Фармацевтична композиція із контрольованим виділенням розчинного tnf-a

1 Фармацевтична композиція із контрольованим виділенням розчинного T N F - a рецептора, який має здатність зв'язуватись з T N F - a і впливати на функцію вказаного TNF - а, яка відрізняється тим, що вона містить бюсумісний полімерний матеріал з розчинним рецептором TNF — (х, який введено в нього 2 Фармацевтична композиція за п 1, яка відрізняється тим, що вказаний полімерний матеріал являє собою бюсумісний полімер, вибраний з групи, що складається з етилен-вшілацетатних співполімерів (EVAc), силіконових каучуків, полісахаридів, поліамідів, поліакрилатів, поліетиленів, поліуретанів, поліізобутилену та поліфосфазенів 3 Фармацевтична композиція за п 1, яка відрізняється тим, що вказаний полімерний матеріал являє собою бюсумісний полімер, вибраний з групи, що складається з поліефірів, поліанпдридів, полюртоефірів, полікапролактону, псевдополіамінокислот, поліпептидів, желатину, полі молочної кислоти, полігліколевої кислоти та співполімерів ПОЛІ(МОЛОЧНО-ГЛІКОЛЄВОІ) кислоти, (PLGA) 4 Фармацевтична композиція за п 2, яка відрізняється тим, що полімер являє собою поліетиленвшілацетат 5 Фармацевтична композиція за п 3, яка відріз няється тим, що полімер являє собою полі(молочно-гліколеву) кислоту 6 Фармацевтична композиція за п 1, яка відрізняється тим, що розчинний T N F - a рецептор являє собою розчинний р55 T N F - a рецептор (р55 sTNF-R) 7 Фармацевтична композиція за п 1, яка відрізняється тим, що розчинний T N F - a рецептор являє собою розчинний р75 T N F - a рецептор (р75 sTNF-R) 8 Фармацевтична композиція за п 1, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування розладів, при яких необхідна нейтралізація шкідливих ефектів TNF-a, при цьому вказаний рецептор є введеним у вказаний полімерний матеріал таким чином, щоб забеспечити контрольоване виділення такої КІЛЬКОСТІ розчинного T N F - a рецептора, яка є ефективною для нейтралізації шкідливих ефектів T N F - a 9 Фармацевтична композиція за п 8, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування септичного шоку 10 Фармацевтична композиція за п 8, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування кахексії, асоційованої з раком 11 Фармацевтична композиція за п 8, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування аутрімунних хвороб 12 Фармацевтична композиція за п 8, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування ревматоїдного артриту 13 Фармацевтична композиція за п 12, яка відрізняється тим, що вона додатково містить протизапальний агент 14 Фармацевтична композиція за п 11, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування розсіяного склерозу 15 Фармацевтична композиція за п 14, яка відрізняється тим, що вона додатково містить агент для лікування розсіяного склерозу, вибраний з групи, що складається з бета-штерферону та співполімеру 1 16 Фармацевтична композиція за п 11, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування системного червоного вовчака О (О З 44761 17 Фармацевтична композиція за п 8, яка но нейтралізувати ШКІДЛИВІ ефекти TNF-a, який відрізняється тим, що вона призначена для включає введення фармацевтичної композиції із лікування реакції "трансплантат проти хазяїна" контрольованим виділенням активної речовини, 18 Фармацевтична композиція за п 8, яка відрізщо нейтралізує вказані ефекти, який відрізняєтьняється тим, що вона призначена для лікування ся тим, що вводять фармацевтичну композицію за розладів, пов'язаних з алергічною реакцією шкіри п 1, призначену для виділення ефективної КІЛЬКОуповільненого типу СТІ вказаної розчинної форми T N F - a рецептора 19 Фармацевтична композиція за п 4, яка таким чином, щоб протягом періоду часу виділявідрізняється тим, що вона виконана у формі лась його ефективна КІЛЬКІСТЬ імплантату 31 Спосіб за п ЗО, який відрізняється тим, що вка20 Фармацевтична композиція за п 5, яка зані захворювання вибирають з групи, яка складавідрізняється тим, що вона виконана у формі ється з септичного шоку, кахексії, асоційованої з імплантату раком, аутоімунного захворювання, реакції "транс21 Фармацевтична композиція за п 5, яка плантат проти хазяїна" та алергічної реакції шкіри відрізняється тим, що вона призначена для ввеуповільненого типу дення у формі ін'єкції 32 Спосіб за п ЗО, який відрізняється тим, що 22 Фармацевтична