Речовина , що знижує рівні холестерину в сироватці крові, та спосіб її одержання

1. Вещество, понижающее уровни холестерина в сыворотке крови, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно включает сложный эфир (5-цитостанола и жирной кислоты или смесь сложных эфиров рцитостанола и жирной кислоты. 2. Вещество п о п . 1, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что жирные кислоты в смеси содержат 2-22 атомов углерода. 3. Вещество по любому из пп. 1,2, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно представлено в форме растворимой в жирах, полученной этерификацией свободного р-цитостанала с эфиром жирной кислоты или смесью эфира жирной кислоты. 4. Вещество по любому из пп. 1-3„ о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно является добавкой при производстве жира или других пищевых продуктов. 5. Вещество по любому из пп. 1-3, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно является жировым компонентом или заменителем жира. 6. Вещество по пп. 5, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно является составной частью растительных масел, маргаринов, сливочных масел, майонезов, приправ к салату, жиров, добавляемых к тесту для рассыпчатости и т.п. 7. Вещество по любому из пп. 1-3, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно является частью диеты. 8. Способ получения вещества по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что свободный р-цитостанол подвергают этерификации со сложным эфиром жирной кислоты или смесью сложных эфиров жирной кислоты в присутствии катализатора переэтерификации. 9. Способ по п. 8, отличающ и й с я тем, что реакцию осуществляют при температуре 90-120°С и вакууме 5-15 мм Нд. с > О о» оо оо О Высокий уровень холестерина в сыворотке крови может быть понижен изменением метаболизма липидов в кишечнике. В этом случае задача может быть затруднена абсорбцией триглицеридов, холестерина или желчных кислот. В ряде исследований отмечалось, что некоторые растительные стеролы, такие как р~цитостерол (24-этил-5-холестен-Зр-ол) и его закрепленная форма, р-цитостанол (24-" этил-5а-холестан-3£-ол), снижают уровни холестерина в сыворотке крови путем снижения абсорбции пищевого холестерина из кишечника (1-25). Использование рас 26688 тительных стеролов может считаться безопасным, поскольку растительные стеролы являются природными составными частями растительных жиров и масел. Сами растительные стеролы не абсорбируются из кишечника или абсорбируются в очень нмзкой концентрации. Снижение сферы действия коронарного заболевания ясно ассоциируется со снижением холестерина в сыворотке крови, в частности LDL холестерина. Высокое значение содержания холестерина в сыворотке крови является наиболее значительным прямым показателем наличия риска коронарного заболевания. Степень абсорбции холестерина зависит от наследственности, апопротеинового Е-фенотипа. Апопротеин Е является протеином, который относится к липопротеинам сыворотки крови и принимает участие в переносе холестерина в системе (26). Для аллелей, связанных с синтезом апопротеина Е, то есть липопротеина, который влияет на абсорбцию, известны три вида - е2, еЗ и е4, которые объединяются в случайные пары. Аллели способны образовывать всего шесть различных комбинаций. Чем выше сумма подиндексов, тем лучше абсорбционная способность холестерина и тем выше уровень холестерина, в частности вредного LDL холестерина, в сыворотке крови (27). е4 аллель наиболее представлен среди наследственных факторов финна (Finns), поэтому его соотношение почти двойное по сравнению со многими европейскими популяциями (28V Финны действительно исключительно чувствительны к пищевым недостаткам и к жирной и с высоким содержанием холестерина пище (29). Уровни холестерина в сыворотке крови могут быть снижены путем диетического питания, при уделении внимания качеству и виду потребляемых жиров и количеству потребляемого холестерина. В практике, однако, этот путь не всегда приводит к удовлетворительному результату. Другие методы, пригодные для всех, для достижения понижения уровня холестерина в сыворотке крови, должны быть рассмотрены в сравнении с настоящими методами. Повышение содержания волокон в пище является методом с ограниченным действием. Понижающее холестерин действие растворимых волокон в пище основане на связывании и удалении желчных киелст. Так как абсорбция холестерина является основным показателем регулирования уровня холестерина в сыворотке крови, является логичным стремить 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ся к развитию методов, по которым абсорбция холестерина может быть предотвращена или уменьшена. Pollak показал, что поглощенный растительный стерол снижал уровень холестерина в сыворотке крови у мужчин (1). То же наблюдалось ранее у экспериментальных животных (2,3). В ряде исследований отмечалось, что большие дозы растительных стеролов понижают уровни холестерина в сыворотке крови, в лучших случаях, на 10-20% (4,5). В этих экспериментах были использованы большие количества (до 24 г/день) р-цитостерола в кристаллической форме (6). В некоторых экспериментах уровень холестерина в сыворотке крови значительно понижался даже при меньших дозах (7), хотя небольшое количество цитостерола, вводимое в виде эфиров жирной кислоты, не кажется очень эффективным для понижения уровня сывороточного холестерина (8). Препараты цитостерола имеют, в основном, хорошую переносимость при длительном применении (9). Природные растительные стеролы имеют структурное сходство с холестерином. Различие между молекулой холестерина и молекулой растительного стерола прежде всего найдено в структуре боковой цепи основного скелета. Обычная пища содержит 100-300 мг/день растительных стеролов. Большинство растительных стеролов в пище - это р-цитостерол и приблизительно одна треть - это кампестерол. Небольшие количества насыщенных цитостанолов также присутствуют в продуктах. Обычно концентрации кампестерола в сыворотке крови частично отражают степень абсорбции холестерина (10,11,12). Изменение количеств растительных стеролов в пище влияет на уровень сывороточного холестерина, но эта область еще недостаточно изучена. Растительные стеролы плохо абсорбируются из кишечника. Растительные стеролы, которые ограниченно абсорбируются в системе (менее чем 10% стеролов) (30,31,32), выделяются с желчью и, через нее, со стулом. В настоящее время легко, измерить уровни стерола из образцов пищи, сыворотки или стула методами газовой хроматографии. Уровни в сыворотке частью зависят от количеств растительных стеролов из пищи и частью от эффективности абсорбции стеролов. Обычно уровни растительного стерола остаются ниже 1/300 уровня сывороточного холестерина, так как часть абсорбированного расти 26688 холестерина меняется, как и их собствентельного стерола выделяется из системы ная абсорбция (21, 22) 23). с желчью. Последующие исследования, главным Даже большие дозы поглощенных расобразом, сосредоточивались на изучении тительных стеролов не проявляются в уровне сывороточного растительного сте- 5 того, как влияет на эффективность понижения уровней сывороточного холестерирола. Значения остаются на нормальном на форма {кристаллическая, суспензия, уровне, так как у человека способность