N-(2,4-діоксо-6-метил-5-піримідил)сульфоніл-n`-(4-піридин-карбоніл) гідразин і його фармацевтично прийнятні солі

1. N-(2,4-діоксо-6метил-5-піримідил)сульфоніл-N'-(4-піридинкарбоніл)гідразин формули (І) 3 16929 4 периментального (доклінічного) вивчення нових лікарських речовин, М., 2000г]. O C SO2 NH NH NH Тест-культура: H37Rv - лабораторний штам М. (I) Tuberculosis, високовірулентний, чутливий до проH3C N O титуберкульозних препаратів. H N Для приготування матричного розчину запро, понованої сполуки зважували 10мг порошку і дота його фармацевтично прийнятними солями. давали 1мл димексиду. Відбувалося неповне розЗапропонована сполука являє собою білий чинення речовини (дрібнодисперсна завись). Для кристалічний порошок чи безбарвні кристали з приготування робочих розчинів використовували жовтуватим або рожевим відтінком. Сполука форяк розріджувач середовище Школьнікової. мули (І) мало розчинна в N,N-диметилформаміді, Для визначення МПК і МБК протягом 2 тижнів помітно розчинна в 0,1М соляній кислоті, не розвирощували тест-культуру в рідкому живильному чинна в етанолі, трихлорметані та воді. Темперасередовищі Школьнікової з додаванням різних тура плавлення запропонованої сполуки становить концентрацій запропонованої сполуки в широкому 247-256°С. діапазоні (128; 64; 32; 16; 8; 4; 2; 1; 0,5; 0,25; 0,125; Одержують запропоновану сполуку формули 0,06мкг/мл). (І) шляхом взаємодії 6-метилурацил-5Потім готували мазки та забарвлювали за Цисульфохлориду з гідразидом ізонікотинової кислолем-Нільсеном. У мазках підраховували кількість ти в сухому ацетонітрилі кип'ятінням при перемімікобактерій туберкульозу (МБТ), і на основі одершуванні. жаних результатів визначали МПК запропонованої Запропоновані сполуки мають антибактеріасполуки, при якій спостерігалося пригнічення їх льну, антимікобактеріальну та імунотропну активросту. ності. Життєздатність МБТ після впливу запропоноЛікарський засіб на основі запропонованої ваної сполуки оцінювали за здатністю їх до росту сполуки може використовуватись у вигляді таблена середовищі Левенштейна-Єнсена (після вилуток, розчинів для ін'єкцій, капсул, комбінованих чення запропонованої сполуки шляхом відмивання таблеток (у поєднанні з іншими активними речовифізіологічним розчином). МБК запропонованої нами такими, як ізоніазид, рифампіцин, піразинасполуки визначали за відсутністю росту культури. мід), суспензій і супозиторій. У результаті проведених досліджень виявлеСполуки відповідно до корисної моделі можуть но, що МПК запропонованої сполуки варіювала від вводитись у звичайний спосіб орально, паренте8 до 16мкг/мл; МБК - 16-32мкг/мл. рально (підшкірно, внутрішньом'язово, внутрішВизначення бактеріостатичної активності ньочеревно) чи ректально. (БАК) крові щурів при введенні запропонованої Дозування залежить від віку, стану та ваги пасполуки цієнта, а також від виду введення. Відповідно до БАК визначали класичним методом, описаним корисної моделі, лікарський засіб містить запропоу методичних рекомендаціях ["Визначення конценновану сполуку в кількості від 0,1 до 4г. трацій антибактеріальних препаратів і туберкулосЛікарські засоби на основі запропонованої татичної активності крові хворих туберкульозом", сполуки виготовляються у звичайний спосіб. ПоМосква, 1973р.]