Похідні бензотіофену, бензофурану, індолтіазепінону, оксазепінону і діазепінону, фармацевтична композиція, що має інгібуючу клітинну адгезію або віл активність, спосіб гальмування адгезії лейкоцитів до ендотелі

1 Производные бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазепинона и диазепинона формулы (I) О , (D где R-i, R2, R3 и R4 независимо друг от друга означают водород, гидроксил, галоген, низший ал кил, низший алкоксил, Rs и R6 независимо друг от друга означают водород или низший алкил, X - группа S(O)n или NH, Y - кислород, группа S(O)n или NH, п - 0, 1 или 2, при условии, что 1) если X означает NH, Y - NH, Ri - водород и R3 водород, то R2 не означает метил, 2) если X означает NH, Y - NH, Ri, R3 и R4 - водород, то R2 не означает метокси или этокси, и 3) если X означает NH, Y - серу, то по меньшей мере один из радикалов Ri, R3, и R4 не означает водород, или их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли 2 Производные бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазепинона и диазепинона по п 1, где R-і, R3 и R4 означают водород 3 Производные бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазепинона и диазепинона по п 2, где R2 означает водород или низший алкоксил, X означает группу S(O)n или NH, Y означает кислород или группу S(O)n и п означает 0, 1 или 2 4 Производное индолтиазепинона по п 3, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси-[1]бензотиено[2,3-1]-1,4-тиазепин-5(4Н)он 5 Производное оксазепинона по п 3, представляющее собой 2,3-дигидро[1]бензотиено[2,3-1]-1,4-оксазепин-5(4Н)он 6 Производное индолтиазепинона по п 3, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси[1]бензотиено[2,3-1]-1,4-тиазепин-5(4Н)он-1 -оксид 7 Производное оксазепинона по п 3, представляющее собой 3,4-дигидро-9-метокси-6-метил-2Н1,4-оксазепино[6,7-Ь]индол-5(6Н)он 8 Производное диазепинона по п 3, представляющее собой 2,3-дигидро-1Н-бензотиено[3,2-е]-1,4диазепин-5-он 9 Производное оксазепинона по п 3, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-[2,3-1]-1,4-оксазепин-5-он 10 Производное оксазепинона по п 3, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси-6-оксид-1Нбензотиено-[2,3-1]-1,4-оксазепин-5-он 11 Производное оксазепинона по п 3, представляющее собой 2,3-дигидро-9-метокси-2-метил-1Нбензотиено-[2,3-1]-1,4-оксазепин-5-он 12 Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей клеточную адгезию или ВИЧ активностью, содержащая активное начало и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она включает терапевтически эффективное количество соединения по п 1 13 Способ торможения адгезии лейкоцитов к эндотелиальным клеткам при лечении вызванных О 1 (О ю З 45967 ею болезней, отличающийся тем, что включает 15 Способ лечения млекопитающих, зараженных введение терапевтически эффективного количестВИЧ, отличающийся тем, что включает введение терапевтически эффективного количества фармава фармацевтической композиции по п 12 в виде цевтической композиции по п 12 в виде дозироводозировочной единицы чной единицы 14 Способ по п 13, отличающийся тем, что лечению подвергают воспалительную болезнь Изобретение относится к новым гетероциклическим соединениям, обладающим биологической активностью, более конкретно к производным бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазепинона и диазепинона, фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей клеточную адгезию или ВИЧ активностью, способу торможения адгезии лейкоцитов к эндотелиальным клеткам при лечении вызванных ею болезней и способу лечения млекопитающих, зараженных ВИЧем Адгезия лейкоцитов к сосудистому эндотелию является неотъемлемой частью патогенеза воспаления Процесс адгезии предшествует трансэндотелиальной миграции лейкоцитов в окружающую ткань и последующему повреждению ткани От соединений, способных к торможению этого начального адгезионного взаимодействия, ожидают эффективность при лечении воспалительных заболеваний, таких, как, например, ревматоидный артрит, остеоартрит, астма, псориаз Другие показания включают, например, респираторный дистресс-синдром у взрослых, травму в связи с повторной перфузией, ишемию, язвенный колит, васкулит, атеросклероз, воспалительную кишечную болезнь и метастазы опухолей Рецепторы адгезии можно подразделять на три главные семьи селектины, суперсемейство иммуноглобулинов и интегрины (см "Nature", 345 426 (1990)) Члены всех трех классов содействуют адгезии лейкоцитов во время воспаления (отн обзоров см "Thrombosis and Hemostasis", 65(3), 223 (1991), "Clinical and Experimental Allergy", 20 619 (1990), "Transplantation", 48 727 (1989), "Biochemical Pharm ", 40(8)1683 (1990)) Молекула-1 адгезии лейкоцитов к эндотелию (в дальнейшем "Е-селектин") является членом семьи служащих в качестве селектина гликопротеинов, способствующих межклеточной адгезии В литературе есть сведения о максимальной экспрессии Е-селектина на поверхности эндотелиальных клеток через 4 часа после стимуляции эндотелиальных клеток цитокинами, такими, как, например, интерлейкин-1, фактор а некроза опухолей или другие медиаторы воспаления как, например, липополисахариды (см "Pro Nat Acad Sci", 34 9238 (1987)) Молекула-1 межклеточной адгезии (в дальнейщем "ICAM-1") является членом суперсемейства иммуноглобулинов Максимальная экспрессия наблюдается через 1 2 - 2 4 часа после стимуляции Есть сведения о том, что через 4 часа после стимуляции эндотелиальных клеток медиатором воспаления и Е-селектин, и ICAM-1 находятся на клеточной поверхности (см "J Clm Invest", 82 1746 (1988), "J Immun", 1311893 (1986), "Blood", 78 2721 (1991)) Бензотиофен, бензофуран и индолтиазепиноны, оксазепиноны и диазепиноны данного изобретения тормозят адгезию неитрофилов к эндотелиальным клеткам пупочной вены человека, стимулированным фактором а некроза опухолей в рамках испытания ин витро Настоящее изобретение также относится к новым тиазепинонам, оксазепинонам и диазепинонам для лечения зараженных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) пациентов путем торможения активации ВИЧа, являющегося латентным в зараженных лицах Патогенез вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) является сложным и пока полностью не выявлен Жизненный цикл вируса теоретически разделяют на афферентные и эфферентные компоненты Связывание, слияние, обратная транскрипция и, в заключение, интеграция вируса являются событиями афферентного компонента жизненного цикла Именно афферентные компоненты жизненного цикла ВИЧа отвечают за первичную инфекцию индивидуума ВИЧем, после чего обычно наблюдается вспышка виремии с клиническими симптомами или же без них Было разработано множество терапевтических стратегий с целью вмешательства в афферентные события (см , например, Н Mitsuya, S Broder, "Inhibition of the In Vitro Infectivity and Cytopathic Effect on Human T-lymphotropic Virus Type Ill/lymphadenopathy Virus-associated Virus (HTLV-III/LAV) by 2',3'-Dideoxynucleosides", Proc Natl Sci (USA), 83 1911 -1915 (1986)) В то время, как разные стадии афферентного компонента позволяют эффективное терапевтическое