к гранула), в которой вводят растительные абсорбции растительного стерола быстро стеролы. Кристаллические растительные насыщается. Уровень растительного стерола в сыворотке крови поднимается до 10 стеролы не обладают значительной стеопасного в небольших случаях редких запенью растворимости в фазе мицелл в болеваний, таких как цереброчувствительпитающем канале и поэтому не могут ный ксантоматоз и цитостеролемия {33, эффективно ингибировать абсорбцию хо34, 35), в сравнении с кот( ыми коронарлестерина. Только масла и жиры опреденая болезнь является обычной. Проявле- 15 ляют степень растворимости свободных ние этих заболеваний составляет нескольстеролов. Только в растворенной форме ко случаев на один миллион. Ни одного могут стеролы ингибировать абсорбцию случая таких заболеваний не отмечалось холестерина. Согласно Хайнманну и соавв Финляндии. Высокие значения раститорам (24) цитостанол ингибировал в экстельного стерола иногда наблюдаются у 20 перименте абсорбцию холестерина на пациентов, страдающих некоторыми бо82%, тогда как цитостерол соответственлезнями печени (36). но ингибировал абсорбцию на 50%. В некоторых исследованиях использовались эфиры жирных кислот цитостеИсследования метаболизма холестерина показало, что цитостерол ингиби- 25 рола, такие как цитостерол ацетат или рует абсорбцию как эндогенного, так и олеат или стигмастерол олеат, раствопищевого хопестермиа из кишечника ренные в жирах. В экспериментах на кры(13,14). Как результат этого, уменьшается сах "масло" этого вида, имеющее конвыделение нейтральных стероидов в стуцентрацию стерола вплоть до 8%, уменьле, что приводит к недостатку холестери- 30 шает абсорбцию холестерина на 20-40% на в печени и, через это, к пониженному (22). При высокохолестериновой диете уровню сывороточного холестерина. С дру(500 мг/день) цитостерол олеат (2 г/день), гой стороны, цитостерол не действует на растворенный в жире, понижает абсорбабсорбцию желчных кислот (13). цию холестерина у испытуемых субъектов На основе экспериментов на живот- 35 в среднем на 33% (25). В том же иссленых кажется, что действие цитостерола довании смешанный с пищей цитостерол основано на его способности помещать в более низкой дозе (1 г/день) понижал пищевой холестерин в мицеллу желчной абсорбцию холестерина на 42%. кислоты (15,16,17). Похожие результаты Патент Германии (Deutsches Patentamt, были получены также для человека (37). 40 Offenlengungsschnitt 2035069, январь 23, Различные растительные стеролы показа1971) касается добавления эфиров жирли действие различными путями на абных кислот стерола в масло для готовки сорбцию холестерина (19,38). Предшестеды с целью снижения урорней сызоровующие исследования, проведенные на точного холестерина у человека. В данэкспериментальных животных, создали 45 ном патенте предлагается для этерифивпечатление, что цитогтанол является наикации свободных стеролов использовать более эффективным ингибитором абсорбспособ, ни в коем случае не отвечающий ции холестерина (38) и сам при этом требованиям приготовления высококачестпочти не абсорбируется. Далее, исследовенной пищи. Согласно патенту, этерифивание без контроля шести субъектов по- 50 кацию проводят между свободным стероказало, что свободный цитостанол (1,5 г/ лом и ангидридом жирной кислоты при день) понижает сывороточный холестерин воздействии хлорной кислоты в качестве (главным образом LDL холестерин) в текатализатора. Используемые катализатор чение четырех недель на 15%. В течение и реагент не могут быть приемлемы в интерпала в две недели значения холес- 55 процессе приготовления пищевого протерина вернулись к первоначальным уровдукта Кроме того, данный патент отноням (20). Большинство препаратов растисится к эфирам жирных кислот только тельных стеролов содержат ряд различприродных растительных стеролов. ных растительных стеролов. Действие смеМного реагентов, которые не могут си растительных стеролов на абсорбцию быть приемлемы как продукт питания или 26688 для производства продуктов, предназначенных как добавка к продуктам питания, были использованы при получении эфиров кислот стеролов Обычным является использование, например, хлора (39), брома (40), тионилхлорида (41) или ангидритных производных жирных кислот Среди запатентованных способов только способ Baites/Deutsches Patentamt, Offenlengungsschnift 2248921; апрель 11, 1974) для этерификации стеролов, присутствующих в масле и жирах, методом химической переэтерификации соответствует критерию приготовления пищевого продукта. В указанном патенте свободный сторол и избыток тфира жирной кислоты добавляются к смеси масла или жира, после чего вся жирная смесь переэтерифицируется широко известным методом переэтерификации Предложение согласно настоящему изобретению относится к использованию стерола совершенно иного вида для понижения уровня холестерина в сыворотке крови Оно включает эфиры жирных кислот 5Ьнасыщенных стеролов, особенно эфиры жирных кислот цитостанола (цитостанол - 24-этил-5!_-холестан-Зр-ол), которые понижают уровень холестерина в сыворотке крови с особенной эффективностью Указанные эфиры могут быть получены или использованы как таковые или могут быть добавлены к продуктам питания, особенно к жирной части пищи Смесь эфира жирной кислоты цитостанола получают отвеождением торговой смеси р-цитостерола (цитостерол = 24-зтил-5-холестен-Зр-ол). р-цитостанол может быть получен ранее известной методикой отверждения хопестерина путем отверждения рцитостєрола с использованием Pd//C катализатора в органическом растворителе (43) Смесь была одобрена FDA (Cytellm, Eli, Lilly). В реакции степень отверждения достигает 99%. Катализатор, используемый при конверсии, удаляется с помощью мембранного фильтра, полученный цитостанол кристаллизуют, промывают и сушат. Согласно изобретению, р-цитостаноловую смесь, которая содержит приблизительно 6% кампестанола, этерифицируют различными смесями эфиров жир ных кислот широко известными методами переэтерификации (44, 45, 46) В реакции может быть использован метиловый эфир смеси жирных кислот любого растительного мэсла Одним примером служит смесь рапсового масла и метиловый зфио, но приемлемыми являются жирные кислоты, содержащие около 2-22 атомов 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 углерода Способ согласно изобретению для получения эфиров жирных кислот станола пыгодно отличается от ранее запатентованных способов тем, что никакие другие вещества, кроме свободного станола, эфир жирной кислоты или смесь эфира жирной кислоты и катализатор, используются в реакции переэтерификации. Используемым катализатором может быть любой известный катализатор переэтерификации, такой как Na-этилат. Необходимо также отметить, что в способе, применяемом в нашей заявке, в противоположность способу Baltes, упоминаемому выше, жир сам не переэтерифицируется В этом случае жировая часть при приготовлении на жиру или какая-либо другая пища будет сохранять свои натуральные свойства Необходимо было отметить далее, что переэтерифицируемая смесь может быть добавлена непосредственно в жиросодержащие продукты или использована в виде таковых. Так как станолсодержащая часть смеси не абсорбируется, энергетическое содержание смеси эфира жирной кислоты и станола составляет только 