Спосіб виготовлення препарату крові “гематон” для тварин

Спосіб виготовлення препарату крові для тварин, що включає стабілізацію свіжоодержаної крові 3 34031 Недоліками способу є обмежене використання, як сировини для препарату, крові великої рогатої худоби з причини дотримання заходів профілактики губчастої форми енцефалопатії й інших захворювань [Інструкція щодо діагностики, профілактики та боротьби з губчастоподібною енцефалопатією великої рогатої худоби / П.І.Вербицький, В.М.Горжеєв, О.О.Кучерявенко та ін. - К., 2002 7с.]; нетривалий термін зберігання рідкої форми препарату (до 30 днів при температурі +2°-+4°С) та застосування такої крові шляхом ауто чи гомогемотерапії. Найбільш близьким по суті до способу, що заявляється, є спосіб виготовлення рідкого препарату гетерогенної крові, позбавленої сенсибілізуючих властивостей [Деклараційний патент №12585 А61М 1/38. - Бюл. №2. 15.02.2006]. Заявлений спосіб і найближчий аналог містять спільні суттєві ознаки: спосіб включає стабілізацію свіжоодержаної крові коня глюкозо-цитратним розчином "Глюгіцир" у співвідношенні 1:4, активацію біологічних властивостей крові витримуванням в холодильнику при +2-+4°С протягом однієї доби, зміну структури білків крові УФ-опромінюванням і фасування одержаного препарату у стерильний посуд. Одержана рідка форма препарату зберігається протягом 30 діб при +2-+4°С. Недоліком препарату є недостатній термін зберігання препарату, незручність транспортування і застосування. Заявлений ними спосіб виготовлення препарату крові «Гематон» усуває недоліки найближчого аналога і забезпечує отримання сухого препарату гетерогенної крові із усуненою сенсибілізаційною властивістю і терміном зберігання 1 рік, який має терапевтичну ефективність за використання, як методу неспецифічної патогенетичної терапії, стимулювання механізмів неспецифічного захисту, клітинного і гуморального імунітету при лікуванні і профілактиці незаразних та інфекційних захворювань тварин. В основу корисної моделі покладено завдання розробити ефективний і доступний, економічно вигідний і зручний у використанні спосіб отримання сухого препарату гетерогенної крові «Гематон», ефективного при використанні, з тривалим терміном зберігання, зручного для транспортування. Технічний результат досягають тим, що опромінену УФ-променями кров розфасовують по 50мл у стерильні флакони ємністю 250мл і висушують шляхом сублімації, закривають гумовими пробками з алюмінієвими ковпачками, завальцьовують, маркують наклеюванням етикеток та зберігають до використання протягом 1 року. Препарат представляє собою суху пористу масу світло-коричневого кольору, що розчиняється в 0,9% розчині хлориду натрію. Таким чином, використовуючи кров коня (жеребця) як універсального донора, досягається умова по дотриманню епізоотичних заходів щодо профілактики повільних пріонних інфекцій, і в першу чергу, губчастої форми енцефалопатії великої рогатої худоби. Застосування глюкозо-цитратного розчину "Глюгіцир", який містить в своєму складі натрію гідроцитрату (двозаміщений) для ін'єкцій 4 20г, глюкози (в перерахунку на безводну) - 30г, води для ін'єкцій до 1л, у співвідношенні 1:4, забезпечує стабілізацію крові, що готується до опромінювання та ліофілізації. Стабілізація відбувається завдяки взаємодії цитрату з вільними іонами кальцію крові, в результаті чого не утворюється тромбопластин і затримується перехід протромбіну у тромбін. Присутність глюкози продовжує термін стабілізації крові, сприяє консервуванню формених елементів крові, не допускає денатурації білків при висушуванні та є необхідною для водної розчинності сухого препарату. Довготривалим (30хв.) ультрафіолетовим опромінюванням за використання ртутнокварцової лампи ДРТ-230 вмонтованої у скляну колбу, яка з'єднана замкненою системою трубок з двома апаратами Боброва, досягають отримання кров'ю біологічно активних властивостей, стерильності та втрати нею анафілактогенності [Мисак А.