Заміщені аміди бензойної кислоти та їх застосування для пригнічення ангіогенезу

1. Сполуки загальної формули І 2 (11) 1 82980 (54) ЗАМІЩЕНІ АМІДИ БЕНЗОЙНОЇ КИСЛОТИ ТА ЇХ З АСТОСУВАННЯ ДЛЯ ПРИГНІЧЕННЯ АНГІОГЕНЕЗУ (13) C2 ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД (19) ДЕРЖАВНИЙ Д ЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛ ЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ 3 82980 4 заміщеною галогеном С 1-С6алкільною або С 1X означає С2-С6алкіл, С2-С6алкеніл або С 2С6алкоксигрупою феніл, піридил, нафтил, хіноліл, С6алкініл, ізохіноліл, інданіл, R11 означає незаміщений або необов'язково одно2 11 R означає водень, ОН-групу або груп у XR , або багатозаміщений галогеном, С1R3 означає водень або групу XR11 , С6алкоксигрупою або гідроксигрупою феніл або X означає С2-С6алкіл, С2-С6алкеніл або С 2піридил, С6алкініл, R4, R5, R6 і R7 означають водень, R11 означає незаміщений або необов'язково одноR10 означає водень або С1-С6алкіл, або багатозаміщений галогеном, С1при цьому R2 і R3 одночасно не означають водень, С6алкоксигрупою або гідроксигрупою феніл або і якщо R2 являє собою ОН-групу, то R3 не означає піридил, водень, а якщо R3 являє собою ОН-групу, то R2 не 4 5 6 7 R , R , R і R означають водень, означає водень, R10 означає водень або С1-С6алкіл, а також їх ізомери і солі. при цьому R2 і R3 одночасно не означають водень, 4. Сполуки за п. 1 з речовинами та носіями для і якщо R2 являє собою ОН-групу, то R3 не означає приготування фармацевтичної композиції. водень, а якщо R3 являє собою ОН-групу, то R2 не 5. Застосування сполук загальної формули І за п. означає водень, 1 для одержання лікувального засобу, призначеа також їх ізомери і солі. ного для лікування пухлин, псоріазу, артриту, тако2. Сполуки загальної формули І за пунктом 1, у го як ревматоїдний артрит, гемангіоми, ангіофібякій роми, очних хвороб, таких як діабетична А означає груп у =NR7, ретинопатія, неоваскулярна глаукома, захворюW означає кисень, вань нирок, таких як гломерулонефрит, діабетична Z означає зв'язок, групу =NR10 або нерозгалуженефропатія, злоякісний нефросклероз, тромбомікний або розгалужений С 1-С12алкіл, роангіопатія, відторгнення трансплантата і гломеR1 означає необов'язково одно- або багатозамірулопатія, фіброзних захворювань, таких як цироз щений галогеном або С 1-С6алкілом розгалужений печінки, захворювань, пов'язаних із проліферацією або нерозгалужений С 1-С6алкіл або необов'язково мезангіальних клітин, артеріосклерозу і пошкоодно- або багатозаміщений галогеном або С 1джень нервової тканини. С6алкілом С 3-С10циклоалкіл, або незаміщений або 6. Лікувальний засіб, який містить у своєму складі необов'язково одно- або багатозаміщений галогепринаймні одну сполуку за п. 1. ном, С1-С6алкілом, С1-С6алкоксигрупою, одно- або 7. Лікувальний засіб за п. 6, призначений для лікубагатозаміщеною галогеном С 1-С6алкільною або вання пухлин, псоріазу, артриту, такого як ревмаС1-С6алкоксигрупою феніл, піридил, нафтил, хінотоїдний артрит, гемангіоми, ангіофіброми, очних ліл, ізохіноліл, інданіл, хвороб, таких як діабетична ретинопатія, неовасR2 означає водень, ОН-групу або груп у XR11, кулярна глаукома, захворювань нирок, таких як R3 означає водень або групу XR11 , гломерулонефрит, діабетична нефропатія, злоякіX означає С2-С6алкіл, С2-С6алкеніл або С 2сний нефросклероз, тромбомікроангіопатія, відтоС6алкініл, ргнення трансплантата і гломерулопатія, фіброзR11 означає незаміщений або необов'язково одноних захворювань, таких як цироз печінки, або багатозаміщений галогеном, С1захворювань, пов'язаних із проліферацією мезанС6алкоксигрупою або гідроксигрупою феніл або гіальних клітин, артеріосклерозу й пошкоджень піридил, нервової тканини. R4, R5, R6 і R7 означають водень, 8. Застосування сполук загальної формули І за п. R10 означає водень або С1-С6алкіл, 1 як інгібіторів тирозинкінази KDR I FLT. при цьому R2 і R3 одночасно не означають водень, 9. Застосування сполук загальної формули І за п. і якщо R2 являє собою ОН-групу, то R3 не означає 1 у ви гляді фармацевтичного препарату для ентеводень, а якщо R3 являє собою ОН-групу, то R2 не рального, парентерального і перорального ввеозначає водень, дення. а також їх ізомери і солі. 10. Застосування проміжних сполук загальної фо3. Сполуки загальної формули І за пунктом 1 або рмули II O 2, у якій А означає груп у =NR7, W означає кисень, OMe (ІІ) Z означає зв'язок, групу =NR10 або розгалужений або нерозгалужений С1-С12алкіл, R2 R1 означає розгалужений або нерозгалужений С 1R3 , С6алкіл або необов'язково одно- або багатозаміу якій щений галогеном або С1-С6алкілом С3R2 і R3 означають водень або групу XR11 , С10циклоалкіл, або незаміщений або необов'язкоX означає С2-С6алкіл, С2-С6алкеніл або С 2во одно- або багатозаміщений галогеном, С1С6алкініл, С6алкілом, С1-С6алкоксигрупою, одно- або багатоR11 означає необов'язково заміщений С 1заміщеною галогеном С 1-С6алкільною або С 1С6алкоксигрупою феніл або піридил, при цьому R2 С6алкоксигрупою феніл, піридил, нафтил, хінолін, і R3 не означають одночасно водень, ізохіноліл, інданіл, 2 11 а також їх ізомерів і солей для одержання сполук R означає водень, ОН-групу або груп у XR , загальної формули І за пунктом 1. R3 означає водень або групу XR11 , 5 82980 6 11. Спосіб одержання сполук загальної формули І стовують проміжні сполуки загальної формули II за за пунктом 1, який відрізняється тим, що викорипунктом 10. Даний винахід стосується заміщених амідів бензойної кислоти та їх застосування як лікувальних засобів для лікування захворювань, зумовлених персистувальним ангіогенезом, а також їх проміжних продуктів для одержання амідів бензойної кислоти. Персистувальний ангіогенез може бути причиною різноманітних захворювань, таких як псоріаз, артрит, такий як ревматоїдний артрит, гемангіома, ангіофіброма, очні хвороби, такі як діабетична ретинопатія, неоваскулярна