20-40% энергетического содержания условного масла или жира, зависящего от состава жирной кислоты. Таким образом смеси с успехом могут быть использованы так же, как вещества, понижающие энергетический состав пищи. Действие эфиров жирных кислот рцитостанола на абсорбцию холестерина и уровни сывороточного холестерина не было ранее исследовано. В исследовании, на котором базируется данная заявка, изучается, как концентрации растительного стерола в сыворотке зависят от цитостанола (р-цитостанол 94% и кампестанол 6%, твердой формы цитостанола, растворенного в рапсовом масле), как в а) свободном, так и в б) форме эфира жирной кислоты. Схема исследований показана на диаграмме I приложения I. Первой стадией для всех групп было введение рапсового масла (50 г/день), для контрольной группы введение рапсового масла продолжалось в течение всего испытания, а для других групп назначалось соединение по изобретению, добавленное к рапсовому маслу. Таблица 1 в приложении 2 показывает, что повышение концентрации р-цитостанола в пище понижает концентрации как [і-цитостерола, так и кампестерола в сыворотке крови, но не дает ясного изме : нения концентрации сывороточного р-цитостанола Лунные также показывают, что поглощение цитостанола в растворимой 26688 форме (например, в виде эфиров жирных кислот) уменьшает абсорбцию растительных стеролов более эффективно, чем свободный р-цитостанол, введенный в той же дозе. Что касается эфиров жирных кислот р-цитостанолов, то дополнительно наблюдалось четкое влияние дозы. Это доказывает, что р-цитостанол также ингибирует абсорбцию р-цитостерола и кампестерола, что может быть видно по понижению их концентраций. Соответственно, были также определенные изменения, вызываемые добавлениями станола, концентрации общего и LDL-сывороточного холестерина и абсорбции холестерина. Контрольная группа потребляла обычное рапсовое масло без добавок станола. Таблица 2 приложения 3 показывает, что абсорбция холестерина значительно понижалась от смеси эфира жирной кислоты р-цитостанола (27,4%), даже если потребление станола было относительно низким (895 мг/день). Абсорбция холестерина контрольной группой не изменялась. Действие смеси свободного р-цитостанола и эфира кислоты р-цитостанола на концентрацию холестерина в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой показано в табл. 3 приложения 4. Смесь эфира жирной кислоты р-цитостеролэ понижает как общий холестерин, так и холестерин более эффективно, чем р-цитостерол. Смесь эфира жирной кислоты р-цитостанола, растворенная в рапсовом масле (3,2 г р-цитостанола/день) понижает общий холестерин не более 9,5% и LDL-холестерин более 11,6% по сравнению с одним рапсовым маслом. Соответственно, соотношение HDL/LDL холестерина выросло значительно (от 0,32 до 0,52). 5 10 15 20 25 30 35 40 Проведенные исследования ясно показывают, что при добавлении эфиров жирной кислоты р-цитостанола к, например, пищевым жирам может быть достигнуто значительное преимущество как в 45 отношении естественной питательности, так и в отношении лечения гиперхолестеринемии, так как 1) смесь снижает уровни холестерина в сыворотке крови, 2) смесь не увеличивает концентрации 50 растительного стерола в сыворотке крови, 3) смесь может применяться ежедневно как заменитель жира при приготовлении обычной пищи, даже в больших дозах (0,2-20 г/день), причем потребле- 55 ние энергии жира уменьшается Липидные изменения, вызванные эфирами жирных кислот ft-станола, отмеченные при исследованиях, очень внимательно рассмотрены с точки зрония влияния 10 на здоровье. Важность результатов подчеркивается возможностью использования соединения непосредственно при приготовлении пищи как часть обычной готовки и при обычном питании. Результаты исследований показывают, что в течение диеты с введением станола уровень его в сыворотке не повышается и что уровни других растительных стеролов в сыворотке снижаются. Таким образом, указанная смесь эфира р-станола безопасна также для таких немногочисленных индивидуумов, которые легко абсорбируют все стеролы и которые имеют нарушения в выделении стеролов. Далее, ежедневная замена жира уменьшает личный энергетический запас, так как эффективное соединение станола не абсорбировалось, то есть оно действует как не производящая энергию часть жира. Отсутствуют доказательства того, что указанная смесь эфира р-станола тормозит абсорбцию липидрастворимых витаминов или уровни витаминов в сыворотке крови. Применение смеси эфира жирной кислоты цитостанола как части различных жиров или масел в жиросодержащих продуктах обширно, так как физические свойства смеси могут быть легко модифицированы изменением состава жирных кислот смеси. В добавление к этому, состав жирной кислоты для смеси эфира жирной кислоты р-станола может быть подобран таким, чтобы он содержал большие количества моноенов или полиенов, благодаря чему ее воздействие на понижение уровней холестерина в сыворотке крови изменяется. Поскольку смесь эфира жирной кислоты р-цитостанол готовится с использованием необработанных продуктов, относящихся к обычной пище, и процессы получения, главным образом, применяются в пищевой промышленности, не существует препятствий для производства и использования соединения. П р и м е р 1. Смесь эфира рцитостанола была получена по следующей схеме. 6 кг р-цитостанола, который был высушен в течение ночи при 60°С, этерифицируют 8,6 кг смеси метилового эфира рапсового масла. Переэтерификацию осуществляют следующим путем. Смесь р-цитостанола и метилового эфира жирной кислоты рапсового масла нагревают в реакционном сосуде при 90120"С в вакууме при 5-15 мм Нд. Высушивание продолжают в течение часа, добавляют 12 г этилата Na и реакцию продолжают еше около 2 часов. Катализатор 12 26688 11 разрушают добавлением к смеси воды. После разделения фаз малярную фазу сушат в вакууме. В реакции достигается 98% конверсии. Полученная эфирная смесь может быть использована в качестве добавки к жирам. Вместо смеси эфиров жирной кислоты рапсового масла можно использовать в реакции метиловый эфир или смесь метиловых эфиров жирных кислот любого растительного масла, которые содержат около 2-22 атомов углерода. П р и м е р 2. Перед паровой отгонкой рапсового масла к нему добавляют смесь эфира р-цитостана, полученного по примеру 1, в количестве 3, 6 и 13% по весу. Был приготовлен майонез, содержащий указанные жировые смеси в количестве 65%, в том числе» %: Жировая смесь 65,0 Загуститель 2,0 Соль 1,0 Сахар 3,0 Уксус (10% по весу) 3,0 Горчица 2,0 Вода ^4,0 В с е г о 100,0 Майонез был приготовлен гомогенизацией по известному способу с использованием гомогенизатора Копита. При приготовлении майонеза не было никаких сложностей, а его свойства, определенные по вкусовым ощущениям, не отличаются от свойств обычного майонеза. П р и м е р 3. Перед паровой отгонкой масла смесь эфира р-цитостанола, полученного по примеру 1, к рапсовому маслу была добавлена в количествах 3 и 6% про весу. 5 Рапсовое масло, к которому была добавлена эфирная смесь, остается прозрачным при комнатной температуре, никакого постоянного помутнения не наблюдалось, когда оно хранилось и при по10 ниженной температуре. П р и м е р 4, В продуктах по примерам 2 и 3 могут быть также использованы в качестве масла другие масла, такие как подсолнечное, соевое, оливко15 вое или кукурузное. П р и м е р 5. Смесь эфира £цитостанола,полученная по примеру 1, была добавлена в количествах 10 и 20% по 20 весу к жировой части обычного мягкого маргарина (состав: частично отвержденное соевое масло 35%, масло кокосового ореха 5%, рапсовое масло 60%) перед паровой отгонкой жировой смеси. 