Штам lactobacillus casei imb b-7280 – індуктор “пізнього” інтерферону та активатор макрофагів

Штам Lactobacillus casei ІMB B-7280 - індуктор "пізнього" інтерферону та активатор макрофагів. Винахід відноситься до біотехнології, а саме до отримання нового штаму лактобактерій, який є індуктором ендогенного інтерферону та імуномодулятором. Визначення імуномодулювальних властивостей лактобактерій, виділених із шлунковокишкового тракту, є одним із найважливіших критеріїв пошуку нових пробіотиків для цілеспрямованої імунокорекції у хворих із різними нозологічними формами хвороб, в т.ч. інфекційно-запальними, вірусними та онкологічними патологіями. Лактобактерії із імуномодулювальними властивостями мають вплив на продукцію різних опозиційних груп цитокінів - про- та протизапальних, а також цитокінів Тh1- та Тh2-типу. Саме від балансу цим цитокінів залежить кооперативна взаємодія між різними типами імунних клітин та між патогенами та клітинами макроорганізму, що визначає характер розвитку імунної відповіді та завершення патологічного процесу. Запропонований штам Lacbacillus casei 1MB В7280 - впливає на продукцію ендогенного інтерферону в організмі експериментальних тварин та має імуномодулювальні властивості. Він виділений самостійно в лабораторних умовах із асоційованої культури під час лабораторних досліджень ферментованого біологічного матеріалу, знаходиться в колекції живих культур Інституту мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАНУ. На Україні потреби у штамах лактобактерій із імуномодулювальними властивостями задовольняються переважно за рахунок штамів лактобактерій, які входять до складу пробіотичних препаратів закордонного походження. На сьогодні відомий штам Lactobacillus case Shirota (Yakult Honsha Co., Японія), який у низьких тирах індукує утворення інтерферону, але не вивчено його вплив на функціональну активність макрофагів [1]. Запропонований нами штам Lacbacillus casei 1MB В-7280 має виразну інтерфероногенну активність та активує макрофаги. Культурально-морфологічні властивості Клітини нерухомі, грампозитивні, спор не утворюють. Штам вирощують при 38,0±1,0°С протягом 18-24год. на середовищі МРС або посівних (19) UA (11) 93133 (13) (21) a200906963 (22) 03.07.2009 (24) 10.01.2011 (46) 10.01.2011, Бюл.№ 1, 2011 р. (72) СПІВАК МИКОЛА ЯКОВИЧ, ШИНКАРЕНКО ЛЮБОВ МИКОЛАЇВНА, ПІДГОРСЬКИЙ ВАЛЕНТИН СТЕПАНОВИЧ, ГОРЧАКОВ ВОЛОДИМИР ЮРІЄВИЧ, СТАРОВОЙТОВА СВІТЛАНА ОЛЕКСАНДРІВНА, ЛАЗАРЕНКО ЛЮДМИЛА МИКОЛАЇВНА, ТИМОШОК НАТАЛІЯ ОЛЕКСАНДРІВНА (73) ІНСТИТУТ МІКРОБІОЛОГІЇ І ВІРУСОЛОГІЇ ІМ. Д.К. ЗАБОЛОТНОГО НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ (56) US A1 20030113306, 19.06.2003 Kuwabara M, Kosaka T, Tanaka S, Ikeda T, Hayashi K, Koide F.Effect of Lactobacillus casei: formation of interferon and macrophage activating factor in mice in C2 1 3 середовищах №1,2 або на капустяному середовищі. Склад середовища МРС: пептон - 10г/л, м'ясна вода - 100мл, дріжджовий екстракт - 10г/л, глюкоза - 20г/л, K2НРО4 - 2г/л, CH3COONa - 5г/л, амоній лимоннокислий - 2г/л, MgSO4 - 0,2г/л, MnSO4 0,05г/л, твин-80 - 1мл, вода дистильована - до 1л. РН