вмешательство, становилось все более очевидным, что вмешательство лишь в этот период недостаточно После заражения ВИЧем и прогрессирования болезни по афферентным стадиям индивидуум переживает продолжительный период клинической латентности, который может длиться несколько лет, и индивидуум является здоровым В этот момент достигается низкая или нулевая степень виремии и вирусной репликации в периферических клетках крови Позже, однако, болезнь в конечном счете прогрессирует до угрожающей жизни иммуносуппрессии (СПИД), способ лечения которой не известен Эти более поздние события представляют собой клинические проявления эфферентных стадий заражения ВИЧем Эфферентный компонент жизненного цикла ВИЧа включает события, необходимые провирусу ВИЧа для успешной транскрипции, трансляции, сборки и продукции вирионов Начало событий, необходимых для прогрессирования ВИЧ-зара 45967 эффективного количества предлагаемой фармацевтической композиции в виде дозировочной единицы Соединения вышеприведенной формулы (I) относятся к категории малотоксичных веществ Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений формулы (I) включают соли неорганических кислот, таких, как, например, хлористоводородная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, фтористоводородная кислота, фосфористая кислота, а также соли нетоксических органических кислот, таких, как, например, алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенил-замещенные алканкарбоновые кислоты, оксиалканкарбоновые кислоты, алкандикарбоновые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты В качестве примеров таких солей R. можно назвать сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, нитрат, фосфат, вторичный фосфат, первичный фосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, йодид, ацетат, трифторацетат, пропионат, каприлат, изобутират, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себакат, фумарат, малеат, манделат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, фталат, бензолсульгде фонат, толуол сул ьфонат, фенилацетат, цитрат, R-i, F?2, R3 и R4 независимо друг от друга озналактат, малеат, тартрат, метансульфонат Кроме чают водород, гидроксил, низший алкил, низший того, можно применять соли аминокислот, наприалкоксил, мер аргинат и тому подобному, а также глюконат, Rs и R6 независимо друг от друга означают вогалактуронат, N-метилглутамин (см , например, С дород или низший алкил, М Берге и др , "Pharmaceutical Salts", Journal of X - группа S(O)n или NH, Pharmaceutical Science, 66 1-19 (1977)) Y - кислород, группа S(O)n или NH, п - 0, 1 или 2, при условии, что Кислотно-аддитивные соли приведенных ос1) если X означает группу NH, Y означает груновных соединений получают путем контактироваппу NH, Ri означает водород и R3 - водород, то R2 ния свободного основания с достаточным количене означает метил, ством желаемой кислоты с получением соли стан2) если X означает группу NH, Y означает грудартным образом Свободное основание можно ппу NH, Ri R3 и R4 означают водород, то R2 не высвобождать путем контактирования соли с осозначает метоксил или этоксил, и нованием и выделением свободного основания стандартным образом Свободные основания нем3) если X означает группу NH, Y означает сеного отличаются от их соответствующих солей по ру, то по меньшей мере один из радикалов Ri, R3 некоторым физическим свойствам, например, по и R4 не означает водород, или их фармацевтичесрастворимости в полярных растворителях, но в ки приемлемые кислотно-аддитивные соли остальном биологические свойства солей являютВторым объектом изобретения является ся эквивалентными соответствующему свободнофармацевтическая композиция, обладающая инму основанию гибирующей клеточную адгезию или ВИЧ активностью, содержащая активное начало и фармацевНекоторые из соединений данного изобрететически приемлемый носитель, которая содержит ния могут иметься и в несольватированных фортерапевтически эффективное количество соедимах, и в сольватированных формах, включая гиднения вышеприведенной формулы (I) и фармацерированные формы В общем сольватированные втически приемлемый носитель формы, включая гидрированные формы, являются Третьим объектом изобретения является споэквивалентными несольватированным формам и соб торможения адгезии лейкоцитов к эндотелиавсе указанные формы охватываются настоящим льным клеткам при лечении вызванных ею болезизобретением ней, который заключается в том, что включает Предпочтительными соединениями формулы введение терапевтически эффективного количест(I) являются те, у которых R-і, R3 и R4 означают вова предлагаемой фармацевтической композиции в дород виде дозировочной единицы Предпочтительный Кроме того, предпочтительными соединениявариант данного способа заключается в том, что ми формулы (I) являются еще те, у которых R-і, R3 лечению подвергается воспалительная болезнь и R4 означают водород, R2 означает водород или Четвертым объектом изобретения является низший алкоксил, X означает группу S(O)n или NH, способ лечения млекопитающих, т е человека или Y означает кислород или группу S(O)n, a n означаживотного, зараженных ВИЧем, который заключает 0, 1 или 2 ется втом, что включает введение терапевтически В частности предпочитаются соединения из женных клеток от бессимптомной, непроявляющей ВИЧ стадии к симптоматической, проявляющей ВИЧ стадии называют активацией В настоящее время эфферентный компонент и клеточная основа активации полностью не выявлены Несмотря на это, разработка новых терапевтических средств и стратегий и их применение во время клинически бессимптомного периода в целях борьбы с прогрессированием к СПИДу может вселять определенную надежду предполагаемому числу одного миллиона зараженных, но клинически латентных, индивидуумов С учетом вышеизложенного первым объектом изобретения являются производные бензотиофена, бензофурана, индолтиазепинона, оксазелинона и диазепи-нона формулы (I) R. 8 45967 лемую кислотно-аддитивную соль и фармацевтигруппы, включающей чески приемлемый носитель Такие композиции 2,3-дигидро-9-метокси-[1]-бензотиено[2,3-т]являются дополнительным объектом настоящего 1,4-тиазепин-5(4Н)-он, 2,3-диги-дро-[1]бензотиеизобретения но[2,3-т]-1,4-оксазепин-5(4Н)-он, 2,3-дигидро-9-меДля применения в области ветеринарии, а татокси-[1] бензотиено[2,3-1]-1,4-тиазепин-5(4Н)-он-1 кже в области медицины композиции данного изо-оксид, 3,4-дигидро-9-метокси-6-метил-2Н-1,4-окбретения содержат активное начало вместе с фасазепино[6,7-Ь]-индол-5(6Н)-он, 2,3-дигидро-1 Нрмацевтически приемлемым носителем и, факульбензотиено-[3,2-е]-1,4-диазепин-5-он, 2,3-дигидротативно, другой (другие) терапевтический(ие) инг9-метокси-1 Н-бензотиено-[2,3-1]-1,4-оксазе-пин-5-редиенты) Носитель(и) должен(ны) быть "приемон, 2,3-дигидро-9-метокси-6-оксид-1 Н-бензотиенолемым^)" в том смысле, что он(и) должен(ны) [2,3-1]оксазепин-5-он, 2,3-дигидро-9-метокси-2-мебыть совместимым(и) с другими ингредиентами тил-1 Н-бензотиено-[2,3-т]-1,4-оказепин-5-он композиций и невредным(и) для пациента При определении показания к ингибитору клеточной