25 На ТК (температура каплепадения) и значение ЯМР были проанализированы (см.таблицу): 1} сама смесь; 2) смесь + 10% эфирной смеси 30 3) смесь + 20% эфирной смеси Маргарин, который содержит 80% жира, был получен широкоизвестным способом. Физические и вкусовые свойства мар35 гарина соответствуют свойствам обычных маргаринов. Д И А Г Р А М М А 1 Схема испытания по исследованию введения Испытуемые группы (п = 22) 'Контроль (п = 8) р-цитостанол (п = 7) * 0 недель 6 недель І 5 недель Начальный Экспериментальный р-цитостанола эфир (п = 7) 21 недель Дополнительный период 26688 13 Таблица Значение ЯМР (%) 1) 2) 3) ТК смеси,°С 10°С 20°С 30°С 35°С 40°С 45'С 31 9 30 4 29 6 Смесь 24 2 21 4 25.4 11 6 100 9.2 27 1.8 20 07 02 06 00 00 00 00 00 00 Т а б л и ц а 1 Изменения (%), происходящие в течение экспериментального периода в уровнях растительного стерола в сыворотке крови при добавлении р-цитостанола к рапсовому маслу в течение дополнительного периода при эфире р-цитостанола (3150 мг/г} Станол, добавленный к рапсовому маслу (мг/д) р-цитостанол (895) р-цитостанол эфир (895)2 р-цитостанол эфир (3150)2 Изменения (%), вызванные добавлением1 Кампестерола р-цитостанол р-цитостанол -18,4* -13,0* -0,6 -28,4* -23,4* -10,3 -43,3* ! -10,3 51,7* 1 Изменение в таблице было уточнено относительно % изменения в контрольной группе, которая получала рапсовое масло. 2 Количество свободного станола f Изменение является значительным по сравнению с изменением в контрольной группе (р < 0,05) Т а б л и ц а 2 Влияние рапсового масла и растворенного в нем эфира р-цитостанол а на абсорбцию холестерина Группа (мг/д) Абсорбция холестерина во время периода введения Начало Контроль р-цитостанола эфир Конец Рапсовое масло 29,4 Рапсовое масло Рапсовое масло 30,4 Рапсовое масло + р-цитостанола + эфир . 21,2 м Изменение (%)' 29,2 +3,4 ! І . -27,4 Изменение значительно, р < 0,05 "' Изменение значительно по сравнению с изменением в контрольной группе, р < 0,05 ' Количество свободного станола 15 Действие 26688 16 Т а б л и ц а 3 р-цитостанола, добавленного к рапсовому маслу, на уровни холестерина в сыворотке крови Станол, добавленный к рапсовому маслу (мг/д) Изменение (%), вызванное добавлением1 общего холестерина холестерина -2,1 -9,51( -6,4 -11,6' р-цитостанол (895) р-цитостанола эфир (3150) 1 Изменение было уточнено относительно % изменения в контрольной группе, которая получала рапсовое масло. 2 Изменение значительно, р < 0,05 1 Изменение является значительным по сравнению с изменением в контрольной группе (р man, pp. 112-118 in "Upoprotein metabolism". Ed. Greten H., Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Verlag, 1976. 14) Kudchodkar B.J., Horlick L, Sodhi H,S. Effects of plant sterols on cholesterol metabolism in man. Atherosclerosis, 23, 239 (1976). 15) Ikeda I., Tanaka K., Sugano M., Vahouny G.V. Gallo l.L. Inhibition of cholesterol absorption in rats by plant sterols. J. Lipid Res., 29, 1573-1582 (1988). 16) Ikeda I., Tanaka K., Sugano M., Vahouny G.V. Gallo l.L Discrimination between cholesterol and sitosterot for absorption in rats. J. Lipid Res., 29, 1583-1592 (1988). 17) Ikeda I., Tanabe Y. and Sugano M. Effects of sitosterol and sitostanol on micellar solubility of cholesterol. J. Nutr. Sci. Vrtaminol., 35, 361-369 (1989). 18) Ikeda I., Sugano M. Comparison of absorption and metabolism of beta-sitosterol and beta-sitostanol in rats. Atherosclerosis, 30, 227 (1978). 19) Sugano M., Мапока Н. and Ikeda I A comparison of hypocholesterolemic activity УКРАЇНА (19) UA,,,, 26688 „,,C1 (5і)б А 61 К 31/575. С 07 J 9/00 ОПИС ДО ПАТЕНТУ ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД (54) РЕЧОВИНА, ЩО ЗНИЖУЄ РІВНІ ХОЛЕСТЕРИНУ В СИРОВАТЦІ КРОВІ, ТА СПОСІБ її ОДЕРЖАННЯ ' 1 (21) 93004552 (22) 03.05.91 (24) 12.11.99 (86) PCT/FI91/00139 (03.05.91) (85) 03.12.93 (46) 12.11.99. Бюл. № 7 (56) 1. Патент DE, А, 2035069, Int.CI.: A 23 d, 5/00; DE Kl.: 53h, 1/01, 17.07.69. 2. ЕР, Al, 0289636, Int.Cf.: A61K 9/10, A61K 31/56, 06.05.87. (72) Мієттінен Тату (Fl), Ванханен Хану (Ft), Вестер Інгмар (Ft) (73) РАЙЗЮ БЕНЕКОЛ ЛТД (FI) (57) 1. Вещество, понижающее уровни холестерина в сыворотке крови, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно включает сложный эфир р-цитостанола и жирной кислоты или смесь сложных эфиров рцитостанола и жирной кислоты. 2. Вещество по п. 1, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что жирные кислоты в смеси содержат 2-22 атомов углерода. 3. Вещество по любому из пп. 1,2, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно представлено в форме растворимой в жирах, полученной этерификацией свободного р-цитостанола с эфиром жирной кислоты или смесью эфира жирной кислоты. I 4. Вещество по любому из пп. 1-3„ о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно является добавкой при производстве жира или других пищевых продуктов. 5. Вещество по любому из пп. 1-3, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно является жировым компонентом или заменителем жира. 6. Вещество по пп. 5, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно является составной частью растительных масел, маргаринов, сливочных масел, майонезов, приправ к салату, жиров, добавляемых к тесту для рассыпчатости и т.п. 7. Вещество по любому из пп. 1-3, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно является частью диеты. 8. Способ получения вещества по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что свободный р-цитостанол подвергают этерификации со сложным эфиром жирной кислоты или смесью сложных эфиров жирной кислоты в присутствии катализатора переэтерификации. 9. Способ по п. 8, отличающ и й с я тем, что реакцию осуществляют при температуре 90-120^0 и вакууме 5-15 мм Нд. С > Оч 00 СО о Высокий уровень холестерина в сыворотке крови может быть понижен изменением метаболизма липидов в кишечнике. В этом случае задача может быть затруднена абсорбцией триглицеридов, холестерина или желчных кислот. В ряде исследований отмечалось, что некоторые растительные стеролы, такие как р-цитостерол (24-этил-5-холестен-Зр-ол) и его закрепленная форма, р-цитостанол (24-' этил-5а-жзлестан-3р-ол), снижают уровни холестерина в сыворотке крови путем снижения абсорбции пищевого холестерина из кишечника (1-25). Использование рас 26688 тительных стеролов может считаться безопасным, поскольку растительные стеролы являются природными составными частями растительных жиров и масел. Сами растительные стеролы не абсорбируются из кишечника или абсорбируются в очень низкой концентрации. Снижение сферы действия коронарного заболевания ясно ассоциируется со снижением холестерина в сыворотке крови, в частности LDL холестерина. Высокое значение содержания холестерина в сыворотке крови является наиболее значительным прямым показателем наличия риска коронарного заболевания. Степень абсорбции холестерина зависит от