R2 означає групу -NHR" алкоксикарбоніл, алкоксикарбоніламіно, або -N(OH)R", де -R" означає атом водню або гетероциклілкарбоніл, гетероциклілкарбоніламіно, лінійну або розгалужену С1-С4-алкільну групу; і де циклоалкілоксикарбоніл і ним подібні, включають A, R і R1 такі, як визначено вище. групи, в яких алкільні, алкоксильні, арильні, Ще один клас переважних сполук формули (Іb) циклоалкільні і гетероциклільні залишки такі, як за винаходом представлений похідними, в яких R, визначено вище. X і А такі, як визначено вище, і R1 і R2 сполучені Фармацевтично прийнятні солі сполук разом двовалентною групою -(CH2)n-NH- таким формули (І) включають адитивні солі з чином, що в результаті утворюються: неорганічними або органічними кислотами, наприклад, з азотною, соляною, бромистоводневою, сарною, перхлорною, 23 80763 24 ст. 3) взаємодію сполуки формули (IVa), одержаної на будь-якій зі стадій 2а, 2b або 2с, або формули (IVb), одержаної на стадії 2а або 2с, з дитрет-бутилацеталем диметилформаміду з одержанням сполуки формули (Va) або (Vb) . Переважними з вищезазначеного класу сполук формули (Іа) і (Іb) також є сполуки, в яких А означає групу, вибрану з -СН2-С(СН3)2- або С(СН3)2-СН2-. Згідно з винаходом будь-яка конкретна сполука формули (Іа) або (Іb) може знаходитися у вигляді фармацевтично прийнятної солі, див. експериментальну частину і формулу винаходу. Як було зазначено раніше, додатковий об'єкт даного винаходу представлений способом одержання сполук формули (І), причому формула яких, якщо конкретно не вказане інше, повинна розглядатися, як така, що включає похідні формули (Іа) і (Іb). Таким чином, сполуки формули (І) або їх фармацевтично прийнятні солі можуть бути одержані способом, який включає: (1) якщо А означає -(СН2)2- групу: ст. 1) взаємодію 2-етокси-2-циклогексен-1-ону з діетилоксалатом в присутності біс(триметилсиліл)аміду літію [LiN(TMS)2] з одержанням сполуки формули (II) і її обробку похідним гідразину формули (III) R1-NHNH2 (III) в якій R1 має вказані вище значення, відповідно до робочих умов, описаних будьякою зі стадій 2а, 2b або 2с. ст. 2а) в присутності нижчого спирту, щоб одержати суміш сполук формули (IVa) і (IVb) , де R1 описаний вище, і розділення їх суміші на окремі сполуки (IVa) і (IVb); ст. 2b) в присутності оцтової кислоти, щоб одержати сполуку формули (IVa); ст. 2с) алкілування сполуки формули (IVa), одержаної на стадії 2а або 2b, де R1 означає водень, сполукою формули (IVc); R1Y (IVc), де Υ означає придатну відхідну групу, таку як мезил, тозил, галоген, щоб одержати суміш сполук формули (IVa) і (IVb), де R1 такий, як зазначено вище, і розділення суміші на окремі сполуки (IVa) і (IVb); , де R1 описаний вище; і взаємодію сполуки формули (Va) або (Vb) за будь-якою з альтернативних стадій 4а, 4b або 4с; ст. 4а) з гуанідином з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb) , де R-X- означає аміно, R2 означає етокси і R1 описаний вище; і необов'язково їх перетворення на інші похідні формули (І); ст. 4b) з похідним гуанідину формули (VI) R-NH-C(=NH)NH2 (VI) де R описаний вище, з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb), де R і R1 такі, як описано вище, X означає -NH- і R2 означає етокси; і необов'язково їх перетворення на інші похідні формули (І); ст. 4с) з алкілізотіосечовиною формули (VII) R-S-C(=NH)NH2 (VII) де R описаний вище, з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb), де R і R1 такі, як описано вище, X означає -S- і R2 означає етокси; і необов'язково їх перетворення на інші похідні формули (І); ст. 4d) з метилізосечовиною з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb), де Ri такий, як описаний вище, R являє собою метил, X означає О- і R2 означає етокси; і необов'язково їх перетворення на інші похідні формули (І); (2) якщо А являє собою групу -С(СН3)2-СН2-: ст. 5) взаємодію 2-метокси-4,4-диметил-2циклогексен-1-ону з діетилоксалатом в присутності [LiN(TMS)2], з одержанням сполуки формули (VIII) , ст. 6) взаємодію сполуки формули (VIII) з похідним гідразину формули (III) відповідно до однієї з попередніх стадій 2а або 2b з одержанням сполуки формули (ІХа) або (ІХb) 25 80763 26 ст. 11) взаємодію сполуки формули (Хllа) або (ХІІb) з ди-трет-бутилацеталем диметилформаміду з одержанням сполуки формули (Хlllа) або (Хlllb) , де R1 описаний вище; ст. 7) взаємодію сполуки формули (ІХа) або (lХb) з етилформіатом в основних умовах з одержанням сполуки формули (Ха) або (Хb) , ст. 12) взаємодію сполуки формули (ХІllа) або (ХІllb) з гуанідином або похідним гуанідину формули (VI) з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb) ; ст. 8) взаємодію сполуки формули (Ха) або (Хb) з гуанідином або з похідним гуанідину формули (VI) з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb) , де R і R1 такі, як описано вище, X означає -NH, і R2 означає етокси; і необов'язково їх перетворення на інші похідні формули (І); (3) якщо А являє собою групу -СН2-С(СН3 )2-: ст. 9) взаємодію 2-метокси-5,5-диметил-2циклогексен-1-ону з діетилоксалатом в присутності гідриду натрію з одержанням полуки формули (XI) , де R і R1 такі, як описано вище, X означає -NHі R2 означає етокси; і необов'язково їх перетворення на інші похідні формули (І); (4) коли в формулі (Іb), А означає групу (СН2)2-, -СН2-С(СН3)2 -, групу -С(СН3)2-СН2-, R1 безпосередньо зв'язаний з R2 таким чином, що виходить тетрациклічна структура: ст. 13) взаємодію сполуки формули (IV), (IX), (XII), де R1 означає водень, одержаної на стадіях 2, 6, 10 способу, з трифенілметилхлоридом з одержанням сполуки формули (XIV) , , ст. 10) взаємодію сполуки формули (XI) з похідним гідразину формули (III) відповідно до однієї з попередніх стадій 2а або 2b з одержанням сполуки формули (ХІІа) або (ХІІb) де Тr означає тритил (трифенілметил); ст. 14) взаємодію сполуки формули (XIV) з дитрет-бутилацеталем диметилформаміду, як описано на стадії 3, з одержанням сполуки формули (XV) , , де R1 описаний вище; ст. 15) взаємодію сполуки формули (XV) з відповідним похідним гуанідину формули (VI), як описано на стадії 4b, з одержанням сполуки формули (Іа) або (Іb) 27 80763 28 ст. 20) взаємодію сполуки формули (XVII) з похідним формули (VII), у відповідності зі стадією 4с, з одержанням сполуки формули (XVIII) , де R описаний вище, А означає групу -(СН2)2-, групу -СН2 -С(СН3)2-, групу -С(СН3)2 -СН2- X означає -NH-, R1 означає тритил і R2 означає етокси; ст. 16) витримування вищезазначеної сполуки формули (Іа) або (Іb) в кислому середовищі з одержанням відповідної сполуки формули (Іа) або (Іb), де R1 означає водень; ст. 17) взаємодію вищезазначеної сполуки формули (Іа) або (Іb) з відповідним алкілуючим агентом формули (XVI) в присутності третбутилату літію Br-(CH2)n-NH-BOC (XVI) де n означає 2 або 3, з одержанням сполуки формули (Іb) , де R описаний вище, і подальшу обробку його в кислих умовах з одержанням сполуки формули (XIX) , ст. 21) взаємодію сполуки формули (XIX) із сполукою формули (XX) , де R2 означає об'ємну групу, з