адгезии или ингибитору активации ВИЧа Композиции включают препараты, пригодные лечащий врач будет учитывать, конечно среди для орального, легочного, глазного, ректального, прочего, соответствующее состояние пациента, парентерального (включая подкожного, внутримысерьезность состояния, а также возраст, пол, вес шечного и внутривенного), внутрисуставного, месит п тного, носового или трансбуккального введения Такие композиции включают известные препараты Для достижения терапевтического эффекта длительного или продленного действия необходимое количество соединения формулы (I) или его фармакологически приемлемой кислотноКомпозиции можно выпускать в виде препарааддитивной соли конечно варьируется в зависимота, включающего дозировочные единицы Их можсти от соответствующего соединения, пути введено получать любым известным в области фармания средства, проходящего курс лечения пациенцевтики способом Эти способы могут охватывать та, определенного расстройства или соответствустадию контактирования активного начала с носиющей болезни Предпочтительный вариант изобтелем, представляющим собой по меньшей мере ретения охватывает метод лечения лиц, страдаюодно вспомогательное вещество Обычно компощих от воспалительной болезни, такой, как, назиции получают путем равномерного и гомогеннопример артрит или припухлость, включающий даго контактирования активного начала с жидким ночу соединения в эффективном противовоспалитесителем и/или тонкоизмельченным твердым носильном количестве Подходящей дозой соединения телем и, в случае необходимости, переведения формулы (I) или его фармацевтически приемлепродукта в желаемый препарат мой кислотно-аддитивной соли для пациента, Пригодные для оральной аппликации препастрадающего или предрасположенного к страдараты согласно изобретению могут иметься в виде нию от любого из вышеописанных состояний, явдискретных единиц, таких, как, например, капсулы, ляется 0,1 мкг - 500мг соединения на килограмм крахмальные капсулы, таблетки, лепешки, содервеса тела В случае системной дачи доза может жащие предопределенное количество активного составлять 0,5 - 500мг соединения на килограмм начала, в виде порошка или гранул, в виде раствеса тела, предпочтительно 0,5 - 50мг/кг веса тела вора или суспензии в водной или неводной жидкопациента два - три раза в день В случае местного сти, или же в виде эмульсии типа масла в воде применения, например, на коже или на глазах, поили эмульсии типа воды в масле Активное начало дходящая доза может составлять 0,1нг - ЮОмкг может также иметься в виде болюса, электуария соединения на килограмм, обычно приблизительили пасты но 0,1мкг/кг Пригодность соединений данного изобретения в качестве ингибиторов адгезии лейкоцитов к васВ случае оральной дачи соединения для лечекулярному эндотелию и, следовательно, пригодния или профилактики артрита или воспаления, ность для лечения связанных с воспалением бовызванных любой причиной, подходящая доза солезней или состояний можно определять на осноединения формулы (I) или его физиологически ве их эффективности в рамках различных стандаприемлемой кислотно-аддитивной соли может ртных испытаний В нижеследующем приведены быть той же самой, что и в предыдущем абзаце, описание хода анализов и результаты испытаний но предпочтительно применяют 1 - 10мг соединения на килограмм, а более предпочтительно 1 Испытание экспрессии молекулы-1 межклето5мкг/кг веса тела пациента, например, 1 - 2мкг/кг чной адгезии и Е-селектина в эндотелиальных клетках пупочной вены человека Само собой разумеется, что специалист в данной области (врач или ветеринар) будет опреКлеточная культура делять и прописывать эффективное количество Эндотелиальные клетки пупочной вены челосоединения для предотвращения или прекращевека (поставляемые фирмой Клоне-тике) в склянния прогрессирования соответствующего состояках Т-25 культивируют в течение 1 - 3 дней при тения При этом, врач или ветеринар может постумпературе 37°С в атмосфере, содержащей 5% пать так, что в начале курса лечения дает относидвуокиси углерода Потом клетки расщепляют путельно низкие дозы, после чего повышает дозу до тем обработки 10мл раствора, содержащего достижения максимальной реакции 0,025% трипсина и 0,01% эти-лендиаминотетрауксусной кислоты (далее "ЭДТУК"), в течение 5 - 1 0 Активное начало можно, правда, давать отдесекунд После декантирования промывочного расльно, но предпочтительно дают его в виде фарматвора добавляют еще 10мл раствора трипсина и цевтической композиции, включающей соединеЭДТУК и клетки перемешивают в течение 2 - 4 миние формулы (I) или его фармацевтически прием 45967 нут, слегка ударяя резинкой постенке склянки Затем содержимое склянки подают в пробирку для центрифугирования емкостью 50мл, содержащую 40мл среды Среда представляет собой эндотелиальную базальную среду (поставляемую фирмой Кпонетике), содержащую 2мг/л гидрокортизона, 0,05мкг/л эпидермального фактора роста, 12мг/л экстракта бычьего мозга и 6%-ную термически инактивированную фетальную телячью сыворотку (поставляемую фирмой Хайклон) Клетки центрифугируют при 15°С в течение 1 0 - 1 5 минут, надосадочную жидкость удаляют и клетки ресуспендируют в свежей среде Клетки вышеописанным образом еще раз обрабатывают, после чего их высеивают в пластинку с 96 чашками Стимулирование цитокином Через 5 дней после достижения слияния клетки стимулируют фактором а некроза опухолей (поставляемым фирмой Гензайм) для получения окончательной концентрации среды, равной 140единиц/мл и инкубируют при 37°С в течение 4 часов Потом среду удаляют из инкубатора и хранят для анализа производства хемокина Клетки три раза промывают фосфатсодержащим буфером солевого раствора, не содержащего кальция или магния Затем монокультуры фиксируют путем добавления к чашкам буферсодержащего 10%-ного формалина в течение 15 минут Потом клетки три раза промывают модифицированной по способу Дульбекко средой Игла (далее "среда ДМЕМ") (поставляемой фирмой Гибко), содержащей 2% альбумина бычьей сыворотки, и хранят в холодильнике в течение ночи Твердофазный иммуноферментный анализ Мышиные моноклональные античеловеческие молекулы-1 межклеточной адгезии (поставляемые фирмой R & D Systems, кат № ВВА-4) или мышиный моноклональный античеловеческий Е-селектин (фирмы R & D Systems, кат № ВВА-2) растворяют в среде ДМЕМ, содержащей 2% альбумина бычьей сыворотки Указанные молекулы-1 или Е~ селектин в концентрации 0,5мкг/мл добавляют к каждой чашке и инкубируют при 37°С в течение 2 часов Монокультуры 4 раза промывают средой ДМЕМ, содержащей 2% альбумина бычьей сыворотки Добавляют разведенный в соотношении 1 3000 конъюгированный пероксидазой выделившийся из овца прстивомышиныи иммуноглобулинг (поставляемый фирмой Каппел) и инкубируют при 37°С в течение часа Клетки четыре раза промывают средой ДМЕМ Затем к зафиксированным клеткам добавляют окрашивающий реактив и инкубируют 15 минут при комнатной температуре Реакцию прекращают добавлением 2%-ного раствора щавелевой кислоты Абсорбция составляет 414нм на аппарате для чтения титрационных пластинок Испытание соединений