наследственности, апопротеинового Е-фенотипа. Апопротеин Е является протеином, который относится к липопротеинам сыворотки крови и принимает участие в переносе холестерина 8 системе (26), Для аллелей, связанных с синтезом апопротеина Е, то есть липопротеина, который влияет на абсорбцию, известны три вида - е2, еЗ и е4, которые объединяются в случайные пары. Аллели способны образовывать всего шесть различных комбинаций. Чем выше сумма подиндексов, тем лучше абсорбционная способность холестерина и тем выше уровень холестерина, в частности вредного LDL холестерина, в сыворотке крови (27). е4 аллель наиболее представлен среди наследственных факторов финна (Finns), поэтому его соотношение почти двойное по сравнению со многими европейскими популяциями (28)и Финны действительно исключительно чувствительны к пищевым недостаткам и к жирной и с высоким содержанием холестерина пище (29). Уровни холестерина в сыворотке крови могут быть снижены путем диетического питания, при уделении внимания качеству и виду потребляемых жиров и количеству потребляемого холестерина. В практике, однако, этот путь не всегда приводит к удовлетворительному результату. Другие методы, пригодные для всех, для достижений понижения уровня холестерина в сыворотке крови, должны быть рассмотрены в сравнении с настоящими методами. Повышение содержания волокон в пище является методом с ограниченным действием. Понижающее холестерин действие растворимых волокон в пище основано на связывании и удалении желчных кислст Так как абсорбция холестерина является основным показателем регулирования уровни холестерина в сыворотке крови, является логичным стремить 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ся к развитию методов, по которым абсорбция холестерина может быть предотвращена или уменьшена. Pollak показал, что поглощенный растительный стерол снижал уровень холестерина в сыворотке крови у мужчин (1). То же наблюдалось ранее у экспериментальных животных (2,3). В ряде исследований отмечалось, что большие дозы растительных стеролов понижают уровни холестерина в сыворотке крови, в лучших случаях, на 10-20% (4,5). В этих экспериментах были использованы большие количества (до 24 г/день) р-цитостерола в кристаллической форме (6). В некоторых экспериментах уровень холестерина в сыворотке крови значительно понижался даже при меньших дозах (7), хотя небольшое количество цитостерола, вводимое в виде эфиров жирной кислоты, не кажется очень эффективным для понижения уровня сывороточного холестерина (8). Препараты цитостерола имеют, в основном, хорошую переносимость при длительном применении (9). Природные растительные стеролы имеют структурное сходство с холестерином. Различие между молекулой холестерина и молекулой растительного стерола прежде всего найдено в структуре боковой цепи основного скелета. Обычная пища содержит 100-300 мг/день растительных стеролов. Большинство растительных стеролов в пище - это р-цитостерол и приблизительно одна треть - это кампестерол. Небольшие количества насыщенных цитостанолов также присутствуют в продуктах. Обычно концентрации кампестерола в сыворотке крови частично отражают степень абсорбции холестерина (10,11,12). Изменение количеств растительных стеролов в пище влияет на уровень сывороточного холестерина, но эта область еще недостаточно изучена. Растительные стеролы плохо абсорбируются из кишечника. Растительные стеролы, которые ограниченно абсорбируются в системе {менее чем 10% стеролов) (30,31,32), выделяются с желчью и, через нее, со стулом. В настоящее время легко, измерить уровни стерола из образцов пищи, сыворотки или стула методами газовой хроматографии. Уровни в сыворотке частью зависят от количеств растительных стеролов из пищи и частью от эффективности абсорбции стеролов. Обычно уровни растительного стерола остаются ниже 1/300 уровня сывороточного холестерина, так как часть абсорбированного расти 26688 тельного стерола выделяется из системы с желчью. Даже большие дозы поглощенных растительных стеролов не проявляются в уровне сывороточного растительного стерола. Значения остаются на нормальном уровне, так как у человека способность к абсорбции растительного стерола быстро насыщается. Уровень растительного стерола в сыворотке крови поднимается до опасного в небольших случаях редких заболеваний, таких как цереброчувствительный ксантоматоз и цитостеролемия (33, 34, 35), в сравнении с кот< ч»гми коронарная болезнь является обычной. Проявление этих заболеваний составляет несколько случаев на один миллион. Ни одного случая таких заболеваний не отмечалось в Финляндии. Высокие значения растительного стерола иногда наблюдаются у пациентов, страдающих некоторыми болезнями печени (36). Исследования метаболизма холестерина показало, что цитостерол ингибирует абсорбцию как эндогенного, так и пищевого холестерина из кишечника (13,14). Как результат этого, уменьшается выделение нейтральных ст-ероидов в стуле, что приводит к недостатку холестерина в печени и, через это, к пониженному уровню сывороточного холестерина. С другой стороны, цитостерол не действует на абсорбцию желчных кислот (13). На основе экспериментов на животных кажется, что действие цитостерола основано на его способности помещать пищевой холестерин в мицеллу желчной кислоты (15,16,17). Похожие результаты были получены также для человека (37). Различные растительные стеролы показали действие различными путями на абсорбцию холестерина (19,38). Предшествующие исследования, проведенные на экспериментальных животных, создали впечатление, что цитогтанол является наиболее эффективным ингибитором абсорбции холестерина (38) и сам при этом почти не абсорбируется. Далее, исследование без контроля шести субъектов показало, что свободный цитостанол (1,5 г/ день) понижает сывороточный холестерин (главным образом LDL хол-естерин) в течение четырех недель на 15%. В течение интерпала в две недели значения холестерина вернулись к первоначальным уровням (20). Большинство препаратов растительных стеролов содержат ряд различных растительных стеролов. Действие смеси растительных стеролов на абсорбцию 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6 холестерина меняется, как и их собственная абсорбция (21, 22! 