композиція за будь-яким з пп вказане введення включає імплантацію вказаної 19-21, яка відрізняється тим, що вона призначена фармацевтичної композиції із контрольованим для локальної ін'єкції у синовіальну рідину для виділенням активної речовини лікування запалення суглобів при ревматоїдному 33 Спосіб за п ЗО, який відрізняється тим, що він артриті призначений для лікування вірусних, бак23 Фармацевтична композиція за будь-яким з пп теріальних та інфекцій, викликаних бага19-21, яка відрізняється тим, що вона призначена токлітинними паразитами для ін'єкції у цереброспшальну рідину для лікуван34 Спосіб лікування пухлин, який включає введення розсіяного склерозу ня фармацевтичної композиції із контрольованим 24 Фармацевтична композиція за п 18, яка виділенням активної речовини, який відрізняєтьвідрізняється тим, що вона призначена для ся тим, що вводять фармацевтичну композицію місцевого застосування для стабілізації корисних ефектів TNF- а, яка 25 Фармацевтична композиція за п 1, яка містить бюсумісну полімерну матрицю з введеним відрізняється тим, що вона додатково містить в неї комплексом розчинного T N F - a рецептора TNF-a та T N F - a таким чином, щоб протягом періоду 26 Фармацевтична композиція за п 1, яка відрізчасу виділялась його ефективна КІЛЬКІСТЬ няється тим, що вона призначена для збільшення 35 Спосіб лікування захворювань, який потребує тривалості корисних ефектів TNF- а, причому, корисних ефектів TNF-a, що включає введення вказаний рецептор є введеним у вказаний полімерний матеріал таким чином, щоб викликати контфармацевтичної композиції із контрольованим рольоване виділення КІЛЬКОСТІ розчинного T N F - a виділенням активної речовини, який відрізняєтьрецептора, яка є ефективною для підсилення кося тим, що вводять фармацевтичну композицію рисних ефектів T N F - a для стабілізації корисних ефектів TNF- а, яка містить бюсумісну полімерну матрицю з введеним 27 Фармацевтична композиція за п 26, яка відрізняється тим, що вона призначена для в неї комплексом розчинного T N F - a рецептора лікування пухлин та T N F - a таким чином, щоб протягом періоду 28 Фармацевтична композиція за п 26, яка відрічасу виділялась його ефективна КІЛЬКІСТЬ зняється тим, що вона призначена для лікування 36 Спосіб за п 35, який відрізняється тим, що він вірусних, бактеріальних та інфекцій, викликаних призначений для загоювання ран багатоклітинними паразитами 37 Спосіб за п 35, який відрізняється тим, що він 29 Фармацевтична композиція за п 26, яка призначений для лікування пухлин, причому вкавідрізняється тим, що вона призначена для зазану композицію вводять у місце розташування стосування у загоюванні ран пухлини 30 Спосіб лікування захворювань, у якому потріб Цей винахід стосується фармацевтичних композицій із контрольованим виділенням розчинних рецепторів із полімерної матриці Системи контрольованого виділення постачають ліки з заданою інтенсивністю протягом ВІДПОВІДНОГО часу, який може тривати від кількох днів до декількох років Ці системи мають значні переваги у порівнянні зі звичайною терапією Наприклад, після введення стандартної дози ЛІКІВ через травний тракт або шляхом ін'єкції концентрація ЛІКІВ у крові збільшується, досягає піку, а потім знижується Кожні ЛІКИ мають власний діапазон терапевтичного ефекту, вище якого воно стає токсичним, а нижче - неефективним, тому зміни рівнів концентрації ЛІКІВ у крові можуть викликати появу періодів його неефективності та токсичності У порівнянні з цим, контрольоване виділення ЛІКІВ підтримує їх концентрацію у потрібній терапевтичній зоні при одноразовому застосуванні Інші потенційні пере 44761 ваги систем контрольованого виділення ЛІКІВ вміщують до себе (і) локалізоване постачання ЛІКІВ ДО визначеної частини тіла, чим досягається зниження рівня ЛІКІВ в організмі, тобто в інших органах, (м) збереження складових, які швидко руйнуються в середовищі організму (це особливо важливо для біологічно чутливих молекул, таких як протеїни), (їм) зниження потреби у подальшому нагляді за хворим, (iv) підвищення комфорту, та (v) поліпшення стану Оптимального контролю над виділенням ЛІКІВ можна досягти шляхом введення ЛІКІВ до полімерного матеріалу 3 полімерного матеріалу ліки звичайно виділяються шляхом дифузії, ХІМІЧНОЮ реакцією або активацією розчинником Найбільш поширеним механізмом виділення є дифузія, при