Спосіб одержання низьконасичених олій

Реферат: Винахід належить до ферментативного способу одержання низьконасичених олій, відповідно до одного варіанта здійснення, низькопальмітинових олій із триацилгліцеринових джерел. Ферменти, які використовуються в способах згідно з даним винаходом, являють собою ферменти типу сатурази, зокрема ферменти типу пальмітази. Олії, одержані способами згідно з даним винаходом, використовуються в харчових продуктах. UA 114514 C2 (12) UA 114514 C2 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Перехресне посилання на споріднені заявки Дана заявка запитує пріоритет попередньої патентної заявки США № 61/659867, поданої 14 червня 2012 р., опис якої у всій своїй повноті включається в даний документ за допомогою посилання. Список послідовностей Дана заявка подається зі списком послідовностей, що міститься у файлі під назвою 011631079-228_SeqListing.txt розміром 6167 байт, який був створений 10 червня 2013 р. Даний список послідовностей включається в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті. Галузь техніки, до якої належить винахід Даний винахід пропонує ферментативний спосіб одержання низьконасичених олій із триацилгліцеринових джерел. Ферменти, використовувані в способах згідно з даним винаходом, являють собою ферменти типу сатурази. Олії, одержані способами згідно з даним винаходом, можна використовувати в харчових продуктах. Рівень техніки Відомо, що дієти з високим вмістом насичених жирів підвищують рівень холестерину в крові і збільшують ризик серцево-судинних захворювань. Таким чином, виявляється бажаним зменшення кількості насичених жирів у харчових продуктах. Патент США № 8153391 і патент США № 8357503, кожен з яких у всій своїй повноті включається в даний документ за допомогою посилання, описують зразкові ферменти типу сатурази, які можна використовувати, щоб гідролізувати насичені жирнокислотні залишки з триацилгліцеринових джерел для одержання низьконасичених олій. Відповідно до визначених аспектів, виявляється бажаним спрямування гідролізованої низьконасиченої олії на ферментативне знесмолювання для видалення фосфоліпідів і слідових металів з метою одержання бажаної олії, що має тривалий термін зберігання. Важливі способи ефективного й економічного виробництва олій, зокрема, коли воно здійснюється на дослідній установці або в промисловому масштабі. Визначені емульгатори, які використовуються для прискорення процесу гідролізу, можуть перешкоджати одержанню низьконасиченої олії з використанням лужного рафінування після закінчення процесів гідролізу і/або знесмолювання. Таким чином, існує потреба в розробці способу ефективного одержання низьконасиченої масляної композиції з триацилгліцеринового джерела. Суть винаходу Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, пропонується спосіб одержання низьконасиченої масляної композиції з триацилгліцеринового джерела, який включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу сатурази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один насичений жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, (b) змішування водного розчину кислоти з емульсією, в якій кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, (c) поділ масляної фази і водної фази. Стадія змішування (a) здійснюється в умовах, де виявляє активність фермент типу сатурази. Відповідно до визначених варіантів здійснення, спосіб додатково включає фракціонування масляної фази для поділу вільної насиченої жирної кислоти і низьконасиченої масляної композиції. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, пропонується спосіб одержання низькопальмітатної масляної композиції з триацилгліцеринового джерела, який включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу пальмітази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один пальмітатний жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, (b) змішування водного розчину кислоти з емульсією, в якій кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, (c) поділ масляної фази і водної фази. Відповідно до визначених варіантів здійснення, спосіб додатково включає фракціонування масляної фази для поділу вільної пальмітинової жирної кислоти і низьконасиченої масляної композиції. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, пропонуються способи, які додатково включають стадію знесмолювання олії. Відповідно до визначених варіантів здійснення, стадія знесмолювання включає водне знесмолювання, кислотне знесмолювання або ферментативне знесмолювання. У способах згідно з даним винаходом можна використовувати будь-який спосіб знесмолювання, відомий фахівцям у даній галузі техніки. 1 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Зразкові способи знесмолювання описують патент США № 4049686, патент США № 4698185, патент США № 5239096, патент США № 5264367, патент США № 5286886, патент США № 5532163, патент США № 6001640, патент США № 6103505, патент США № 6127137, патент США № 6143545, патент США № 6172248, патент США № 6548633, патент США № 7226771, патент США № 7312062, патент США № 7494676, патент США № 7713727, патент США № 8192782, патентна публікація США № 2008/0182322, патентна публікація США № 2009/0069587 і патентна публікація США № 2011/0136187, причому кожний з даних документів у всій своїй повноті включається в даний документ за допомогою посилання. Відповідно до одного варіанта здійснення, спосіб одержання низьконасиченої масляної композиції з триацилгліцерину включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу сатурази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один насичений жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, (b) змішування водного розчину кислоти з емульсією для одержання кислої емульсії, в якої значення рН становить менше, ніж приблизно 4, (c) змішування водного розчину основи для одержання суміші, в якої значення рН становить приблизно від 4 до 9, (d) змішування ферменту типу фосфоліпази, вибраного з PLA1, PLA2, PLC або їх сполучення, із сумішшю, одержаною на стадії (c), для одержання суміші, що включає знесмолену олію і водну фазу, (e) поділ знесмоленої олії і водної фази для одержання сепарованої знесмоленої олії, (f) змішування сепарованої знесмоленої олії з водним розчином кислоти для одержання суміші, що включає масляну фазу і водну фазу, де кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, і (g) відділення масляної фази від суміші, одержаної на стадії (f), де масляна фаза являє собою низьконасичену масляну композицію. Стадія змішування (a) здійснюється в умовах, де виявляє активність фермент типу сатурази. Відповідно до визначених варіантів здійснення, сепарована олія фракціонується для поділу вільної насиченої жирної кислоти і низьконасиченої масляної композиції. Відповідно до одного варіанта здійснення, спосіб одержання низькопальмітинової масляної композиції включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу пальмітази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один пальмітиновий жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, (b) змішування водного розчину кислоти з емульсією для одержання кислої емульсії, в якій значення рН становить менше, ніж приблизно 4, (c) змішування водного розчину основи для одержання суміші, в якої значення рН становить приблизно від 4 до 9, (d) змішування ферменту типу фосфоліпази, вибраного з PLA1, PLA2, PLC або їх сполучення, із сумішшю, одержаною на стадії (c), для одержання суміші, що включає знесмолену олію і водну фазу, (e) поділ знесмоленої олії і водної фази для одержання сепарованої знесмоленої олії, (f) змішування сепарованої знесмоленої олії з водним розчином кислоти для одержання суміші, що включає масляну фазу і водну фазу, де кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, і (g) відділення масляної фази від суміші, одержаної на стадії (f), де масляна фаза являє собою низькопальмітинову масляну композицію. Стадія змішування (a) здійснюється в умовах, де виявляє активність фермент типу пальмітази. Відповідно до визначених варіантів здійснення, триацилгліцеринове джерело, яке використовується у способах згідно з даним винаходом, являє собою соєву олію. Зразкові ферменти типу сатурази, зокрема ферменти типу пальмітази, для використання в способах згідно з даним винаходом, можна одержувати способами, відомими в техніці, наприклад, способами, що описують патент США № 8153391 і патент США № 8357503, причому кожний з патентів у всій своїй повноті включається в даний документ за допомогою посилання. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, пропонуються способи, що можуть бути призначені для одержання низьконасичених олій у промисловому масштабі. Низьконасичені олії, зокрема низькопальмітинові олії, такі як низькопальмітинова соєва олія, яка одержується способами, запропонованими згідно з даним винаходом, можна використовувати в харчових продуктах, таких як бутильована олія, салатні приправи, майонез, бутербродні олії і кулінарні олії. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, пропонується низькопальмітинова соєва олія, причому дана соєва олія містить менше, ніж приблизно 5 % пальмітинової кислоти відносно сумарної маси соєвої олії. Відповідно до визначених варіантів 2 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 здійснення, низькопальмітинова соєва олія містить приблизно від 0,5 до 5 % пальмітинової кислоти відносно сумарної маси соєвої олії. Короткий опис креслень Фіг. 1 схематично ілюструє зразковий спосіб одержання низьконасичених олій. Докладний опис Визначення При використанні в даному документі термін "сатураза" означає фермент, що гідролізує складні ефіри насичених жирних кислот, причому дані гідролізовані складні ефіри можуть являти собою складні ефіри насичених жирних кислот, що утворюють гліцерин, умбеліферол або інші спирти. При використанні в даному документі термін "пальмітаза" означає фермент, що гідролізує складні ефіри пальмітинової кислоти, які утворюють, наприклад, гліцерин. Зразкові сатурази, що включають ферменти типу пальмітази, описують патент США № 8153391 і патент США № 8357503, кожний з яких у всій своїй повноті включається в даний документ за допомогою посилання. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, використовувані сатурази селективно гідролізують щонайменше 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % або 100 % складних ефірів насичених жирних кислот. Відповідно до іншого аспекту даного винаходу, використовувані пальмітази селективно гідролізують складні ефіри жирних кислот таким чином, що щонайменше 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % або 100 % одержуваних при гідролізі жирних кислот становить пальмітинова кислота. Відповідно до іншого аспекту даного винаходу, використовувані стеаратази пальмітази селективно гідролізують складні ефіри жирних кислот таким чином, що щонайменше 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % або 100 % одержуваних при гідролізі жирних кислот становить стеаринова кислота. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, використовувані ферменти типу сатурази відповідно селективно гідролізують складні ефіри насичених жирних кислот, таких як, наприклад, пальмітинова кислота або стеаринова кислота, які відщеплюються з положень Sn1, Sn2 і/або Sn3. Зразкові насичені жирні кислоти, що можуть утворюватися в результаті гідролізу способами, описаними в даному документі, являють собою насичені жирні кислоти, що містять від 2 до 24 атомів вуглецю. Зразкові кислоти являють собою, але не обмежуються цим, наступні: капронова кислота: CH3(CH2)4COOH, каприлова кислота: CH3(CH2)6COOH, капринова кислота: CH3(CH2)8COOH, ундеканова кислота: CH3(CH2)9COOH, лауринова (додеканова) кислота: CH 3(CH2)10COOH, міристинова (тетрадеканова кислота): CH 3(CH2)12COOH, пентадеканова кислота: CH3(CH2)13COOH, пальмітинова (гексадеканова) кислота: CH3(CH2)14COOH, маргаринова (гептадеканова) кислота: CH3(CH2)15COOH, стеаринова (октадеканова) кислота: CH3(CH2)16COOH, арахінова (ейкозанова) кислота: CH3(CH2)18COOH, бегенова (докозанова) кислота: CH3(CH2)20COOH. При використанні в даному документі термін "низькопальмітинова соєва олія" означає соєву олію, яка одержується після обробки ферментом типу сатурази способами, описаними в даному документі. Відповідно до визначених варіантів здійснення, низькопальмітинова соєва олія містить приблизно від 0,5 до 5 % пальмітинової кислоти відносно сумарної маси соєвої олії. При використанні в даному документі термін "знесмолена олія" означає олію, одержувану після видалення основної маси фосфоліпідів і лецитинів (у сукупності відомих як смоли) з олії. Найбільш розповсюджені способи, які використовуються в промисловості для знесмолювання олії, являють собою водне знесмолювання, кислотне знесмолювання, лужне рафінування і ферментативне знесмолювання. Зразкові способи описують патент США № 4049686, патент США № 4698185, патент США № 5239096, патент США № 5264367, патент США № 5286886, 3 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 патент США № 5532163, патент США № 6001640, патент США № 6103505, патент США № 6127137, патент США № 6143545, патент США № 6172248, патент США № 6548633, патент США № 7226771, патент США № 7312062, патент США № 7494676, патент США № 7713727 і патент США № 8192782, патентна публікація США № 2008/0182322, патентна публікація США № 2009/0069587 і патентна публікація США № 2011/0136187, причому кожний з даних документів у всій своїй повноті включається в даний документ за допомогою посилання. При використанні в даному документі термін "низьконасичена олія" означає олію, яка одержується після видалення одного або декількох насичених кислотних залишків із молекул триацилгліцерину в олії. При використанні в даному документі термін "низькопальмітинова олія" означає олію, яка одержується після видалення одного або декількох пальмітинових кислотних залишків з молекул триацилгліцерину в олії. При використанні в даному документі термін "фосфоліпази" означає ферменти, що виявляють активність відносно фосфоліпідів. Як описує, наприклад, патентна публікація США № 2009/0069587, типи фосфоліпаз визначаються на підставі положення у фосфоліпідній молекулі, в якому реагує фермент, і відомі типи являють собою PLC, PLD і PLA, зокрема PLA1 і PLA2. Відповідно до визначених варіантів здійснення, ферменти типу PLA включають ацилтрансферази, зокрема, але не обмежуючись тими, які описують патент США № 8192782 і патентна публікація США № 2011/0136187. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, пропонується спосіб одержання низьконасиченої масляної композиції, який включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу сатурази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один насичений жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, (b) змішування водного розчину кислоти з емульсією, в якій кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, (c) поділ масляної фази і водної фази. Відповідно до визначених варіантів здійснення, спосіб додатково включає фракціонування масляної фази для поділу вільної насиченої жирної кислоти і низьконасиченої масляної композиції. Стадія змішування (a) здійснюється в умовах реакції, де виявляє активність фермент типу сатурази. Такі умови реакції, зокрема умови рН і температури, є відомими для фахівця в даній галузі техніки. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, пропонується спосіб одержання низькопальмітинової масляної композиції, який включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу пальмітази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один пальмітиновий кислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, (b) змішування водного розчину кислоти з емульсією, в якій кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, (c) поділ масляної фази і водної фази. Відповідно до визначених варіантів здійснення, спосіб додатково включає фракціонування масляної фази для поділу пальмітинової кислоти і низькопальмітинової масляної композиції. Відповідно до одного варіанта здійснення, спосіб одержання низьконасиченої масляної композиції включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу сатурази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один насичений жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, (b) змішування водного розчину кислоти з емульсією для одержання кислої емульсії, в якій значення рН становить менше, ніж приблизно 4, (c) змішування водного розчину основи для одержання суміші, у якій значення рН становить приблизно від 4 до 9, (d) змішування ферменту типу фосфоліпази, вибраного з PLA1, PLA2, PLC і їх сполучення, із сумішшю, одержаною на стадії (c), для одержання суміші, що включає знесмолену олію і водну фазу, (e) поділ знесмоленої олії і водної фази для одержання сепарованої знесмоленої олії, (f) змішування сепарованої знесмоленої олії з водним розчином кислоти для одержання суміші, що включає масляну фазу і водну фазу, де кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, і (g) відділення масляної фази від суміші, одержаної на стадії (f), де масляна фаза являє собою низьконасичену масляну композицію. Відповідно до одного варіанта здійснення, спосіб одержання низькопальмітинової масляної композиції включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином 4 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ферменту типу пальмітази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один пальмітиновий жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, (b) змішування водного розчину кислоти з емульсією для одержання кислої емульсії, в якій значення рН становить менше, ніж приблизно 4, (c) змішування водного розчину основи для одержання суміші, в якій значення рН становить приблизно від 4 до 9, (d) змішування ферменту типу фосфоліпази, вибраної з PLA1, PLA2, PLC і їх сполучення, із сумішшю, одержаною на стадії (c), для одержання суміші, що включає знесмолену олію і водну фазу, (e) поділ знесмоленої олії і водної фази для одержання сепарованої знесмоленої олії, (f) змішування сепарованої знесмоленої олії з водним розчином кислоти для одержання суміші, що включає масляну фазу і водну фазу, де кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, і (g) відділення масляної фази від суміші, одержаної на стадії (f), де масляна фаза включає низькопальмітинову масляну композицію. Відповідно до визначених варіантів здійснення, сепарована масляна фаза фракціонується для поділу пальмітинової кислоти і низькопальмітинової масляної композиції. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, запропоновані способи можуть бути призначені для одержання низьконасичених олій у промисловому масштабі. Відповідно до визначених варіантів здійснення, кількість кислоти на стадії (b) є достатньою для одержання значення рН, що становить приблизно від 1 до 4, від 2 до 4 або від 3 до 4. Відповідно до визначених варіантів здійснення, кількість основи на стадії (c) є достатньою для одержання значення рН, що становить приблизно від 4 до 6,5, від 5,5 до 7, від 7 до 8 або від 8 до 9. Відповідно до визначених варіантів здійснення, сепарована масляна фаза охолоджується до температури, що становить від -20 до 20C, від -15 до 15C, від -10 до 10C, від -5 до 5C або 0 до 5C для отвердження насиченої жирної кислоти, зокрема пальмітинової кислоти. Отверджена насичена жирна кислота відокремлюється способами, відомими в техніці, і виходить низьконасичена масляна композиція. Триацилгліцеринові джерела, які можна використовувати в способах, запропонованих згідно з даним винаходом, включають, але не обмежуються цим, будь-яку водорослеву олію, рослинну олію або тваринне масло або жир, наприклад, олію Neochloris oleoabundans (зелені мікроводорості), олію Scenedesmus dimorphus (морські одноклітинні водорості), олію Euglena gracilis (прісноводні одноклітинні водорості), олію Phaeodactylum tricornutum (діатомові водорості), олію Pleurochrysis carterae (коколітофоридні водорості), олію Prymnesium parvum (джгутикові водорості), олію Tetraselmis chui (зелені джгутикові водорості), олію Tetraselmis suecica (морські зелені водорості), олію Isochiysis galbana (морські мікроводорості), олію Nannochloropsis salina (Nannochloropsis salina), олію Botryococcus braimii (бурі водорості), олію Dunaliella tertiolecta (одноклітинні зелені водорості), олію водоростей видів роду Nannochloris, олію водоростей видів роду Spirulina (спіруліна), олію зелених водоростей класу Chlorophycease, олію діатомових водоростей класу Bacillariophyceae, олію каноли, касторову олію, кокосову олію, коріандрову олію, кукурудзяну олію, бавовняну олію, олію лісового горіха, конопляну олію, лляну олію, олію пінника лугового, маслинову олію, пальмову олію, кісточкову пальмову олію, арахісову олію, рапсову олію, олію з рисових висівок, сафлорову олію, олію камелії гірської, соєву олію, соняшникову олію, талову олію, олію камелії японської (цубакі), різноманітні натуральні олії, що мають змінені композиції жирних кислот за допомогою генетично модифікованих організмів (ГМО) або традиційних організмів, які розводяться генетично, такі як високоолеїнові, низьколіноленові або низьконасичені олії (високо олеїнову олію каноли, низьколіноленову соєву олію або високостеаринову соняшникову олію); тваринні жири (яловичий жир, свинячий жир, вершкове масло і курячий жир), риб'ячий жир (жир тихоокеанської корюшки, жир печінки тріски, жир атлантичного великоголова, жир сардини, жир оселедця і жир американського оселедця), або суміші, що містять будь-які з перерахованих вище олій і жирів. Відповідно до одного варіанта здійснення, триацилгліцеринове джерело, яке використовується у способах згідно з даним винаходом, являє собою соєву олію. Відповідно до іншого варіанта здійснення, триацилгліцеринові джерела в способах згідно з даним винаходом являють собою неочищені незнесмолені або напівперероблені олії, зокрема неочищені незнесмолені або напівперероблені соєві олії (знесмолені, хімічно рафіновані, вибілені і/або дезодоровані, якщо додається лецитин). Емульгатори, які використовуються в способах згідно з даним винаходом, включають солі лужних металів і ненасичених жирних кислот. Будь-які солі лужних металів і ненасичених жирних кислот, що відомі фахівцям у даній галузі техніки, можна використовувати в способах, 5 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 описаних у даному документі. Відповідно до визначених варіантів здійснення, емульгатор