23). Последующие исследования, главным образом, сосредоточивались на изучении того, как влияет на эффективность понижения уровней сывороточного холестерина форма (кристаллическая, суспензия, гранула), в которой вводят растительные стеролы. Кристаллические растительные стеролы не обладают значительной степенью растворимости в фазе мицелл в питающем канале и поэтому не могут эффективно ингибировать абсорбцию холестерина. Только масла и жиры определяют степень растворимости свободных стеролов. Только в растворенной форме могут стеролы ингибировать абсорбцию холестерина. Согласно Хайнма_нну и соавторам (24) цитостанол ингибировал в эксперименте абсорбцию холестерина на 82%, тогда как цитостерол соответственно ингибировал абсорбцию на 50%. В некоторых исследованиях использовались эфиры жирных кислот цитостерола, такие как цитостерол ацетат или олеат или стигмастерол олеат, растворенные в жирах. В экспериментах на крысах "масло" этого вида, имеющее концентрацию стерола вплоть до 8%, уменьшает абсорбцию холестерина на 20-40% (22). При высокохолестериновой диете (500 мг/день) цитостерол олеат (2 г/день), растворенный в жире, понижает абсорбцию холестерина у испытуемых субъектов в среднем на 33% (25). В том же исследовании смешанный с пищей цитостерол в более низкой дозе (1 г/день) понижал абсорбцию холестерина на 42%. Патент Германии (Deutsches Patentamt, Offenlengungsschruft 2035069, январь 23, 1971) касается добавления эфиров жирных кислот стерола в масло для готовки еды с целью снижения урорней сывороточного холестерина у человека. В данном патенте предлагается для этерификации свободных стеролов использовать способ, ни в коем случае не отвечающий требованиям приготовления высококачественной пищи. Согласно патенту, этерификацию проводят между свободным стеролом и ангидридом жирной кислоты при воздействии хлорной кислоты в качестве катализатора. Используемые катализатор и реагент не могут быть приемлемы в процессе приготовления пищевого продукта Кроме того, данный патент относится к эфирам жирных кислот только природных растительных стеролов Много реагентов, которые не могут быть приемлемы как продукт питания или 26688 для производства продуктов, предназначенных как добавка к продуктам питания, были использованы при получении эфиров кислот стеролов. Обычным является использование, например, хлора (39), брома (40), тионилхлорида (41) или ангидритных производных жирных кислот. Среди запатентованных способов только способ Baltes/Deutsches Patentamt, Offenlengungsschnift 2248921; апрель 11, 1974) для этерификации стеролов, присутствующих в масле и жирах, методом химической переэтерификации соответствует критерию приготовления пищевого продукта. В указанном патенте свободный стерол и избыток эфира жирной кислоты добавляются к смеси масла или жира, после чего вся жирная смесь переэтерифицируется широко известным методом переэтерификации. Предложение согласно настоящему изобретению относится к использованию стерола совершенно иного вида для понижения уровня холестерина в сыворотке крови. Оно включает эфиры жирных кислот 51_-насыщенных стеролов, особенно эфиры жирных кислот цитостанола {цитостанол - 24-этил-5!_-холестан-Зр-ол), которые понижают уровень холестерина в сыворотке крови с особенной эффективностью. Указанные эфиры могут быть получены или использованы как таковые или могут быть добавлены к продуктам питания, особенно к жирной части пищи. Смесь эфира жирной кислоты цитостанола получают отвеождением торговой смеси р-цитостерола (цитостерол - 24-зтил-5-холестен-Зр-ол). р-цитостанол может быть получен ранее известной методикой отверждения холестерина путем отверждения рцитостерола с использованием Р6//С катализатора в органическом растворителе (43) Сгйесь была одобрена FDA (Cyteliin, Eli, Lilly). В реакции степень отверждения достигает 99%. Катализатор, используемый при конверсии, удаляется с помощью мембранного фильтра, полученный цитостанол кристаллизуют, промывают и сушат. Согласно изобретению, р-цитостаноловую смесь, которая содержит приблизительно 6% кампестанола, этерифицируют различными смесями эфиров жир ных кислот широко известными методами переэтерификации (44, 45, 46). В реакции может быть использован метиловый эфир смеси жирных кислот любого растительного масла Одним примером служит смесь рапсового масла и метиловый эфир, но приемлемыми являются жирные кислоты, содержащие около 2-22 атомов 8 углерода. Способ согласно изобретению для получения эфиров жирных кислот станола выгодно отличается от ранее запатентованных способов тем, что никакие 5 другие вещества, кроме свободного станола, эфир жирной кислоты или смесь эфира жирной кислоты и катализатор, используются в реакции переэтерификации. Используемым катализатором может быть 10 любой известный катализатор переэтерификации, такой как Na-этилат. Необходимо также отметить, что в способе, применяемом в нашей заявке, в противоположность способу Baltes, упоминае15 мому выше, жир сам не переэтерифицируется. В этом случае жиро,вая часть при приготовлении на жиру или какая-либо ' другая пища будет сохранять свои натуральные свойства. Необходимо было от20 метить далее, что переэтерифицируемая смесь может быть добавлена непосредственно в жиросодержащие продукты или использована в виде таковых. Так как станолсодержащая часть смеси не абсорби25 руется, энергетическое содержание смеси эфира жирной кислоты и станола составляет только 20-40% энергетического содержания условного масла или жира, зависящего от состава жирной кислоты. Та30 ким образом смеси с успехом могут быть использованы так же, как вещества, понижающие энергетический состав пищи. Действие эфиров жирных кислот рцитостанола на абсорбцию холестерина и 35 уровни сывороточного холестерина не было ранее исследовано. В исследовании, на котором базируется данная заявка, изучается, как концентрации растительного стерола в сыворотке зависят от цитоста40 нола (р-цитостанол 94% и кампестанол 6%, твердой формы цитостанола, растворенного в рапсовом масле), как в а) свободном, так и в б) форме эфира жирной кислоты. Схема исследований показана 45 на диаграмме 1 приложения I. Первой стадией для всех групп было введение рапсового масла (50 г/день), для контрольной группы введение рапсового масла продолжалось в течение всего испытания, а 50 для других групп назначалось соединение по изобретению, добавленное к рапсовому маслу. Таблица 1 в приложении 2 показывает, что повышение концентрации fj-ци55 тостанола в пище понижает концентрации как р-цитостерола, так и кампестерола в сыворотке крови, но не дает ясного изме : нения концентрации сывороточного р-цитостанола Данные также показывают, что поглощение цитостанола в растворимой 26688 форме (например, в виде эфиров жирных кислот) уменьшает абсорбцию растительных стеролов более эффективно, чем свободный р-цитостанол, введенный в той же дозе. Что касается эфиров жирных кислот р-цитостанолов, то дополнительно наблюдалось четкое влияние дозы. Это доказывает, что р-цитостанол также ингибирует абсорбцию р-цитостерола и кампестерола, что может быть видно по понижению их концентраций. Соответственно, были также определенные изменения, вызываемые добавлениями станола, концентрации общего и LDL-сывороточного холестерина и абсорбции холестерина. Контрольная группа потребляла обычное рапсовое масло без добавок станола. Таблица 2 приложения 3 показывает, что абсорбция холестерина значительно понижалась от смеси эфира жирной кислоты р-цитостанола (27,4%), даже если потребление станола было относительно низким (895 мг/день). Абсорбция холестерина контрольной группой не изменялась. Действие смеси свободного р-цитостанола и эфира кислоты р-цитостанола на концентрацию холестерина в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой показано в табл. 3 приложения 4. Смесь эфира жирной кислоты р-цитостеролэ понижает как общий холестерин, так и холестерин более эффективно, чем р-цитостерол. Смесь эфира жирной кислоты р-цитостанола, растворенная в рапсовом масле (3,2 г р-цитостанола/день) понижает общий холестерин не более 9,5% и LDL-холестерин более 11,6% по сравнению с одним рапсовым маслом. Соответственно, соотношение HDL/LDL холестерина выросло значительно (от 0,32 до 0,52). Проведенные исследования ясно показывают, что при добавлении