глаукома, захворювання нирок, такі як гломерулонефрит, діабетична нефропатія, злоякісний нефросклероз, тромбомікроангіопатія, відторгнення трансплантата і гломерулопатія, фіброзні захворювання, такі як цироз печінки, захворювання, пов'язані з проліферацією мезангіальних клітин, і артеріосклероз, або може приводити до прогресування цих захворювань. Для лікування подібних захворювань, так само як і інших формах патологічного ангіогенезу, індукованого васкулярним ендотеліальним фактором росту (VEGF), і для усунення умов, що сприяють проникності судин, таких як васкуляризація пухлин, можна використовувати пряме або непряме інгібування VEGF-рецептора. Так, наприклад, відомо, що за допомогою розчинних рецепторів і антитіл до VEGF вдається пригнічувати ріст пухлин. Персистувальний ангіогенез індукується VEGF-фактором через його рецептор. Необхідною умовою для прояву VEGF-фактором такої його дії є його зв'язування з рецептором і ініціювання фосфорилювання тирозином. Дотепер відомі лише такі виділені похідні запропонованих у даній заявці сполук, які описані у відповідних публікаціях як інгібітори калпаїніну [WO 98/23581, WO 98/25883], інгібіторів фосфоліпази А2 [WO 97/00583], антагоністів простагландину D2 [WO 97/00853], антагоністів нейрокініну A [WO 95/16682], транквілізаторів [US 3892752] або анорексигеніків [FR 1600541]. Якої-небудь інформації про дію цих відомих сполук по відношенню до VEGF на сьогоднішній день не існує. При створенні винаходу було встановлено, що сполуки загальної формули І у якій А означає груп у =NR7, W означає кисень, сірку, два атоми водню або груп у =NR 8, Z означає зв'язок, групу =NR10, або =N-, розгалужений або нерозгалужений С 1-С12алкіл або групу m, n і о означають 0-3, Ra, Rb, Rc, Rd , Re , Rf означають незалежно один від одного водень, фтор, C1-С 4алкіл або групу =NR10 і/або Ra і/або Rb можуть утворювати з Rc і/або Rd або Rc з Re і/або Rf зв'язок або два замісники з числа Ra-Rf можуть утворювати місток до R1 або до R3, що містить до 3 С-атомів відповідно, R1 означає необов'язково одно- або багатозаміщений галогеном або C1-С6алкілом розгалужений або нерозгалужений C1-С6алкіл, C2-С12алкеніл або С3-С12алкініл або необов'язково одно- або багатозаміщений галогеном або C1-С6алкілом С3С10циклоалкіл або C3-С10циклоалкеніл або незаміщений або необов'язково одно- або багатозаміщений галогеном, С1-С6алкілом, C1С6алкоксигрупою, одно- або багатозаміщеною галогеном С1-С6алкільною або C1-С6алкоксигрупою арил або гетероарил, R2 і R3 означають водень, ОН-групу або групу 11 XR , X означає С2-С6алкіл, С2-С6алкеніл або С2С6алкініл, R11 означає незаміщений або необов'язково одно- або багатозаміщений галогеном, C1С6алкілом, C1-С6алкоксигрупою або гідроксигрупою моноциклічний арил, біциклічний арил або гетероарил, R4, R5 і R6 означають водень, галоген або незаміщений або необов'язково одно- або багатозаміщені галогеном C1-С6алкоксигрупу, C1-С6алкіл, C1-С6карбоксіалкіл, або R4 і R5 разом утворюють груп у R7 означає водень або C1-С6алкіл або разом з Ra-Rf утворює від Z або до R1 місток, що містить до 3 членів кільця, R8 і R10 означають водень або C1-С6алкіл, при цьому R2 і R3 одночасно не означають водень, і якщо R2 представляє собою ОН-групу, то R3 не означає водень, а якщо R3 представляє собою ОНгруп у, то R2 не означає водень і R1 не може представляти собою тіазол, а також їх ізомери і солі пригнічують фосфорилювання тирозином, відповідно персистуваль 7 82980 ний ангіогенез і перешкоджають тим самим росту і поширенню пухлин. Якщо R7 утворює місток до R1, то утворюються гетероцикли, з якими R1 сконденсований. Як приклади можна назвати наступні групи: Якщо Ra, Rb, Rc, Rd , Re, Rf незалежно один від одного представляють собою водень або C1С4алкіл, то Z утворює алкільний ланцюг. Якщо Ra і/або Rb утворюють з Rc і/або Rd або Rc і/або Rd з Re і/або Rf зв'язок, то Z означає алкенільний або алкінільний ланцюг. Якщо Ra-Rf утворюють місток між собою, то Z представляє собою циклоалкільну або циклоалкенільну гр упу. Якщо два замісники з числа Ra-Rf утворюють місток до R1, що містить до 3 С-атомів, то Z разом з R1 представляють собою сконденсований з бензольним або гетероарильним ядром (Ar) циклоалкіл. Як приклади можна назвати наступні групи: Якщо один із замісників Ra-Rf утворює місток до R7, то утворюється азотний гетероцикл, який може бути відділений від R1 відповідною групою. Як приклади можна назвати наступні групи: 8 Під алкілом мається на увазі відповідно прямоланцюговий або розгалужений алкільний радикал, такий, наприклад, як метил, етил, пропіл, ізопропіл, бутил, ізобутил, втор-бутип, пентил, ізопентил або гексил, переважними при цьому є С1-С4алкільні радикали. Під циклоалкілом мається на увазі відповідно циклопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил або циклогептил, циклооктил, циклононіл або циклодецил. Під циклоалкенілом мається на увазі відповідно циклобутеніл, циклопентеніл, циклогексеніл, циклогептеніл, циклооктеніл, циклононеніл або циклодеценіл, при цьому приєднання може здійснюватися як за подвійним зв'язком, так і за простим зв'язком. Під галогеном мається на увазі відповідно фтор, хлор, бром або йод. Алкенільні й алкінільні замісники є відповідно прямоланцюговими або розгалуженими і містять 26, переважно 2-4 С-атоми. Як приклади можна назвати наступні: вініл, пропен-1-іл, пропен-2-іл, бут-1-ен-1-іл, бут-1-ен-2-іл, бут-2-ен-2-іл, 2метилпроп-2-ен-1-іл, 2-метилпроп-1-ен-1-іл, бут-1ен-3-іл, етиніл, проп-1-ін-1-іл, бут-1-ин-1-іл, бут-2ин-1-іл, бут-3-ен-1-іл, аліл. Арильний радикал містить 6-12 атомів вуглецю, як приклади можна назвати нафтил, біфеніл і насамперед феніл. Гетероарильний радикал може бути відповідно сконденсований з бензольним ядром. Як приклади можна назвати такі 5-членні гетероароматичні сполуки, як тіофен, фуран, оксазол, тіазол, імідазол і їх бензопохідні, і такі 6-членні гетероароматичні сполуки, як піридин, піримідин, тіазин, хінолін, ізохінолін і бензопохідні. Арильний і гетероарильний радикали можуть бути ідентично або по-різному одно-, дво- або трикратно заміщені галогеном, C1-С4алкоксигрупою, нітрогрупою, трифторметилом, трифторметоксигрупою, ціаногрупою SOq R5 або C1-С4алкілом, при цьому q означає 0-2. При наявності кислотної функціональної групи як солі можуть використовуватися фізіологічно прийнятні солі органічних і неорганічних основ, такі, наприклад, як добре розчинні солі лужних і лужноземельних металів, а також Nметилглюкамін, диметилглюкамін, етилглюкамін, лізин, 1,6-гексадіамін, етаноламін, глюкозамін, сакрозин, серинол, трисгідроксиметиламінометан, амінопропандіол, основа Совака і 1-аміно-2,3,4бутантриол. 