являє собою сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, що має довгий ланцюг. Відповідно до визначених варіантів здійснення, емульгатор має гідрофільно-ліпофільний баланс (ГЛБ), що становить більше, ніж 12, 14, 16 або 18. Відповідно до визначених варіантів здійснення, емульгатор має ГЛБ, що становить від 12 до 18, від 12 до 16, від 12 до 14, від 14 до 18, від 14 до 16 або від 16 до 18. Відповідно до визначених варіантів здійснення, емульгатор має ГЛБ, що становить 12, 14, 16 або 18. Відповідно до визначених варіантів здійснення, як емульгатор вибирається олеат натрію, олеат калію, лінолеат натрію, лінолеат калію, ліноленат натрію, ліноленат калію або їх сполучення. Відповідно до одного варіанта здійснення, як емульгатор вибирається олеат калію або олеат натрію. Відповідно до визначених варіантів здійснення, кількість емульгатора, що використовується в способах, які описані в даному документі, становить приблизно від 1 до 10 %, від 2 до 8 %, від 2 до 6 %, від 2 до 5 % або від 3 до 5 мас. % відносно сумарної маси олії. Відповідно до одного варіанта здійснення, використовувана кількість емульгатора становить приблизно 1, 3, 5, 7 або 10 мас. % відносно сумарної маси олії. Відповідно до визначених варіантів здійснення, змішування на стадії (a) являє собою зсувне змішування для одержання емульсії. Відповідно до визначених варіантів здійснення, олія або жир змішується з емульгатором перед додаванням ферменту типу сатурази. Відповідно до визначених варіантів здійснення, суміш олії/жиру і емульгатора гомогенізується до і/або після додавання ферменту для одержання однорідної емульсії. Відповідно до одного варіанта здійснення, зсувне змішування здійснюється протягом приблизно від 5 до 30 хвилин, приблизно від 5 до 20 хвилин, приблизно від 5 до 15 хвилин, приблизно від 7 до 15 хвилин, приблизно від 7 до 12 хвилин або приблизно 10 хвилин за допомогою зсувного змішувача, такого як Ultra Turrax® T-50. Відповідно до іншого варіанта здійснення, зсувне змішування здійснюється у вбудованому зсувному змішувачі, такому як високозсувний триступінчастий змішувач DISPAX-REACTOR®, протягом менше, ніж приблизно однієї хвилини. Відповідно до визначених варіантів здійснення реакційна суміш, одержана на стадії (a), містить приблизно від 1 до 30 % води відносно сумарної маси реагентів. Відповідно до визначених варіантів здійснення, реакційна суміш, одержана на стадії (a), містить приблизно від 1 до 20 %, від 1 до 15 %, від 1 до 10 %, від 1 до 5 %, від 5 до 25 % або від 10 до 25 % води відносно сумарної маси реагентів. Відповідно до одного варіанта здійснення, реакційна суміш містить приблизно 1, 3, 5, 7, 10, 15, 17 або 20 % води відносно сумарної маси реагентів. Відповідно до визначених варіантів здійснення, спосіб, запропонований згідно з даним винаходом, зменшує вміст насичених сполук, зокрема вміст пальмітату в олії/жирі до рівня, що становить приблизно 15 % або менше, 10 % або менше, або 5 % або менше відносно сумарної маси олії/жиру. Відповідно до визначених варіантів здійснення, вміст насичених сполук, зокрема вміст пальмітату в олії/жирі зменшується до рівня, що становить приблизно 10, 7, 5, 4, 3, 2, 1 % або менше відносно сумарної маси олії/жиру. Відповідно до визначених варіантів здійснення, спосіб, запропонований згідно з даним винаходом, зменшує вміст насичених сполук, що включає, вміст пальмітату в олії/жирі до рівня, що становить приблизно від 0,5 до 20 %, від 3 до 15 %, від 3 до 10 %, від 3 до 7 %, від 3 до 5 %, від 2 до 10 %, від 2 до 7 %, від 2 до 5 %, від 1 до 15 %, від 1 до 12 %, від 1 до 10 %, від 1 до 8 %, від 1 до 7 % або 1-5 %, від 1 до 3 %, від 0,5 до 7 %, від 0,5 до 5 %, від 0,5 до 3 % або менше. У способах, запропонованих згідно з даним винаходом, можна використовувати будь-які кислоти, які підходять для використання в харчових продуктах. Зразкові кислоти являють собою, але не обмежуються цим, фосфорну кислоту, оцтову кислоту, лимонну кислоту, винну кислоту, бурштинову кислоту і їх суміш. Відповідно до одного варіанта здійснення, кислота являє собою лимонну кислоту. Зразкові основи для використання згідно з даним винаходом являють собою, але не обмежуються цим, гідроксид натрію і гідроксид калію. Відповідно до одного варіанта здійснення, фермент типу сатурази, що включає фермент типу пальмітази, додається в одну частину. Відповідно до одного варіанта здійснення, фермент типу сатурази, що включає фермент типу пальмітази, додається в множину частин. Відповідно до одного варіанта здійснення, фермент типу сатурази, що включає фермент типу пальмітази, додається в триацилгліциринове джерело при температурі, що становить приблизно від 15 до 50 °C, приблизно від 20 до 40 °C, приблизно від 22 до 30 °C або приблизно від 22 до 25 °C. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, пропоновані способи додатково включають стадію знесмолювання олії, яка являє собою водне знесмолювання, кислотне знесмолювання, або ферментативне знесмолювання. У способах згідно з даним 6 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 винаходом можна використовувати будь-який спосіб знесмолювання, відомий фахівцям у даній галузі техніки. Зразкові способи знесмолювання описують патент США № 4,049,686, патент США № 4698185, патент США № 5264367, патент США № 5532163, патент США № 6001640, патент США № 6103505, патент США № 6127137, патент США № 6143545, патент США № 6172248, патент США № 6548633, патент США № 7713727, патент США № 7226771, патент США № 7312062, патент США № 7494676, патент США № 8192782, патентна публікація США № 2008/0188322, патентна публікація США № 2009/0069587 і патентна публікація США № 2011/0136187, причому кожний з даних документів у всій своїй повноті включається в даний документ за допомогою посилання. Кількості ферментів типу сатурази, пальмітази, PLA і PLC, що використовуються в способах, запропонованих згідно з даним винаходом, залежать від використовуваних умов реакції, типів олії і типів ферменту. Відповідно до визначених варіантів здійснення, використовувана кількість ферменту становить від 10 до 20000 одиниць, від 20 до 10000 одиниць, від 50 до 5000 одиниць або від 100 до 2000 одиниць на 1 кг олії. Відповідно до одного варіанта здійснення, спосіб одержання низькопальмітинової масляної композиції включає: (a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу пальмітази в присутності олеату калію для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один пальмітиновий кислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, (b) змішування водного розчину лимонної кислоти для одержання значення рН, що становить менше, ніж приблизно 4, відповідно до одного варіанта здійснення, менше, ніж приблизно 2, (c) змішування водного розчину гідроксиду натрію для одержання суміші, в якій значення рН становить приблизно від 4 до 9, відповідно до одного варіанта здійснення, приблизно від 4,5 до 7, (d) змішування ферменту типу фосфоліпази, вибраного з PLA1, PLA2, PLC і сполучення PLA і PLC, для одержання суміші що включає знесмолену олію і водну фазу, (e) поділ знесмоленої олії і водної фази, (f) змішування знесмоленої олії з водним розчином лимонної кислоти для одержання суміші, що включає масляну фазу і водну фазу, де лимонна кислота присутня в кількості, достатній для перетворення олеату калію в олії у вільну олеїнову кислоту і цитратну сіль калію, і (g) поділ масляної фази, що включає низькопальмітинову масляну композицію, пальмітинову кислоту і вільну олеїнову