эфиров жирной кислоты р-цитостанола к, например, пищевым жирам может быть достигнуто значительное преимущество как в отношении естественной питательности, так и в отношении лечения гиперхолестеринемии, так как 1) смесь снижает уровни холестерина в сыворотке крови, 2) смесь не увеличивает концентрации растительного стерола з сыворотке крови, 3) смесь может применяться ежедневно как заменитель жира при приготовлении обычной пищи, даже в больших дозах (0,2-20 г/дечь), причем потребление энергии жира уменьшается Липидные изменения, вызванные эфирами жирных кислот ft-станола, отмеченные при исследованиях, очень внимательно рассмотрены с точки зрония влияния 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 10 на здоровье. Важность результатов подчеркивается возможностью использования соединения непосредственно при приготовлении пищи как часть обычной готовки и при обычном питании. Результаты исследований показывают, что в течение диеты с введением станола уровень его в сыворотке не повышается и что уровни других растительных стеролов в сыворотке снижаются. Таким образом, указанная смесь эфира р-станола безопасна также для таких немногочисленных индивидуумов, которые легко абсорбируют все стеролы и которые имеют нарушения в выделении стеролов. Далее, ежедневная замена жира уменьшает личный энергетический запас, так как эффективное соединение станола не абсорбировалось, то есть оно действует как не производящая энергию часть жира. Отсутствуют доказательства того, что указанная смесь эфира р-станола тормозит абсорбцию липидрастворимыч витаминов или уровни витаминов в сыворотке крови. Применение смеси эфира жирной кислоты цитостанола как части различных жиров или масел в жиросодержащих продуктах обширно, так как физические свойства смеси могут быть легко модифицированы изменением состава жирных кислот смеси. В добавление к этому, состав жирной кислоты для смеси эфира жирной кислоты р-станола может быть подобран таким, чтобы он содержал большие количества моноенов или полиенов, благодаря чему ее воздействие на понижение уровней холестерина в сыворотке крови изменяется. Поскольку смесь эфира жирной кислоты р-цитостанол готовится сиспользованием необработанных продуктов, относящихся к обычной пище, и процессы получения, главным образом, применяются в пищевой промышленности, не сушествует препятствий для производства и использования соединения П р и м е р 1. Смесь эфира рцитостзнола была получена по следующей схеме 6 кг р-цитостанола, который был высушен в течение ночи при 60°С, этерифицируют 8,6 кг смеси метилового эфира рапсового масла. Переэтерификацию осуществляют следующим путем. Смесь р-цитостанола и метилового эфира жирной кислоты рапсового масла нагревают в реакционном сосуде при 90120°С в вакууме при 5-15 мм Нд. Высушивание продолжают в течение часа, добавляют 12 г этилата Na и реакцию продолжают еше около 2 часов. Катализатор t1 12 26688 разрушают добавлением к смеси воды. После разделения фаз малярную фазу сушат в вакууме. В реакции достигается 9б% конверсии. Полученная эфирная смесь может быть использована в качестве добавки к жирам. Вместо смеси эфиров жирной кислоты рапсового масла можно использовать в реакции метиловый эфир или смесь метиловых эфиров жирных кислот любого растительного масла, которые содержат около 2-22 атомов углерода. П р и м е р 2. Перед паровой отгонкой рапсового масла к нему добавляют смесь эфира р-цитостана, полученного по примеру 1, в количестве 3, 6 и 13% по весу. Был приготовлен майонез, содержащий указанные жировые смеси в количестве 65%, в том числе, %: Жировая смесь 65,0 Загуститель 2,0 Соль 1,0 Сахар 3,0 Уксус (10% по весу) 3,0 Горчица 2,0 Вода 24,0 В с е г о 100,0 Майонез был приготовлен гомогенизацией по известному способу с использованием гомогенизатора Копита. При приготовлении майонеза не было никаких сложностей, а его свойства, определенные по вкусовым ощущениям, не отличаются от свойств обычного майонеза. П р и м е р 3. Перед паровой отгонкой масла смесь эфира р-цитостанола, полученного по примеру 1, к рапсовому маслу была добавлена в количествах 3 и 6% про весу. 5 Рапсовое масло, к которому была добавлена эфирная смесь, остается прозрачным при комнатной температуре, никакого постоянного помутнения не наблюдалось, когда оно хранилось и при по10 ниженной температуре. П р и м е р 4. В продуктах по примерам 2 и 3 могут быть также использованы в качестве масла другие масла, такие как подсолнечное, соевое, оливко15 вое или кукурузное. П р и м е р 5. Смесь эфира рцитостанола,полученная по примеру 1, была добавлена в количествах 10 и 20% по 20 весу к жировой части обычного мягкого маргарина (состав: частично отвержденное соевое масло 35%, масло кокосового ореха 5%, рапсовое масло 60%) перед паровой отгонкой жировой смеси. На ТК (температура каплепадения) и 25 значение ЯМР были проанализированы (см.таблицу): 1) сама смесь; 2) смесь + 10% эфирной смеси 30 3) смесь + 20% эфирной смеси Маргарин, который содержит 80% жира, был получен широкоизвестным способом. Физические и вкусовые свойства мар35 гарина соответствуют свойствам обычных маргаринов. Д И А Г Р А М М А t Схема испытания по исследованию введения Испытуемые группы (п = 22) 'Контроль (п = 8) р-цитостанол (п - 7) _• р-цитостанола эфир (п - 7) 0 недель 6 недель 15 недель Начальный Экспериментальный 21 недель Дополнительный период 13 14 26688 Таблиц.) Значение ЯМР (%) 1) 2) 3) ТК смеси, °С 10°С 20°С 30"С 35°С 40°С 45'С 31 9 30 4 29 6 Смесь 24 2 21 4 25 4 11 6 10.0 92 27 1 8 20 07 0 2 06 00 00 00 00 00 00 Т а б л и ц а 1 Изменения (%), происходящие в течение экспериментального периода в уровнях растительного стерола в сыворотке крови при добавлении р-цитостанола к рапсовому мпслу в течение дополнительного периода при эфире [J-цитостанола (3150 мг/г) Станол, добавленный к рапсовому маслу (мг/д) р-цитостанол (895) р-цитостанол эфир (895)2 р-цитостанол эфир (3150)2 Изменения (%), вызванные добавлением' Кампестерола р-цитостанол р-цитостанол -18,4* -13,0* -0,6 -28,4* -23,4* -10,3 51,7* -43,3* -10,3 і 1 Изменение в таблице было уточнено относительно % изменения в контрольной группе, которая получала рапсовое масло 2 Количество свободного станола I Изменение является значительным по сравнению с изменением s контрольной группе (р < 0,05) Т а б л и ц а 2 Влияние рапсового масла и растворенного в нем эфира р-цитостанола на абсорбцию холестерина Группа (мг/д) Абсорбция холестерина во время периода введения Начало Контроль р-цитостанола эфир Конец Рапсовое масло 29,4 Рапсовое масло Рапсовое масло 30,4 Рапсовое масло + р-цитостанола + эфир . 21,2 П Изменение (%)' 29,2 +3,4 I . -27,4 Изменение значительно, р < 0,05 "1 Изменение значительно по сравнению с изменением в контрольной группе, р < 0,05 1 Количество свободного станола 15 Действие 26688 16 Т а б л и ц а 3 fi-цитостанола, добавленного к рапсовому маслу, на уровни холестерина в сыворотке крови Станол, добавленный к рапсовому маслу (мг/д) Изменение (%), вызванное добавлением1 общего холестерина холестерина ~2,1 -9,5'» -6,4 -11,6' р-цитостанол (895) р-цитостанола эфир (3150) ' Изменение было уточнено относительно % изменения в контрольной группе, которая получала рапсовое масло. 