Р. Завірюха B.I., Мисак Х.А. Пристрій для ультрафіолетового опромінювання біологічних рідин. Деклараційний патент №13639 A61N 5/00. - Бюл. №4. 17.04.2006]. В результаті ліофільного висушування рідкої форми препарату в максимальній мірі зберігається вихідний об'єм й початкові властивості опроміненої крові і в першу чергу специфічні властивості білків, а також полегшуються умови зберігання, транспортування та застосування препарату. При проведенні патентно-інформаційного пошуку авторами і заявником знайдено технічне рішення, в якому є ряд суттєви х ознак, спільних із заявленим, а саме: спосіб включає стабілізацію свіжоодержаної крові глюкозо-цитратним розчином «Глюгіцир» у співвідношенні 1:4, активацію біологічних властивостей крові витримуванням в холодильнику при +2-+4°С протягом однієї доби, зміну структури білків крові УФ-опромінюванням та фасування препарату в стерильний посуд [Мисак А.Р. Завірюха B.I., Крупник Я.Г. Спосіб усунення сенсибілізуючої властивості крові. Деклараційний патент №12585 А61М1/38. - Бюл. №2. 15.02.2006]. Однак наявність зазначених, спільних із найближчим аналогом ознак, недостатня для отримання технічного результату, який забезпечує заявлений спосіб. В джерелах патентної і науково-технічної інформації не знайдено технічних рішень, в яких були б описані відомості про ознаки, що відрізняють заявлений спосіб від найближчого аналога і забезпечують досягнення технічного результату: опромінену УФ-променями кров розфасовують по 50мл у стерильні флакони ємністю 250мл і висушують шля хом сублімації, закривають гумовими пробками з алюмінієвими ковпачками, завальцьовують, маркують наклеюванням етикеток та зберігають до використання протягом 1 року. Заявлена корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема ветеринарної фармакології, а саме до способів виготовлення препаратів крові для здійснення неспецифічної терапії, зокрема застосування гетерогенної крові у тварин з лікувальною та стимулюючою метою. Спосіб може бути використаний на біофабриках і в лабораторіях установ ветеринарної меди 5 34031 цини з різними формами власності, для одержання препаратів крові, що не спричиняють явищ анафілактичного шоку в тварин при парентеральному введенні і забезпечує стимулювання механізмів неспецифічного захисту, клітинного і гуморального імунітету при лікуванні і профілактиці незаразних та інфекційних захворювань тварин. Заявлений спосіб здійснюється наступним чином: із яремної вени здорового коня-донора беруть кров у стерильний апарат Боброва з глюкозоцитратним розчином "Глюгіцир" у співвідношенні 1:4. З метою збільшення біологічно активної (стимулюючої) дії кров витримують протягом доби в холодильнику при температурі +2-+4°С, після чого піддають опроміненню. Для опромінення апарат Боброва із стабілізованою кров'ю з допомогою гумової трубки по системі реципієнта під'єднують до вхідного (нижнього) патрубка колби із вмонтованою лампою ДРТ-230. Другий апарат Боброва під'єднують аналогічно до протилежного патрубка і розміщують нижче рівня колби. Після цього обидва апарати повертають дном до верху. За принципом сполучених посудин кров із вище розміщеного апарата, омиваючи лампу у колбі, протікає у по 6 рожній апарат Боброва. В момент повного заповнення колби кров'ю вмикають живлення опромінювача ОКН-11М і розпочинають відлік часу опромінення. Перетікання крові із одного апарата Боброва в інший і назад вважається одним циклом опромінення. Періодична зміна положення апаратів Боброва дозволяє проводити декілька (8-10 і більше) циклів, тобто здійснювати тривале опромінення крові УФ променями впродовж 30хв. Для отримання сухого препарату опромінену кров розфасовують по 50мл у стерильні флакони (ємністю 250мл) і висушують сублімаційним способом. Після