стерилізації дорівнює 6,6-6,8 (після стерилізації - 6,2-6,6). Для отримання більш щільного середовища МРС добавляють 2% агару. Можливо вирощувати штам на середовищі без твину-80. Модифіковане середовище МРС: в 200мл дистильованої води розчиняють 0,05г MnSO4, 0,2г MgSO4, 0,2г цистеїну, 2г K2НРО4, 2г цитрату амонію, 5г CH3COONa, 20г глюкози, 10г пептону. Добавляють також 1мл твину-80 (попередньо розчиняють окремо в невеликій кількості гарячої дистильованої води), 50мл дріжджового автолізату, по 100мл екстракту печінки та м'ясного екстракту. Об'єм рідини доводять дистильованої водою до 500мл та добавляють 500мл гідролізованого молока, рН дорівнює 6,2-6,8. Середовище фільтрують та стерилізують. Склад посівного середовища №1 (г/л): ферментаційний гідролізат харчових дріжджів - 100мг/мл NH2+; сахароза - 10,0; CH3COONa - 7,5; K2НРО4 3,0; MgSO4 - 0,5; рН середовища до стерилізування дорівнює 6,5-6,8, дистильована вода добавляється до 1л. Склад посівного середовища №2 (г/л): ферментаційний гідролізат соєвого шроту або муки -1л; + NH2 - 0,5мг/мл; дріжджовий екстракт -2,0; NaCl 3,0; K2НРО4 - 2,2; KН2РО4 - 1,7; MgSO4 - 0,12; глюкоза - 5,0; рН дорівнює 6,7-6,8 (до стерилізації). Склад капустяного середовища - 200г ретельно подрібненої білокачанної капусти кип'ятять протягом 10хв. в 1л водопровідної-води, проціджують через подвійний шар марлі, фільтрують через складчастий фільтр, добавляють 2% глюкози та 1% пептону. Фізіолого-біохімічні властивості Штам вирощується при 38±1°С протягом 2448год. на поживному рідкому середовищі МРС. Факультативний анаероб, не містить каталази. Зберігає життєздатність на середовищах з широким діапазоном рН від 1,0 до 8,5; Оптимальним рН для початку росту є 5,5-6,5. Зберігає життєздатність на середовищах у присутності жовчі, холестерину, шлункового соку, ферментів травлення, фенолу. Глюкозу зброджує без утворення вуглекислого газу, на бульйоні з 2% глюкози накопичує молочну кислоту. Зброджує широкий спектр вуглеводів і спиртів: целобіозу, фруктозу, галактозу, глюкозу, глюконат натрію, лактозу, мальтозу, манозу, манітол, рамнозу, рибозу, цукрозу, трегалозу, саліцин. Не зброджує: арабінозу, мелібіозу, рафінозу, крохмаль, ксилозу. Штам є непатогенним. Відношення до кисню: факультативний анаероб. Відношення до температури: оптимальна температура для росту 38±1°С. 93133 4 Штам довготривало зберігається (2 роки і більше) в сублімованому стані в запаяних ампулах. Захисне середовище під час ліофільного висушування: сахароза 10%, желатин 1%, рН 7,0±0,2. Активність штаму Інтерфероногенні та імуномодулювальні властивості Встановлено, що запропонований штам має імуномодулювальні властивості: впливає на продукцію ендогенного інтерферону та функціональну активність макрофагів. Після введення запропонованого штаму інтактним мишам спостерігалась стимуляція продукції «пізнього» інтерферону: концентрація сироваткового інтерферону не змінювалась порівняно з показниками контролю через 6год. (5,00±0,09 Iog2 Од/мл; у контролі 5,30±0,90 log2 Од/мл; Р>0,05) та на 1 добу (5,30±0,07 log2 Од/мл; Р>0,05), однак підвищувалась на 3 (6,30±0,01 log2 Од/м; Р