Соединения растворяют в диметилсульфоксиде при концентрации ЗОммоль и разбавляют средой для достижения конечной концентрации К клеткам добавляют растворенное в среде соединение за 30 минут до стимуляции фактором а некроза опухолей Абсорбцию нестимулированных клеток вычитают из значений абсорбции стимулированных фактором а некроза опухолей клеток пе 10 ред определением процента торможения Процент торможения определяют путем сравнения абсорбции обработанных только носителем соединений клеток (контрольный опыт) с клетками, обработанными исследуемым соединением Значения КТ50 определяют с помощью линейно-регрессионного анализа Метод определения торможения адгезии нейтрофилов человека к стимулированным фактором а некроза опухолей эндотелиальным клеткам пупочной вены человека Клеточная культура Эндотелиальные клетки пупочной вены человека второго пассирования (поставляемые фирмой Кпонетике Корпорейшн, Сан Диэго, Калифорния, СС-2617) высеивают в пластинки с 96 чашками (поставляемые фирмой Корнинг гласе верке, Корнинг, Нью-Йорк) плотностью приблизительно 5 х 103 клеток на чашку и выращивают до слияния в полной эндотелиальной базальной среде (ЕВМ, MCDB, поставляемой фирмой Кпонетике), содержащей Юнг/мл эпидермального фактора роста, 1мкг/мл гидрокортизона, 0,4% экстракта бычьего мозга и 6%-ную фетальную телячью сыворотку За один день до проведения испытания, обычно через 3 дня после высеивания клеток, к культурам добавляют еще 0,2мл полной эндотелиальной базальной среды на чашку Изготовление испытуемых соединений Испытуемые соединения переводят в маточный раствор объемом 10мл, концентрация которого составляет 1,0ммоль Сначала соединения солюбилизируют в 0,1мл диметилсульфона, после чего добавляют 9,9мл полной эндотелиальной базальной среды Затем испытуемые соединения в одну стадию разбавляют до достижения концентрации 66,6мкм Операции солюбилизации и разбавления осуществляют в полистирольных сосудах Стимулирование эндотелиальных клеток пупочной вены человека Рекомбинантный человеческий фактор а некроза опухолей (поставляемый фирмой Гензайм, Бостон, Массачусетс, код TNFН) получают в концентрации, равной 400единиц/мл в полной эндотелиальной базальной среде Маточный раствор фактора а некроза опухолей состоит из 20000единиц/мл фосфатсодер-жащего буфера солевого раствора (PBS, поставляемого фирмой Гибко, Грэнд Айлэнд, Нью-Йорк) и 0,1% альбумина бычьей сыворотки Его хранят при температуре -70°С Эндотелиальные клетки пупочной вены человека один раз промывают 0,2мл теплой неполной эндотелиальной базальной среды, после чего их стимулируют фактором а некроза опухолей, взятым в концентрации 200единиц/мл, в присутствии ЗЗ.Змкм испытуемого соединения при температуре 37°С в течение 4 часов Эту операцию осуществляют путем добавления 0,1мл фактора а некроза опухолей, взятым в концентрации 400единиц/мл, и 0,1мл (66,6мкм) испытуемого соединения Вещества добавляют медленно для предотвращения разрыва монослоя эндотелиальных клеток Каждое соединение испытывают в шести чашках Кроме того, в каждой пластинке проводят контрольный опыт с нестимулированными клетками и опыт с клетками, стимулированными фактором а некроза опухолей без об 11 45967 12 работки испытуемым соединением нически зараженных клеток Специфический вид вируса ВИЧ, ВИЧ-1, подвергали ряду различных Мечение нейтрофилов испытаний, в результате которых стало ясно, что За час до добавления нейтрофилов к эндотевирус является покоящимся или неэкспримируюлиальным клеткам нейтрофилы в концентрации 5 6 щимся провирусом в популяции хронически зарах 10 /мл подвергают мечению 5мкм кальцеина-АМ женных Т-лимфоцитов Однако, в рамках данных (поставляемого фирмой Молекулар Пробе, испытаний не излагаются подробности ядерных и Юджин, Орегон) в сбалансированном солевом рабиохимических механизмов, которые являются осстворе Хэнкса, содержащем 0,45% альбумина быновой латентного вирусного состояния О подробчьей сыворотки, при температуре 37°С в течение ной информации см статью Беднарика и др 30 минут Маточный кальцеин получают в концент"Mechanisms of HIV-1 Latency" в журнале Aids, № рации 5ммоль в безводном диметилсульфоксиде, 6, стр 3-16, 1992 г высушивают и хранят при -20°С После инкубации клетки два раза промывают холодным сбалансиВплоть до недавнего времени предполагарованным солевым раствором Хэнкса и ресуспенлось, что во время клинического бессимптомного дируют до конечной концентрации, равной 1 х периода ВИЧ является покоящимся или неэкспри10 клеток/мл в полной эндотелиальной базальнои мирующимся во всех популяциях хронически зарасреде женных клеток Вследствие наблюдений низких или отсуствующих степеней вирусемии и репликаДобавление нейтрофилов к эндотелиальным ции вируса в периферических гемоцитах предпоклеткам лагалось, что ВИЧ не является активным во время После четырехчасового стимулирования и неклинического бессимптомного периода Однако, посредственно до добавления нейтрофилов к мобыло найдено, что настоящего скрытого состояния нослою эндотелиальных клеток пластинки обрабаво время заражения вирусом ВИЧ не существует тывают 0,2мл теплой неполной эндотелиальной (см статью Фоки и др , "HIV Infection is Active and базальнои среды для удаления фактора а некроза Progressive in Lymphoid Tissue During the Clinically опухолей и испытуемого соединения К каждой обLatent Stage of disease", в журнале Nature, № 362, рабатываемой чашке медленно добавляют нейтстр 355-358, 1993 г) рофилы (1 х 105 клеток) и инкубируют при 37°С в течеие 30 минут Потом пластинки два раза проВо время клинического скрытого состояния намывают 0,2мл теплой неполной эндотелиальной блюдается дихотомия между степенями вирусного базальнои среды, после чего добавляют еще груза и репликации вируса в периферических ге0,1мл среды для сканирования пластинки моцитах по отношению к лимфатическим органам На основе данных наблюдений было установлено, Определение относительной флюоресценции что периферические гемоциты не точно отражают Относительную флюоресценцию определяют настоящую стадию заболевания вирусом ВИЧ, в с помощью системы Milhpore Cytofluor 300 (возбужчастности в начале клинического хода ВИЧ-инфекдение = 480, эмиссия = 530, чувствительность = ции На самом деле, заболевание вирусом ВИЧ 4) является активным и развивается, даже в таком Расчеты случае, если активность, измеряемая в перифериИспытание считается действительным, если ческих гемоцитах вирусными показателями, низстимулирование клеток фактором а некроза опукая и пациент находится в клиническом скрытом холей приводит к 300%-ному повышению адгезии состоянии нейтрофилов по сравнению с нестимулированными клетками Результаты приведены в процентах Неизбежно, стадия заболевания развивается торможения стимулированной фактором а некроза начиная с клинически латентного бессимптомного опухолей адгезии периода до экспрессионного и активного симгтгомного периода Согласно Бутера и др (см AIDS, № стимул и р о за иная чес™ мули ровенчая адгезия 6, стр 994, 1992 г), были разработаны различные клеточные модели, которые при обработки цитокинес гимуга ров з ь пая стимулированная адгезия нами могут экспримировать ВИЧ-1 Значит, что на стадии микробиологического скрытого состояния Некоторые соединения согласно изобретению ВИЧ-1 начинает репликацию только после получеподвергали испытанию в концентрациях 33,3 ния внеклеточного сигнала Этот сигнал может мкмоль, 10,0 мкмоль, З.