9 82980 10 При наявності ж лужної функціональної групи якщо R2 представляє собою ОН-групу, то R3 не придатні для використання фізіологічно прийнятні означає водень, а якщо R3 представляє собою ОНсолі таких органічних і неорганічних кислот, як согруп у, то R2 не означає водень, а також їх ізомери і ляна кислота, сірчана кислота, фосфорна кислота, солі. лимонна кислота, винна кислота, фумарова кислоЗапропоновані у винаході сполуки запобігають та й ін. фосфорилюванню, іншими словами, вони можуть Як особливо ефективні зарекомендували себе селективно інгібувати певні тирозинкінази, пригнітакі сполуки загальної формули І, у якій чуючи при цьому персистувальний ангіогенез. Тим А означає груп у =NR7, самим створюється можливість, наприклад, переW означає кисень, сірку або два атоми водню, шкоджати росту і поширенню пухлин. Z означає зв'язок, групу =NR10 або нерозгалуСполуки за винаходом загальної формули І міжений або розгалужений С1-С12алкіл, стять також можливі таутомерні форми і включаR1 означає необов'язково одно- або багатозають E- і або Z-ізомери, при наявності хірального міщений галогеном або C1-С6алкілом розгалужецентра, також рацемати і енантіомери. ний або нерозгалужений C1-С6алкіл або необов'язСполуки формули І, так само як і їх фізіологічні ково одно- або багатозаміщений галогеном або прийнятні солі завдяки їх інігібувальній активності C1-С6алкілом С3-С10циклоалкіл або незаміщений по відношенню до фосфорилювання VEGFабо необов'язково одно- або багатозаміщений рецептора можуть застосовуватися як лікувальні галогеном, C1-С6алкілом, C1-С6алкоксигрупою, засоби. Механізм їх дії дозволяє застосовувати одно-або багатозаміщеною галогеном C1запропоновані сполуки для лікування захворюС6алкільною або C1-С6алкоксигрупою феніл, піривань, зумовлених персистувальним ангіогенезом. дил, нафтил, хіноліл, ізохіноліл, інденіл, тетраліОскільки сполуки формули І є, як було встаноніл, індоліл, тієніл, індазоліл або бензотіазоліл, влено, інгібіторами тирозинкінази KDR і FLT, вони R2 і R3 означають водень, ОН-групу або групу придатні насамперед для лікування таких захвоXR11, рювань, які зумовлені ініційованим VEGFX означає С2-С6алкіл, С2-С6алкеніл або С 2рецептором персистувальним ангіогенезом або С6алкініл, підвищенням проникності судин. R11 означає незаміщений або необов'язково Об'єктом даного винаходу відповідно до цього одно- або багатозаміщений галогеном, C1є також застосування запропонованих сполук як С6алкоксигрупою або гідроксигрупою феніл, піриінгібіторів тирозинкінази KDR і FLT. мідиніл або піридил, Ще одним об'єктом даного винаходу є також R4, R5, R6 і R7 означають водень, лікувальні засоби, призначені для лікування пухR8 і R10 означають водень або С 1-С6алкіл, при лин, відповідно їх застосування. цьому R2 і R3 одночасно не означають водень, і Сполуки за винаходом можуть застосовуватиякщо R2 представляє собою ОН-групу, то R3 не ся індивідуально або в складі відповідної композиозначає водень, а якщо R3 представляє собою ОНції як лікувальні засоби для лікування псоріазу, груп у, то R2 не означає водень, артриту, такого як ревматоїдний артрит, гемангіоа також їх ізомери і солі. ми, ангіофіброми, очних хвороб, таких як діабетиЯк найбільш ефективні зарекомендували себе чна ретинопатія, неоваскулярна глаукома, захвотакі сполуки загальної формули І, у якій рювань нирок, таких як гломерулонефрит, А означає груп у =NR7, діабетична нефропатія, злоякісний нефросклероз, W означає кисень або один або два атоми вотромбомікроангіопатія, відторгнення трансплантадню, та і гломерулопатія, фіброзних захворювань, таких Z означає зв'язок, групу =NR10 або розгалужеяк цироз печінки, захворювань, зв'язаних із проліний або нерозгалужений С1-С12алкіл, ферацією мезангіальних клітин, артеріосклерозу й R1 означає розгалужений або нерозгалужений пошкоджень нервової тканини. C1-С6алкіл або необов'язково одно- або багатозаПри лікуванні пошкоджень нервової тканини за міщений галогеном або C1-С6алкілом С 3допомогою сполук за винаходом можна запобігти С10циклоалкіл або незаміщений або необов'язково швидкому утворенню рубців в пошкоджених місодно- або багатозаміщений галогеном, C1цях, тобто вдається запобігти рубцюванню до того С6алкілом, C1-С6алкоксигрупою, одно- або багатомоменту, коли аксони знову відновлять зв'язок між заміщеною галогеном C1-С6алкільною або C1собою. Тим самим вдалося б полегшити відновС6алкоксигрупою феніл, піридил, нафтил, хіноліл, лення зв'язків між нервовими клітинами. ізохіноліл, інденіл, тетралініл, індоліл, індазоліл, Крім того, за допомогою запропонованих у вибензотіазоліл або тієніл, наході сполук можна пригнічувати утворення в R2 і R3 означають водень, ОН-групу або групу пацієнтів асциту. В однаковій мірі можливо також 11 XR , пригнічення набряків, зумовлених VEGFX означає С2-С6алкіл, С2-С6алкеніл або С 2фактором. С6алкініл, Лікувальні засоби вищезгаданого типу, їх комR11 означає незаміщений або необов'язково позиції і їх застосування також є об'єктом даного одно- або багато заміщений галогеном, C1винаходу. С6алкоксигрупою або гідроксигрупою феніл, піриВинахід