Спосіб отримання карбоксипептидази а

Спосіб отримання карбоксипептидази А, який полягає в тому, що карбоксипептидазу А екстрагують з тканини тваринного походження, потім карбоксипептидазу А додатково очищують від білкових та небілкових домішок, який відрізняється тим, що як тканину тваринного походження використовують яєчники тварин. (19) (21) u200809387 (22) 17.07.2008 (24) 10.02.2009 (46) 10.02.2009, Бюл.№ 3, 2009 р. (72) ВОВЧУК ІРИНА ЛЕОНІДІВНА, U A (73) ОДЕСЬКИЙ НАЦІОН АЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ І.І.МЕЧНИКОВА, U A 3 39128 4 сипептидази А, що призводить до подорожчання Відмінними ознаками способу, який пропонукарбоксипептидази А (1г трипсину коштує 240,10 ється, є те, що як тканину тваринного походження євро) та збільшує трудомісткість процесу. використовують не тканину мозку, як у найближВ основу корисної моделі поставлена задача: чому аналозі, а яєчники тварин. створити спосіб отримання карбоксипептидази А з Запропонований спосіб ілюструється наступотриманням технічного ефекту, що полягає в виним прикладом. ключені процесу активації карбоксипептидази А Пропонуємий спосіб отримання карбоксипептрипсином. тидази А реалізується наступним чином. Тканину Поставлена задача досягається тим, що каряєчників тварин гомогенізують з ацетоном, потім боксипептидазу А екстрагують з тканини тваринногомогенат центрифугують, потім осад ресуспенго походження, потім карбоксипептидазу А додатдують, екстрагують та повторно центрифугують, ково очищують від білкових та небілкових після того осади об'єднують, висушують, потім з домішок, який відрізняється тим, що які тканину ацетонового порошку готують екстракт, який потім тваринного походження використовують яєчники очищають від білкових та небілкових домішок вітварин. домими способами. Загальними ознаками найближчого аналога та Встановлено, що до 95% активності карбоксиспособу, який пропонується, є те, що в обох випапептидази А екстрагується під час першої екстракдках карбоксипептидазу А екстрагують з тканини ції, що свідчить на користь того, що фермент не є тваринного походження, потім карбоксипептидазу мембранозв'язаний (табл. 1). А додатково очищюють від білкових та небілкових домішок. Таблиця 1 Екстрагуємость карбоксипептидази А немалігнізованої та пухлинних тканин яєчника (М±m, n=3) Яєчник Екстракція І II Усього: Немалігнізована тканина ПА 57,12±5,54 3,62±3,46 60,71±5,87 Доброякісна пухлина Злоякісна пухлина % ПА % ПА % 94,08% 5,92% 100,0% 98,03±9,63 4,59±4,41 102,63±9,87 95,52% 4,48% 100,0% 81,43±7,81 4,85±4,67 86,28±8,54 94,38% 5,62% 100,0% Примітка: ПА - питома активність карбоксипептидази А в мМ фенілаланіну / мг білка за 1хв. інкубації при 37°С; % - остаточна активність ферменту у % по відношенню до показників суми. Таблиця 2 Вплив трипсину на активність карбоксипептидази А немалігнізованої та пухлинних тканин яєчника (М±m, n=3) Немалігнізована тканина Активація трипБез трипсина сином 0,270±0,03 0,280±0,03 Яєчник Доброякісна пухлина Активація трипБез трипсина сином 1,400±0,13 1,430±0,13 Інкубація гомогенатів тканини яєчника з трипсином (у співвідношенні 1мл гомогенату 100мг трипсину) на протязі 45хв. не збільшувала активність карбоксипептидази А, що свідчить про присутність карбоксипептидази А в тканині яєчників в активній формі (табл. 2). Отримані результати свідчать про те, що використання трипсину для активації карбоксипептидази А недоцільне і може бути виключено. Таким чином, запропонований спосіб у порівнянні з найближчим аналогом забезпечує виклюКомп’ютерна в ерстка А. Крижанівський Злоякісна пухлина Активація трипБез трипсина сином 1,220±0,11 1,200±0,11 чення операції активації карбоксипептидази А трипсином, що дозволяє виключити затрати на трисин та скоротити трудомісткість процесу отримання карбоксипептидази А. Це досягається завдяки тому, що як тканину тваринного походження використовують яєчники тварин, а не тканину мозку. Спосіб, що пропонується, надається промисловим підприємствам для промислового використання. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601