Змкмоль и 1,0 мкмоль для быть вызван не только взаимодействием раствоопределения средних значений KTso, которые римого цитокина с рецегтгором, но и межрецепторопределялись с помощью линейно-регрессионноным взаимодействием, происходящим во время го анализа межклеточной коммуникации или воздействия на Результаты испытаний соединений согласно клетки ультрафиолетовым излучением или темпеизобретению приведены в таблице I ратурным шоком Кроме того, внеклеточный сигБыло найдено, что соединения согласно изобнал может быть вызван аутокринным или паракретению, в частности соединения формулы (III), ринным способом, так что активированная вирутормозят активацию вируса иммунодефицита чесом ВИЧ-1 клетка может продолжать экспримироловека (ВИЧ), являющегося латентным в зараженваться и одновременно активировать смежную ланых людях и животных, и, следовательно, являюттентную клетку ся пригодными для лечения СПИДа Попытки понять вирусные и клеточные основы Предполагается, что и дополнительные факклинического бессимптомного периода показываторы участвуют в активации вируса ВИЧ Было ют, что ВИЧ представляет собой покоящийся или установлено, что применение 12-0-тетрадеканоилнеэкспри-мирующийся провирус в популяции хрофорбол-13-ацетата приводит к снижению количес 13 45967 тва рецепторов CD4 и к вирусной экспрессии в зараженных вирусом ВИЧ клетках (см Хамамото и др в журнале Biochem Biophys Res Commun , № 164, стр 339 - 344, 1989 г) Интересно, что Хамамото исследовал также эффект высокоактивных ингибиторов протеинкиназы С, таких, как, например, стауроспорин, Н-7, UCN-01, на вызываемое 12-0-тетрадеканоилфорбо-13-ацетатом снижение количества рецепторов CD4 и повышение экспрессии ВИЧ Найдено, что стауроспорин представляет собой эффективный ингибитор как снижения количества рецептора CD4, так и экспрессии вируса ВИЧ Клеточные пути, передающие сигнал активации от плазматической мембраны к вирусу, что приводит к экспрессии ВИЧ-1, менее известны Недавно, на симпозиуме National Cooperative Discovery Grant (NCDDG)/AIDS, состоявшемся 3 7 ноября 1991 г, П Феорино, СТ Бутера, Т М Фолкс и РФ Шинаци сообщили о разработке надежной и простой системы определения соединений, способных предотвращать активацию латентного вируса ВИЧ Испытательная система включает клеточную линию ОМ-10 1, т е уникальный хронически зараженный промиелоциточный клон, который сохраняет уровень рецептора CD4 + до активации ВИЧ-1 фактором а некроза опухолей Экспрессия рецептора CD4 + на поверхности клеток, а также активность обратной транскриптазы используют для определения экспрессии вируса Альтернативно, для определения экспрессии вируса ВИЧ можно применять и активность протеазы Клетки ОМ-10 1 сохраняют уровень рецептора CD4 + до активации вируса и реагируют на индукцию фактора а некроза опухолей Поэтому эти культуры используют для удобного и быстрого исследования фармакологических свойств соединений в отношении их способности предотвращать снижение количества рецептора CD4 + на поверхности клеток и экспрессию вируса ВИЧ Исследовали ряд соединений, проявляющих антивирусную активность в отношении остро или хронически зараженных клеток, проверяя их способность тормозить экспрессию вируса ВИЧ в клетках ОМ-10 1 Кроме того, исследовали ряд соединений, которые взаимодействуют с биохимическими путями, которые могут отрицательно влиять на реактивацию Результаты исследования были показаны на плакате, представленном на симпозиуме NCDDG/AIDS, состоявшемся 3-7 ноября 1991 г в Сан Диего в шт Калифорния, США Из числа приблизительно 48 исследованных соединений низкодействующими ингибиторами активации ВИЧ-1 считают З'-фтор-З'-деокситимидин, интерферон Y и десферри-оксамин Охватываемое формулой (I) соединение, 2,3дигидро-9-метокси-[1]бензотиено[2,3-т]-1,4-тиазепин-5(4Н)-он, в концентрации 0,21 мкм проявляет 50%-ное торможение в клетках ОМ-10 1 (см таблицу 1) Предлагаемые" соединения проявляют активность и в обычных опытах in vivo, в которых измеряют способность веществ предотвращать втекание нейтрофилов, и соответственно их полезность для лечения воспалений В одном опыте крыс-самцов типа Вистар весом в 220 - 245г не кормят в 14 течение 1 6 - 1 8 часов Им внутривенно дают буфер (смесь этанола и солевого раствора в соотношении, равном 1 1) или предлагаемое соединение в буфере Крыс слабо анестезируют диэтиловым эфиром, им дают внутривенную инъекцию раствора 2,5мг альбумина бычьей сыворотки в солевом растворе Непосредственно после внутривенной инъекции делают маленький разрез между ребрами и с помощью подходящей иглы в плевральную полость инъецируют раствор 0,2мл выделенного из кроличего иммуноглобулина G антиальбумина бычьей сыворотки в фосфат-содержащем солевом растворе (концентрация 10мг/мл солевого раствора) Затем разрез закрывают зажимом из нержавеющей стали размером в Эмм Через 4 часа крыс умерщвляют с помощью двуокиси углерода и плевральную полость промывают 2мл 0,325%-ного раствора красного фенола в фосфатсо-держащем солевом растворе Выходящий из плевральной полости поток буфера подвергают анализу Лейкоциты (> 90% нейтрофилов) подсчитают счетчиком фирмы Каультер Объем выходящего потока буфера измеряют способом разведения с применением красителя (см статью Г В Картера и др в журнале "J Pharm Pharmacol", № 34, стр 66 - 67, 1982г) Животных, которым дали предлагаемое соединение, сравнивают с животными, которым дали только буфер При этом статистическую значимость активности испытуемых соединений определяют с помощью t-опыта по Стьюденту Результаты данного анализа, которому подвергают соединение примера 1, приведены в таблице 2 В другом опыте in vivo мышей-самок типа Balb/c помещают в клетках группами по семи Во время проведения опыта мыши имеют свободный доступ к пище и воде Им орально дают носитель (0,5%-ный раствор гидроксипропилметилцеллюлозы, содержащий 0,2% Твина 80) или предлагаемое соединение, растворенное или суспендированное в указанном носителе Через час после оральной подачи мышей анестезируют путем ингаляции диэтилового эфира и им внутрибрюшинно инъецируют 1,0мл 3%-ного тиогликоллата в солевом растворе Через 2 часа после инъекции тиогликоллата мышей умерщвляют с помощью двуокиси углерода и им инъецируют 6мл фосфатсодержащего солевого раствора, содержащего 10ед/мл гепарина натрия и 0,1% альбумина бычьей сыворотки Брюшинную полость массируют и разрезают и вытекающую жидкость собирают в центрифужных пробирках емкостью в 15мл От каждой мыши берут аликвотную пробу и с помощью счетчика фирмы Каультер (модель ZBi, поставляемая фирмой Каультер Инструменте, г Hialeah, шт Флорида, США) подсчитают общее количество клеток в каждой аликвотной пробе Берут другую аликвотную пробу с целью ее исследования под микроскопом с последующим окрашиванием модифицированным