одержанням сполуки формули (XXI) , де Α, n і R такі, як визначено вище; ст. 18) витримування сполуки формули (Іb) в кислих умовах для перетворення третбутоксикарбоніламіногрупи в аміногрупу (зняття захисту) і взаємодію одержаної сполуки з карбонатом цезію (Cs2CO3) з одержанням однієї з двох сполук формули (Іb) , де А і R такі, як визначено вище, і необов'язково їх перетворення на інші похідні формули (І); (5) якщо R2 являє собою об'ємну групу: ст. 19) взаємодію 2-етокси-2-циклогексежшу з ди-трет-бутилацеталем диметилформаміду, як описано на стадії 3, з одержанням сполуки формули (XVII) , ст. 22) взаємодію сполуки формули (XXI) з похідним гідразину формули (III) згідно зі стадією 1 способу з одержанням сполуки формули (І), в якій R і R1 такі, як зазначено вище, X означає -S- і R2 означає об'ємну групу; і необов'язково перетворення її на інші похідні формули (І). Як зазначено вище, сполуки формули (І), які одержують за способом, який є об'єктом винаходу, наприклад, як показано для описаних стадій 4а, 4b, 4с, 8, 12, 13, 18 і 22, можуть бути зручним чином перетворені на інші сполуки формули (І) при використанні добре відомих умовах реакцій. Як приклад сполуки формули (І): ст. 23) де R2 означає етокси, можна перетворити на сполуки формули (Іа) або (Іb), де R2 означає аміногрупу, обробкою гідроксидом амонію , , ст. 24) де R2 означає етокси, можна перетворити на сполуки формули (І), де R2 означає групу -NHR", обробкою аміном формули 29 R"-NH2 80763 (XXII) , ст. 25) де R2 означає етокси, можна перетворити на сполуки формули (І), де R2 означає групу ОН-, кислотним або основним гідролізом , ст. 26) де R2 означає -ОН, можна перетворити на сполуки формули (І), де R2 означає групу NR"R''' або -N(OH)R", реакцією з похідними формули (XXIII) або (XXIV) R"R'''NH (XXIII) R"NHOH (XXIV) в основних умовах і в присутності відповідного конденсуючого агента 30 ст. 29) де R означає водень і X означає -NH-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає арил і X означає -NH-, спочатку перетворенням аміногрупи в йод реакцією з ізоамілнітритом і дийодметаном або йодидом цезію в присутності йоду і Cul і подальшою взаємодією йодпохідного з ариламіном формули R-NH2 (XXVII) в присутності ацетату паладію і (2,2'біс(дифенілфосфіно))-1,1'-бінафталіну (BINAP) ст. 29а) де R означає водень і X означає -NH-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає алкіл, циклоалкіл, циклоалкілалкіл, арилалкіл, гетероцикліл, гетероциклілалкіл і X означає -NH-, спочатку перетворенням аміногрупи на йод, як описано на попередній стадії 29, і подальшою взаємодією йодпохідного з алкіл-, циклоалкіл-, циклоалкілалкіл-, арилалкіл-, гетероциклілабо гетероциклілалкіламіном формули RNH2 (XXVII), де R такий, як визначено вище; ст. 30) де R означає водень і X означає -NH-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає арил і X означає простий зв'язок, спочатку перетворенням аміногрупи на йод, як на вищезазначеній стадії 29, і подальшою взаємодією йодпохідного з арилбороновою кислотою формули R-B(OH)2 (XXVIII) в присутності похідного паладію , ст. 27) де R означає водень і X означає -NH-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає замісник, відмінний від водню, як зазначено вище, і X означає -CONH-, реакцією з галогенангідридом кислоти, наприклад хлоридом формули R-COCl (XXV) , ст. 31) де R означає водень і X означає -NH-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає алкіл або арилметил, реакцією з алкілальдегідом або арилальдегідом формули R-CHO (XXIX) в присутності ціаноборгідриду натрію (NaBH3CN) і оцтової кислоти , ст. 28) де R означає водень і X означає -NH-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає замісник, відмінний від водню, як зазначено вище, і X означає NH-CO-NH-, реакцією з ізоціанатом формули R-NCO (XXVI) , ст. 31а) де R означає водень і X означає -NH-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає циклоалкіл або гетероциклоалкіл, реакцією з циклоалкілкетоном або гетероциклоалкілкетоном в присутності натрійтриацетоксиборгідриду (NaBH(OAc)3) і трифтороцтової кислоти , , 31 80763 32 останнього з аміном формули R-NH2 (XXVII), де R ст. 32) де R такий, як визначено вище, означає необов'язково заміщену алкільну, наприклад метил, і X означає -S-, можна циклоалкільну, гетероциклільну, перетворити на сполуки формули (І), де R означає циклоалкілалкільну, арилалкільну або необов'язково заміщену алкільну, циклоалкільну, гетероциклілалкільну групу гетероциклільну, циклоалкілалкільну, арилалкільну або гетероциклілалкільну групу, спочатку перетворенням RS-групи на RSO2-групу в умовах окиснення і потім реакцією сульфонільного похідного з аміном формули R-NH2 (XXVII) в якій R означає необов'язково заміщену алкільну, циклоалкільну, гетероциклільну, циклоалкілалкільну, арилалкільну або , гетероциклілалкільну групу , ст. 33) де R такий, як визначено вище, наприклад метил, і X означає -S-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R такий, як визначено в формулі (І), і X означає -О-, спочатку перетворенням RS-групи на RSO2-групy, як на стадії 32, і потім реакцією сульфонільного похідного із сполукою формули R-OH (XXX) , ст. 33а) де R означає метил і X означає -О-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R такий, як визначено в формулі (І), і X означає -О-, спочатку перетворенням МеО-групи на НО-, потім реакцією з трифторметансульфорилуючим агентом з одержанням відповідного трифторметансульфонату і, нарешті, його взаємодією із сполукою формули R-OH (XXX) , ст. 33b) де R означає метил і X означає -О-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає необов'язково заміщену алкільну, циклоалкільну, гетероциклільну, циклоалкілалкільну, гетероциклілалкільну групу і X означає -NH-, спочатку перетворенням МеО-групи на НО-, потім реакцією з трифторметансульфорилуючим агентом з одержанням відповідного трифторметансульфонату і, нарешті, взаємодією ст. 33с) де R означає метил і X означає -О-, можна перетворити на сполуки формули (І), де R означає арил і X означає -NH-, спочатку перетворенням МеО-групи на НО-, потім реакцією з трифторметансульфорилуючим агентом з одержанням відповідного трифторметансульфонату і, нарешті, взаємодією останнього з аміном формули R-NH2 (XXVII), де R означає необов'язково заміщену арильну групу, в присутності ацетату паладію і BINAP; ст. 34) де А означає групу -(СН2)2-, можна перетворити на сполуки формули (І), де А означає групу СН СН-, в умовах дегідрування в = присутності Pd або Pt каталізатора. Вищезазначений спосіб, в будь-кому з вищезазначених варіантів, є аналогом способу, який можна здійснити у відповідності з добре відомими в даній галузі техніки способами. На стадії 1 способу 2-етокси-2-циклогексен-1он піддають взаємодії з діетилоксалатом в присутності LiN(TMS)2 і відповідного розчинника, такого, наприклад, як діоксан, тетрагідрофуран або діетиловий ефір. На стадії 2а сполуку формули (II) піддають взаємодії з відповідним похідним гідразину формули (III) в присутності нижчого спирту, такого як метанол, етанол або їх суміші. Переважно вищезазначену реакцію проводять в етанолі при температурі кипіння, щоб одержати суміш обох сполук (IVa) і (IVb), в якій перше із згаданих присутнє в значних кількостях. Розділення на індивідуальні речовини (IVa) і (IVb) проводять звичайними способами, наприклад, препаративною ВЕРХ. При використанні замість стадії 2а стадії 2b способу, яка полягає у взаємодії сполуки формули (II) з похідним гідразину формули (III) в присутності оцтової кислоти, одержують індивідуальну сполуку формули (IVa). Реакцію проводять переважно при кімнатній температурі. На стадії 2с способу сполуку формули (IVa), де R1 означає водень, піддають взаємодії з відповідною сполукою формули (IVc) в присутностіоснови, такої як гідрид натрію, у відповідному розчиннику, наприклад, тетрагідрофурані, діоксані або диметилформаміді, при температурі від кімнатної до 100°С, з одержанням суміші сполук (IVa) і (IVb), в якій перше із згаданих присутнє в значних кількостях. Розділення на індивідуальні 33 80763 34 можна легко ідентифікувати як сполуку формули речовини (IVa) і (IVb) проводять звичайними (IV). Приймаючи це до уваги, дане похідне способами, наприклад, препаративною ВЕРХ. піддають взаємодії з трифенілметилхлоридом з На стадії 3 способу сполуку формули (IVa) або одержанням сполуки формули (XIV), в якій будь(IVb) піддають взаємодії з ди-трет-бутилацеталем який з двох атомів азоту піразольного циклу диметилформаміду в присутності відповідного алкілований тритильною (тобто розчинника, такого, наприклад, як трифенілметильною) групою. диметилформамід, з одержанням сполуки Умови здійснення стадій 14 і 15 способу по формули (Va) або (Vb), відповідно. Переважно суті відповідають умовам, вже описаним для проводять реакцію при температурах від кімнатної стадій 3, 4а і 4b. Згідно зі стадією 16, тритильну до 70°С. групу сполук формули (І) видаляють в кислих Згідно з однією з альтернативних стадій 4а, умовах, наприклад дією трифтороцтової кислоти, і 4b, 4с або 4d способу, сполуку формули (Va) або в присутності відповідного розчинника, такого як (Vb) піддають взаємодії з гуанідином, солями дихлорметан, для того, щоб одержати відповідну гуанідину або його похідними, сполуку формули (І), де R1 означає водень, в обох алкілізотіосечовиною або метилізосечовиною з формах: одержанням відповідної сполуки формули (Іа) або (Іb) за допомогою утворення піримідинового циклу. Будь-яку з вищезазначених реакцій здійснюють за загальноприйнятими методиками. Наприклад, реакції з гуанідином або його солями, такими як гідрохлорид, карбонат або нітрат, або з похідним гуанідину формули (VI), як описано для . стадій 4а або 4b, проводять в присутності розчинника, як розчинник використовують нижчі Подальше алкілування одержаної сполуки спирти, в нейтральних або основних умовах, похідним формули (XVI) на стадії 17 способу переважно в етанолі з етилатом натрію або дозволяє селективно алкілувати атом азоту діазабіциклоундеценом (DBU) при температурі піразольного циклу, який розташований біля кипіння; або, альтернативно, в диметилформаміді COOEt-групи; вказану реакцію можна провести з при температурі від 80°С до температури кипіння в трет-бутилатом літію і у відповідному розчиннику, присутності карбонату калію. Реакцію з такому як діоксан, діетиловий ефір або алкілізотіосечовиною (VII), згідно зі стадією 4с, тетрагідрофуран. проводять в присутності ацетату калію і у На стадії 18, вищезазначену сполуку спочатку відповідному розчиннику, такому як перетворюють на вільне амінопохідне, диметилформамід, при температурі кипіння. використовуючи загальноприйняті методи, Реакцію з метилізосечовиною (ст. 4d) наприклад, в кислих умовах, переважно дією проводять у відповідному розчиннику, такому як соляної кислоти, у відповідному розчиннику, ацетонітрил, і в присутності основи, такої як такому як діоксан, при температурі кипіння, і потім карбонат калію, при температурі кипіння. піддають циклізації в тетрациклічне похідне в Реакції стадій 5 і 6 проводять згідно з присутності основи, такої як карбонат цезію умовами, описаними для стадій 1, 2а або 2b, і (Cs2CO3), і у відповідному розчиннику, такому як одержують потрібні сполуки формули (ІХа) або нижчий спирт, переважно метанол, при (lХb), відповідно. температурі від кімнатної до температури кипіння. Стадію 7 способу переважно здійснюють Умови, що використовуються на стадіях 19 і 20 шляхом взаємодії похідного формули (ІХа) або способу, по суті відповідають умовам, вже (lХb) з етилформіатом в основних умовах, описаним для стадій 3 і 4с; подальшу обробку переважно в присутності етилату натрію або кислотою сполуки формули (XVIII), яка дає сполуку гідриду натрію, і відповідного розчинника, формули (XIX), здійснюють переважно водним наприклад, діетилового ефіру, тетрагідрофурану розчином оцтової кислоти при температурі або діоксану, при температурі від кімнатної до близько 100°С. температури кипіння. На стадії 21 сполуку формули (XIX) піддають Умови реакції на стадії 8 такі ж, як умови, взаємодії з відповідним похідним формули (XX) в раніше описані для стадій 4а і 4b. присутності гідриду натрію і у придатному На стадії 9, 2-метокси-5,5-диметил-2розчиннику, такому як діетиловий ефір, циклогексен-1-он піддають взаємодії з тетрагідрофуран або діоксан, при температурі діетилоксалатом в присутності гідриду натрію і у приблизно від -50°С до кімнатної. відповідному розчиннику, такому як діетиловий Умови стадії 22 способу по суті відповідають ефір, тетрагідрофуран або діоксан, при умовам стадії 1 способу. температурі кипіння. Як раніше зазначено, сполуки формули (І), Умови реакцій для подальшої стадії 10 по суті одержані таким чином, можна легко перетворити такі ж, як описані раніше для стадій 2а або 2b, і на деякі інші сполуки формули (І) по винаходу. умови проведення стадій 11 і 12 відповідають Наприклад, сполуки формули (І), які містять як умовам стадій 3, 4а і 4b, відповідно. R2 етоксигрупу або навіть алкоксигрутіу, можна Стосовно стадії 13 способу фахівцеві в даній перетворити на цілий ряд похідних, галузі техніки зрозуміло, що обидві сполуки використовуючи способи, відомі в даній галузі формули (IVa) або (IVb), де R1 означає атом техніки, для перетворення складноефірних груп (водню, є таутомерними формами сполуки, яку 35 80763 36 тетрагідрофуран, діетиловий ефір або COOR2) на карбоксаміди (-CONH2), N-заміщені диметоксіетан, при температурі від кімнатної до карбоксаміди (-CONHR") і карбонові кислоти (близько 70°С, і час реакції складає від близько 8 СООН), наприклад, як описано на стадіях 23, 24 і годин до близько 48 годин. 