кислоту. Відповідно до визначених варіантів здійснення, сепарована масляна фаза фракціонується для поділу пальмітинової кислоти і низькопальмітинової масляної композиції. Відповідно до визначених варіантів здійснення, сепарована масляна фаза охолоджується до температури, що становить від 0 до 5C, для тверднення пальмітинової кислоти. Отверджувана пальмітинова кислота відокремлюється, і виходить низькопальмітинова масляна композиція. Відповідно до визначених варіантів здійснення, низьконасичена масляна композиція спрямовується на наступні технологічні стадії, які відомі в техніці і включають Вибілювання або дезодорування, що можуть виявитися необхідними або бажаними, залежно від кінцевого використання, для якого призначається масляна композиція. Зразкові способи Зразковий спосіб ілюструє схему технологічного процесу на фіг. 1. Відповідно до зразкового способу, використовують приблизно 1000 кг неочищеної соєвої олії. Олію нагрівають приблизно до 70 °C і перемішують для гомогенізації в резервуар із перемішуванням. Якщо як вихідний матеріал використовується неочищена незнесмолена олія, у цю олію не додається лецитин. Якщо використовується олія з інших джерел, зокрема знесмолена олія, додають аж до приблизно 50 кг соєвого лецитину (від 0 до 5 мас. % відносно маси олії) приблизно при 70 °C, і одержують однорідну суміш у резервуарі з перемішуванням. Олія охолоджується до температури, що становить приблизно від 20 до 50 °C. Через масовий витратомір в олію перекачують приблизно 50 кг ферменту, що містить пальмітазу. Через масовий витратомір в олію перекачують приблизно від 10 до 50 кг води (від 1 до 5 мас. % відносно маси олії). Олію перекачують через високозсувний змішувач, що робить механічну емульсію води в олії, у реакційний резервуар 1. Олію перемішують протягом приблизно від 24 до 48 годин при температурі, що становить приблизно від 20 до 50 °C. Як емульгатор додають і перемішують приблизно від 30 до 50 кг олеату калію (від 3 до 5 мас. % відносно маси олії). Через масовий витратомір в олію перекачують приблизно 50 кг ферменту, що містить пальмітазу. Олію потім перекачують у реакційний резервуар 2 через другий високий зсувний змішувач, який виробляє механічну емульсію води в олії. 7 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Олію перемішують протягом приблизно від 24 до 72 годин при температурі, що становить від приблизно 25 до 40 °C. В олію додають приблизно 50 частин на мільйон Lecitase® Ultra (PLA1) (0,005 мас. % відносно маси олії) і/або приблизно 200 частин на мільйон Purifine® PLC (0,02 мас. % відносно маси олії). Олію перемішують протягом приблизно від 1 до 4 годин. Олію перекачують через теплообмінник приблизно при 85 °C, а потім її центрифугують. Легку фазу олії (від 1030 до 1050 кг), що містить одержані шляхом гідролізу пальмітинову кислоту й олеат калію, відокремлюють від важкої фази (від 130 до 200 кг), що містить вологі смоли і денатурований білок. Масляний шар охолоджують до температури, що становить приблизно від 0 до 5 °C, і повільно перемішують протягом приблизно 24 годин. Пальмітинову жирну кислоту залишають для тверднення, що забезпечує фракціонування пальмітинової кислоти. Необов'язково додають приблизно від 1 до 10 кг (0,1 до 1 мас. % відносно маси олії) діатомової землі, щоб сприяти фільтрації обробленої олії. Фільтрат (857 до 1008 кг), що містить низькопальмітинову олію й олеат калію, відокремлюють від осаду (від 40 до 160 кг), що містить пальмітинову кислоту і діатомову землю. Осад нагрівають приблизно до 100C і фільтрують, одержуючи фільтрат (від 37 до 137 кг), що містить пальмітинову кислоту. Збирають матеріал (від 1,3 до 13 кг), що залишився на фільтрі і являє собою діатомову землю. Обробка обробленої пальмітазою олії Перетворення мила в кислоту Описаний вище фільтрат, що містить низькопальмітинову олію й олеат калію, нагрівають до температури, що становить приблизно від 50 до 70C, у резервуарі з перемішуванням. Приблизно 50 % розчин лимонної кислоти (від 12 до 20 кг розчину 50 мас. %) перекачують в олію для перетворення мила, що містить олеат калію, в олеїнову кислоту. Відповідно до визначених варіантів здійснення, обробку кислотою для перетворення калієвого мила в жирну кислоту можна необов'язково здійснювати безпосередньо перед описаною вище стадією центрифугування перед охолоджуванням і відділенням пальмітинової жирної кислоти. Вибілювання Олію нагрівають приблизно в 60C у резервуарі з перемішуванням, куди у формі суспензії додають приблизно від 1 до 5 кг активованої кислотою вибілювальної землі (Tonsil Optimum FF або еквівалентної). Створюють вакуум, що становить приблизно 100 мбар (10 кПа), і олію нагрівають до температури, що становить приблизно від 90 до 120C, протягом приблизно 30 хвилин. Олію фільтрують, одержуючи масляну фракцію (від 851 до 1007 кг), що містить низькопальмітинову олію й олеїнову жирну кислоту, і тверду фракцію (від 1,3 до 6,5 кг), що містить відпрацьовану вибілювальну землю. Відповідно до визначених варіантів здійснення, відділення пальмітинової жирної кислоти можна здійснювати після стадії вибілювання перед стадією дезодорування. Дезодорування Масляну фракцію нагрівають приблизно до 250C при тиску, що становить від 0,5 до 3 мбар (від 50 до 300 Па), і приблизно від 0,1 до 3 мас. % (відносно маси олії) пари вводять протягом приблизно від 30 до 180 хвилин. Олію охолоджують приблизно до 100C, а потім додають приблизно від 1 до 25 частин на мільйон розчину 50 мас. % лимонної кислоти для утворення хелатних комплексів з будь-якими слідовими металами. Вакуум заповнюють азотом, щоб запобігти впливу повітря на олію. При випусканні олії з вакуумного устаткування олію фільтрують через сітку з розміром отворів 5 мкм, щоб відокремити хелатні комплекси металів. Олію утримують в атмосфері азоту. У результаті даного процесу одержують рафіновану, вибілену і дезодоровану низькопальмітинову олію (від 786 до 967,7 кг) і дезодорований дистилят (від 39 до 65 кг), що містить олеїнову жирну кислоту. Дистилят можна обробляти розчином приблизно 50 мас. % KOH, одержуючи олеат калію (від 10 до 20 кг) для повторного використання в технологічному процесі. Зразкові ферменти, які використовують для обробки Зразкові ферменти типу сатурази, зокрема пальмітази, і способи одержання цих ферментів описують патент США № 8153391 і патент США № 8357503, кожний з яких у всій своїй повноті включається в даний документ за допомогою посилання. Зразкові ферменти включають поліпептид, вибраний із групи, що складається з виділених, синтетичних і рекомбінантних поліпептидів, що виявляють активність сатурази, зокрема пальмітази, причому даний поліпептид: і) кодується нуклеїновою кислотою, що включає нуклеотидну послідовність, причому дана послідовність щонайменше на 85 % ідентична послідовності SEQ ID NO: 1 і містить зміни 1, 2, 3, 8 UA 114514 C2 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 або більше, або всіх нуклеотидних залишків, які представляють нижче таблиця A, таблиця B або таблиця C, де нуклеїнова кислота кодує щонайменше один поліпептид, що виявляє активність сатурази, зокрема пальмітази. 