красителем фирмы Райт С помощью гематологического анализа определяют процентное количество нейтрофилов, вытекших в брюшинную полость В данном опыте соединение примера 1 проявляет следующее торможение втекания нейтрофи 15 45967 16 лов 26,1% при концентрации 10мг/кг, 31,9% при или карбоксила стандартными методами Общепконцентрации 30мкг/кг, и, соответственно, 34,3% ринятые химические группы, способные защищать при концентрации ЮОмкг/кг реакционноспособные группы, как гидроксил, амино и карбоксил, а также методы их введения в моПредлагаемые соединения могут получаться лекулу и последующего снятия описаны Грином и следующими способами Бутсом в источнике "Protective Groups in Organic Согласно первому способу в качестве исходSynthesis", из-во Джон Уайлей & Сане, Инк , Ньюных соединений применяют 3-ги-дрокси-, 3-тиол-, Йорк, 1991 г 3-аминобензо[Ь]тиофен-, бензофуран- или индол2-карбокси-лат 1 (схема 1) Сложные эфиры 3-гидТак, например, 3-амино-, 3-гидрокси- или 3-тирокси-бензо[Ь]тиофена-2 получают по способу, оиндол, бензотиофен или бен-зофуран (соединеописанному Коннором и др в журнале J Med ние 1 в схеме 1) можно подвергать взаимодейстChem , № 35, стр 958, 1992 г 3-тиобензо[Ь]тиовию с р-галогенэтиленамином, причем амино-групфен-2-карбоксилат получают взаимодействием па защищена пригодным остатком, таким, кактресоответствующего 3-хлор-производного (см Конт-бутоксикарбонил или бензилоксикарбонил При нор и др в журнале J Med Chem , № 35, стр 958, осуществлении реакции в вышеуказанных услови1992 г) с тиоацетамидом в присутствии основаях получают соединения 5 Снятием защитных ния, такого, как 1,8-диазабицикло[5 4 0]-ундек-7~ групп в соединении 5 общеизвестными способами, ен, в среде растворителя, такого, как N N'-диметитакими, как применение трифторуксусной кислоты лформамид или тетрагидрофуран 3-аминобенили водной кислоты в случае трет-бутоксикарбозо[Ь]тиофен-2-карбоксилат получают по общеизни-ла, или гидрогенолиз в случае бензилоксикарвестному методу, описанному Бекком в журнале J бонила, получают соединения 3, которые циклизуOrg Chem , № 37, стр 3224, 1972 г 3-гидроксиинют вышеуказанным способом Другим способом дол-2-карбоксилат получают известными способаполучения соединений 3 является взаимодейстми, описанными, например, Унангстом и др в журвие соединений 1 с этиленимином в среде спиртонале J Heterocychc Chem , № 24, стр 811, 1987г, и вого растворителя (см статью Нагараяна и др в Мойером и др в журнале J Org Chem, № 5 1 , стр журнале Indian J Chem , № 20В, стр 672, 1981 г) 5106, 1986 г З-тиоиндол-2-карбоксилат получают Вторым общим способом получения соединепо известным методам, описанным, например, ний 4 (см схему 2) является взаимодействие соотУнангстом и др в журнале J Heterocychc Chem , ветственных 3-галогенпроизводных 6 с этилендиа№ 24, стр 811, 1987 г, Аткинсоном и др в журнамином и окисью меди в среде растворителя, таколе Synthesis, стр 480, 1988 г, Нагараяном и др в го, как пиридин, в присутствии основания, такого, журнале Indian J Chem , № 20В, стр 672, 1981 г как карбонат калия, с получением соединений 3, З-аминоиндол-2-карбоксилат получают известныгде Y означает группу NH (см С М Хайермат и др ми способами, описан-ыми С В Симаковым и др в журнале Proc Nat Acad Sci , India, № 60, стр в Химико-Фармацевтическом Журнале, № 17, стр 367, 1990 г) Взаимодействием 3-галогенпроизво1183, 1983г дных с 2-аминоэтанолом в среде растворителя, такого, как диметилформамид, в присутствии осСхема 1 поясняет превращение соединений 1 нования, такого, как диазабициклоундекан, полудо предлагаемых соединений Сложные эфиры чают соединения 3, где Y означает серу Взаимоподвергают взаимодействию с производным замедействием 3-галогенпроизводных с нитроэтанощенного а-галогеном ацетонитрила, таким, как лом в среде растворителя, такого, как тетрагидробромацетонитрил, в присутствии основания, как фуран, в присутствии основания, такого, как треттрет -бутилата калия, в тетрагидрофуране, ацетобутилат калия или гидрид калия, получают соединитриле или диметил-сульфоксиде при температунения 7 Последующим восстановлением нитрорах 0 - 80°С Получают сложные эфиры 2 Нитрил группы до амина получают соединения 3, где Y восстанавливают до соответственного первичного кислород В некоторых случаях соединения 3 не амина и получаемый при этом промежуточный выделяют, а непосредственно превращают до сопродукт 3 циклизуют с получением лактама 4 единений 4 Предпочтительной реакцией является гидрирование сложных эфиров 2 на кобальтовом катализаВ третьем общем способе получения соединеторе типа Ренея в среде растворителя, такого, как ния 4 тоже используют 3-галоген-производные 6 тетрагидрофуран, в присутствии основания как (см схему 3), которые подвергают взаимодейсттриэтиламина, при повышенных температурах и вию с первичным амином, содержащим в р-полопод давлением В таких условиях сложные эфиры жении пригодную защищенную аминогруппу, гид2 превращаются непосредственно до лактама 4 В роксильную или тиол-группу Получают промежуслучае предварительного выделения промежуточточный продукт 7 Снятием защитной группы с поный продукт 3 циклизуют до лактама 4 в основных следующей циклизацией получают соединения 4 условиях, предпочтительно в присутствии метил8 аналогичном способе осуществляется взаимоата натрия в метаноле, или в кислотных условиях, действие 3-гидроксил-, 3-тиол-или 3-амино-произпредпочтительно в присутствии полифосфорной водного с амином, имеющим в р-положении пригокислоты, при повышенных температурах дную удаляемую группу Получаемые при этом промежуточные продукты 8 циклизуют с получениПри синтезе некоторых предлагаемых соедием соединения 4 нений необходимо или желательно переводить реакционноспособные группы, как гидроксил, амиСоединения 4, где X означает серу, a Y - кисно или карбоксил, в производные, защищающие лород или группу NR, могут быть превращены до их от нежелательных побочных реакций Защитсоответствующих сульфоксидов и/или сульфонов ные группы снимают с гидроксила, амино-группы 9 с помощью агента окисления, такого, как хлорна 17 45967 18 дбензойная кислота, или оксазиридина, причем лия в 60мл диметилсульфоксида обрабатывают степень окисления зависит от условий реакции порциями 5,6г (24ммоль) метил-З-гидрокси-5-ме(схема 4) Аналогичным окислением соединений 4, токси-1-метил-1Н-индол-2-карбоксилата (см где Y означает серу, получают либо сульфоксид, Унангст и др , J Heterocychc Chem , 24 811 (1987)) либо сульфон 10 Смесь перемешивают в течение 15 минут, после чего прикалывают 4,8мл (5,7г, 76ммоль) хлорацеУсловия реакций по схемам 1 - 4 широко изветонитрила Смесь нагревают при 80°С в течение стны или могут определяться простым образом 90 минут, охлаждают и подают в 800г льда и воды Нижеследующие примеры поясняют получеОсажденное твердое вещество фильтруют, проние соединений настоящего изобретения мывают 10%-ным раствором метанола в воде и Пример 1 перекристаллизуют из водного ацетонитрила с по2,3-дигидро-9-метокси[1]бензотиено[2,3-1]-1,4лучением 3,9г (60%) продукта Т п 136-137°С тиазепин-5(4Н)-он К 500мг (1,95ммоль) имеющего комнатную теБ мпературу раствора метил-3-хлор~5-метокси-бенСмесь 0,60г (2,2ммоль) метил-3-(цианометокзо[Ь]тиофен-2-карбоксилата, полученного в реси)-5-метокси-1-метил-1Н-индол-2-карбоксилата и зультате взаимодействия известного З-хлор-5-ме0,40мл (0,29г, 2,9ммоль) триэтиламина в 35мл теттокси-бензо[Ь]тиофен-2-карбонилхлорида с метарагидрофурана в автоклаве обрабатывают 0,40г нолом (см J Med Chem , 35 958 (1992)) в 20мл кобальта Ренея в качестве катализатора В автодиметилформами-да добавляют сначала 885мг клаве создают повышенное давление с примене(7,79ммоль) 2-аминоэтантиола в виде гидрохлоринием водорода (41,4829кг/см2) и нагревают при да, а потом 2,33мл (15,58ммоль) диазабициклоун80°С в течение 10 часов Реакционную смесь декана Реакционную смесь перемешивают при охлаждают, фильтруют и фильтрат упаривают комнатной температуре в течение 1,5 часов, после Масляный остаток растворяют в 50мл метанола, чего нагревают до 70°С Смесь разбавляют этилапосле чего к раствору добавляют 0,80г (15ммоль) цетатом и промывают водной соляной кислотой, метилата натрия Смесь нагревают с обратным водой и рассолом Органический слой сушат над холодильником в течение 3 часов, охлаждают и сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууупаривают Остаток распределяют между 75мл ме Сырой продукт перекристаллизуют из смеси этилацетата и 150мл рассола Водный слой экстгексана и этилацетата с получением 2,3-дигидрорагируют несколько раз свежим этилацетатом 9-метокси[1]бензотиено[2,3-1]-1,4-тиазепин-5(4Н)Объединенные органические слои промывают раона с выходом 74% Т п 209 - 209,5°С ссолом, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают Остаточный сырой продукт очищают Пример 2 путем флеш-хроматографии на силикагеле Элюа2,3-дигидро-[1]бензотиено[2,3-1]-1,4-оксазепинцию осуществляют 5%-ным раствором метанола в 5(4Н)-он дихлорметане с получением 0,18г (33%) продукта Смесь 405мг (1,64ммоль) сложного метиловоОбразец, перекристаллизованный из смеси этилаго эфира 3-(цианометокси)-бензо[Ь]тиофен-2-карцетата и гексана, имеет т п 184-186°С боновой кислоты (см J Hetero Chem, 12 1037 (1975)), 0,5мл триэтиламина и 0,50г кобальта РеПример 5 нея в 50мл тетрагидрофурана нагревают при 2,3-дигидро-1 Н-бензотиено-[3,2-е]-1,4-диазе100°С в атмосфере 84,372 кг/см2 водорода Реакпин-5-он ционную смесь сгущают в вакууме В результате Гидрохлорид сложного метилового эфира 3колоночной градиентной хроматографии с приме(2-аминоэтиламино)бензо[Ь]тио-фен-2-карбоновой нением в качестве элюента сначала смеси гексана кислоты и этилацетата в соотношении 1 1 и затем этилаРаствор 1,00г (5,62ммоль) 2-(4,5-дигидро-1Н~ цетата получают 2,3-дигидро-[1]бензотиено[2,3-1]имидазол-2-ил)бензолтиола (см Н Недеп, Н 1,4-оксазепин-5(4Н)-она с выходом 55% Т п 244Fleig, "Justus Liebigs Ann Chem " Ц 1994 (1975)) и 245°С 610мг (5,62ммоль) хлорметил ацетата в 15мл метанола нагревают с обратным холодильником в Пример 3 течение 90 минут Реакционную смесь охлаждают 2,3-дигидро-9-метокси-[1]бензотиено[2,3-1]до комнатной температуры и фильтруют Фильт1,4-тиазепин-5(4Н)-он-1 -оксид рат сгущают досуха и остаток растворяют в горяСмесь 200мг (0,75ммоль) 2,3-дигидро-9-метокчем хлороформе По истечении нескольких часов си-[1]бензотиено[2,3-1]-1,4-тиа-зепин-5(4Н)-она и полученный осадок собирают и сушат Маточный 116мг (0,75ммоль) NaBO3-4H20 в 18мл уксусной раствор позволяет получать второй выход крискислоты перемешивают при комнатной температуталлов в качестве гидрохлорида сложного метилре в течение ночи Реакционную смесь фильтруового эфира 3-(2-аминоэтиламино)бензо[Ь]тиоют, после чего к фильтрату добавляют 60мл воды фен-2-карбоновой кислоты Общий выход 6 1 % В результате фильтрации получают 2,3-дигидро-9Т п 219-220°С метокси-[1]бензотиено[2,3-1]-1,4-тиазепин-5(4Н)он-1-оксид с выходом 69% Т п 215 - 216°С 2,3-дигидро-1 Н-бензотиено-[3,2-е]-1,4-диазе(разл) пин-5-он Пример 4 Раствор 339мг (1,18ммоль) гидрохлорида сложного метилового эфира 3-(2-аминоэтилами3,4-дигидро-9-метокси-6-метил-2Н-1,4-оксазено)бензо[Ь]тиофен-2-карбоновой кислоты и свежепино[6,7-Ь]-индол-5(6Н)-он изготовленного метилата натрия (из 134мг А Метил-3-(цианометокси)-5-метокси-1-метил(2,48ммоль) натрия) в 5мл метанола нагревают с 1 Н-индол-2-карбоксилат обратным холодильником в течение 18 часов Суспензию 3,2г (29ммоль) трет бутилата ка 20 19 45967 Смесь охлаждают, нейтрализуют 25мл 1-н соля2,3-дигидро-9-метокси-6-оксид-1Н-бензотиеноной кислоты и охлаждают до 0°С в течение часа [: [2,3-f]-1,4-оксазепин-5-он Получаемый желтый кристаллический продукт фиК суспензии 1,00г (4,0ммоль) 2,3-дигидро-9~ льтруют и сушат в вакууме при 60°С в течение неметокси-1 Н-бензотиено-[2,3-1,4-оксазепин-5-она в скольких часов с получением 2,3-дигидро-1Н-бен100мл теплого метанола добавляют сначала зотиено-[3,2-е]-1,4-диазепин-5-она Выход 64% В 8,0мл (80ммоль) 30%-ной перекиси водорода, а результате колоночной градиентной хроматограпотом 445мг (4,01ммоль) двуокиси селена Реакфии с применением в качестве элюента сначала ционную смесь перемешивают при комнатной тем2%-ного раствора метанола в этилацетате и затем пературе в течение 3 часов, после чего нагревают 5%-ного раствора метанола в этилацетате получапри 30°С в течение 1,5 часов, а потом при 40°С в ют аналитически чистый 2,3-дигидро-1Н-бензотиетечение 2 часов Реакционную смесь охлаждают но-[3,2-е]-1,4-диазепин-5-он Т п 210-212°С до -40°С и полученный осадок собирают путем фильтрации Остаток подвергают колоночной граПример 6 диентной хроматографии с применением в качест2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-[3,2-т]ве элюента 5%-ного метанола в этилацетате при 1,4-оксазепин-5-он постепенном увеличении концентрации метанола Сложный метиловый эфир З-цианометокси-5-до получения его смеси с этилацетатом в соотнометокси-бензо[Ь]тиофен-2-карбоновой кислоты шении 1 1 Получают 338мг продукта АналитичесК имеющему комнатную температуру раствору кий образец 2,3-дигидро-9-метокси-6-оксид-1Н1,00г (4,2ммоль) м етил-З-о кс и-5-мето кс и бенбензотиено-[2,3-1]-1,4-оксазепин-5-она получают зо[Ь]тиофен-2-карбоксилата (см Коннор и др , J путем перекристаллизации из смеси метола и Med Chem 25 959 (1992)) в 20мл диметилсульфоэтил-ацетата Т п 273 - 274°С ксида добавляют 494мг (4,41ммоль) трет -бутилата калия, а потом 878 мкл (12,58ммоль) бромацеПример 8 тонитрила Смесь перемешивают при комнатной 2,3-дигидро-9-метокси-2-метил-1Нтемпературе в течение 1,5 часов, после чего ее бензотиено-[2,3-1]-1,4-оксазепин-5-он подают в этилацетат и 1-н соляную кислоту ОргаСложный метиловый эфир 3-(1-цианоэтокси)нический слой сначала промывают 1-н соляной 5-метокси-бензо[Ь]-тиофен-2-карбоновой кислоты кислотой, потом несколькими порциями рассола, К имеющему комнатную температуру раствору после чего сушат над сульфатом магния В ре1,00г (4,2ммоль) м етил-З-о кс и-5-мето кс и бензультате фильтрации, удаления растворителя в зо[Ь]тиофен-2-карбоксилата (см Коннор и др , J вакууме и перекристаллизации остатка из смеси Med Chem 25 958 (1992)) в 20мл диметилсульфоэтилацетата и гексана