Штамм продуцент ліполітичного ферментного препарату солізім

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к медицинской промышленности, при производстве препаратов микробного синтеза. Наиболее близкий к заявляемому является штамм BKПM-F-353. Известный штамм имеет малое число образуемых конидий и удельную активность фермента в готовом продукте 3019 ЛЕ/мг белка. В настоящее время в промышленности медицинских ферментов неизвестны штаммы продуценты, дающие более высокую активность в готовом препарате. Заявленный штамм обладает повышенной способностью образовывать конидии, что ведет к увеличению всхожести посевных партий, и как следствие этого, экономии сырья и трудозатрат при промышленном производстве. Важным также является увеличение активности фермента в готовом продукте до 6000 ЛЕ/мл. Штамм получен в результате отбора в течение пятикратного пассирования штамма BKПM-F-353 на модифицированной среде Райстрика следующего состава, (%): глицерин - 1,5; пептон - 0,6; NaCI - 0,5; KCI - 0,05, FeSO4 × 7Н2О - 0,0015; CuSO4 × 7Н2О - 0,002; КН2РО4 0,03; MnSO4 × 7Н2О - 0,00002; MgSO4 × 7Н2О - 0,005; агар - 2,5, с Na солью леворина с концентрацией, увеличивающейся от 2,5 до 20 ед/мл. Штамм депонирован в ВКПМ института ВНИИгенетики под номером BKПM-F-583. Морфолого-культуральные признаки штамма BKПM-F-583. На модифицированной среде Райстрика на 14 сутки роста при 25°С колоний 4,1-4,5 см в диаметре, войлочные, зелено-серого цвета, переходящего к краю колонии в синевато-зеленый, радиальноскладчатые. Зона роста белая, шириной 1,5-2 мм, край волнистый. Иногда наблюдаются сектора с более светлым или темным воздушным мицелием и белое опушение в центре колонии. Обратная сторона желтовато-буроватого цвета, переходящего в оранжевый, радиальноскладчатая.. На агаре Чапека с глюкозой - колений 4,2-4,5 см в диаметре, бархатисто-войлочные, зелено-серого цвета, переходящего к краю колонии в зелено-малахитовый, радиально-складчатые. Центр колонии опущенный, слегка приподнят, бледно-серовато-фиолетового цвета. Наблюдаются пятна аспорогенного мицелия и мелкие капли экссудата желтого цвета. Зона роста серовато-белого цвета, шириной 1,0-1,5 мм, край волнистый. Обратная сторона песочного цвета, радиальноскладчатая. На агаре Чапека с кукурузным экстрактом колонии 3,2-4,1 см в диаметре, войлочно-пушистые, от синевато-зеленого до малахитового цвета к краю колонии, сильно-радиальноскладчатые. Центр приподнятый, белый, пушистый. Могут быть мелкие капли экссудата желтого цвета и пятна белого аспорогенного мицелия. Зона роста белого цвета, шириной 2-3 мм, край волнистый. Обратная сторона темнокремового цвета, сильнорадиальноскладчатая. На сусло - агаре колонии 3,7-4,3 см в диаметре, войлочно-пушистые, белого цвета с редкими радиальными складками. Центр слегка вдавлен (бледно-бирюзовым) кольцом у края колонии. Наблюдаются войлочные сильнорадиальноскладчатые сектора сероватого цвета. Зона роста белая, шириной 1,5-2 мм, край волнистый. Обратная сторона коричневого цвета с редкими радиальными складками по краю колонии. Микроскопические признаки шт. ВКПМ-F-583 при росте на модифицированном агаре Райстрика: метулы одиночные и редко 2-3 в группе размером 8,4-14,4 мкм 1,9-2,6 мкм, стеригм 1-3, размером 4,8-7,2 мкм 2,4-3,1 мкм, конидии круглые, 2,4-5,5 мкм, оболочка гладкая. Физиологические признаки штамма ВКПМ-F-583: Желатин не разжижает, молоко пептонизирует, на клетчатке рост очень слабый, на ломтике картофеля рост хороший, крахмал гидролизует, сероводород не образует, нитраты в нитриты восстанавливает, реакция на инверсию сахарозы отрицательная, пигменты меланоидного типа не образует. Растет на среде с глицерином, глюкозой, арабинозой, сахарозой, ксилозой, инозитом, маннитом, фруктозой, рамнозой, в качестве единственного источника углерода. Штамм ВКПМ-583 хранится на агаризованной среде Райстрика (модифицированной) при +4°С 12 месяцев. При использовании предлагаемого штамма в производстве солизима (в соответствии с промышленным регламентом на производство солизима 64-5509-87-91) удельная активность в готовом продукте превышает активность штамма ВКПM-F-353 в 2 раза и составляет в среднем 6000 ЛЕ/мг белка при размахе от 4000 до 13000 ЛЕ/мг белка. Характеристика различия штамма ВКПМ-F-583 и его прототипа штамма ВКПМ-F-353 представлены в таблице. Таким образом, селекционированный штамм ВКПМ-F-583 отличается от штамма ВКПM-F-353 (прототип) рядом морфолого-культуральных и физиологических признаков. По удельной активности в готовом продукте штамм ВКПМ-Р-583 превышает штамм ВКПМ-Р-353 в два раза.