25. Подальше перетворення йодпохідного можна Умови проведення реакцій є відомими в даній здійснити у придатному розчиннику, такому як галузі і можуть включати, наприклад, при диметилформамід, диметоксіетан або перетворенні складноефірної групи в ацетонітрил, і в присутності каталітичних карбоксамідну групу, реакцію з аміаком або кількостей ацетату паладію, 2,2'гідроксидом амонію у придатному розчиннику, біс(дифенілфосфіно)-1,1'-бінафталіну (BINAP) і такому як нижчий спирт, диметилформамід або їх основи, такої як карбонат калію, фосфат калію або суміші; переважно реакцію проводять з карбонат цезію, при температурі від кімнатної до гідроксидом амонію в суміші 110°С, і час реакції складає від близько 2 до метанол/диметилформамід при температурі від близько 24 годин. близько 50°С до близько 100°С. Сполуки формули (І), де R означає арил і X Аналогічні умови використовують при означає простий зв'язок, можна одержати, як одержанні N-заміщених карбоксамідів, де замість описано на стадії 30, з вищезазначеного аміаку або гідроксиду амонію застосовують йодпохідного реакцією з арилбороновими відповідні первинні аміни. кислотами формули (XXVIII) у придатному Складноефірні групи можна також розчиннику, такому як диметилформамід, перетворити на похідні карбонових кислот в дихлорметан, метанол, диметоксіетан або умовах основного або кислотного гідролізу, добре ацетонітрил, в присутності відомих в даній галузі техніки. трис(дибензиліденацетон)дипаладію (0) або На стадії 26 способу сполуки формули (І), де тетракис(трифенілфосфіно)паладію [Pd(PPh3)4], R2 означає карбоксильну групу (-СООН), можна необов'язково в присутності фториду цезію, при перетворити на карбоксамідні похідні (-CONR"R''') температурі від кімнатної до 100°С. або [-CON(OH)R"], де R" і R''' такі, як зазначено Сполуки формули (І), де RNH- означає раніше, а також охоплюють сполуки, де R" і R''' алкіламіно, циклоалкіламіно, утворюють разом з атомом азоту, до якого вони циклоалкілалкіламіно, гетероцикліламіно, приєднані, 5-6-членну гетероарильну або гетероциклілалкіламіно, можна одержувати з гетероциклільну групу, яка необов'язково містить відповідного йодпохідного, як описано на стадії один додатковий гетероатом, вибраний з Ν, Ο або 29а способу. Реакцію можна провести у S. придатному розчиннику, такому як Реакцію проводять в присутності аміну диметилформамід, діоксан або ацетонітрил, або формули (XXIII) або сполуки формули (XXIV), що без розчинника при температурі від 40 до 120°С, можливо в окремих випадках, в основних умовах, час реакції складає від 3 до 18 годин. переважно з N,N-діізопропіл-N-етиламіном або Сполуки формули (І), де R-NH- означає триетиламіном, у придатному розчиннику, такому аміногрупу, можна також перетворити на як дихлорметан, диметилформамід, відповідні алкіламіно- або арилметиламінопохідні тетрагідрофуран або діоксан, і в присутності формули (І), як описано на стадії 31, відповідного конденсуючого агента, такого як N,Nвикористовуючи придатний розчинник або суміш дициклогексилкарбодіімід (DCC), гідрохлорид N-(3розчинників, наприклад, включаючи суміш оцтової диметиламінопропіл)-N(-етилкарбодііміду (EDCI) кислоти, метанолу і води (1:1:1). або тетрафторборат O-(бензотриазол-1-іл)Сполуки формули (І), де R-NH- означає N,N,N',N'-тетраметилізоуронію (TBTU); можуть аміногрупу, можна також перетворити на також бути потрібні каталітичні кількості відповідні циклоалкіламіноабо гексафторфосфату (бензотриазол-1гетероциклоалкіламінопохідні формули (І), як ілокси)трипіролідинофосфонію (РуВОР). описано на стадії 31а, використовуючи придатний Крім того, сполуки формули (І), де R-NHрозчинник, такий як метиленхлорид, ацетонітрил, означає аміногрупу (-NH2 ), можна легко диметилформамід. перетворити на відповідні карбоксамідо (-NHCOR) Сполуки формули (І), де R-X- означає або уреїдо (-NHCONHR) похідні, як описано на алкілтіогрупу (R-S-), можна перетворити на цілий стадіях 27 або 28 способу, відповідно. Реакцію і ряд сполук формули (І), де X означає -NH-, ізоціанатом звичайно проводять з гідридом натрію спочатку окисненням алкілтіона в диметилформаміді, тоді як реакцію з алкілсульфонільну групу і потім її заміщенням хлорангідридом кислоти можна провести у групою R-NH-, як описано на стадії 32. Окиснення придатному розчиннику, такому як піридин, можна здійснювати оксоном у відповідному тетрагідрофуран, етилацетат або діоксан, або в їх розчиннику, переважно в диметилформаміді або суміші при кімнатній температурі. диметилсульфоксиді, при кімнатній температурі; Сполуки формули (І), де R-NH- означає подальше заміщення алкілсульфонільної групи ариламіно- або гетероариламіногрупу, можна відповідним амінопохідним проводять переважно в одержати з відповідних йодпохідних, які, в свою диметилсульфоксиді, диметилформаміді, чергу, можна одержати з відповідних сполук диметоксіетані, діоксані, ацетонітрилі, Nформули (І), де R-NH- означає аміногрупу, як на метилпіролідоні або диглімі при температурі від стадії 29 способу. кімнатної до близько 100°С. Одержання йодпохідних можна провести у відповідному розчиннику, такому як 37 80763 38 Цікаво, що якщо останню стадію проводять в Сполуки формули (І), де X означає -NH- і R диметилсульфоксиді як придатному розчиннику, означає необов'язково заміщену алкільну, розчинник може також діяти як окисник, здатний циклоалкільну, гетероциклільну, давати цільові сполуки у випадках, якщо А означає циклоалкілалкільну або гетероциклілалкільну групу -СН=СН -. Зазначені останні похідні потім групу, можна одержувати взаємодією сполук виділяють з реакційної суміші загальноприйнятими формули (І), де X означає -О- і R означає способами, наприклад, хроматографією або трифторметансульфонільну групу, з аміном препаративною ВЕРХ. формули R-NH2 (XXVII), де R такий, як в формулі Згідно зі стадією 33 способу, сполуки формули (І), використовуючи придатний розчинник, такий як (І), де X означає -О-, можна легко одержати діоксан, тетрагідрофуран, диметоксіетан, взаємодією сульфонільного похідного зі спиртовим ацетонітрил, диметилформамід або або фенольним похідним формули (XXX), де R диметилсульфоксид, в інтервалі температур від такий, як в формулі (І). Реакцію можна провести в кімнатної до 90°С, необов'язково в присутності присутності основи, такої як карбонат калію або основи, такої як карбонат калію або триетиламін. натрію, бутиллітій, амід літію, гідрид натрію або Нарешті, будь-яку з вищезазначених сполук ним подібні, у придатному розчиннику, такому як формули (І), де А являє собою -СН2-СН2- групу, диметилформамід або тетрагідрофуран, і при можна піддавати дегідруванню в присутності температурі від кімнатної до температури близько паладієвого або платинового каталізатора, 100°С. необов'язково на носії, щоб одержати відповідне Альтернативно, згідно зі стадіями 4d і 33а, ароматичне похідне, в якому А являє собою сполуки формули (І), де X означає -О-, можна СН=СН-, як описано на стадії 34 способу. одержати взаємодією сполук формули (Va) і (Vb) з Див. експериментальну частину для будьсульфатом метилізосечовини, використовуючи якого конкретного прикладу, що належить до придатний розчинник, такий як діоксан, одержання сполук формули (І) за винаходом і їх диметилформамід або ацетонітрил, в присутності перетворення на інші сполуки формули (І). основи, такої як карбонат натрію або калію, при