Спосіб визначення вмісту поліфенолів в плодовій сировині та продуктах її переробки

Спосіб визначення вмісту поліфенолів в плодовій сировині та продуктах її переробки, що включає відбір проби продукту, взаємодію її з органічними реагентами, приготування стандартних розчинів, вимірювання оптичної густини проби і стандартних розчинів, який відрізняється тим, що вимірюють оптичну густину стандартного розчину для встановлення коефіцієнта екстинкції, за допомогою якого визначають концентрацію вмісту по ліфенолів, причому вимірювання оптичної густини здійснюють при довжині хвилі 670 нм, та розраховують за формулою: m-V, X - масова частка поліфенолів у міліграмах на 100г продукту; Е с р - середня величина екстинкції; Д п р - оптична густина екстракту проби; 100 - коефіцієнт визначання поліфенолів на 100г продукту; V - об'єм екстракту проби, см 3 ; Vj - об'єм екстракту проби для аналізування, см 3 ; m - маса наважки продукту, г. со Корисна модель відноситься до методів контроля якості плодовій сировини та продуктах її переробки за вмістом поліфенолів і може бути використана, у спектрофотометричному або колориметричному методах аналізу. Відомий спосіб визначення суми фенольних сполук спектрофотометричним або колориметричним методами, який оснований на законі ЛамбераБера, згідно з яким пропорційна залежність оптичної густині розчину від концентрації основної сполуки (рутину або кверцетину) має прямолінійний характер [див. Методы биохимического исследования растений. Ленинград. - "Агропромиздат", 1987, с. 112]. Спосіб здійснюють слідуючим чином. Пробу сировини масою 10-20 г заливають 96°-м етанолом, кип'ятять на водяній бані з оборотним холодильником 10 хв., екстракт фільтрують. Загальний об'єм екстракту 200-250 см 3 . Далі його концентрують відгонкою на роторному випарювачі під вакуу мом, додають 200-250 мг метабисульфіта натрію проти окислення фенольних сполук. Готують не менш п'яти стандартних концентрацій 0,05; 0,1: 0,15; 0,2; 0,25 мг/см і проводять реакцію комплексоутворення з реактивом Фоліна-Деніса. Для цього в стандартні розчини додають 3 см 3 дистильованої води, 0,5 см 3 реактиву Фоліна Деніса та через 3 хв. 1 см 3 насиченого розчину вуглекислого натрію. Доводять об'єм розчинів водою до 10 см 3 і через ЗО хв. вимірюють оптичну густину стандартних розчинів при довжині хвилі 725-730 нм на фотоколориметрі в кюветах з робочою длиною 5 мм. За отриманими результатами будують калібрувальний графік і здійснюють розрахунок вмісту фенольних сполук. Даний спосіб обрано прототипом. Прототип збігається з корисною моделлю, що заявляється, у наявності спільних ознак: - відбір проби; - взаємодія проби з реагентами; ю CD О О) а? 9065 - вимірювання оптичної густини; Але спосіб за прототипом є досить тривалим і складним, тому, що пов'язаний з використанням не менш як п'яти стандартних розчинів, будуванням калібрувального графіка, прямолінійність якого часто одержується після багатократних визначань оптичної густини відповідної концентрації. Усе це ускладнює виконання способу за прототипом. В основу корисної моделі поставлено задачу створити спосіб, в якому за рахунок зменшення кількості стандартних розчинів, визначання есктинкції стандартних розчинів, а також вимірювання оптичної густини при довжині хвилі 670 нм, забезпечити спрощення та скорочення способу визначення поліфенолів в плодовій сировині та продуктах її переробки. Поставлена задача вирішена в способі визначення вмісту поліфенолів в плодовій сировині та продуктах її переробки, що включає відбір проби продукту, взаємодію її з органічними реагентами, приготування стандартних розчинів, вимірювання оптичної густини проби і стандартних розчинів тим, що вимірюють оптичну густину стандартного розчину для встановлення коефіцієнту екстинкції, за допомогою якого визначають концентрацію вмісту поліфенолів, причому вимірювання оптичної густини здійснюють при довжині хвилі 670 нм, та розраховують за формулою: Х_Е„.Д».