якій ліки пересуваються з початкового положення у полімері до зовнішньої його поверхні, а потім в організм Дифузія може відбуватися крізь полімерну плівку, що покриває ліки, або з матриці полімерної системі, через що ліки розподіляються більш рівномірно Ліки можуть також бути виділені ХІМІЧНОЮ реакцією, наприклад, розпадом полімеру, або розщепленням ЛІКІВ З полімерної основи Також можливі комбінації зазначених механізмів Швидкість виділення може контролюватися властивостями полімерного матеріалу (наприклад, ступенем кристалізації, або структурою пор дифузних контрольованих систем, гідролітичною нестійкістю зв'язків, або гідрофобією мономерів ХІМІЧНО контрольованих систем ) та будовою самої системи (наприклад, товщиною і формою) Перевагою наявності систем з різними механізмами виділення є те, що за їх допомогою кожної з них можна досягти різних цілей На протязі багатьох років системи контрольованого виділення були здатні тільки до помірного виділення ЛІКІВ з низькою молекулярною масою (< 600) Великі молекули, такі як протеїни, не розглядалися як ймовірні кандидати, тому що поліпептиди вважалися занадто великими для помірної дифузії крізь більшість полімерних матеріалів, навіть після набрякання полімеру Відкриття того, що матриці твердих гідрофобних полімерів, які мають макрофібрильну структуру, дозволяють молекулам майже будь-якого розміру виділятися протягом більш 100 днів, надало можливість контрольованого постачання в організм усіляких протеїнів, полісахаридів та полінуклеотидів (Див Langer, 1990) Протеїни та поліпептиди, що вводилися до цього часу в полімерні матеріали з метою контрольованого виділення, є у більшості ефекторними молекулами, такими як інсулін, а це суперечить композиціям із контрольованим виділенням молекул, які зв'язують та нейтралізують ефекторні молекули, що містяться у людському організмі Пухлинний некроз-фактор-а (TNFa) - це сильно діючий цитокін, що породжує широкий спектр біологічних реакцій TNFa цитотоксичний по відношенню до багатьох пухлинних клітин і може використовуватись при лікуванні раку TNFa посилює ріст фібро бласт, діє як речовина, що зумовлює реконструювання тканини, і може бути, таким чином, придатним для лікування ран Також він викликає гемороїдальні некрози пересаджуваних пухлин у мишей, посилює фагоцитозну функцію та цитотоксичність поліморфоатомних нейтрофилів і модулює виразність багатьох протеїнів, включаючи ліпопротешову ліпазу класу 1 антигенів головного пстосполучного комплексу, і ЦИТОКІНІВ, таких як інтерлеукш-1 і интерлеукін-6 TNFa показав свою ефективність проти вірусів, бактерій і багатоклітинних, зокрема внутрішньоклітинних, паразитів TNFa є необхідним для нормальної імунної реакції, але велика його КІЛЬКІСТЬ викликає значні патогенні наслідки TNFa здобув назву "кахектін", тому що він є пануючим фактором, відповідаючим за спустошливий синдром (кахексія), зв'язаний з неопластичною хворобою і паразитомією TNFa є також головним постачальником токсинів при грамнегативному сепсисі, тому що антитіла проти TNFa можуть захистити інфікованих тварин TNFa виказав свою причетність до захворювань, прикладом яких є синдром респіраторного виснаження дорослих, легеневий фіброз, малярія, інфекційний гепатит, туберкульоз, запалення кишечника, септичний шок, СНІД, позитивна реакція на щеплення, аутоімунні хвороби, такі як ревматоїдний артрит, поширений склероз і юнацький діабет, та хвороби, пов'язані з тривалим розладом надчутливості шкіри Свідоцтва того, що деякі ефекти TNFa можуть бути шкідливими для організму, притягли увагу до механізмів, які регулюють функцію TNFa Внутрішньоклітинні сигнали для реакції на TNFa забезпечуються рецепторами поверхні клітини (далі TNF-R) двох різних молекулярних видів, до яких TNFa приєднується міцним зв'язком Рецептори поверхні клітини TNF-R виявляються майже у всіх клітинах організму РІЗНІ ВПЛИВИ TNFa цитотоксичність, сприяння росту та ІНШІ, обумовлюються рецепторами TNF після приєднання до них TNFa Дві форми цих рецепторів, які відрізняються молекулярним розміром, 55 і 75 кілоДалтон, вже описані і будуть далі називатися р55 та р75 TNF-R ВІДПОВІДНО Проте необхідно пам'ятати, що є публікації, у яких також робиться посилання на ці рецептори, але позначені як рбО та р80 TNF-R ВІДПОВІДНО Обидва рецептори TNFa знаходяться не тільки на клітинах, але й в