Проміжні сполуки формули (Va) або (Vb) згідно температурі від 50°С до 100°С. Сполуки формули зі стадією 3 способу (І), де X означає -О- і R означає водень, можна одержати взаємодією сполук формули (І), де X означає -Оі R означає метил, з триметилсилілхлоридом в присутності йодиду натрію і у придатному розчиннику, такому як діоксан, тетрагідрофуран або ацетонітрил, при кімнатній температурі. Сполуки формули (І), де X , означає -О- і R означає трифторсульфонільну групу, можна одержати взаємодією сполук де R1 означає атом водню або необов'язково формули (І), де X означає -О- і R означає водень, з заміщену групу, вибрану з лінійного або трифторметилуючим агентом, таким як ангідрид розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С6-циклоалкілу, трифторметансульфонової кислоти, арилу, арилалкілу, гетероциклілу або трифторметансульфонілхлорид і N-фенілгетероциклілалкілу, є новими і, отже, являють біс(трифторметансульфонімід), необов'язково у собою додатковий об'єкт винаходу. присутності основи, такої як триетиламін або N,NУ будь-якому варіанті способу одержання діізоііропіл-N-етиламін (DIPEA), у придатному сполук формули (І), вихідна речовина і будь-який розчиннику, такому як дихлорметан, інший реактант є відомими або легко тетрагідрофуран або діоксан, при температурі від одержуваними відомими способами. 78°С до кімнатної. Наприклад, 2-етокси-2-циклогексен-1-он являє Сполуки формули (І), де X означає -О- і R собою відому сполуку, яку можна легко одержати описаний вище, можна одержувати взаємодією кип'ятінням циклогексан-1,2-діону з етанолом в сполук формули (І), де X означає -О- і R означає толуолі в присутності каталітичних кількостей птрифторметансульфонільну групу, зі спиртом або толуолсульфонової кислоти (TsOH). фенолом формули (XXX), де R такий, як в формулі Аналогічно, 2-метокси-4,4-диметил-2(І), використовуючи придатний розчинник, такий як циклогексен-1-он являє собою відому сполуку, яку діоксан, тетрагідрофуран, диметоксіетан, можна одержати епоксидуванням комерційно ацетонітрил, диметилформамід або доступного 4,4-диметил-2-циклогексен-1-ону і диметилсульфоксид, при температурі від кімнатної подальшою обробкою одержаного епоксиду до близько 90°С, необов'язково в присутності гідроксидом калію в метанолі. основи, такої як карбонат калію, трет-бутоксид Нарешті, 2-метокси-5,5-диметил-2калію або гідрид натрію. циклогексен-1-он можна одержувати за наступною Альтернативно, реакцію можна провести у схемою з комерційно доступного 5,5придатному розчиннику, такому як толуол, диметилциклогексан-1,3-діону: диметилформамід, диметоксіетан або ацетонітрил, в присутності ацетату паладію, (±)BINAP і основи, такої, як фосфат калію (K3РО4) або карбонат калію або цезію (K2СО3 або Cs2CO3) при температурі від 0°С до 100°С (ст. 33с). 39 80763 40 , . Сполуки формул (III), (VI), (VII), (XVI), (XXII), (XXIII), (XXIV), (XV), (XXVI), (XXVII), (XXVIII), (XXIX) і (XXX) відомі або легко одержуються відомими способами. Наприклад, при одержанні визначених гуанідинопохідних формули (VI), де R означає залишок досить складної хімічної структури, можна дотримуватися наступної схеми: . Фахівцеві в даній галузі зрозуміло з вищевикладеного, що при одержанні сполук формули (І) за будь-яким з вищезазначених варіантів способу необов'язкові функціональні групи у вихідних речовинах або проміжних сполуках, які могли б викликати небажані побічні реакції необхідно правильно захищати, використовуючи загальноприйняті прийоми. Перетворення речовин із захисними групами у вільні сполуки зі знятим захистом можна також здійснювати за відомими методиками. Має бути зрозуміло, що, якщо сполуки формули (І), одержані за способом, описаним вище, одержують у вигляді суміші ізомерів, їх розділення на окремі ізомери формули (І) за допомогою загальноприйнятих прийомів охоплюється об'ємом даного винаходу. Загальновідомі прийоми для розділення рацематів включають, наприклад, дрібну кристалізацію одержаних з них діастереоізомерних солей або препаративну хіральну ВЕРХ. Крім того, сполуки формули (І) за винаходом можна також одержати, застосовуючи прийоми комбінаторної хімії, широко відомі в даній галузі техніки, наприклад, здійснюючи вищезазначені реакції декількох інтермедіатів послідовним чином і використовуючи умови твердофазного синтезу (SPS). Для загальної довідки з одержання сполук формули (І) за винаходом за допомогою прийомів комбінаторної хімії див. експериментальну частину заявки. Отже, додатковим об'єктом даного винаходу є бібліотека двох або більше сполук формули (Іа) або (Іb) де R означає водень або необов'язково заміщену групу, вибрану з аміно, лінійного або розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С10-циклоалкілу, циклоалкілалкілу, арилу, арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу; X означає простий зв'язок або двовалентний радикал, вибраний з -NR'-, -CONR'-, -NH-CO-NH-, О-, -S - або -SO2-, де R' означає водень або необов'язково заміщену групу, вибрану з лінійного або розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С6циклоалкілу, циклоалкілалкілу, арилу, арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу або R і R' разом з атомом азоту, з яким вони зв'язані, можуть утворювати 5-6-членну гетероарильну або гетероциклільну групу, яка необов'язково містить один додатковий гетероатом, вибраний з Ν, Ο або S; R1, зв'язаний з будь-яким атомом азоту піразольного циклу, згідно з формулами (Іа) або (Іb), являє собою атом водню або необов'язково заміщену групу, вибрану з лінійного або розгалуженого С1-С6-алкілу, С3-С6-циклоалкілу, арилу, арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу, або в формулі (Ib) R1 означає двовалентну групу -(CH2)n-NH-, зв'язану з R2, де n означає 2 або 3; R2 означає групу, вибрану з -NR"R''', -N(OH)R", -OR" або -R", де кожний з R" і R''' незалежно означає водень або необов'язково заміщену групу, вибрану з лінійного або розгалуженого С1-С6алкілу, С3-С6-циклоалкілу або циклоалкілалкілу, арилу, арилалкілу, гетероциклілу або гетероциклілалкілу, або R" і R''' разом з атомом азоту, з яким вони зв'язані, можуть утворювати 56-членну гетероарильну або гетероциклільну групу, яка необов'язково містить один додатковий гетероатом, вибраний з Ν, Ο або S; А означає двовалентну групу, вибрану з -СН2-, -(СН2)2-, -СН2 -С(СН3)2-, -С(СН3)2 -СН2- або -СН=СН; або їх фармацевтично прийнятних солей. Фармакологія Сполуки формули (І) активні як інгібітори протеїнкіназ і тому застосовні, наприклад, для обмеження нерегульованої проліферації пухлинних клітин. У терапії вони можуть бути використані в лікуванні різних пухлин, таких як пухлини, про які раніше повідомлялося, а також в лікуванні інших проліферативних захворювань клітин, таких як псоріаз, проліферація гладких клітин стінок судин, пов'язана з атеросклерозом, післяопераційний стеноз і рестеноз, і в лікуванні хвороби Альцгеймера. Інгібуюча активність передбачуваних інгібіторів комплексів cdk/циклін і ефективність вибраних сполук визначають