стосується також застосування сполук мідиніл або піридил, загальної формули І для одержання відповідного R4, R5, R6 і R7 означають водень, лікувального засобу, призначеного для лікування R8 і R10 означають водень або C1-С6алкіл, при пухлин, псоріазу, артриту, такого як ревматоїдний цьому R2 і R3 одночасно не означають водень, і артрит, гемангіоми, ангіофіброми, очних хвороб, 11 82980 12 таких як діабетична ретинопатія, неоваскулярна у якій R4-R6 мають вказані вище значення й А глаукома, захворювань нирок, таких як гломерулоозначає галоген або OR11, при цьому R11 означає нефрит, діабетична нефропатія, злоякісний нефводень, C1-С4алкіл або C1-С4ацил, a R2' або R3' росклероз, тромбомікроангіопатичні синдроми, означає водень, альдегід, галоген або OH, Овідторгнення трансплантата і гломерулопатія, фітрифлат, О-тозилат або O-мезилат, спочатку R2] брозних захворювань, таких як цироз печінки, заабо R3' переводять в алкеніл або алкініл, необов'яхворювань, пов'язаних із проліферацією мезангіазково насичують до утворення відповідного алкану льних клітин, артеріосклерозу й пошкоджень і потім COA переводять в амін, або нервової тканини. б) сполуку формули III Для застосування сполук формули І як лікувальних засобів з нихвиготовляють відповідний фармацевтичний препарат, який містить у своєму складі поряд з активною речовиною для ентерального або парентерального введення придатні для цих цілей фармацевтичні, органічні або неорганічні інертні носії, такі, наприклад, як вода, желатин, гуміарабік, лактоза, крохмаль, стеарат магнію, тальк, олії рослинного походження, поліалкіленгліу якій R4-R6 мають вказані вище значення, a T колі і т.п. Фармацевтичні препарати можуть вигоозначає захисну гр упу, ацилюють і потім при необтовлятися у твердій формі, наприклад у вигляді хідності кетогрупу відновлюють до спирту або алтаблеток, драже, супозиторіїв, капсул, або в рідкій кану, захисну групу відщеплюють, амін переводять формі, наприклад у вигляді розчинів, суспензій або у нітрил, нітрил омилюють і переводять у відповідемульсій. При необхідності вони містять, крім того, ний амід. допоміжні речовини, такі як консерванти, стабіліОписані операції у всі х випадках можна прозатори, змочувачі або емульгатори, солі для регуводити в зворотній послідовності. ляції осмотичного тиску або буфери. Процес утворення амідів здійснюють за метоДля парентерального застосування придатні дами, відомими з літератури. Так, зокрема, для насамперед розчини для ін'єкцій або суспензії, у утворення амідів можна виходити з відповідного першу чергу водні розчини активних сполук у поліскладного ефіру. Цей ефір піддають згідно із гідроксіетоксилованій рициновій олії. [Joum. Org. Chem. стор.8414 (1995)], взаємодії з Як системи-носії можна використовува ти татриметилалюмінієм і відповідним аміном у розчинкож поверхнево-активні допоміжні речовини, такі никах, таких як толуол, при температурах в інтеряк солі жовчних кислот або фосфоліпіди тваринновалі від 0°C до температури кипіння використовуго або рослинного походження, так само як і їх ваного розчинника. Якщо молекула містить дві суміші, а також ліпосоми або їх компоненти. складноефірні групи, то їх обидві переводять у той Для перорального застосування придатні насамий амід. самперед таблетки, драже або капсули з тальком При використанні замість складного ефіру ніті/або вуглеводневим носієм або зв'язуючим, як рилів одержують в аналогічних умовах амідини. наприклад лактоза, кукурудзяний або картопляний Для одержання амідів можуть використовувакрохмаль. Можливо також застосування рідких тися також усі методи, відомі з хімії пептидів. Так, форм, таких, наприклад, як настойка, необов'язконаприклад, відповідну кислоту можна піддавати в во з додаванням підсолоджувальної речовини. апротонних полярних розчинниках, таких, зокрема, Дозування активних речовин можна змінювати як диметилформамід, з використанням відповіднозалежно від методики введення, віку та ваги паціго активованого похідного кислоти, що одержуєтьєнта, типу і ступеня тяжкості відповідного захвося, наприклад, за допомогою гідроксибензотриарювання і тому подібних факторів. Добова доза золу і карбодііміду, такого як становить від 0,5 до 1000мг, переважно від 50 до діізопропілкарбодіімід, або ж за допомогою попе200мг, причому цю дозу можна призначати як раредньо утворених реагентів, таких, наприклад, як зову дозу або з розрахунку на два або декілька ГАТУ [Chem. Comm. стор.201 (1994)] або БТУ, при прийомів. температурах в інтервалі від 0°C до температури Вищеописані композиції і препаративні форми кипіння розчинника, переважно при 80°C, взаємотакож є об'єктом даного винаходу. дії з аміном. Для утворення амідів можна застосоСполуки за винаходом можна одержувати за вувати також метод, де використовують змішаний відомими методами. Так, наприклад, сполуки фоангідрид кислоти, імідазолід або азид. рмули І можна одержувати завдяки тому, що Саліциламіди можна одержувати взаємодією а) у сполуці формули II відповідного фенолу в присутності каталізатора Фріделя-Крафтса, такого як трихлорид бору, з ізоціанатами або ізотіоціанатами в розчинниках, таких, наприклад, як толуол, при температурах в інтервалі від 0°C до температури кипіння використовуваного розчинника. Якщо передбачається введення в молекулу різних амідних груп, то необхідно, наприклад, другу складноефірну групу вводити в молекулу після утворення першої амідної групи і потім амідувати 13 82980 14 або у випадку молекули, у якій одна група преднаприклад, трифенілфосфіну й ефіру азодікарбоставлена у ви гляді складного ефіру, а інша у винової кислоти. Можливий і інший підхід, а саме: гляді кислоти, обидві групи амідують послідовно за піддавати амін відновному алкілуванню альдегідопомогою різних методів. дами або кетонами, здійснюючицю реакцію в приТіоаміди можна одержувати з антраніламідів сутності