розчинній формі, складаючись з розділених позакліткових областей цілих клітинних рецепторів Утворюються вони протеолітичним розщепленням рецепторних форм поверхні клітини Ці TNFa рецептори розчинної форми (sTNF-R) можуть підтримувати здатність зв'язувати TNFa, конкуруючи з TNFa рецепторами поверхні клітини, і, таким чином, блокувати TNFa активність Таким чином, sTNF-Rs діють як фізіологічні послаблювачі активності TNFa, захищаючи від його потенційно шкідливих впливів Але, як також згадувалося, sTNF-Rs впливають також на TNFa функцію, стабілізуючи и активність, скоріше, запобігаючи розпаду його бюактивної тривимірної структури на інертні мономери (Aderka et al , 1992) Таким чином, sTNF-Rs можуть впливати на активність TNFa двома способами або вони конкурують з TNFa рецепторами поверхні 44761 8 клітини і блокують ШКІДЛИВІ реакції TNFa, або вони СТІЙНІЙ швидкості та впродовж тривалого часу Ці діють як буферне середовище і стабілізують TNFa підходи базуються на введенні розчинного рецепактивність тора у бюсумісні полімерні матеріали, які імплантуються або вводяться у задані ВІДДІЛИ організму Два рецептори sTNF-Rs, далі р55 sTNF-R та Полімерні матриці, які містять в собі розчинний р75 sTNF-R, раніш позначалися як TNF зв'язуючі рецептор, дозволяють місцеве контрольоване випротеїни І та II, або ТВРІ та ТВРІІ ВІДПОВІДНО (ДИВ , ділення розчинного рецептора в його звичайній наприклад, ЕР 398327, ЕР 412486, та ЕР 433900) формі У цій заявці ми будемо використовувати обидва позначення р55 sTNF-R, або ТВРІ та р75 sTNF R, Будь-який розчинний рецептор, що має можабо ТВРІІ , у кожнім позначенні протеїни ті ж самі ливість приєднуватися і впливати на функції його ліганд, або нейтралізуючи їх ШКІДЛИВІ ефекти і/або STNF-Rs істотно присутні у сироватці у концестабілізуючи або підсилюючи їх активність, охопнтраціях, які значно збільшуються в обох, запальлюється цим винаходом них та незапальних, етапах хвороби Реакція цих протеїнів, однак, може бути різною, залежно від їх Прикладами таких розчинних рецепторів є концентрації на МІСЦІ ДІЇ TNFa, співвідношення їх розчинні рецептори гормонів і ЦИТОКІНІВ, а найкраконцентрації до місцевої концентрації TNFa, та ще, розчинний рецептор - це розчинний TNFa решвидкості, з якою sTNF-Rs та TNFa виходять із цептор зони дії TNFa по відношенню до швидкості ослабТаким чином, ще одним предметом цього вилення активності TNFa Залежно від цих параметнаходу є забезпечення нового підходу до терапеврів, sTNF-Rs можуть у різних ситуаціях впливати тичних застосувань розчинних TNFa рецепторів на функцію TNFa цілком по-іншому, або пригнічудля впливу на TNFa ефекти, тобто для захисту від ючи реакції TNFa, або виконуючи роль несучого TNF ефектів, включаючи системи контрольованого середовища для TNFa, або навіть підсилюючи виділення реакції TNFa, збільшуючи тривалість її функції Цей винахід, таким чином, забезпечує фарма(Aderkaetal , 1992) цевтичну композицію з контрольованим виділенням розчинного рецептора, де зазначений розчинНа ефективність sTNF-Rs в якості ЛІКІВ проти ний рецептор запроваджений у бюсумісну TNFa можуть впливати різні фактори структурна полімерну матрицю близькість, при якій sTNF-Rs зв'язують TNFa, в порівнянні зі структурною близькістю рецепторів Приклади бюсумісних полімерних матеріалів, поверхні клітини, можливість доступу розчинних які можуть бути використані у композиціях винахорецепторів у зону дії TNFa, і швидкість очистки ду включають до себе, але не обмежують цим, розчинних рецепторів і сполук, які вони утворюють бюсумісні недеградуючи полімери, обрані з групи, з TNFa з місця формації TNFa яка включає етилен-вшілові ацетатні сополімери (EVAc), СИЛІКОНОВІ каучуки, полісахариди, такі як Ймовірно, що звичайні форми sTNF-Rs діють целюлоза, поліаміди, поліакрилати, поліетилени, найбільш фізіологічно доречним способом Проте, поліуретани, поліізобутилени і поліфосфазени, та їх достатньо швидке усунення з крові є головною бюдеградуючі полімери, обрані з групи, яка вклюперешкодою їх застосування Було вжито декілька чає поліефіри, поліанпдриди, полюрфоефіри, поспроб покращити ці молекули, прикладами яких є лікапролактон, псевдополіамінокислоти, поліпептак звані химерні "імунозв'язки", де sTNF-Rs зв'ятиди, желатин, полімолочну кислоту, полігліколеву зані з частиною Fc імуноглобулінової молекули кислоту і полімери