ліофілізації флакони із висушеною кров'ю закривають гумовими корками і алюмінієвими пробками, які завальцьовують. Для маркування на флакони наклеюють етикетки із назвою препарату «Гематон». Препарат представляє собою суху пористу масу світло-коричневого кольору, що розчиняється в 0,9% розчині хлориді натрію. Термін зберігання сухо го препарату становить 1 рік. Ефективність заявленого способу і його переваги перед найближчим аналогом підтверджені прикладом конкретного виконання способу. Таблиця 1 Основні технологічні прийоми, застосовані для виготовлення препарату крові Препарат крові Технологічні прийоми 1 Стерильний відбір крові коня 2 Стабілізація крові Збільшення біологічно активної (стимулюю3 чої) дії крові Зміна структури білків крові під дією УФ 4 опромінення, тривалістю Фасування опроміненої крові в стерильний 5 посуд 6 Висушування сублімацією 7 Коркування і вальцювання корків 8 Маркування препарату 9 Доза введення мл/кг маси тіла Рідкий препарат крові Сухий препарат крові (найближчий аналог) «Гематон» + + Глюкозо-цитратний розчин «Глюгіцир» Витримування в холодильнику при температурі +2 - +4°С протягом доби 30хв Ємністю 250мл 2,0мл/кг рідкого препарату 30хв По 50мл у флакони ємністю 250мл + + Наклеювання етикеток «Гематон» 2мл/кг, після розведення 0,9% розчином NaCI Результати спостережень - збудження; - пригнічення; - загибель тварин В умовах лабораторії кафедри хірургії та клініки дрібних домашніх тварин Львівського національного університету ветеринарної медицини та біотехнологій імені С.З.Гжицького проведено дослід по вивченню ефективності заявленого способу. Для досліду відібрано 20 морських свинок вагою 500-550г, аналогів за віком і вагою. Для сенсибілізації, за 14 днів до експерименту, усім морським свинкам під шкіру в ділянці черева було введено по 0,2мл нормальної кінської сироватки крові. Всі підібрані тварин були поділені на 2 групи по 10 голів у кожній. Не спостерігалось Не спостерігалось І група тварин - була піддана парентеральному введенню рідкого препарату гетерогенної крові (найближчий аналог); II група тварин - піддавалася введенню гетерогенної крові виготовленої за новим способом. Перед застосуванням сухий препарат розчиняли 0,9% розчином NaCl або 0,5% розчином новокаїну в кількості, що відповідає початковому об'єму крові. Наприклад: у флакон, в якому до ліофільного висушування знаходилось 50мл цільної крові, додавалось 50мл розчинника. Через 1-2 хвилини після легкого похитування флакона, кров готова для парентерального використання. 7 34031 Морським свинкам обох груп препарати гетерогенної крові вводили у вену сте гна в однаковій дозі - із загального розрахунку 2мл/кг маси тіла. Спостереження за тваринами проводили протягом 24год. За результатами проведених досліджень у морських свинок, як першої так і другої груп ознаки анафілактичного шоку були відсутніми: не проявлялися збудження, почісування лапками носа, чхання, посмикування тіла. Не відмічалося жодних змін загального стану та поведінки тварин і в подальших спостереженнях. За час проведення досліду усі морські свинки залишилися живими. Підсумовуючи отримані результати досліджень можна стверджувати, що в порівняльному Комп’ютерна в ерстка М. Ломалова 8 аспекті препарат «Гематон» виготовлений за новим способом та рідкий препарат гетерогенної крові (найближчий аналог) характеризуються ідентичними терапевтичними властивостями. Проте, заявлений ними спосіб виготовлення сухого препарату гетерогенної крові усуває недоліки найближчого аналога, оскільки забезпечує отримання препарату гетерогенної крові з тривалим терміном зберігання, зручного для транспортування, вигідного і зручного у застосуванні, що є важливим моментом для використання препарату «Гематон» у повсякденній практичній роботі лікарів ветеринарної медицини. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601