відновника, такого, наприклад, як ціановзаємодією з дифосфадитіанами згідно із [Bull. борогідрид натрію, у відповідному інертному Soc. Chim. BeIg. 87, стор.229 (1978)] або взаємодірозчиннику, наприклад етанолі, при температурах єю з пентасульфідом фосфору в розчинниках, в інтервалі від 0°C до температури кипіння розтаких як піридин, або взагалі без використання чинника. Якщо виходити з первинної аміногрупи, розчинників при температурах в інтервалі від 0 до то реакцію можна проводити при необхідності з 200°C. послідовним використанням двох різних карбоніПродукти можуть піддаватися також електрольних сполук, одержуючи при цьому змішані похіфільному ароматичному заміщенню. Заміщення в дні [див., наприклад, Verardo і ін., Synthesis, цих випадках проводять у сполуках формули III в стор.121 (1993); Synthesis, стор.447 (1991); орто- або пара-положенні відносно аміногрупи або Kawaguchi, Synthesis, стор.701 (1985); Micovic і ін., однієї з аміногруп (у сполуках формули II - у метаSynthesis, стор.1043 (1991)]. Доцільним може виположенні відносно карбонільної групи). Так, зокявитися і варіант, у якому спочатку взаємодією рема, можна здійснювати ацилювання за Фрідеальдегіду з аміном у розчинниках, таких як етанол лем-Крафтсом за допомогою хлорангідридів кисабо метанол, необов'язково з додаванням допомілот у присутності каталізаторів Фріделя-Крафтса, жних речовин, таких як льодяна оцтова кислота, таких, наприклад, як трихлорид алюмінію, у розутворюють шифову основу і лише після цього дочинниках, таких як нітрометан, сірковуглець, метидають відновник, такий, наприклад, як ціанобороленхлорид або нітробензол, при температурах в гідрид натрію. інтервалі від 0°C до температури кипіння викорисГідрування алкенових або алкінових груп у товуваного розчинника, переважно при кімнатній молекулі здійснюють звичайним способом, напритемпературі. За відомими з літератури методами, клад за допомогою каталітично активованого воднаприклад за допомогою нітрувальної кислоти, ню. Як каталізатори можуть застосовуватися важкі азотної кислоти в різній концентрації без викорисметали, такі як паладій або платина, необов'язкотання розчинників або за допомогою нітратів мево нанесені на відповідний носій, або нікель Реталів, таких, наприклад, як нітрат міді(ІІ) або нітрат нея. Як розчинники придатні спирти, такі, напризаліза(lll), у полярних розчинниках, таких як етанол клад, як етанол. При цьому працюють при або льодяна оцтова кислота, або в ацетангідриді температурах в інтервалі від 0°C до температури можна вводити одну або декілька нітрогруп. кипіння використовуваного розчинника і при тиску Галогени вводять за відомими з літератури аж до 20бар, переважно, однак, працювати при методами, наприклад обмінною реакцією з брокімнатній температурі і нормальному тиску. Завдямом, N-бром- або N-йодсукцинімідом або гідроки застосуванню каталізаторів, таких, наприклад, трибромідом уротропіну в полярних розчинниках, як каталізатор Ліндлара, потрійні зв'язки вдається таких як тетрагідрофуран, ацетонітрил, метиленчастково гідрувати до подвійних зв'язків із перевахлорид, льодяна оцтова кислота або диметилфожним утворенням при цьому Z-форми. Переважно рмамід. проводити це гідрування в піридині як розчиннику Відновлення нітрогрупи проводять у полярних у присутності паладію на карбонаті кальцію як карозчинниках при кімнатній температурі або при талізатор. Аналогічним шляхом Z-подвійний зв'япідвищеній температурі. Як каталізатори відновзок можна утворити з потрійного зв'язку відновлення придатні метали, такі як нікель Ренея, або ленням за допомогою дііміну, наприклад, згідно із каталізатори на основі благородних металів, таких [R. M. Moriatry і ін., Synth. Comm. 17, с.703 (1987)]. як паладій або платина, а також гідроксид палаАцилювання аміногрупи здійснюють звичайдію, необов'язково нанесені на носії. Замість водним способом, наприклад відповідним галогенідом ню відомим способом можуть використовуватися кислоти або ангідридом кислоти, необов'язково в також, наприклад, форміат амонію, циклогексен присутності основи, такої як диметиламінопіридин, або гідразин. В однаковій мірі можливо викорису розчинниках, таких як метиленхлорид, тетрагідтання і таких відновників, як хлорид олова(ll) або рофуран або піридин, відповідно до варіанту Шотхлорид титан у(lll), а також таких як комплексні гідтена-Баумана у водному розчині при слабко лужриди металів, необов'язково в присутності солей ному значенні рН або взаємодією з відповідним важких металів. Як відновники прийнятно також ангідридом у льодяній оцтовій кислоті. залізо. У цих випадках реакцію проводять у присуВідновлення кетогрупи здійснюють за відомитності відповідної кислоти, такої, наприклад, як ми методами. Так, зокрема, за допомогою комплеоцтова кислота, або хлориду амонію, необов'язкоксних гідридів металів, таких, наприклад, як борово з додаванням розчинника, такого, наприклад, як гідрид натрію, у розчинниках, таких як метанол або вода, метанол, залізо/аміак і т.п. При більшій триізопропанол, кетогрупу поряд з амідною групою валості реакції в цьому варіанті може початися або складноефірною групою можна вибірково відацилювання аміногрупи. новлювати до спирту. В іншому варіанті відновлюЯкщо передбачається алкілування аміногрупи, вати кетогрупу до метиленової групи можна за то цю груп у можна алкілувати за звичайними мереакцією Клемменсена під дією цинку в соляній тодами, наприклад алкілгалогенідами, або відпокислоті або ж, наприклад, під дією силанів у тривідно до варіанта Міцонубо (Mitsonubo) взаємодіфтороцтовій кислоті. єю з відповідним спиртом у присутності, 15 82980 16 Введення галогенів - хлору, брому, йоду - або простих ефірах, таких як тетрагідрофуран, димеазидної групи за допомогою аміногрупи можна токсіетан або діетиловий ефір. Як основи придатні також проводити, наприклад, за реакцією Занднеорганічні основи, такі як гідроксиди