полімолочно-гліколевої кислоти (розроблено Huffman La Roche and Immunex), і (PLGA) Полі Етиленгліколеві (ПЕГ) sTNF-Rs, в яких sTNFRs мають поперечні зв'язки за допомогою ПЕГ За одним з переважних рішень, розчинний молекул (розроблено Synergen) Обидва підходи TNFa рецептор (sTNF-R) вводиться у прийнятний дають в результаті формацію двовалентних sTNFполімерний матеріал, такий як поліетилен-вшілова R молекул, у яких більш тривалий час усунення, і ацетатна матриця, або у мікросфери полі (молочякі можуть більш ефективно приєднуватися до но-гліколевої кислоти) тривалентної молекули TNFa Проте вони, схоже, Фармацевтичні композиції, ВІДПОВІДНО З ЦИМ більш імуногенні, ніж звичайні розчинні рецептори, винаходом, можуть мати в собі р55 sTNF-R або і усунення їх сполук з TNFa з циркуляції може відр75 sTNF-R У найкращому рішенні, композиція буватися недостатньо ефективно містить р55 sTNF-R (ТВРІ) Багато шкідливих ефектів TNFa виникають при В одному рішенні фармацевтичні композиції хронічних утвореннях цього цитокшу в певному винаходу призначені для використання при лікуокремому МІСЦІ організму Найбільш передбаченим ванні хвороб, що вимагають захисту від шкідливих обмеженням використання розчинних форм TNF ефектів ліганд, тобто, TNFa Полімерні матриці з рецепторів для захисту проти таких патологічних sTNF-Rs розташовуються у потрібних частинах умов є складність, пов'язана з підтримкою терапеорганізму, тим самим дозволяючи утримувати втично-ефективних концентрацій розчинних рецеsTNF-R у організмі постійно на протязі тривалого пторів у необхідних місцях в перебігу більш тривачасу лого часу У другому рішенні фармацевтичні композиції винаходу призначені для використання разом з Предметом цього винаходу є розробка нових лігандами, тобто, TNFa, для стабілізації та/або ПІДХОДІВ до терапевтичного застосування розчинпосилювання активності TNFa, для використання у них форм рецепторів для впливу на функції їх лібудь-який ситуації, де потрібна корисна дія TNFa ганд, тобто для захисту від шкідливих ефектів їх В одному аспекті цього рішення композиція вклюліганд, зокрема систем, дозволяючих місцеве вичає до себе сполучення TNFa/sTNF-R, яке при ділення розчинного рецептора в організмі при по 44761 застосуванні у МІСЦІ розташування пухлини може виконувати ефективну місцеву протипухлинну функцію і давати незначні соматичні небажані ефекти з боку TNFa В інших аспектах цього рішення композиція, що включає до себе сполучення TNFa/sTNF-R, корисна проти вірусних, бактеріальних і паразитичних, зокрема, внутрішньоклітинних багатоклітинно-паразитичних інфекцій, і для лікування ран В іншому рішенні винахід охоплює лікування пацієнта для його захисту від шкідливих ефектів ліганд, тобто, TNFa, при якому вказаному пацієнту призначається фармацевтична композиція у ВІДПОВІДНОСТІ з винаходом, що має ефективну КІЛЬ КІСТЬ ВІДПОВІДНОГО розчинного рецептору, тобто, sTNF-R, у формі контрольованого виділення В наступному рішенні винахід стосується лікування раку, охоплюючи застосування, при необхідності, в районі пухлини пацієнта фармацевтичної композиції винаходу, яка включає сполучення TNFa/sTNF-R у формі контрольованого виділення Фіг 1 показує вплив розміру частинки на сукупне виділення ТВРІ Частинки ТВРІ + BSA порошок трьох розмірних класів були введені в етиленВІНІЛОВІ ацетатні сополімерні (EVAc) матриці з заповненням на 30% (і) < 75мкм (затушовані ромби) , (м) 75 - 250мкм (чисті квадрати) і (їм) 250 - 425мкм (затушовані круги) На фіг 2 показан вплив ефекту заповнення на сукупне виділення ТВРІ Були зроблені матриці EVAc з заповненням ТВРІ + BSA, з використанням частинок розміром 75 -250мкм (і) 10% заповнення (затушовані ромби) , (м) 30% заповнення (чисті квадрати), і (їм) 50% заповнення (затушовані круги) Фіг 3 показує сукупне відсоткове виділення розчинного TNFa рецептора І (ТВРІ) окремо, або введеного разом з альбуміном бичачої сироватки (BSA) з мікросфер (і) ПОЛІМОЛОЧНО-ГЛІКОЛЄВОІ кис лоти (PLGA) 75 25 (чисті та затушовані круги, ВІДПОВІДНО) , (м) PLGA 50 50 (чисті та затушовані квадрати, ВІДПОВІДНО) , (їм) полі-1-молочної кислоти (PLLA) (чисті та затушовані трикутники, ВІДПОВІДНО) Фігури 4а-с показують in vivo результати оголених мишей Балба, інокульованих TNFвиробляючими клітинами яєчника китайського хом'яка (СНО) (CHO/TNF) і підданим лікуванню ТВРІ , або мишиними анти-TNF