Спосіб приготування еритроцитарних тіней у собак

Спосіб приготування еритроцитарних тіней у собак, що включає гемоліз еритроцитів гіпертонічним розчином глюкози і відрізняється тим, ідо перед додаванням 4 0 % розчину глюкози в суміш, яка складається з відмитих еритроцитів, 0,5 мл 2,5% розчину аміназину і 4 мл фізіологічного розчину хлориду натрію, додається 1500 ОД гепарину, а центрифугування проводиться при швидкості 2000 і 4000 об/хе при кімнатній температурі. Винахід відноситься до медицини, зокрема до експериментальних досліджень на тваринах, і може бути застосований для приготування аутологічних еритроцитарних тіней у собак. Відомий спосіб приготування еритроцитарних тіней у собак полягає в тому, що після видалення плазми крові еритроцити двічі відмивають фізіологічним розчином хлориду натрію шляхом центрифугування при 3000 об/хв при 4°С, до осадку еритроцитів добавляють семикратний об'єм охолодженої до 0°С дистильованої води і центрифугують при 8000 об/хв на протязі 25 хвилин при 4 С, до отриманих тіней еритроцитів додають семикратний об'єм антибіотика, розчиненого в охолодженій до 0°С дистильованій воді, суміш інкубують на протязі 20 хвилин при 4°С, потім добавляють 1/9 об'єма 9 % розчину хлориду натрію для відновлення цілісності мембрани еритроцитарних тіней І Інкубують на протязі ЗО хвипин при 37°С (Жумадилое Ж.Ш , Скуба НД., Макаренкова Р.В. Экспериментальное обоснование направленного транспорта антибиотиков при гнойно-воспалительных заболеваниях печени и желчных путей // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1990. - Ne 5. - С. 4 4 9 451). Прототипом винаходу с спосіб приготування еритроцитарних тіней людини, який полягає в тому, що після забору 5 мл венозної крові в стерильний флакон, який містять 5 мл фізіологічного розчину та 1800 ОД гепарину, тричі відмивають еритроцити шляхом центрифугування при 2000 об/хв протягом 7 хвилин, до отриманих еритроцитів додають 4 мл фізіологічного розчину хлориду натрію, ресуслендують струшуванням та додають 0,5 мл 2,5% аміназину або піпольфену, одержану суспензію витримують при кімнатній температурі 15-20 хвипин, додають 6 мл 4 0 % глюкози і ресуспендують, потім Інкубують при кімнатній температурі протягом 20-30 хвилин, отримані тіні виділяють шляхом центрифугування при 300 об/хв протягом 15 хвилин, потім двічі відмивають фізіологічним розчином, центрифугуючи по 10 хвилин при 3000 об/хв, відмиті тіні змішують з розчином антибіотика І витримують ЗО хвилин при кімнатній температурі (Інформаційний лист № 6 3 - 9 8 МОЗ України, Укрмедпатентінформ / Метод спрямованого транспорту антибіотиків в гепатобіліарній хірургії / Медвецький Є.Б., Гиндич Л.О. - Випуск 5 по проблемі "Хірургія"). -Недоліками першого методу приготування еритроцитарних тіней є те, що центрифугування потрібно проводити при температурі 4°С, треба охолоджувати дистильовану воду до 0°С перед тим, як додавати її до осаду еритроцитів після їх відмивання, потрібно проводити центрифугування при 8000 об/хв на протязі 25 хвилин, що потребує наявність спеціально обладнаної центрифуги, важко визначити об'єм осадку еритроцитів і отриманих* тіней еритроцитів. Недоліками другого' методу є те, що при використанні його для виробки тіней еритроцитів собаки після додавання 4 0 % розчину глюкози і наступній інкубації гемоліз еритроцитів відбувається недостатньо і утворюється згусток останніх, що не дає в подальшому насичити тіні необхідним розчином. В основу винаходу поставлене завдання створити спосіб виготовлення тіней еритроцитів собаки, який не потребує складних технічних засе о CM о> со 34920 бів при центрифугуванні, додержання особливого температурного режиму, попереджує утворення згустку еритроцитів Це досягається тим, що у запропонованому способі тіні еритроцитів у собак отримують внаслідок гемолізу еритроцитів гіпертонічним розчином глюкози. Спосіб відрізняється тим, що перед додаванням 40% розчину глюкози в суміш, яка складається з відмитих еритроцитів, 0,5 мл 2,5% розчину ачіназина і 4 мл фізіологічного розчину хлорида натрію, додають 1500 ОД гепарину, що попереджує утворення згустку і сприяє повному гемолізу еритроцитів, відмивання отриманих тіней відбувається шляхом центрифугування при 2000 і 4000 об/хв на протязі 15 хвилин тричі, всі етапи виробки тіней виконуються при кімнатній температурі. Еритроцитарні тіні у собак готуються у такий спосіб. У собаки проводять забір 5 мл венозної крові в флакон, який містить 5 мл фізіологічного розчину хлориду натрію та 2000 ОД гепарину. Тричі відмивають еритроцити шляхом центрифугу вання при 2000 об/хв на протязі 7 хвилин. До отриманих еритроцитів додають 4 мл фізіологічного розчину хлорида натрію, ресуспендують струшуванням та додають 0,5 мл 2,5% аміназина. Одержану суспензію витримують при кімнатній температурі 15 хвилин, потім додають 1500 ОД гепарину, після чого добавляють 6 мл 40% розчину глюкози. Отриману суміш витримують при кімнатній температурі 20 хвилин. Виділяють отримані тіні еритроцитів із інкубаційного середовища шляхом центрифугування при 4000 об/хв протягом 15 хвилин. Над осад обережно відбирають, а одержані тіні тричі відмивають фізіологічним розчином хлорида натрію по 15 хвилин при 4000 об/ха. Відмиті тіні змішують з необхідним лікарським засобом (наприклад з антибіотиком); який розчинений в 10 мл фізіологічного розчину натрію хлорида. Даний спосіб приготування еритроцита рних тіней випробуваний під час експериментального дослідження на собаках і показав свою ефективність і відносну технічну простоту виконання. Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122)3-72-89 (03122)2-57-03