або гідрокамейєра взаємодією солей діазонію, утворених за рбонати, карбонати і фосфати лужних або лужнодопомогою нітритів як проміжних продуктів, із хлоземельних металів, або органічні основи, такі як ридом міді(І) або бромідом міді(І) у присутності циклічні, аліциклічні й ароматичні аміни, такі як відповідної кислоти, такої як соляна кислота або піридин, триетиламін, ДБУ і основа Хюніга, причобромистоводнева кислота, або ж взаємодією з му в деяких випадках такі основи, як діетиламін йодидом калію. або піперидин, одночасно можуть служити розчинУ випадку використання ефіру органічної азониками. У деяких випадках реакцію доцільно протистої кислоти галогени можна вводити, наприводити під тиском. клад, додаванням метиленйодиду або тетрабромПри введенні триметилсилілетинільної групи метану в розчиннику, такому, наприклад, як цю триметилсилільну груп у можна вводити взаєдиметилформамід. Для видалення аміногрупи є модією з фторидами, такими, наприклад, як фтодві можливості: або взаємодія з ефіром органічної рид калію або фторид тетрабутиламонію, у розазотистої кислоти в тетрагідрофурані, або діазотучинниках, таких як тетрагідрофуран, вання і відновне варіння солі діазонію, наприклад, метиленхлорид або ацетонітрил, при температуз використанням фосфористої кислоти, при необрах в інтервалі від 0°C до температури кипіння хідності з додаванням оксиду міді(І). використовуваного розчинника. Фтор можна вводити, наприклад, за реакцією Алкенільну гр упу можна вводити за допомогою Бальца-Шимана з використанням тетрафторборареакцій олефінування, таких, наприклад, як олефіту діазонію або згідно із [Journ. Fluor. Chem. 76 нування за Петерсоном, реакція Віттіга або реак(1996), стор.59-62], шляхом діазотування в присуція Віттіга-Хорнера. З цією метою альдегід піддатності НF·піридину і наступного варіння, необов'язють взаємодії з попередньо утвореним аніоном, ково в присутності джерела іонів фториду, такого, наприклад відповідно заміщеної солі фосфонію наприклад, як фторидтетрабутиламонію. або ефіру фосфонової кислоти, у розчинниках, Введення азидогрупи можна здійснювати після таких як толуол, тетрагідрофуран, діетиловий ефір діазотування взаємодією з азидом натрію при кімабо диметоксіетан. Як основи можуть використонатній температурі. вуватися, наприклад, гідриди лужних металів, аміВідщеплення простого ефіру здійснюють за віди лужних металів, алкоголяти лужних металів, домими з літератури методами. При цьому й у такі, наприклад, як трет-бутилат калію, карбонати випадку наявності в молекулі декількох груп може або гідроксиди лужних або лужноземельних метабути досягнуте селективне відщеплення. З цією лів, необов'язково в присутності каталізаторів фаметою ефір обробляють, наприклад, трибромідом зового переходу, таких як краун-ефіри, придатні бору в розчинниках, таких як дихлорметан, при для використання також органічні основи, такі як температурах в інтервалі від -100°C до температриетиламін, діізопропілетиламін або діазабіциктури кипіння використовуваного розчинника, перелоундекан, необов'язково в присутності солей, важно при -78°С. Разом з тим можливий і інший таких як бромід літію. підхід, а саме: відщеплювати ефір під дією тіомеСуміші ізомерів за допомогою звичайних метилату натрію в розчинниках, таких як диметилфотодів, наприклад шляхом кристалізації, хроматогрмамід. Температура при цьому може знаходитися рафії або солеутворення, можна розділяти на енав інтервалі від кімнатної до температури кипіння нтіомери, відповідно на E/Z-ізомери. розчинника, переважно працювати при 150°C. Процес одержання солей здійснюють звичайАлкенільну груп у вводять за допомогою відпоним способом, а саме: розчин сполуки формули І відних вінільних сполук в умовах реакції Хекка змішують з еквівалентною кількістю або з надлиш(Heck). Для введення етинільних гр уп служить реком відповідної основи або кислоти, необов'язково акція Сонгашири (Songashira). представлених у розчиненому вигляді, і утворений Як групу R2 , що вилучається, прийнятні галоосад відділяють або розчин піддають звичайній гени, такі як фтор, хлор, бром і йод або О-мезилат, переробці. О-тозилат, О-трифла т або О-нонафлат. НуклеофіЯкщо одержання проміжних сполук у заявці не льне заміщення з метою введення етинільних, описується, то це означає, що такі сполуки відомі відповідно етенільних груп здійснюють при каталізі або їх можна одержувати аналогічно до відомих з використанням з цією метою комплексів перехідсполук або за описаними нижче способами. них металів, таких як Pd(0), наприклад паладійОписані проміжні сполуки особливо придатні тетракістрифенілфосфін, або Pd(2+), такого як для одержання амідів бензойної кислоти за винапаладій-бістри-о-толіфосфіндихлорид, нікель(ІІ) ходом. або нікель(0), за відомими з літератури методами, Найбільш придатні для вказаних цілей такі необов'язково в присутності основи і необов'язкопроміжні сполуки загальної формули II во при співкаталізі з використанням солі, такої, наприклад, як йодид міді(І) або хлорид літію. Як нуклеофіли придатні серед інших вінільні або етинільні сполуки, оловоорганічні сполуки або цинкорганічні сполуки. Реакцію можна проводити в полярних розчинниках, таких як диметилформамід, диметилацетамід, N-метилпіролідон або ацетонітрил, у вуглеводнях, таких як толуол, або в 17 82980 у якій R2 і R3 означають водень або групу XR11 , X означає C1-С6алкіл, С2-С6алкеніл або С 2С6алкініл, R11 означає необов'язково заміщений C1С6алкоксигрупою феніл або піридил, при цьому R2 і R3 не означають одночасно водень, а також їх ізомери і солі. Вказані проміжні сполуки також є об'єктом даного винаходу. Ці проміжні продукти частково самі є активними і можуть завдяки їх активності також застосовуватися для одержання відповідного лікувального засобу, призначеного для лікування пухлин, псоріазу, артриту, такого як ревматоїдний артрит, гемангіоми, ангіофіброми, очних хвороб, таких як діабетична ретинопатія, неоваскулярна глаукома, захворювань нирок, таких як гломерулонефрит, діабетична нефропатія, і злоякісний нефросклероз, тромбомікроангіопатія, відторгнення трансплантата і гломерулопатія, фіброзних захворювань, таких як цироз печінки, захворювань, пов'язаних з проліферацією мезангіальних клітин, артеріосклерозу й пошкоджень нервової тканини. 