монотонними антитілами TNF-1 (АЬ), де Фіг 4а - це графічне зображення усередненої ваги групи (гр) оголених мишей Балба при лікуванні (і) ТВРІ в EVAc матриці, введеної підшкірне (затушовані круги), (м) ТВРІ у PLGA 75 25, імплантовані (чисті круги), (їм) анти(TNF) антитіла, введені ІН'ЄКЦІЄЮ ОДИН раз, через п'ять днів після інокуляції клітинами CHG7TNF (АЬ один раз) (затушовані квадрати), (iv) анти-TNF антитіла, введені ІН'ЄКЦІЄЮ два рази, через п'ять днів після інокуляції мишей клітинами CHO/TNFTa через тиждень (АЬ ДВІЧІ) (ЧИСТІ квадрати), і (v) контрольної групи, без будь-якого лікування (затушовані трикутники) Фіг 4Ь подає результати in vitro рівнів концентрації бюактивних TNFa у мишиній сироватці Сироватка була відібрана у мишей, що мають TNFa виробляючи клітини яєчника китайського хом'яка (СНО), через вказані періоди часу після імпланта 10 ції ТВРІ у EVAc (затушовані круги), або ТВРІ у PLGA 75 25 (чисті круги), або введення ін'єкції анти-TNFa антитіла одноразово (затушовані квадрати), або ДВІЧІ (чисті квадрати), як на фіг 4а, а також у мишей без лікування (затушовані трикутники) Бюактивність TNFa у сироватці була визначена шляхом його вміщення у розчин у співвідношенні 1 100 к культивованій МНА2 КЛІТИНІ (похідна від клітин Гела, через 24 години після їх 4 висіва у клітини розміром 3 х 10 на 9 мікровел) протягом 10 годин у присутності циклогексиміда (25мкм/мл), з послідуючим підсумовуванням схожості клітин методом нейтрального червоного поглинання (Wallach etal ,1984), і Фіг 4С подає криві виживання мишей при лікуванні (і) ТВРІ у EVAc, імплантовані (чисті квадрати), (м) ТВРІ у PLGA 75 25, імплантовані (затушовані круги), (їм) анти-TNF антитіла, одноразово (чисті трикутники), (iv) анти-TNF антитіла, ДВІЧІ (затушовані трикутники), та (v) контрольні, без лікування (чисті круги) Фіг 5 показує вплив імплантованих у різні частини тіла миши EVAc матриць, що мають ТВРІ, на концентрацію виділення ТВРІ шия (затушовані круги), спина (чисті круги) та живіт (затушовані квадрати) Фіг 6 - це графічне зображення опуклостей кісткових суглобів (мм), показуючих розвинення артриту на різних ступенях у потомства трансгенних Тд 197 артритних мишей, яких лікували імплантуванням EVAc, який має ТВРІ (чорні колонки), тільки EVAc (сірі колонки), або без лікування (контрольні) (білі колонки) Фіг 7 - це графічне зображення опуклостей кісткових суглобів (мм), показуючих розвинення артриту на різних ступенях у потомства трансгенних Тд 197 артритних мишей, лікованих анти-TNFa антитілами один раз кожен тиждень на протязі експерименту (65 днів) (чорний колір колонок) і один раз на тиждень на протязі двох тижнів (сірий колір), або без лікування (контрольна) (білий колір колонок) Фіг 8 - це графічне зображення усередненої ваги групи (гр) трансгенних Тд 211 мишей, які мають ЛЮДСЬКІ TNFa mRNA у Т клітинах, яких лікували імплантаціями EVAc, що містять ТВРІ (затушовані круги), тільки EVAc (чисті круги), або без лікування (контрольна) (затушовані квадрати) Фіг 9 - це графічне зображення усередненої ваги групи (гр) трансгенних Тд 211 мишей, яких лікували анти-TNFa антитілами один раз кожен тиждень на протязі експерименту (50 днів) (затушовані трикутники), і один раз на тиждень на протязі двох тижнів (чисті трикутники), або без лікування (контрольна) (затушовані квадрати) Фіг 10 подає криві виживання трансгенних Тд 211 мишей, яких лікували імплантуванням EVAc з ТВРІ (затушовані круги) і тільки EVAc (чисті круги), або без лікування (контрольна) (затушовані квадрати) Фіг 11 подає криві виживання трансгенних Тд 211 мишей при лікуванні анти-TNFa антитілами раз на тиждень на протязі 65 днів (затушовані круги), і раз на тиждень на протязі двох тижнів (чисті круги), або без лікування (контрольна) (затушовані квадрати) Цей винахід дозволяє контрольоване виділен 11 44761 12 ня будь-якого розчинного рецептору, який може ватковий альбумін (хоча він і не є найкращим для зв'язуватись та впливати на активність його ліганд, використання людиною), людський альбумін, міогяк нейтралізуючи ліганд, який має ШКІДЛИВІ ефеклобін, гемоглобін та інш ти, так і стабілізуючи / посилюючи його ДІЯЛЬНІСТЬ Фармацевтична композиція, ВІДПОВІДНО З винаПрикладами таких розчинних рецепторів є розчинходом, яка має в собі sTNF-R, може бути введена ні рецептори ЦИТОКІНІВ, тобто, TNFa, IFN-_, IL-2, ILу