2 Изменение значительно, р < 0,05 1 Изменение является значительным по сравнению с изменением в контрольной группе (р < 0,05) 1) Pollak O.J. Reduction of blood cholesterol in man. Circulation, 7, 702-706 (1953). 2) Peterson D.W. Effect of soybean sterols in the diet on plasma and liver cholesterol in chicks. Pric. Soc. Exp. Biol. Med. 78, 143-147(1951). 3) Pollak O.J. Succesful prevention of experimental hypercholesterolemia and cholesterol atheroscleroses in the rabbit. Circulation, 7, 696-701 (1953). 4) Farquhar J.W. and Sokolow M. Response of serum iipids and lipoproteins of man to beta-sitosteroi and saffiower oil - A long term study. Circulation, 17, 890 (1956). 5) Grundy S.M., Ahrens E.H. Jr., and Davignon J. The interaction of cholesterol absorption and cholesterol synthesis in man. J. Lipid Res., 10, 304 (1969). 6) Oster P., Schlierf G., Heuck C.C., Greten H., Gundert-Remy U., Haase W., Klose G., Nothelfer A., Raetzer H., Scgellenberg B. und Schmidt-Gayk H. Sitosterin bei famili.a.ren Hyperlipoproteinamie Тур II. Eine Randomisierte gekreuzte Doppelblindstudie, Dtsch. Med.Wschr., 101, 1308-1311 (1976). 7) Grundy S.M., Dietary and drug regulation of cholesterol metabolism in man, pp. 127-159 in "Lipid Pharmacology, Vol, IP, Eds: Padetti, R and Glueck, C.J., Academic Press, New York, 1976. 8) Lees A.M., Mok H.Y.I., McCluskey M.A., Grundy S.M. Plant sterols as cholesterol lowering agents: clinical trials in patients with hypercholesterolemia and studies of sterol balance. Atherosclerosis, 28, 325-338 (1977). 9) Schwartzkopf W. and Jantke H.-.J.. Dosiswirksamkeit von Beta-sitosterin bei Hypercholestennemien der Typen II A und И В. Munch. Med. Wschr., 120, 1575 (1969). m~ 10) Tilvis R.S., Miettinen T.A. Serum plant sterols and their relation to cholesterol absorption. Am. J. Clin. Nutr., 43, 92-97 (1986). 11) Miettinen Т.Д., Tilvis R.S., Kesaniemt Y.A. Serum plant sterois and cholesterol precursors reflect cholesterol absorption and synthesis in volunteers of a randomly selected male population. Am. J. Epidem., 131 (1), 20-31 (1990). 12) Farkkila M.A., Tilvis R.S., Miettinen T.A. Regulation of plasma plant sterois levels in patients with gut resections. Scand. J. Clin. Lab. Invest., 48, 715-722 (1988). 13) Grundy S.M., Mok H.Y.I. Effects of low dose phytosterols on cholesterol absorption in man, pp. 112-118 in "Lipoprotein metabolism". Ed. Greten H., Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Verlag, 1976. 14) Kudchodkar B.J., Horlick L, Sodhi H.S. Effects of plant sterols on cholesterol metabolism in man. Atherosclerosis, 23, 239 (1976). 15) Ikeda I., Tanaka K., Sugano M., Vahouny G.V. Gallo i.L Inhibition of cholesterol absorption in rats by plant sterols. J. Lipid Res., 29, 1573-1582 (1988). 16) Ikeda I., Tanaka K., Sugano M., Vahouny G.V. Gallo I.L Discrimination between cholesterol and sitosteroi for absorption in rats. J. Lipid Res., 29, 1583-1592 (1988). 17) Ikeda I., Tanabe Y. and Sugano M. Effects of sitosteroi and sitostanol on miceliar solubility of cholesterol. J. Nutr. Sci. Vrtaminot., 35, 361-369 (1989). 18) Ikeda I., Sugano M. Comparison of absorption and metabolism of beta-sitosteroi and beta-sitostanol in rats. Atherosclerosis, 30, 227 (1978). 19) Sugano M., Marioka H. and Ikeda I A comparison of hypocholesterolerruc activity 17 26688 of p-sitostero! and p-sitostanol in rats. J. Nutr., 107, 2011-2019 (1977). 20) Heinemann Т., Leiss O M von Bergman K. Effects of low-dose sitostano! on serum cholesterol in patients with hypercholesterolemia. Atherosclerosis, 61, 219-223(1986). 21) Lees R.S.S Lees A.M. fcffects of sitosterol therapy pn plasma iipids and lipoprotein concentrations, pp. 119-124 in "Lipoprotein metabolism". Ed: Greten H. Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Veriag, 1976. 22) Mattson F.N., Volpenhein R.A.. and Erickson B.A.: Effect of plant sterot esters on the absorption of dietary cholesterol. J. Nutr., 107, 1139-1146 (1977). 23) Heinemann Т., Pietruck В., KuttalUblick G., von Bergman K. Comperison of sitosterol and sitostanol on inhibition of intestinal cholesterol absorption. Agents Actions (Suppl.), 26, 117-122 (1988). 24) Heinemann Т., Kullak-Ublick G.-K.t Pietruck В., von Bergmann K. Mechanisms of action of plant sterols on inhibition of cholesterol absorption. Eur. J . Clin. Pharmacol., 40 Suppl. 1, S50-S63 (1991). 25) Mattson F.H., Grundi S.M., Crouse J.R. Optimizing the effect of plant sterols on cholesterol absorption in man. Am. J. Clin. Nutr., 35, 697-700 (1982). 26) Kesaniemi Y.A., Ehnholm C, Miettinen T.A. Intestinal cholesterol absorption efficiency in man is related to apoprotein E phenotype. J. Clin. Invest., 80, 578-581 (1987). 27) Kesaniemi Y.A., Miettinen T.A. Metabolic epidemiology of plasma cholesterol. Ann. Clin. Res., 20, 26-31 (1988). 28) Ehnholm C. et al. Apolipoprotein polymorphism in the Finnish population: gene frequencies and relation to lipoprotein concentrations. J. Lipid. Res. 27, 227-235 (1986). 29) Miettinen T.A., Gylling H., Vanhanen H. Serum cholesterol response to dietary cholesterol and apoprotein E phenotype. Lancet, 2, 1261 (1988). 30) Gould G. Absorbability Of betasitosterol. Trans. N.Y. Acad. Sci., 2 t 129 (1955). 31) Gould R.G., Jones R.J., LeRoy G.W., Wissler R.W., Taylor C.B. Absorbability of psitosterot in humans. Metabolism, 18, 652662 (1969). 32) Salen G., Ahrens E.J., Grundy S.M. Metabolism of p-sitostero! in man. J.CIin.lnvest., 49, 952-67 (1970). 33) Salen G., Kwiterowich P.O. Jr, Shefer S., lint G.S., Horak L, Shore V., Daya! В., Horak E. Increased plasma cholestanoS and 5 J5-saturated plant stero! derivatives in 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 18 subjects with sitosterolemia and xanthomatosis. J. Lipid Res., 26, 203-209 (1985). 34) Saien G., Shore V., Tint G.S., Forte Т., Shefer S., Horak I., Horak E., Dayai В., Nguyen L, Batta A.K., Lindgr^en F.T and Kwiterowich P.O. Jr. Increased sitosterol absorption, decreased removal and expanded body pools compensate for reduced cholesterol synthesis in sitosterolemia with xanthomatosis. J. Lipid Res., 30, 1319-1330 (1989). 35) Miettinen T.A. Phytosterolemia, xanthomatosis and premature atherosclerosis desease: a case with high plant steroi absorption, impaired steroi elimination and low cholesterol synthesis. Eur. J. Cltn. Invest., 10, 27-35 (1980). 36) Nikkila K., Miettinen T.A. Serum, cholesterol Precursors, cholestanol and plant sterols in PBC. Scand. J. Gastroenterl., 23, 967-972(1988). 37) Miettinen Т.Д., Siura!a M. Bile salts, sterols, asterol esters, glycerides and fatty acids in micellar and oil phases of intestinal contents during fat digestion in man. Z. Klin. Chem. Biochem., 9, 47-52 (1971). 38) Hassan A.S., Rampone A.J. Intestinal Absorption and lymphatic transport of cholesterol and fj-sitostanol in the rat. J. Upid Res., 20, 646-653 (1979). 39) Kuksis A., Beveridge J.M.R. J. Org. Chem., 25:1209 (1960). 40) Saroja V., Kaimal T.N.B. A convienent method of esterification of fatty acids. Preparation of afkyl esters, steroi esters, wax esters and trialcyfglycerols. Synthetic communications, 16, 1423-1430 (1986). 41) Prabhudesai A.V. A simple method for the preparation of chdesteryt esters. Lipids. 12, 242-244