получают 413мг продукта ксида добавляют сначала 494мг (4,41ммоль) треДополнительный выход в количестве 112мг можно т -бутилэта натрия, а потом 1,1мл (12,6ммоль) 2получать из маточного раствора Т п 159,5 хлорпропионитрила Смесь перемешивают при ко160°С мнатной температуре в течение 1,5 часов, после чего нагревают до 82°С в течение 3 часов Реак2,3-дигидро-9-метокси-1Н-бензотиено-[2,3-1]ционную смесь подают в этилацетат и 1-н соля1,4-оксазепин-5нэн Раствор 2,5г (9,0ммоль) сложную кислоту Органический слой сначала промыного метилового эфира З-цианометокси-5-мет-оквают 1-н соляной кислотой, потом несколькими си-бензо[Ь]-тиофен-2-карбоновой кислоты в 50мл порциями рассола, после чего сушат над сульфатетрагидрофурана нагревают до интенсивного китом магния В результате фильтрации, удаления пения Быстро добавляют 9,0мл (90,2ммоль) борастворителя в вакууме и перекристаллизации осран-диметилсульфида, продолжают нагревание в татка из смеси этилацетата и гексана получают течение 25 минут и добавляют тетрагидрофуран в 853мг продукта Т п 127-129°С момент испарения Добавляют еще 4,0мл борандиметил-сульфида и нагревание продолжают в те2,3-дигидро-9-метокси-2-метил-1Нчение 10 минут Реакционную смесь охлаждают до бензотиено-[2,3-1]-1,4-оксазепин-5-он 0°С и осторожно добавляют 50мл 6-н соляной киРаствор 400мг (1,37ммоль) сложного метилслоты Водородный газ выделяется и температура ового эфира 3-(1-цианоэтокси)-5-метоксибензо[Ь]реакционной смеси повышается Полученный осатиофен-2-карбоновой кислоты в 10мл тетрагидродок собирают путем фильтрации, промывают вофурана нагревают до интенсивного кипения Придой и сушат в вакууме в течение ночи калывают 1,4мл (13,7ммоль) боранди-метилсульфида и нагревание продолжают в течение 20 ми2,3г (8,2ммоль) твердого вещества подают в нут с добавлением тетрагидрофурана в момент свежеизготовленный раствор метилата натрия (из испарения Реакционную смесь охлаждают до ко1,9г (82,0ммоль) натрия) в 40мл метанола Реакмнатной температуры и осторожно добавляют ционную смесь нагревают до 50°С в течение 2 ча7,5мл 6-н соляной кислоты Через 5 минут реаксов, после чего нагревают с обратным холодильционную смесь охлаждают до 0°С и добавляют ником в течение 2 часов После охлаждения до ко68,5мл 1-н гидроокиси натрия, а затем этилацемнатной температуры осадок собирают и промытат Слои разделяют и органическую фазу промывают сначала холодным метанолом, а потом холовают сначала смесью рассола и воды в соотношедным диэтиловым эфиром Твердое вещество сунии 1 1, потом дополнительным рассолом Оргашат в вакууме в течение ночи с выходом 1,18г ническую фазу сушат над сульфатом магния, фи(52%) продукта Аналитический образец 2,3-дигидльтруют и сгущают в вакууме Остаток подвергают ро-9-метокси-1 Н-бензотиено-[2,3-1]-1,4-оксазепинколоночной градиентной хроматографии с приме5-она получают в результате перекристаллизации нением в качестве элюента смеси метанола, гекиз смеси этилацетата и гексана Т п 264 - 265°С сана и хлороформа в соотношении 5 25 70, потом Пример 7 22 21 45967 смеси метанола и хлороформа в соотношении ванной воды и оксазепинон суспендируют К сме10 90, а затем смеси метанола и хлороформа в си добавляют сахарин, бензоат натрия и аромат и соотношении 30 70, в результате чего получают растворяют Объем доводят до 100мл добавлени135мг продукта Аналитический образец 2,3-дигидем дистиллированной воды Каждый миллилитр ро-9-метокси-2-метил-1 Н-бензотиено-[2,3-т]-1,4сиропа содержит 5мг оксазепинона Данная компооксазепин-5-она получают путем перекристаллизиция для оральной дачи идеально годится для зации из смеси этилацетата и гексана Т п 185 лечения воспаления в области педиатрии 186°С Пример 11 Соединения согласно изобретения легко поПолучение растворов для парентеральной даддаются переработке со стандартными разбавитечи лями и носителями для удобной оральной или паВ растворе 700мл пропиленгликоля и 200мл рентеральной дачи людям и животным для лечедистиллированной воды для инъекции растворяют ния болезней, таких, как, например, воспаление, в 20,Ог 2,3-дигидро-7-диметиламино-1 Н-бензотиеночастности артрит и тому подобному Нижеследую[3,2-е]-1,4-диазепин-5-она Значение рН раствора щие примеры поясняют получение типичных фархлористоводородной кислотой доводят до 5,5 и мацевтических композиций объем доводят до 1000мл добавлением дистиллированной воды Композицию стерилизуют, разлиПример 9 вают в ампулы емкостью 5,0мл, каждая из которых Получение капсулы емкостью 250 мг содержит 2,0мл композиции (что представляет со250мг 2,3-дигидро-9-изопропокси-7-хлор-1Нбой 40мг активного диазепинона) и герметизируют бензотиено[2,3-1]-1,4-оксазепина-5-она смешивают в атмосфере азота Композицию внутривенно дас 150мг лактозы и 150мг кукурузного крахмала до ют пациентам, страдающим от воспаления или получения гомогенной смеси Смесь подают в жеСПИДа латиновые капсулы, которые дают орально в количестве 1 - 3 в сутки для лечения артрита Пример 12 Пример 10 Получение крема для местного применения Композиция для оральной суспензии 500мг 2,3-дигидро-7-этокси-бензофурано-[2,31]-1,4-оксазепин-5-она смешивают с 15г цетилового спирта, 1г лаурилсульфата натрия, 40г жидкого Ингридиент Количество силикона марки D С 200 (торговый продукт фир2,3-дигидро-8-этил-10-трифтор500 мг мы Дау Корнинг Ко , Мидленд, Мичиган), 43г стеметил-б-оксид-1 -1 Н-бензотиено рильной воды, 0,25г метилпарабена и 0,15г пропи[2,3-1]-1,4-оксазепин лпарабена Смесь нагревают приблизительно до Раствор сорбита (70%) 40 мл 75°С при постоянном перемешивании, после чего Бензонат натрия 150 мг охлаждают до комнатной температуры, при котоСахарин 10 мг рой смесь затвердевает Препарат наносят на поВишневій аромат 50 мг верхность кожи пациента, страдающего от воспаДистилированная вода 100 мл ления Раствор сорбита подают в 40мл дистиллироТаблица 1 о Пример R2 1 2 3 5 6 7 8 Оме Н Оме Н Оме Оме Оме 2,3 дигидро-9-метокси-(1)бензотиено[2 3-1]-тиазелин-5(4Н)-он ЕСА" ICAM'VESEL" X Y (КТ50) (КТ50 ИЛИ % ИНГИб @ 30 МКМ) S S 5,2 3,1/1,3 S О 42%/40% NMe О 14,7/14,2 S NH 64%/47% S О 3,1/7,5 S-0 О 30%/30% S О(2-метил) 3,8/5,3 ОМ-10 (КТ50 мкм) 21 >30 1 Метод определения торможения адгезии неитрофилов человека к стимулированным фактором а некроза опухолей эндотелиальным клеткам пупочной вены человека 2| 31 / Испытание экспрессии молекулы-1 межклеточной адгезии и Е-селектина в эндотелиальных клетках пупочной вены человека Доза (мг/кг) 03 10 30 Процент торможения 40 28 28 Таблица 2 выходящего потока Процент торможения втекания неитрофилов 5 18,6 4 8,9 2 16,9 23 24 45967 Схема 1 *s. он ООМе восстановление R. 1 основание или кислота случае необходимости) Me = МИТил Схема 1 (продолжение) СЭОМа основание ! Ї, Зг, CI трет.-йутижкси карйоим^, бензилоксмкарбонил МаСМе/МеОК • или полифосфорная кислота 1 NaQMe/MsOH и поли фосфорная кислота 25 45967 Схема 2 K2NCH2CH2NH2 COOMe Z = Sr, с uG/основание Cl *) или полифосфорная кислота 26 27 28 45967 см. схему І удаляемая группа He = метил Схема 4 окисление ї = О, N H NH X окисление . *z 29 45967 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71 ЗО