18 Нижче одержання запропонованих сполук більш докладно пояснюється на прикладах, які не обмежують обсяг винаходу. Приклад 1.0 Одержання аміду (N-4-хлорфеніл)-2-(4піридилетил)бензойної кислоти До 105мг метилового ефіру 2-(4піридилетил)бензойної кислоти і домішують у 7,5мг толуолу 56мг 4-хлораніліну, о холоджують до 4°С і в атмосфері аргону, крім доступу вологи, змішують з 0,22мл триметилалюмінію (2-молярний розчин у гексані). Потім суміш протягом 2год нагрівають до температури ванни 120°C. Після охолодження домішують 30мл розведеного розчину бікарбонату натрію і двічі екстрагують оцтовим ефіром порціями по 25мл. Органічну фазу промивають водою, сушать, фільтрують і концентрують. Залишок хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту суміші етиловий ефір оцтової кислоти/циклогексан у співвідношенні 1:1. У результаті одержують 133мг (89% від теорії) аміду (N-4-хлорфеніл)-2-(4-піридилетил)бензойної кислоти у вигляді масла. Аналогічно до прикладу 1.0 одержують наступні сполуки: 19 82980 20 21 82980 22 23 82980 24 25 82980 26 Приклад 2.0 Одержання Е-N-4-хлорфеніл-3-(2піридилетеніл)бензаміду До 179мг аміду N-4-хлорфеніл-3-(2піридилетиніл)бензойної кислоти домішують у 7мл піридину 20мг паладію на карбонаті кальцію (5%ного) і протягом 1,5год при нормальному тиску водню гідрують при кімнатній температурі. Після відділення вакуум-фільтрацією через кізельгур від каталізатора фільтрат концентрують. Залишок хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту суміші етиловий ефір оцтової кислоти/гексан у співвідношенні 1:1. У результаті одержують 123мг (68% від теорії) (Z)-N-4-хлорфеніл-3(2-піридилетеніл)бензаміду у ви гляді масла. Аналогічно до прикладу 2.0 одержують також наступні сполуки: Приклад 3.0 Одержання (E)-N-4-хлорфеніл-3-(2піридилетеніл)бензаміду До 120мг (Z)-N-4-хлорфеніл-3-(2піридилетеніл)бензаміду домішують у толуолі йод і протягом 7год кип'ятять зі зворотним холодильником. Після концентрування залишок хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту суміші етиловий ефір оцтової кислоти/гексан у співвідношенні 1:1. У результаті одержують 60мг (50% від теорії) (E)-N-4-хлорфеніл-3-(2піридилетеніл)бензаміду з температурою плавлення 212,7°C. Аналогічним шляхом одержують наступні сполуки: 27 82980 Приклад 4.0 Одержання аміду N-(4-хлорфеніл)-2-(3-[4гідроксифенілпропіл])бензойної кислоти 90мг аміду N-(4-хлорфеніл)-2-(3-[4метоксифенілпропіл])бензойної кислоти по краплях змішують у 8мл метиленхлориду при -78°С з 1,2мл триброміду бору і після завершення додавання перемішують протягом ночі при кімнатній температурі. Потім змішують з водою, метиленхлорид відганяють під вакуумом і воду видаляють 28 струшуванням з етиловим ефіром оцтової кислоти. Оцтовоефірну фаз у концентрують і залишок хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту суміші гексан/етиловий ефір оцтової кислоти в співвідношенні 8:2. У результаті одержують 24мг (28% від теорії) аміду N-(4-хлорфеніл)-2-(3-[4гідроксифенілпропіл])бензойної кислоти. Аналогічним шляхом одержують наступні сполуки: 29 82980 30 Приклад 5.0 Одержання аміду N-(4-хлорфеніл)-3-(4метоксистирил)саліцилової кислоти 904мг 4-метокси-2-гідроксистиролу попередньо поміщають у 40мл толуолу і при 4°C змішують з 4мл розчину трихлориду бору (1-молярного в гексані). Потім протягом 1год перемішують при кімнатній температурі, змішують з 614мг 4хлорфенілізоціанату і протягом 1,5год нагрівають до 120°C. Після цього домішують 5мл метанолу і концентрують. Залишок двічі хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту спочатку суміші етиловий ефір оцтової кислоти/гексан у співвідношенні 1:1, а другий раз - суміші толуол/етиловий ефір оцтової кислоти в співвідношенні 100:3,5. У результаті одержують 150мг (10% від теорії) аміду n-(4-хлорфеніл)-3-(4метоксистирил)саліцилової кислоти у вигляді масла. Аналогічним шляхом з відповідних ви хідних матеріалів одержують наступні сполуки: Одержання проміжних сполук Приклад Z-5.0 Одержання 4-метокси-2 -гідроксистиролу До 2,44г саліцилальдегіду в 200мл толуолу спочатку домішують 12,5г хлориду 4метоксибензилтрифенілфосфонію, після чого при охолодженні льодом додають 2,24г трет-бутилату калію. Потім перемішують спочатку протягом 1год при цій температурі, а потім протягом 3,5год при кімнатній температурі. Після примішування 100мл води і підкислення 1н. соляною кислотою тричі екстрагують 50мл оцтового ефіру. Зібрану органічну фазу промивають насиченим розчином хлориду натрію, сушать, фільтрують і концентрують. Залишок хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту суміші етиловий ефір оцтової кислоти/гексан у співвідношенні 2:8. У результаті одержують 3,1г (68% від теорії) 4-метокси-2гідроксистиролу. Аналогічним шляхом одержують також наступні сполуки: Приклад 6.0 Одержання аміду N-(4-хлорфеніл)-3-(4метоксифенетил)саліцилової кислоти 813мг 4-метокси-2-гідрокси-1,2-дифенілетану піддають обмінній реакції аналогічно до прикладу Z-5.0. Отриманий після описаної в вказаному прикладі переробки залишок хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту суміші етиловий ефір оцтової кислоти/гексан у співвідно шенні 1:1 і відповідні фракції концентрують, після чого перемішують з етиловим ефіром оцтової кислоти/гексаном з утворенням при цьому кристалів. У результаті одержують 375мг (27,6% від теорії) аміду N-(4-хлорфеніл)-3-(4метоксифенетил)саліцилової кислоти з температурою плавлення 141°C. Аналогічним шляхом одержують також наступні