методом аналізу, 41 80763 42 лінійному інтервалі реакції для експерименту по заснованим на застосуванні SPA техніки визначенню Ki. (Amersham Pharmacia Biotech). Оцінка кінетичних параметрів: кінетичні Аналіз полягає в перенесенні кіназою залишку параметри оцінюють за допомогою одночасної фосфату з радіоактивною міткою на нелінійної регресії методом найменших квадратів, біотинільований субстрат. Одержаному 33Рвикористовуючи [Eq. 1] (конкурентний інгібітор у міченому біотинільованому продукту дозволяють відношенні АТФ, механізм випадкового вибору) і зв'язуватися з SPA гранулами, покритими повний набір даних (80 точок): стрептавідином (місткість по біотину 130пмоль/мг), і світло, що випускається, вимірюють в Vm × A × B сцинтиляційному лічильнику. [Eq.1] n= Ka æ Bö Оцінка інгібування активності комплексу a × Ka × Kb + a × Ka × B + a × Kb × A + A × B + a × × l × çKb + ÷ ç ÷ bø Ki сdk2/циклін А è Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок планшета вміщують 4мкМ субстрату в «house» біотинільованому гістоні Н1 (Sigma # Н-5505), де А = [АТФ], В = [субстрат], І = [інгібітор], Vm = 10мкМ АТФ (0,1мкКі Ρ33g-ΑΤΦ), 1,1нМ комплексу максимальна швидкість, Kа, Kb, Ki являють собою СDK2/циклін А, інгібітор в загальному об'ємі константи дисоціації АТФ, субстрату і інгібітору, буфера 30мкл (TRIS-HCI 10мМ рН 7,5, MgCl2 відповідно; a і b означають фактори 10мМ, DTT 7,5мМ+0,2мг/мл BSA). Після інкубації кооперативності між зв'язуванням субстрату і АТФ протягом 60хв. при кімнатній температурі, реакцію і зв'язуванням субстрату і інгібітору, відповідно. припиняють шляхом додавання 100мкл PBS Крім того, вибрані сполуки характеризуються буфера, що містить 32мМ ЕДТО, 500мкМ на наборі ser/thre кіназ, строго зв'язаних з нерадіоактивного АТФ, 0,1% Тритона X100 і клітинним циклом (сdk2/циклін Е, cdk1/циклін В1, 10мг/мл SPA гранул, покритих стрептавідином. cdk5/p25, сdk4/циклін D1), і також для Після інкубації протягом 20хв. відбирають по специфічності на МАРK, РKА, EGFR, IGF1-R, 110мкл суспензії і переносять в 96-ямкові Aurora-2 і Cdc 7. планшети OPTIPLATE, що містять 100мкл 5М Оцінка інгібування активності комплексу CsCl. Через 4 години з планшетів зчитують сdk2/циклін Ε показники протягом 2хв. в радіоактивному рідері Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок Packard TOP-Count.) планшета вміщують 10мкМ субстрат в «house» Визначення ІС50: інгібітори випробовують при біотинільованому гістоні Н1 (Sigma # Н-5505), різних концентраціях в інтервалі від 0,0015 до 30мкМ АТФ (0,3мкКі Ρ33g-ΑΤΦ), 4нг комплексу GST10мкМ. Експериментальні дані аналізують за циклін E/CDK2, інгібітор в загальному об'ємі допомогою комп'ютерної програми GraphPad буфера 30мкл (TRIS-HCl 10мМ рН 7,5, MgCl2 Prizm, використовуючи логістичні рівняння з 10мМ, DTT 7,5мМ+0,2мг/мл BSA). Після інкубації чотирма параметрами: протягом 60хв. при кімнатній температурі, реакцію Υ=BOTTOM+(TOP-BOTTOM)/(1+10)(LOGIC 50припиняють шляхом додавання 100мкл PBS X)(*SLOPE)), буфера, що містить 32мМ ЕДТО, 500 мкМ де x означає логарифм концентрації інгібітору, нерадіоактивного АТФ, 0,1% Тритона X100 і у означає відповідь; у починається в нижній 10мг/мл SPA гранул, покритих стрептавідином. частині і підіймається вгору, утворюючи сигмоїдну Після інкубації протягом 20хв. відбирають по криву. 110мкл суспензії і переносять в 96-ямкові Розрахунок Kі: планшети OPTIPLATE, що містять 100мкл 5М Експериментальний метод: реакцію проводять CsCl. Через 4 години з планшетів зчитують в буфері (10мМ Трис, рН 7,5, 10мМ MgCl2, показники протягом 2хв. в радіоактивному рідері 0,2мг/мл BSA, 7,5мМ DTT), що містить 3,7нМ Packard TOP-Count.) ферменту, гістону і АТФ (постійне співвідношення Визначення ІС50: див. вище. нерадіоактивний/мічений АТФ 1/3000). Реакцію Оцінка інгібування активності комплексу зупиняють дією ЕДТО і субстрат уловлюють на cdk1/циклін В1 фосфомембрані (96-ямкові планшети типу Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок Multiscreen від Мillіроrе). Після інтенсивного планшета вміщують 4мкМ субстрату в «house» промивання з планшетів зчитують показники на біотинільованому гістоні Н1 (Sigma # Н-5505), top-лічильнику. Проводять контрольне (час 20мкМ АТФ (0,2мкКі Ρ33g-ΑΤΦ), 3нг комплексу дорівнює нулю) для кожної концентрації АТФ і циклін B/CDK1, інгібітор в загальному об'ємі гістону. буфера 30мкл (TRIS-HCl 10мМ рН 7,5, MgCl2 Планування експерименту: швидкості реакції 10мМ, DTT 7,5мМ+0,2мг/мл BSA). Після інкубації вимірюють при чотирьох концентраціях АТФ, протягом 20хв. при кімнатній температурі, реакцію субстрат (гістону) і інгібітору. 80-точкова матриця припиняють шляхом додавання 100мкл концентрацій будується на основі відповідних PBS+32мМ ЕДТО+0,1% Тритона Х100+500мкМ значень Km для АТФ і субстрату і значень ІС50 АТФ, що містить 1мг SPA гранул. Потім об'єм інгібітору (0,3-, 1-, 3-, 9-кратні значення Km або 110мкл переносять в планшети Optiplate. Після ІС50). Попередній експеримент по перебігу реакцій інкубації протягом 20хв. для уловлювання у часі за відсутності інгібітору і при різних субстрату додають 100мкл 5М CsCl, щоб дати концентраціях АТФ і субстрату дозволяє зробити можливість стратифікації гранул до верхньої вибір однієї кінцевої тимчасової точки (10хв.) в частини Optiplate і витримують 4 години до 43 80763 44 планшети OPTIPLATE, що містять 100мкл 5М зчитування показників лічильника радіоактивності CsCl. Через 4 години з планшетів зчитують TOP-Count. показники протягом 2хв. в рідері лічильника Визначення ІС50: див. вище. радіоактивності Packard TOP-Count. Оцінка інгібування активності комплексу Визначення ІС50: див. вище. cdk5/p25 Оцінка інгібування активності РКА Оцінку інгібування активності cdk5/p25 Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок здійснюють у відповідності з наступним планшета вміщують 10мкМ субстрату в «house» протоколом. біотинільованому гістоні Н1 (Sigma # Н-5505), Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок планшета вміщують 10мкМ субстрату в «house» 10мкМ АТФ (0,2мкКі Ρ33g-ΑΤΦ), 0,45 U РКА (Sigma біотинільованому гістоні НІ (Sigma # Н-5505), # 2645), інгібітор в загальному об'ємі буфера 30мкл (TRIS-HCl 10мМ рН 7,5, MgCl2 10мМ, DTT 30мкМ АТФ (0,3мкКі Ρ33g-ΑΓΦ), 15нг комплексу 7,5мМ+0,2мг/мл BSA). Після інкубації протягом CDK5/p25, інгібітор в загальному об'ємі буфера 90хв. при кімнатній температурі, реакцію 30мкл (TRIS-HCl 10мМ рН 7,5, MgCl2 10мМ, DTT припиняють шляхом додавання 100мкл PBS 7,5мМ+0,2мг/мл BSA). Після інкубації протягом буфера, що містить 32мМ ЕДТО, 500мкМ 35хв. при кімнатній температурі, реакцію нерадіоактивного АТФ, 0,1% Тритона X100 і припиняють шляхом додавання 100мкл PBS 10мг/мл SPA гранул, покритих стрептавідином. буфера, що містить 32мМ ЕДТО, 500мкМ Після інкубації протягом 20хв. відбирають по нерадіоактивного АТФ, 0,1% Тритона X100 і 110мкл суспензії і переносять в 96-ямкові 10мг/мл SPA гранул, покритих стрептавідином. планшети OPTIPLATE, що містять 100мкл 5М Після інкубації протягом 20хв. відбирають по CsCl. Через 4 години з планшетів зчитують 110мкл суспензії і переносять в 96-ямкові показники протягом 2хв. в рідері лічильника планшети OPTIPLATE, що містять 100мкл 5М радіоактивності Packard TOP-Count. CsCl. Через 4 години з планшетів зчитують Визначення ІС50: див. вище. показники протягом 2хв. в рід ері лічильника Оцінка інгібування активності EGFR радіоактивності Packard TOP-Count. Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок Визначення ІС50: див. вище. планшета вміщують 10мкМ субстрату в «house» Оцінка інгібування активності комплексу біотинільованому МВР (Sigma # Μ-1891), 2мкМ сdk4/циклін D1 Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок АТФ (0,04мкКі Ρ33g-ΑΤΦ), 36нг клітин комах, планшета вміщують 0,4мкМ субстрату GCT-Rb експресованих GST-EGFR, інгібітор в загальному миші (769-921) (# sc-4112 з Santa Cruz), 10мкМ об'ємі буфера 30мкл (Hepes 50мМ рН 7,5, MgCl2 3мМ, DTT 1мМ, NaVO3 3мкМ+0,2мг/мл BSA). Після АТФ (0,5мкКі Ρ33g-ΑΤΦ), 100нг бакуловірусу, інкубації протягом 20хв. при кімнатній температурі, експресованого GST-cdk4/GST-циклін D1, інгібітор реакцію припиняють шляхом додавання 100мкл у відповідних концентраціях в загальному об'ємі PBS буфера, що містить 32мМ ЕДТО, 500мкМ буфера 50мкл (TRIS-HCl 10мМ рН 7,5, MgCl2 нерадіоактивного АТФ, 0,1% Тритона X100 і 10мМ, DTT 7,5мМ+0,2мг/мл BSA). Після інкубації 10мг/мл SPA гранул, покритих стрептавідином. протягом 40хв. при 37°С, реакцію припиняють Після інкубації протягом 20хв. відбирають по шляхом додавання 20мкл ЕДТО 120мМ. 110мкл суспензії і переносять в 96-ямкові Уловлювання: 60мкл переносять з кожної ямки планшети OPTIPLATE, що містять 100мкл 5М в планшет MultiScreen для того, щоб зробити CsCl. Через 4 години з планшетів зчитують можливим зв'язування субстрату з показники протягом 2хв. в рідері лічильника фосфоцелюлозним фільтром. Планшети потім три радіоактивності Packard TOP-Count. рази промивають (150мкл на ямку) PBS, що не Визначення ІС50: див. вище. містить Ca++/Mg++ і фільтрують в системі для Оцінка інгібування активності IGF1-R фільтрації MultiScreen. Оцінку інгібування активності IGF1-R Детектування: фільтрам дають сушитися при здійснюють у відповідності з наступним 37°С, потім додають сцинтилятор (100мкл на ямку) протоколом. і мічений 33Р фрагмент Rb визначають Активація ферменту: IGF1-R має бути підрахунком радіоактивності в приладі Top-Count. активований аутофосфорилуванням до початку Визначення ІС50: див. вище. експерименту. Безпосередньо перед аналізом Оцінка інгібування активності МАРК концентрований розчин ферменту (694нМ) Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок інкубують протягом півгодини при 28°С в планшета вміщують 10мкМ субстрату в «house» присутності 100мкМ АТФ і потім доводять біотинільованому МВР (Sigma # М-1891), 15мкМ розбавлення до робочого у вказаному буфері. АТФ (0,15мкКі Ρ33g-ΑΤΦ), 30нг GST-МАРК (Upstate Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок Biothecnology # 14-173), інгібітор в загальному планшета вміщують 10мкМ біотинільованого IRS1 об'ємі буфера 30мкл (TRIS-HCl 10мМ рН 7,5, пептидного (PRIMM) субстрату, 0-20мкМ інгібітору, MgCl2 10мМ, DTT 7,5мМ+0,2мг/мл BSA). Після 6мкМ АТФ, 1мкКі Ρ33g-ΑΤΦ і 6нМ GST-IGF1-R інкубації протягом 35хв. при кімнатній температурі, (заздалегідь інкубованого протягом 30хв. при реакцію припиняють шляхом додавання 100мкл кімнатній температурі з 60мкМ нерадіоактивного PBS буфера, що містить 32мМ ЕДТО, 500мкМ АТФ) в загальному об'ємі буфера 30мкл (50мМ нерадіоактивного АТФ, 0,1% Тритона X100 і HEPES рН 7,9, 3мМ МnСl2, 1мМ DTT, 3мкМ 10мг/мл SPA гранул, покритих стрептавідином. NaVO3). Після інкубації протягом 35хв. при Після інкубації протягом 20хв. відбирають по кімнатній температурі реакцію зупиняють 110мкл суспензії і переносять в 96-ямкові 45 80763 46 планшети OPTIPLATE, що містять 100мкл 5М додаванням 100мкл PBS буфера, що містить CsCl. Через 4 години з планшетів зчитують 32мМ ЕДТО, 500мкМ нерадіоактивного АТФ, 0,1% показники протягом 2хв. в рідері лічильника Тритона X100 і 10мг/мл SPA гранул, покритих радіоактивності Packard TOP-Count. стрептавідином. Після інкубації протягом 20хв. Визначення ІС50: див. вище. відбирають по 110мкл суспензії і переносять в 96Сполуки за даним винаходом можна вводити ямкові планшети OPTIPLATE, що містять 100мкл або у вигляді окремого засобу або, альтернативно, 5М CsCl. Через 4 години з планшетів зчитують в поєднанні з відомими методами лікування раку, показники протягом 2хв. в рідері лічильника такими як радіаційна терапія або хіміотерапія в радіоактивності Packard TOP-Count. комбінації з цитостатичними або цитотоксичними Оцінка інгібування активності Aurora-2 агентами, агентами тину антибіотиків, Реакція кінази: у кожну з 96 U-подібних ямок алкілуючими агентами, антиметаболітними планшета вміщують 8мкМ біотинільованого агентами, гормональними агентами, пептиду (4 повтори LRRWSLG), 10мкМ АТФ імунологічними агентами, агентами тину (0,5мкКі Ρ33g-АТФ), 7,5нг Aurora-2, інгібітор в інтерферону, інгібіторами циклооксигенази загальному об'ємі буфера 30мкл (50мМ HEPES рН (наприклад, інгібіторами СОХ-2), інгібіторами 7,0, 10мМ MgCl2, 1мМ DTT, 0,2мг/мл BSA, 3мкМ матричної металопротеази, інгібіторами ортованадату). Після інкубації протягом 60хв. при теломерази, інгібіторами тирозинкінази, агентами, кімнатній температурі реакцію зупиняють які являють собою рецептори факторів росту, додаванням 100мкл суспензії гранул. анти-HER агентами, анти-EGFR агентами, Стратифікація: У кожну ямку додають 100мкл агентами, які перешкоджають ангіогенезу 5М CsCl2 і витримують протягом 4 годин до (наприклад, інгібіторами ангіогенезу), інгібіторами підрахунку радіоактивності на приладі Top-Count. фарнезилтрансферази, інгібіторами шляху Визначення ІС50: див. вище. трансдукції «ras-raf» сигналу, інгібіторами Оцінка інгібування активності комплексу клітинного циклу, іншими інгібіторами cdks, Cdc7/dbf4 тубулінзв'язуючими агентами, інгібіторами Оцінку інгібування активності комплексу топоізомерази І, інгібіторами топоізомерази II і ним Cdc7/dbf4 здійснюють у відповідності з наступним подібними. протоколом. При складанні рецептури в таких комбінованих Субстрат Biotin-MCM2транспродуктах використовують сполуки за винаходом в фосфорильований комплексом Cdc7/Dbf4 в 33 діапазоні доз, описаному нижче, і інший присутності АТФ, міченої g-ΑΤΦ. фармацевтично активний агент у встановленому Фосфорильований Biotin-MCM2 субстрат потім діапазоні доз. уловлюється гранулами SPA, на які нанесений Сполуки формули (І) можуть бути використані стрептавідин, і ступінь фосфорилування оцінюють послідовно в поєднанні з відомими протираковими підрахунком b-випромінювання. засобами, в тих випадках, коли комбінована Оцінку інгібування активності Cdc7/dbf4 рецептура не підходить. здійснюють в 96-ямковому планшеті у Сполуки формули (І) за даним винаходом, відповідності з наступним протоколом. застосовні для введення ссавцем, наприклад, У