бюдеградований полімер, обраний з групи, яка 6 і подібні включає полі-І_-молочну кислоту, полігліколеву кислоту, та сополімери, комерційне наявні гомопоУ переважному рішенні, композиції винаходу лімери, або сополімери молочної кислоти і/або мають sTNF-Rs, які можуть бути одержані з натугліколевої кислоти, з'єднані у формі мікросфер, які ральних джерел, таких як людська сеча ( Engelпридатні як для імплантацій, так і для ІН'ЄКЦІЙ МІКmann et al , 1989, Engelmann et al , 1990, Olson et росфери можуть бути виготовлені, наприклад, al , 1989, і Seckmger et al , 1989), або рекомбінантудосконаленим методом випарювання розчину з ними способами ( ЕР 433900, Nophar et al , 1990, використанням подвійної емульсії, як описано у Schall et al , 1990, і Loetscher et al , 1990) з подаCohen et al , 1991 3 тої причини, що полімери бюльшим очищенням, як описано, наприклад, у ЕР деградовані, імплантований об'єкт може бути лег308378 і ЕР 398327 Використані тут терміни ко введений ІН'ЄКЦІЄЮ, уникаючи використання хі"sTNF-Rs", "p55 sTNF-R", "p75 sTNF-Rs", віднорургічних процедур і необхідності виведення сяться до всіх sTNFs з натуральних джерел, або обладнання після вичерпання ЛІКІВ Динаміка видіздобутих рекомбінантними DNA способами, вклюлення активного компонента є контрольованою та чаючи, але не обмежуючись ними, TNF зв'язуючі прогнозованою Система дозволяє тривале видіпротеїни І і II, описані у ЕР 308378 і ЕР 398327 лення активного компонента на протязі тижнів або, Полімери, які можуть бути використані при занавіть, МІСЯЦІВ стосуванні цього винаходу, включають, але не обмежуються ними, бюсумісні недеградовані поліФармацевтична композиція винаходу, що мери, вибрані з етилен-вшілових ацетатних соповключає sTNF-R, може бути використана для полімерів, силіконових каучуків, полісахаридів, таких давления шкідливих ефектів TNFa при гострих як целюлоза, а також поліаміди, поліакрилати, захворюваннях, таких як септичний шок, позитивполіетилени, поліізобутилен, поліуретани й поліна реакція на щеплення (GVHD), малярія, інфекфосфазени, та бюдеградовані полімери, вибрані з ційний гепатит, туберкульоз, або при хронічних поліефірів, полюрфоефірів, полікапролактону, захворюваннях, таких, як кахексія, що супроводить поліпептидів, псевдополі(амшокислот), желатину, рак, хронічний GVHD, або при аутоімунних захвополіанпдридів, ПОЛІ-І_-МОЛОЧНОІ кислоти, полі-Dрюваннях, тобто, ревматоїдному артриті, підлітковому діабеті, соматичному туберкульозі шкіри ериМОЛОЧНОІ КИСЛОТИ, ПОЛІ-О,1-МОЛОЧНОІ КИСЛОТИ, ПОтематозі та поширеному склерозі, або при лігліколевої кислоти, і сополімери, обрані з полі-Lтривалих розладах надчутливості шкіри ФармаМОЛОЧНОІ КИСЛОТИ-ГЛІКОЛЄВОІ КИСЛОТИ, ПОЛІ-Dцевтична композиція винаходу може бути застосоМОЛОЧНОІ КИСЛОТИ-ГЛІКОЛЄВОІ КИСЛОТИ, ПОЛІ-D.Lвана будь-яким способом, придатним для контроМОЛОЧНОІ КИСЛОТИ-ГЛІКОЛЄВОІ КИСЛОТИ, ПОЛІ-Lльованої доставки sTNF-R - або імплантуванням, молочної кислоти-О-молочної кислоти, та полі-Lабо місцевими ІН'ЄКЦІЯМИ, наприклад, внутрішньоМОЛОЧНОІ КИСЛОТИ-О,І_-МОЛОЧНОІ КИСЛОТИ суглобною ІН'ЄКЦІЄЮ у синовіальну рідину порожПолімери, найкраще використовані у цьому нин суглоба при лікуванні ревматоїдного артриту, винаході, були етилен-вшілові ацетатні сополімеабо внутрішньооболонковою ІН'ЄКЦІЄЮ у церебросри (EVAc), сополімери полімолочно-гліколевої кипинальну рідину при лікуванні поширеного склерослоти (PLGA) та ПОЛІ-І_-МОЛОЧНОІ кислоти (PLLA) зу, або способом топічних формулювань, тобто, Фармацевтична композиція, що включає sTNFлосьйонів, при лікуванні шкіряних захворювань R, вводиться у EVAc матрицю, яка може бути виКомпозиції для лікування ревматоїдного артриту готовлена з промислових EVAc, після очистки, можуть включати ІНШІ протизапальні компоненти, а коли необхідно, наприклад, розчинним литтям, як композиції для лікування поширеного склерозу описано у Rhine et al , 1980 Ці матриці утворюють можуть включати ІНШІ компоненти проти поширедифузно-контрольовані системи, що забезпечують ного склерозу, тобто, бета-штерферон і Сополірівномірний розподіл протеїнів, репродуктивну мер-1 (Соп-1) динаміку з пролонгованим виділенням біологічно активного sTNF-R на протязі тижнів або, навіть, Композиція винаходу, що має в собі sTNF-R, МІСЯЦІВ По причині того, що EVAc бюсумісний, але буде складена таким чином, щоб доставити в орне