5 9 UA 114514 C2 10 UA 114514 C2 11 UA 114514 C2 12 UA 114514 C2 13 UA 114514 C2 5 10 ii) має послідовність, ідентичну щонайменше на 85 % послідовності SEQ ID NO: 2 в області щонайменше приблизно 100 амінокислотних залишків і містить зміни 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 або більше, або всіх амінокислотних залишків, що представляють вище таблиця A або таблиця B, або таблиця C iii) включає амінокислотну послідовність, що відповідає послідовності SEQ ID NO: 2, але також включає щонайменше одну зміну амінокислотних залишків D61A, D61E, R72E, R72K, E116A, E116Q, E116R, E116T, E116V, S133A, I151G, I151A, V163R, D164R або їх сполучення, або 14 UA 114514 C2 5 10 15 iv) включає амінокислотну послідовність, що відповідає послідовності SEQ ID NO: 2, але також включає щонайменше одну зміну амінокислотних залишків I20L, V62S, G77P, V83C, D88H, Y113G, E116T, E116G, H140K, K146S, I167S, L180E, E194M, A211Q, S212Y, G215C, G215V, G215W, A218H, A218S, V223A, A225M, A225Q або їх сполучення, або v) включає амінокислотну послідовність, що відповідає послідовності SEQ ID NO: 2, але також включає наступні зміни амінокислотних залишків: D61E, R72K, V83M, R85Y, V163R і R172H. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, використовувана поліпептидна послідовність кодується нуклеїновою кислотою, що включає нуклеотидну послідовність, яка ідентична щонайменше на 85 %, 88 %, 90 %, 95 % послідовності SEQ ID NO: 1 і містить зміни 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 або більше, або всіх нуклеотидних залишків, що представляють вище таблиця A, таблиця B або таблиця C. Відповідно до визначених варіантів здійснення даного винаходу, використовувана поліпептидна послідовність є ідентичною щонайменше на 85 %, 88 %, 90 %, 95 % послідовності SEQ ID NO: 2 і містить зміни 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 або більше, або всіх амінокислотних залишків, що представляють вище таблиця A, таблиця B або таблиця C. Вищезгадані нуклеотидні і поліпептидні послідовності являють собою наступні: Послідовність SEQ ID NO: 1: 20 Послідовність SEQ ID NO: 2 (кодується послідовністю SEQ ID NO: 2): Однобуквений код: 25 Трибуквений код: 15 UA 114514 C2 Послідовність SEQ ID NO: 3 5 Послідовність SEQ ID NO: 4 (кодується послідовністю SEQ ID NO: 3): Однобуквений код: 10 16 UA 114514 C2 Трибуквений код: 5 10 15 20 25 Відповідно до одного варіанта здійснення даного винаходу, для використання в даному способі пропонується фермент типу пальмітази, що має амінокислотну послідовність, що відповідає послідовності SEQ ID NO: 2, а також містить наступні зміни амінокислотних залишків: D61E, R72K, V83M, R85Y, V163R і R172H. Відповідно до одного варіанта здійснення даного винаходу, для використання в даному способі пропонується фермент типу пальмітази, що кодується нуклеїновою кислотою, що має нуклеотидну послідовність, що відповідає послідовності SEQ ID NO: 3. Відповідно до одного варіанта здійснення даного винаходу, для використання в даному способі пропонується фермент типу пальмітази, що має амінокислотну послідовність, що відповідає послідовності SEQ ID NO: 4. Відповідно до одного варіанта здійснення даного винаходу, для використання в даному способі пропонується фермент типу пальмітази, що має амінокислотну послідовність, що відповідає послідовності SEQ ID NO: 2, а також містить наступні зміни амінокислотних залишків: D61E, R72K, V83M, R85Y, V163R і R172H. Відповідно до одного варіанта здійснення даного винаходу, для використання в даному способі пропонується фермент типу пальмітази, що кодується нуклеїновою кислотою, що має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO: 3. Відповідно до одного варіанта здійснення даного винаходу, для використання в даному способі пропонується фермент типу пальмітази, що має амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 4. 17 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Різноманітні варіанти здійснення даного способу описані в наведених нижче прикладах. У кожному із представлених прикладів використовується зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Фермент PLA1 являв собою Lecitase® Ultra, і фермент PLC являв собою Purifine®. Приклад 1. Ферментативна обробка У даному прикладі використовували неочищену соєву олію, що має наступний склад: Вміст пальмітинової кислоти - 10,8 %. Фосфор - 567,7 частин на мільйон. Кальцій - 48,53 частин на мільйон. Магній - 45,14 частин на мільйон. Вільна жирна кислота - 0,43 %. Приблизно 165,3 кг неочищеної фільтрованої соєвої олії вміщували в резервуар із нержавіючої сталі. Вміст резервуара перемішували при 70 об/хв і 22,8 °C. Приблизно 6 кг композиції, що містить пальмітазу (2 кг води додавали в 3 пляшки, що містять 80 г порошкоподібного ферменту партії № LIP 29241-PK005). Олію перемішували протягом 15 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Вміст резервуара перемішували при 70 об/хв протягом 24 годин. Приблизно 9 кг олеату калію, одержаного від компанії Viva Corporation (Індія), додавали в резервуар, і перемішували протягом 10 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Ще 8 кг композиції, що містить одержану від компанії Verenium Corporation пальмітазу (партія № 29241-PK005) і приготована, як описано вище, додавали в резервуар і перемішували протягом 15 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Вміст резервуара перемішували протягом 48 годин. Додавали приблизно 165,3 г розчину 50 мас. % лимонної кислоти і перемішували протягом однієї години, а потім додавали 264 г розчину 10 мас. % гідроксиду натрію. Вміст ретельно перемішували. Додавали приблизно 8,25 г ферменту Lecitase® Uita PLA1 від компанії Novozyme і перемішували протягом приблизно 2 годин. Реакційну суміш нагрівали до 80 °C і центрифугували. Механічна емульсія розділялася на масляний і водний шари. На цій стадії проблеми поділу не спостерігалися (система містила приблизно 14 кг води, що становило більше, ніж 10 %). Аналіз зразка масляної фракції показав наступний склад: Вміст пальмітинової кислоти - 2,9 %. Фосфор - 59,43 частин на мільйон. Кальцій - 29,09 частин на мільйон. Магній - 16,49 частин на мільйон. Залізо - нижче межі виявлення. Приклад 2. Лужне рафінування Була зроблена спроба лужного рафінування масляного шару, одержаного, як зазначено вище. Масляний шар мав вміст вільних жирних кислот (ВЖК), що становить 12,4 %. У даному дослідженні було нейтралізовано тільки 2 % ВЖК. Масляний шар нагрівали приблизно до 80 °C у процесі перемішування. Додавали приблизно 7,52 кг розчину 10 мас. % гідроксиду натрію і повільно перемішували протягом 10 хвилин; неочікувано вийшла емульсія. Олію центрифугували. Однак олія, одержана з центрифуги, являла собою емульсію, що має консистенцію, яка нагадує майонез, і не розділялася на масляний і водний шари. Виявилося неможливим лужне рафінування обробленої пальмітазою олії. В емульсію додавали приблизно 20 л води і витримували протягом ночі в спробі поділу емульсії. Вважали, що через якийсь час відбудеться коалесценія молекул води в емульсії, яка розділиться на масляний і водний шари. Але ніякий поділ не спостерігався. Не маючи наміру обмежуватися якою-небудь визначеною теорією, вважали, що при додаванні гідроксиду натрію для зменшення вмісту вільних жирних кислот (ВЖК) утвориться дуже стійка емульсія води й олія. Приклад 3. Фізичне рафінування Оброблену пальмітазою олію, одержану в прикладі 1, піддавали фізичному рафінуванню після обробки кислотою. На даній стадії використовували приблизно 120 кг обробленої пальмітазою олії. В олію додавали приблизно 10 кг водного розчину 50 мас. % лимонної кислоти. Реакційну суміш перемішували протягом приблизно 30 хвилин. Водну і масляну фази розділяли шляхом центрифугування матеріалу при 80C. На даній стадії вміст вільних жирних кислот становив приблизно 19 %, а вміст мила становив приблизно 304 частин на мільйон. Приклад 4. Вибілювання і дезодорування Масляну фазу піддавали обробці на стадії вибілювання в такий спосіб: додавали 298 г TrySil® S615, 995 г BASF FF 105 і 500 г фільтруючої добавки. Суміш нагрівали до 105 °C при зниженому тиску, що становить 60 мбар (6 кпа), і перемішували протягом 30 хвилин у вибілювачі. Олію фільтрували через плитково-рамний фільтр. 