кожну ямку планшета додають: людині, можна вводити звичайними шляхами і -10мкл субстрату (біотинільований МСМ2, дозування залежить від віку, маси тіла і стану 6мкМ кінцева концентрація); хворого і способу введення. -10мкл ферменту (Cdc7/Dbf4, 17,9нМ кінцева Наприклад, прийнятне дозування для концентрація); перорального введення сполуки формули (І) може 10мкл випробовуваної сполуки (12 складати від близько 10 до близько 500мг на дозу, концентрацій, що збільшуються в інтервалі від нМ яку приймають 1-5 разів на день. до мкМ з одержанням кривої залежності дозаСполуки за винаходом можна вводити в відповідь); різноманітних лікарських формах, наприклад, - 10мкл суміші нерадіоактивного АТФ (2мкМ перорально у вигляді таблеток, капсул, таблеток, кінцева концентрація) і радіоактивного АТФ покритих цукром або плівкою, рідких розчинів або (мольне співвідношення радіоактивного і суспензій; ректально у вигляді супозиторіїв; нерадіоактивного АТФ 1/5000) використовують парентерально, наприклад, внутрішньом'язово або потім, щоб почати реакцію, яка має місце при за допомогою внутрішньовенних і/або 37°С. інтратекальних і/або інтраспінальних ін'єкцій або Субстрат, фермент і АТФ розводять 50мМ вливань. HEPES (рН 7,9), що містить 15мМ MgCl2, 2мМ DTT, Даний винахід також включає фармацевтичні 3мкМ NaVO3, 2мМ гліцерофосфату і 0,2мг/мл BSA. композиції, які містять сполуку формули (І) або Розчинник для випробовуваних сполук містить його фармацевтично прийнятну сіль спільно з також 10% ДМСО. фармацевтично прийнятним наповнювачем, який Після інкубації протягом 60хв. реакцію може бути носієм або розріджувачем. зупиняють додаванням в кожну ямку 100мкл PBS Фармацевтичні композиції, які містять сполуки (рН 7,4), що містить 50мМ ЕДТО, 1мМ за винаходом, звичайно одержують визначеними нерадіоактивного АТФ, 0,1% Тритона X100 і нижче загальноприйнятими методами і вводять у 10мг/мл гранул SPA, на які нанесений відповідній лікарській формі. стрептавідин. Наприклад, тверді форми для перорального Після інкубації протягом 20хв. відбирають введення можуть містити разом з активною 110мкл суспензії і переносять в 96-ямкові 47 80763 48 представлена у вигляді відповідної хімічної сполукою, розріджувачі, наприклад, лактозу, формули в представленій нижче таблиці І, в якій декстрозу, сахарозу, целюлозу, кукурудзяний або також вказане положення приєднання до іншої картопляний крохмаль; речовини, сприяючі частини молекули Х-М. ковзанню, наприклад, діоксид кремнію, тальк, Шифр X просто означає групу X в формулі (І); стеаринову кислоту, стеарат магнію або кальцію значення групи X представлені в таблиці II, де і/або поліетиленгліколі; зв'язуючі, наприклад, також вказане положення сполуки X з іншою крохмаль, аравійську камедь, желатин, частиною молекули Μ. метилцелюлозу, карбоксиметилцелюлозу або Шифр С означає групу R1, яка сполучена з полівінілпіролідон; розпушувачі, наприклад, іншою частиною молекули через один з атомів крохмаль, альгінова кислота, альгінати, або азоту піразольного циклу згідно з формулою (І). натрійкрохмальгліколят; спінювальні і виділяючі Кожна група С представлена у вигляді відповідної пузирків газу суміші; барвники; підсолоджувальні хімічної формули в представленій нижче таблиці агенти, зволожувачі, такі як лецитин, полісорбати, III, в якій також вказане положення приєднання до лаурилсульфати і, взагалі нетоксичні і іншої частини молекули М. фармакологічно інертні речовини, що Шифр D означає групу R2, яка сполучена з використовуються в фармацевтичних рецептурах. іншою частиною молекули через карбонільну групу Вказані фармацевтичні препарати можна згідно з формулою (І). Кожна група D виготовляти відомими методами, наприклад, представлена у вигляді відповідної хімічної змішуванням, гранулюванням, таблетуванням, формули в представленій нижче таблиці IV, в якій способамидля нанесення цукрового або також вказане положення приєднання до іншої плівкового покриття. частини молекули М. Рідкі дисперсії для перорального введення І нарешті, шифр Μ належить до центральної можуть бути, наприклад, у вигляді сиропів, частини молекули (І), яка містить карбонільну емульсій і суспензій. групу в положенні 3. Із всього вищевикладеного Наприклад, сиропи можуть містити як носій фахівцеві зрозуміло, що Μ заміщена групами -Xсахарозу або сахарозу з гліцерином і/або маніт і (шифр X), R1 (шифр С) і R2 (шифр D), що описано сорбіт. в формулі (І); кожна група Μ представлена у Суспензії і емульсії можуть містити як вигляді відповідної хімічної формули в таблиці V, приклади носіїв природну камедь, агар, альгінат де також вказані положення інших замісників. натрію, пектин, метилцелюлозу, Таким чином, система шифрів, що карбоксиметилцелюлозу або полівініловий спирт. використовується тепер для деяких сполук Суспензії або розчини для внутрішньом'язових формули (І), може бути стисло викладена таким ін'єкцій можуть містити, нарівні з активною чином: сполукою, фармацевтично прийнятний носій, наприклад, стерильну воду, оливкове масло, етилолеат, гліколі, наприклад, пропіленгліколь, і, якщо потрібно, потрібну кількість гідрохлориду лідокаїну. Розчини для внутрішньовенних ін'єкцій або вливань можуть містити як носій стерильну воду або вони можуть бути у вигляді стерильних водних ізотонічних фізіологічних розчинів, що переважно, або вони можуть містити пропіленгліколь як носій. Супозиторії можуть містити разом з активним компонентом фармацевтично прийнятний носій, наприклад, масло какао, поліетиленгліколь, поліоксіетиленовий ефір сорбіту і жирної кислоти (сурфактант) або лецитину. Представлені нижче приклади наведені для того, щоб краще пояснити даний винахід, ніяким чином не обмежуючи його. Приклади Одержані різні сполуки формули (І), які включають, отже, сполуки формули (Іа) і (Іb) за винаходом. Хоч деякі з них конкретно названі і перераховані в представленій нижче Просто як приклад, в якому не мається на експериментальній частині, більшість зручно увазі обмеження об'єму даного винаходу, ідентифікувати відповідно до системи шифрів в розглянемо сполуку B66-X03-M00(C01)-D01 (див. таблицях, наведених в експериментальній частині, приклад 36), яка являє собою похідне разом з даними аналізів. піразолохіназоліну формули (Іа), де центральна Кожний шифр, який однозначно ідентифікує частина являє собою залишок М00 в таблиці V, R тільки одну конкретне сполуку формули (І) означає групу формули В66 в таблиці І, X означає складається з п'яти елементів B-X-M(C)-D. двовалентну групу Х03 в таблиці II, R1 означає Шифр В означає будь-який замісник R згідно з групу С01 в таблиці III і R2 означає групу D01 в формулою (І), сполучений з іншою частиною таблиці IV, що має наступну структуру: молекули через лінкер X; кожна група В 49 80763 . З всього вищевикладеного фахівцеві зрозуміло, що коли R1 і R2 зв'язані разом згідно з формулою (Іb), цей додатковий цикл вже включений в структуру залишку Μ і, отже, шифри С і D опускаються. 50 51 80763 52 53 80763 54 55 80763 56 57 80763 58 59 80763 60