сполуки: 31 82980 32 Одержання проміжних сполук Приклад Z-6.0 Одержання 4-метокси-2-гідрокси-1,2дифенілетану До 905мг 4-метокси-2-гідроксистиролу домішують у 50мл етанолу 1,3г паладію на вуглеці (10%-ного) і протягом 70хв гідрують при кімнатній температурі і при нормальному тиску водню. Після відділення вакуум-фільтрацією від каталізатора і концентрування одержують 880мг 4-метокси-2гідрокси-1,2-дифенілетану. Аналогічним шляхом одержують також наступні сполуки: Приклад 7.0 Одержання проміжних продуктів Нижче одержання проміжних продуктів за винаходом, найбільш придатних для одержання пропонованих сполук загальної формули І, більш докладно пояснюється на прикладах, які не обмежують обсяг винаходу. Метод А Одержання метилового ефіру 2-(4піридилетеніл)бензойної кислоти В атмосфері аргону до суміші з 2,10г метилового ефіру 2-йодбензойної кислоти і 0,97г 4вінілпіридину в 24мл диметилформаміду домішують 1,04г триетиламіну і 40мг ацетату паладію(II), а також 24мг три-о-толілфосфіну і протягом 5год нагрівають у скляному автоклаві до 100°C. Після концентрування під вакуумом залишок хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту суміші гексан/етиловий ефір оцтової кислоти в співвідношенні 1:1. У результаті одержують 1,8г (94% від теорії) метилового ефіру 2-(4піридилетеніл)бензойної кислоти. Метод Б Одержання метилового ефіру 2-(4піридилетиніл')бензойної кислоти До 2,10г метилового ефіру 2-йодбензойної кислоти в 25мл диметилформаміду домішують в атмосфері аргону 2,94г триетиламіну, 179мг хлориду біс(трифенілфосфін)паладію(II), 111мг йодиду міді(І) і 900мг 4-етинілпіридину і протягом 3,5год нагрівають у скляному автоклаві до температури ванни 80°C. Після концентрування під вакуумом залишок хроматографують на силікагелі з використанням як елюенту суміші гексан/ацетон у співвідношенні 1:1. У результаті одержують 1,08г (45% від теорії) метилового ефіру 2-(4піридилетиніл)бензойної кислоти. Метод В Одержання метилового ефіру 2-(4піридилетил)бензойної кислоти До 237мг метилового ефіру 2-(4піридилетиніл)бензойної кислоти домішують у 30мл етанолу 200мг паладію на вуглеці (10%-ного) і при нормальному тиску протягом 20хв гідрують при кімнатній температурі. Потім вакуумфільтрацією через кізельгур відокремлюють від каталізатора і фільтрат концентрують. У результаті одержують 220мг метилового ефіру 2-(4піридилетил)бензойної кислоти. Замість етинільної сполуки можна застосовувати також відповідну етенільну сполуку. Метод Г За методом, описаним в прикладі 2.0, можна також відповідні складні ефіри перетворювати в Zсполуки. Метод Д За методом, описаним в прикладі 3.0, при використанні складних ефірів можна також з відповідної Z-сполуки одержувати Е-сполуки. Метод E За методом, аналогічним до методу Б, з етилового ефіру 2-йодбензойної кислоти за допомогою етинілтриметилсилану можна одержувати також метиловий ефір 2триметилсилілетинілбензойної кислоти з виходом 83%. Метод Ж 464мг метилового ефіру 2триметилсилілетинілбензойної кислоти змішують у 15мл абсолютного метиленхлориду з 2,75мл фториду тетрабутиламонію (1-молярного в тетрагід 33 82980 34 рофурані) і протягом 2,5год перемішують при кімреакції з 1,94г 3-йоданізолу, одержуючи в резульнатній температурі. Після промивання розведеним таті після колонкової хроматографії на силікагелі з аміаком органічну фазу сушать, фільтрують і конвикористанням як елюенту суміші етиловий ефір центрують і без подальшого очищення використооцтової кислоти/гексан у співвідношенні 2:8 680мг вують на наступній стадії. (55,3% від теорії) 2-карбетоксиметил-3'Метод З метоксидифенілац етилену. 440мг метилового ефіру 2-етинілбензойної киАналогічним шляхом одержують також настуслоти піддають аналогічно до методу Б обмінній пні сполуки: 35 82980 Нижче на прикладах застосування, які не обмежують обсяг винаходу, більш докладно пояснюються біологічна дія запропонованих сполук і їх застосування. Розчини, які використовувалися в дослідах Вихідні розчини: 36 вихідний розчин А: 3мМ АТФ у воді, рН 7,0 (70°C), вихідний розчин Б: g-33Р-АТФ 1мКі/100мкл, вихідний розчин В: полі(GIu4Туr) 10мг/мл у воді. Розчин для розведень: 37 82980 38 розчинники субстратів: 10мМ ДТТ, 10мМ хлоретельно перемішують і протягом 10хв інкубують рид марганцю, 100мМ хлорид магнію, при кімнатній температурі. Потім додають 10мкл розчин ферменту: 120мМ трис/НСІ, рН 7,5, стоп-розчину (250мМ ЕДТК, рН 7,0), перемішують і 10мкМ оксид натрійванадію. 10мкл розчину переносять на фосфоцелюлозний Приклад застосування 1 фільтр типу P 81, після чого декілька разів промиПригнічення активності кінази KDR і FLT-I у вають у 0,1-молярній фосфорній кислоті. Фільтруприсутності сполук за винаходом вальний папір сушать, покривають шаром Meltilex і У титраційний мікропланшет, що звужується за допомогою мікролічильника бета-частинок вина кінцях, (без зв'язування протеїну) додають мірюють радіоактивність. 10мкл живильної суміші (вихідний розчин А об'ІС50-значення представляють собою величини, ємом 10мкл АТФ+25мкКі g-33Р-АТФ (приблизно які визначаються за концентрацією інгібітора, не2,5мкл вихідного розчину Б)+вихідний розчин В: обхідної для пригнічення вбудовування фосфату 30мкл полі(GIu4Туr)+1,21мл розчинника субстрана 50% від його вбудовування за відсутності інгібітів), 10мкл розчину інгібітору (сполукивідповідно тора, за винятком контрольного значення, отримадо розведень, як контроль служить 3%-ний розчин ного в результаті сліпого досліду (реакція, припиДМСО в розчиннику субстратів) і 10мкл розчину нена за допомогою ЕДТК). ферменту (11,25мкг вихідного розчину ферменту Результати інгібування кінази IC50 у мкМ пред(кінази KDR або FLT-1), розведеного при 4°С в ставлені в нижченаведеній таблиці. 1,25мл розчину ферменту). Вказані інгредієнти BI означає відсутність інгібування. Комп’ютерна в ерстка О. Гапоненко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601