деградований полімер, EVAc матриці придатні ганізм таку КІЛЬКІСТЬ sTNF-R, яка є достатньою для для використання там, де є потрібним або бажаблокування дії TNFa Для застосування при лікуним пролонговане виділення ЛІКІВ ванні аутоімунних хвороб композиція буде складена таким чином, щоб доставити таку КІЛЬКІСТЬ По причині того, що головним принципом є виsTNF-R, що відповідає курсу лікування і тяжкості ділення з недеградованих полімерних матеріалів, аутоімунної хвороби, для поліпшення стану пацієтаких як EVAc, методом дифузії крізь канали у манта та зниження або ремісії хвороби Ефективність триці, дифузія посилюється більш високою загруздози буде залежати від способу її введення, хвокою протеїнів Таким чином, у переважному ріроби, яку лікують, і стану пацієнта Визначення шенні, активний протеїн є з'єднаним з рівня р55 sTNF-R або р75 sTNF-R у сироватці або нейтральним протеїном, який не впливає на біолоу ІНШІЙ придатній для вивчення рідині пацієнта гічне спрацьовування активного протеїну, щоб відомими методами (для ELISA, див Aderka et al , збільшити загальну протеїнову загрузку Прикла1991) може допомогти визначенню необхідної додами таких нейтральних протеїнів є бичачий сиро 13 зи для цього пацієнта, пам'ятаючи, що екзогенне застосування sTNF-R може доповнити ендогенне існуючий sTNF-R при нейтралізації шкідливої активності TNFa Коли потрібна стабілізація активності TNFa, композиція включає в себе сполучення TNFa і sTNF-R, наприклад, сполучення 1 1, для застосування на МІСЦІ локалізації пухлини Винахід буде зараз проілюстровано наступними прикладами, які не обмежують цей винахід, і фігурами, які додаються ПРИКЛАДИ Матеріали та методи Матеріали Використовувались PLGA 50 50, властива в'язкість (і v) 0,51дл/гр, та PLGA 75 25 , iv 0,48дл/гр, PLLA (полі-1-молочна кислота), iv 0,64дл/гр (обидва із PURAC Biochem BV, Holland) Були використані по одержанні етилен-вшіловий ацетатний сополімер (EVAc) (40% ВІНІЛОВОГО ацетату) (Dupont), бичачий сироватковий альбумін (BSA) (Sigma Chemical Co , USA), полівшілспирт (PVA) з середньою молекулярною вагою 77000 79000, 88% гідролізний (Aldnch Chtmical Co ) і ТВРІ (р55 sTNF-R) (InterPharm Laboratories Ltd , Israel) Анти-TNFa антитіло, позначене TNF-1, - це мишине моноклональне антитіло, отримане проти людського рекомбінанту TNFa в одній з сучасних лабораторій винахідника (D Wallach) Методи In vitro профілі виділення були отримані розміщенням матриць для доставки ЛІКІВ у фосфатно-буферний фізіологічний розчин (PBS, ph 7 4), який міститься у пляшці і збовтується у ванні для цього Періодично відбиралися і аналізувалися зразки ТВРІ Ферментно-Зв'язаним ІмуноСорбентним Аналізом (ELISA, Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), як описано у Aderka et al , 1991 In vivo ефективність полімерних систем досліджувалася на трьох моделях (і) мишах з імплантованими TNFaвиробляючими клітинами пухлини (CHGyTNF), як описано yXDhff et al , 1987, розвинено тяжку форму кахексії, яка веде до смерті, (м) трансгенних Тд 197 мишах, у яких прогнозовано розвивався артрит, як описано у Kefferetal , 1991, (їм) трансгенних Тд 211 мишах, які мають людський TNFa mRNA в Тклітинах, з помітно розвиненими ГІСТОЛОГІЧНИМИ змінами і летальним виснажливим синдромом, як описано у Probert et al , 1993 ПРИКЛАД 1 Контрольовані виділення р55 sTNF-R з EVAc матриць Етилен-вшіловий ацетатний сополімер (40% ВІНІЛОВИЙ ацетат по вазі) був розчинений у метиленхлориді, щоб отримати 10% розчин (w/v) ТВРІ розчин був доданий у порошок бичачого сироваткового альбуміну (BSA), розчиненого у дистильованій воді подвійної очистки Суміш була виморожена до перетворення у порошок (24 години при 5 мікронах Нд та -70°С, Freeze Dryer, Lab Conco) ТВРІ + BSA порошок був просіяний для отримання частинок ФІГ З -• Фіг 4с 50 21 22 44761 0 10 20 ЗО ЧАС (ДНІВ ПІСЛЯ імплантації) ЧАС (Днів) Фіг 5 ь fib (един раз кожний тиждень) с Ab (pas у тиждень 2 тижні) • контроль О ЧАС (Днів після інокуляції) Фіг. 9 ЧАС (Днів після імплантації"} Фіг. 6 АЬ ' 0 Д И м P f l 3 кожний тиждень) АЬ {Р а з У ти ждет* 2 ТІІЖНІ^ иоитроль ЧАС (Днів після імплантації) 14 27 ЧАС (Дніє після інокуляції^ Фіг. 7 65 Фіг 10 23 44761 24 я і n a І U "АЬ іодпн раз ножний т -ЛЬ (раз ч гикдень 2 Тижні - КОМграл Ї ЧАС (Днів після Інокуляції} ФІГ. 1 1 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90