У.1ОО X - масова частка поліфенолів у міліграмах на 100 г продукту, Еср - середній коефіцієнт екстинкції; ДпР - оптична густина екстракту проби; 100 - коефіцієнт визначання поліфенолів на 100 г продукту; V - об'єм екстракту проби, см 3 ; Vi - об'єм екстракту проби для аналізування, см 3 , m - маса наважки продукту, г. Досягнення вказаного технічного результату можна пояснити наступним. Спрощення і скорочення тривалості аналізу, а також забезпечення можливості кількісного визначення поліфенолів стало можливим завдяки тому, що готують три стандартних розчини (замість п'яти у прототипі), визначають екстинкцію стандартних розчинів та їх середнє значення, що дає можливість не будувати калібрувальний графік і скоротити тривалість способу. Вимірювання оптичної густини при довжині хвилі 670 нм дозволяє здійснювати визначення за допомогою фотоелектроколориметрів, які більш розповсюджені у виробничих лабораторіях. Цей параметр підібрано експериментально. Визначення екстинкції ґрунтується на формулі фотоколориметри: ^ =^ де Д2 С2 ' Д Ді - оптична густина стандартного розчину, Д 2 - оптична густина аналізуємо!' проби, Сі - масова концентрація стандартного розчину (мг/дм3), Сг - шукана масова концентрації (мг/дм3). Таким чином, знаючи одну з концентрацій порівняльних розчинів, легко враховувати і другу шукану концентрацію. Спосіб здійснюють слідуючим чином. Готують пробу для аналізу - наважку продукту розчиняють спиртом, витримують 15 хв. і охолоджують. Далі проводять реакцію комплексоутворення з реактивом Фоліна-Деніса з подальшим вимірюванням оптичної густини. Паралельно готують стандартні розчини і вимірюють оптичну густину стандартних розчинів. Визначають екстинкцію стандартних розчинів по формулі: Е = — , де: С - масова концентрація стандартного розчину 3 (мг/дм ), Д - оптична густина стандартного розчину. Знаходять середнє значення (Е ср ) знайдених величин. Далі розраховують вміст поліфенолів згідно з формулою. Приклад 1. З проби продукту "Слива-сировина" беруть наважку 5 г і вміщують її у мірну колбу місткістю 50 см 3 і заливають 75% етиловим спиртом, нагрітим до температури 60°С. Витримують протягом 15 хв. Після охолодження екстракт доводять 75% етиловим спиртом до мітки, перемішують і фільтрують. 1 см 3 екстракту переносять у пробірку і проводять реакцію комплексоутворення поліфенолів з реактивом Фоліна-Деніса і утворення речовин, забарвлених у синій колір. Для цього у пробірку додають 7,5 см 3 води, 0,5 см 3 реактиву Фоліна-Деніса та через 3 хвилини 1 см 3 насиченого розчину вуглекислого натрію. Ретельно струшують і витримують протягом 60 хв. Через 60 хв. вимірюють оптичну густину при довжині хвилі 670 нм. Готують стандартні розчини з масовою концентрацією 0,15; 0,20: 0,25 мг/см3. Проводять реакцію комплексоутворення з реактивом ФолінаДеніса. доводять об'єм розчинів до 10 см 3 водою і через 60 хв. і вимірюють оптичну густину при довжині хвилі 670 нм. Визначають екстинкцію у кожQ ному стандартному розчині по формулі: Е = — , та середнє значення (Е ср ) знайдених величин: 0,515 1 = 0-291 0,685 0,25 = 0,294 0,85 Ecp. =0,292 Вміст поліфенолів в мг/100 г обчислюють за формулою: ЕСр - середня величина екстинкції (Еср 0,292); ДпР - оптична густина екстракту проби (Д пр 0,26) V - об'єм екстракту, см 3 (V = 50 см3) 9065 - об'єм екстракту для аналізування, см (Vi = 1 см°) 0,292 0,26-50-100 Х= = 76мг/100г 5,00-1,0 Результати наведені у таблиці. Для проб №1-15 наведені результати визначення вмісту поліфенолів в різних видах консервованої продукції. Таким чином, спосіб визначення вмісту поліфенолів в плодовій сировині та продуктах її переробки може бути реалізовано у лабораторіях харчової промисловості. Таблиця Визначення вмісту поліфенольних сполук у плодовій сировині та продуктах її переробки № п/п 1 2 3 4 5 6 Назва проби для аналізування Слива-сировина Сік сливовий Полуниця Айва-цукати Абрикоса-цукати Абрикоса Десерт з морквою та 7 яблуком Коктейль вишнево8 яблучний Нектар черешнево9 вишневий Мюслі з яблук, айви 10 та моркви Десерт з гарбуза, 11 яблук та персиків Йогурт з яблук та 12 полуниці Коктейль з яблук та 13 чорниці Коктейль з буряка та 14 яблук "Здоров'є" Коктейль з кабачків 15 та малини Маса наважки продукту^ 5,00 4,4333 4,2598 5,0200 2,3120 4,4100 Об'єм екстракту для Об'єм екст3 ракту V, см аналізування Vi, см 3 0,5 50 0,5 50 0,5 50 0,2 50 50 0,5 0,5 50 Оптична густина проби, Д Екстинкція, 0,260 0,565 0,555 0,480 0,295 0,680 0,292 0,292 0,292 0,292 0,292 0,292 Масова частка поліфенолів, мг/100 760,0 372,1 760,9 698,0 372,6 450,2 Еср 5,5700 50 0,5 0,680 0,292 356,5 5,3700 50 0,2 0,492 0,292 668,8 2,2705 50 0,5 0,280 0,292 360,1 5,3100 50 0,5 0,430 0,292 472,9 5,2100 50 0,5 0,240 0,292 269,0 5,8900 50 0,5 0,570 0,292 565,2 4,5700 50 0,5 0,660 0,292 843,4 3,1700 50 0,5 0,330 0,292 304,0 5,6400 50 0,5 0,495 0,292 512,6 Комп'ютерна верстка М. Клюкін Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ-42, 01601