18 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Вибілена олія мала вміст ВЖК, що становить приблизно 21,15 %, вміст мила становив 0 частин на мільйон, вміст фосфору становив 0 частин на мільйон, пероксидне число (ПЧ) становило 0,0, і вміст пальмітинової кислоти становив 3,7 %. Вибілену олію дезодорували шляхом нагрівання у вакуумі при 260 °C при обробці парою (3 % на годину) протягом 5 годин. Олію охолоджували до 100 °C, і вакуум заповнювали азотом. Аналіз дезодорованої олії показав наступні результати: ВЖК - 0,45 %. ПЧ - 0,00. Фосфор - 0 частин на мільйон. Пальмітинова кислота - 4,2 %. Приклад 5. Ферментативна обробка У даному прикладі використовували неочищену соєву олію, що має наступний склад: Вміст пальмітинової кислоти - 10,2 %. Фосфор - 681,4 частин на мільйон. Кальцій - 61,2 частин на мільйон. Магній - 64,2 частин на мільйон. Залізо - 0,59 частини на мільйон. Приблизно 127 кг неочищеної фільтрованої соєвої олії вміщували в резервуар з нержавіючої сталі. Вміст резервуара перемішували при 70 об/хв і 31 °C. Приблизно 8 кг композиції, що містить пальмітазу (2 кг води додавали в 4 пляшки, що містять 80 г ліофілізованого порошкоподібного ферменту партії № 060512). Олію перемішували протягом 15 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Uhra Turrax® T-50. Вміст резервуара перемішували при 70 об/хв і закривали. Зразок олії відбирали після 45-годинної реакції. Оскільки був відсутній хімічно чистий олеат калію для дослідження, порцію калієвого мила виготовляли на місці, додаючи 1,62 кг гідроксиду калію, розчиненого в 1,47 кг води. Розчин гідроксиду калію додавали дуже повільно до 8,26 кг рафінованої і вибіленої соєвої олії. Після того, як весь лужний розчин був доданий в олію, лужну суміш перемішували протягом 30 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Температура підвищувалася від кімнатної температури до приблизно 71 °C. Коли суміш охолоджувалася до кімнатної температури, калієве мило додавали в олію приблизно через 6 годин після відбору 45годинного зразка. Зразок олії відбирали перед додаванням калієвого мила. Приблизно 10 кг композиції, яка містить пальмітазу (2 кг води додавали в 4 пляшки, що містять 80 г ліофілізованого порошкоподібного ферменту партії № 060512). Олію перемішували протягом 15 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Вміст резервуара перемішували при 70 об/хв і закривали. Додаткові зразки відбирали через 70 годин і 95 годин після вихідного додавання ферменту типу пальмітази. Додавали приблизно 9 г ферменту Lecitase® Ultra (партія № LY 05035) і приблизно 26 г ферменту Purifine® PLC (партія № 190AU008A1) і перемішували зсувним змішувачем протягом 15 хвилин. Додавали приблизно 3,81 кг води і перемішували зсувним змішувачем протягом 15 хвилин. Олію перемішували при температурі від 45 до 47 °C протягом двох годин. В олію додавали приблизно 4 кг розчину 50 мас. % лимонної кислоти і перемішували зсувним змішувачем протягом 5 хвилин. Кислоту додавали для перетворення калієвого мила із соєвої олії в жирні кислоти. Олію потім нагрівали до 85 °C і центрифугували. Оскільки олія містила мила (304 частини на мільйон), цю олію промивали 5 мас. % гарячої води для видалення залишкового мила. Гарячу олію (приблизно при 85 °C) потім повільно охолоджували шляхом перемішування при 70 об/хв у резервуарі з нержавіючої сталі з оболонкою водного охолодження (4,5 °C). Резервуар витримували для охолоджування протягом ночі в процесі перемішування. Приблизно через 14 годин температура олії в резервуарі становила 8 °C. У резервуар при перемішуванні додавали приблизно 1,8 кг фільтруючої добавки і витримували до одержання однорідної суміші протягом приблизно 30 хвилин. Охолоджену олію потім фільтрували з використанням плитково-рамного фільтра для відділення твердої пальмітинової кислоти. Після фільтрації одержували приблизно 72 кг обробленої пальмітазою олії. 55 19 UA 114514 C2 Таблиця 1 Тривалість реакції (годин) 0 45 51 70 95 5 10 15 Вміст пальмітинової кислоти (%) 10,2 3,7 2,6 2,8 4,0 Як чітко показують дані в таблиці 1, одержане на місці калієве мило не було нейтральним, і після його додавання надлишок гідроксиду калію дезактивував пальмітазу. Приклад 6. Ферментативна обробка У резервуарі 72 кг обробленої пальмітазою соєвої олії, одержаної в прикладі 4, нагрівали до температури від 70 до 72 °C. В олію додавали 6 кг олеату калію з партії № POT/115, одержаної від компанії Viva Corporation (Індія). Додавали 1,0 кг соєвого лецитину 3FUB (партія № T 180007025 від компанії Bunge), і суміш охолоджували до 23 °C у процесі перемішування при 70 об/хв. В олію додавали приблизно 6,6 кг композиції, яка містить пальмітазу (2,2 кг води додавали в 3 пляшки, що містять 100 г ліофілізованого порошкоподібного ферменту партії № LIP 29241PK05). Олію перемішували протягом 15 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Вміст резервуара перемішували при 70 об/хв і закривали. Зразки відбирали в процесі реакції через 24, 48 і 72 годин і аналізували на вміст пальмітинової кислоти. Результати представлені в таблиці 2. Таблиця 2 Тривалість реакції (годин) 0 24 48 72 20 25 30 35 40 Вміст пальмітинової кислоти (%) 4,0 1,6 1,6 1,1 Олію нагрівали до температури від 40 до 45 °C при перемішуванні. В олію додавали приблизно 36 г розчину 50 мас. % лимонної кислоти і перемішували зсувним змішувачем протягом 10 хвилин. В олію додавали 50,1 мл чотиринормального розчину гідроксиду натрію, і суміш перемішували зсувним змішувачем протягом 10 хвилин. Додавали 3 г Lecitase® Ultra (партія № LYN05035), 12 г Purifine® PLC (партія № 190AU015A1) і 1 кг води, а потім перемішували зсувним змішувачем протягом 10 хвилин. Резервуар закривали, і перемішування здійснювали протягом 4 годин, щоб фосфоліпази могли розкласти фосфоліпіди. Додавали 1,2 кг розчину 50 мас. % лимонної кислоти, щоб перетворити олеат калію в жирну кислоту. Олію нагрівали до 85C і центрифугували. Механічну емульсію розділяли на масляний і водний шари. Приклад 7. Ферментативна обробка У даному прикладі використовували неочищену соєву олію, що має наступний склад: Вміст пальмітинової кислоти - 10,8 %. Фосфор - 767,8 частин на мільйон. Кальцій -71,2 частин на мільйон. Магній - 74,9 частин на мільйон. Залізо - 0,7 частин на мільйон. Вільна жирна кислота - 0,89 %. Приблизно 120 кг неочищеної фільтрованої соєвої олії додавали в резервуар з нержавіючої сталі. Олію нагрівали до 76 °C у процесі перемішування при 70 об/хв, а потім охолоджували до 23 °C. У резервуар додавали приблизно 6 кг композиції, яка містить пальмітазу (2 кг води додавали в 3 пляшки, що містять 100 г ліофілізваного порошкоподібного ферменту партії № LIP29241-PK05). Олію перемішували протягом 15 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Вміст резервуара перемішували при 70 об/хв і закривали. Зразки олії відбирали через 24, 48 і 72 години після вихідного додавання пальмітази й аналізували на вміст пальмітинової кислоти. 20 UA 114514 C2 5 10 15 В олію додавали 1,0 кг соєвого лецитину 3FUB (партія № T180007025 від компанії Bunge) і 6 кг олеату калію з партії № POT/115, одержаної від компанії Viva Corporation (Індія). Суміш перемішували протягом 15 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax®. Приблизно 6 кг композиції, яка містить пальмітазу (2 кг води додавали в 3 пляшки, що містять 100 г ліофілізованого порошкоподібного ферменту партії № LIP 29241PK05). Олію перемішували протягом 15 хвилин, використовуючи зсувний змішувач Ultra Turrax® T-50. Вміст резервуара перемішували при 70 об/хв і закривали. Зразки олії відбирали через 96 і 144 години після вихідного додавання пальмітази. Олію нагрівали приблизно до 45 °C. В олію додавали приблизно 60 г розчину 50 мас. % лимонної кислоти і перемішували зсувним змішувачем протягом 10 хвилин. В олію додавали 100,2 мл чотиринормального розчину гідроксиду натрію, і суміш перемішували зсувним змішувачем протягом 10 хвилин. Додавали 6 г ферменту Lecitase® Ultra (партія № LYN05035), 24 г ферменту Purifine® PLC (партія № 190AU015A1) і 2 кг води, а потім перемішували зсувним змішувачем протягом 10 хвилин. Резервуар закривали, і перемішування здійснювали протягом 4 годин, щоб фосфоліпази могли розкласти фосфоліпіди. Додавали 2,4 кг розчину 50 мас. % лимонної кислоти для перетворення олеату калію в жирну кислоту. Олію нагрівали до 85 °C і центрифугували. Механічна емульсія розділялася на масляний і водний шари. Масляний шар аналізували на вміст пальмітинової кислоти. Таблиця 3 Тривалість реакції (годин) 0 24 48 72 96 144 Вміст пальмітинової кислоти (%) 10,8 5,7 5,1 5,1 2,5 1,9 20 25 30 35 Приклад 8. Відділення пальмітинової жирної кислоти Оброблену пальмітазою олію, одержану в прикладах 5 і 6, об'єднували для відділення пальмітинової кислоти з використанням сухого фракціонування. Суміш олії і жирної кислоти містила всього 9,1 % пальмітинової кислоти. Олію нагрівали до 80 °C при перемішуванні, щоб повністю перевести всю олію в рідкий стан. Олію вміщували в резервуар MoBulizer™. Олію ізотермічно охолоджували приблизно до 10 °C охолодженою приблизно до 10 °C водою і витримували протягом 8 годин, щоб забезпечити утворення кристалів (повна тривалість кристалізації становила 20,3 години). Олію потім фільтрували, використовуючи лабораторний фільтр L-Frac™. Тиск, що досягається в процесі фільтрація, становив 6 бар (0,6 МПа). Одержували олеїнову фракцію або рідку олію, де залишковий вміст пальмітинової кислоти в суміші становив 3,9 % (зокрема приблизно 1,5 % пальмітинової кислоти, зв'язаної гліцерином, і 2,4 % вільної пальмітинової кислоти). Також одержували стеаринову фракцію або тверду речовину, де вміст пальмітинової кислоти становив приблизно 33 %. Олію можна потім піддавати вибілюванню і фізичному рафінуванню для відділення залишкових жирних кислот. Хоча зразкові варіанти здійснення способу викладені в даному документі, інші варіанти здійснення, що передбачають даний спосіб, повинні бути легко зрозумілими для фахівців в даній галузі техніки, і передбачається, що дана заявка і формула даного винаходу поширюються на всі такі варіанти здійснення і їх еквіваленти. 21 UA 114514 C2 22 UA 114514 C2 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 1. Спосіб одержання низьконасиченої олійної композиції, який включає 23 UA 114514 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу сатурази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один насичений жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, b) змішування водного розчину кислоти з емульсією для одержання суміші, де кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, і c) поділ суміші для одержання олійної фази і водної фази, де олійна фаза являє собою низьконасичену олійну композицію. 2. Спосіб одержання низьконасиченої олійної композиції, який включає: a) змішування триацилгліцеринового джерела з водним розчином ферменту типу сатурази в присутності емульгатора для одержання емульсії, де триацилгліцерин включає щонайменше один насичений жирнокислотний залишок і щонайменше один ненасичений жирнокислотний залишок, і емульгатор включає сіль лужного металу і ненасиченої жирної кислоти, b) змішування водного розчину кислоти з емульсією для одержання значення рН, що становить менше ніж приблизно 4, c) змішування водного розчину основи для одержання суміші, в якій значення рН становить приблизно від 4 до 9, d) змішування ферменту типу фосфоліпази, вибраного з PLA1, PLA2, PLC і їх сполучення, із сумішшю, одержаною на стадії (с), для одержання суміші, що включає знесмолену олію і водну фазу, e) поділ знесмоленої олії і водної фази для одержання сепарованої знесмоленої олії, f) змішування сепарованої знесмоленої олії з водним розчином кислоти для одержання суміші, яка включає олійну фазу і водну фазу, де кислота присутня в кількості, достатній для перетворення емульгатора у вільну ненасичену жирну кислоту і сіль, і g) відділення олійної фази від суміші, одержаної на стадії (f), де олійна фаза являє собою низьконасичену олійну композицію. 3. Спосіб за п. 1 або 2, в якому триацилгліцерин включає щонайменше один пальмітиновий кислотний залишок. 4. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3, в якому фермент типу сатурази включає фермент типу пальмітази. 5. Спосіб за будь-яким з пп. 1-4, в якому фермент типу сатурази (і) кодується нуклеотидною послідовністю, що включає послідовність SEQ ID NO: 3, або (іі) включає амінокислотну послідовність, що являє собою послідовність SEQ ID NO: 4. 6. Спосіб за будь-яким з пп. 1-4, в якому фермент типу сатурази кодується нуклеотидною послідовністю, що включає послідовність SEQ ID NO: 3. 7. Спосіб за будь-яким з пп. 1-4, в якому фермент типу сатурази включає амінокислотну послідовність, що являє собою послідовність SEQ ID NO: 4. 8. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, в якому олія, що являє собою низьконасичену олійну композицію, піддається фракціонуванню для поділу вільної насиченої жирної кислоти і низьконасиченої олії. 9. Спосіб за п. 8, в якому фракціонування здійснюється за допомогою охолоджування олії до температури, що становить від -20 до 20 °С, для тверднення вільної насиченої жирної кислоти. 10. Спосіб за п. 8, в якому фракціонування здійснюється за допомогою охолоджування олії до температури, що становить від -10 до 10 °С, для тверднення вільної насиченої жирної кислоти. 11. Спосіб за п. 2, в якому кількість кислоти на стадії (b) є достатньою для одержання значення рН, що становить приблизно від 1 до 4. 12. Спосіб за п. 2, в якому кількість основи на стадії (с) є достатньою для одержання значення рН, що становить приблизно від 4,5 до 7. 13. Спосіб за будь-яким з пп. 1-12, в якому триацилгліцеринове джерело включає водоростеву олію, рослинну олію або тваринне масло. 14. Спосіб за будь-яким з пп. 1-13, в якому триацилгліцеринове джерело включає соєву олію. 15. Спосіб за будь-яким з пп. 1-14, в якому емульгатор включає олеат калію, олеат натрію або їх суміш. 16. Спосіб за будь-яким з пп. 1-15, в якому емульгатор являє собою олеат калію. 17. Спосіб за будь-яким з пп. 1-16, в якому як кислота присутня фосфорна кислота, оцтова кислота, лимонна кислота, винна кислота, бурштинова кислота або їх суміш. 18. Спосіб за будь-яким з пп. 1-17, в якому основа являє собою гідроксид натрію, гідроксид калію або їх суміш. 24 UA 114514 C2 19. Спосіб за будь-яким з пп. 1-18, в якому змішування ферменту типу сатурази з триацилгліцериновим джерелом здійснюється при температурі, що становить приблизно від 20 до 50 °С. Комп’ютерна верстка М. Мацело Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 25