. ряд з активною речовиною лікарські засоби моПопередньо відібраним і зваженим щурам жуть при цьому містити звичайні допоміжні речовнутрішньошлунково вводили запропоновану сповини, прийняті в технології приготування ліків, такі луку в 1% крохмальному гелі. Доза запропоноваяк сполучні для таблеток, наповнювачі, консерванної сполуки - 100мг/кг. ти, речовини, що розприскуються на таблетки, Взяття крові у тварин робили через 0,5; 1 і 2 регулятори плинності, пом'якшувачі, змочувальні години після введення запропонованої сполуки. З речовини, диспергатори, емульгатори, розчинники, кожної проби крові готували розведення від 1:2 до пролонгатори дії, антиокислювачі і/або пропеленти 1:512 з подальшим внесенням у кожну пробірку [див. Н. Sucker etal.: Pharmazeutische Technologie, 0,2мл суспензії культури мікобактерій туберкульоThieme-Verlag, Stuttgard, 1991]. зу штаму H37Rv з розрахунку 500млн. клітин у Крім того, лікарські засоби на основі запропо1мл, приготовлену за стандартом мутності. Підгонованої сполуки замість окремих активних речовин товлені таким чином пробірки інкубували в термоможуть містити комбінації різних активних речостаті при 37 градусах протягом 14 днів. вин, щоб використовувати разом якості окремих По закінченні терміну з осаду робили мазки і активних речовин при застосуванні, або також тозабарвлювали за Цилем-Нільсоном без подальшому, що окремі активні речовини в поєднанні дего дозабарвлення синькою. При мікроскопії оцінюмонструють синергізм, тобто, дають в результаті вали ріст колоній за трибальною системою: сусуперадитивне посилення дії. цільний ріст (+++); коси майже в кожному полі зору Далі наводяться дані щодо біологічних випро(++); одиничні в мазку (+) (така культура зростаюбувань. чою не визнається). Відсутність росту позначали Оцінка протитуберкульозної активності in vitro (-). запропонованої сполуки БАК проба оцінюється як позитивна при відсуКритеріями оцінки були рівні мінімальних притності росту культури (-) чи при рості культури, що гнічуючої і бактерицидної концентрації (МПК, оцінюється як (+) у розведеннях крові 1:32 і вище. МБК). Визначення МПК, МБК проводили у стандаДані мікроскопії мазків наведені в Таблиці 1. ртний спосіб серійних розведень відповідно до вимог Фармакологічного комітету [Посібник з ексO 5 16929 6 Таблиця 1 Картина мікроскопії мазків крові Запропонована сполука і час взяття крові (година) Запропонована сполука/0,5 Запропонована сполука/1,0 Запропонована сполука/2,0 1:2 1:4 1:8 Розведення крові 1:16 1:32 1:64 + + 1:128 ++ + ++ 1:256 ++ + ++ 1:512 ++ ++ ++ Аналіз картини мікроскопії дав результати, наведені в Таблиці 2. Таблиця 2 Результати визначення БАК Запропонована сполука і час взяття крові (година) Запропонована сполука/0,5 Запропонована сполука/1,0 Запропонована сполука/2,0 БАК проба вважається високою при відсутності росту в розведеннях вище 1:32. В отриманих результатах дослідження БАК при введенні запропонованої сполуки вища від зазначеного еталона, що свідчить про високу чутливість культури МБТ до концентрацій запропонованої сполуки, які були створені в крові. Найбільш висока БАК проба через 1 годину після введення запропонованої сполуки. При ентеральному введенні запропонованої сполуки в дозі 100мг/кг протягом 2 годин після введення створюються концентрації запропонованої сполуки, що забезпечують високі рівні БАК проби. Максимальне розведення крові, при якому відсутній ріст культури, 1:256 при введенні запропонованої сполуки. Визначення імуностимулюючої активності за Позитивна БАК проба при розведенні крові 1:64 1:256 1:64 пропонованої сполуки методом Ерне (за синтезом антитіл у селезінці) Імуностимулююча активність запропонованої сполуки характеризується індексом стимуляції (1C) імунної відповіді. В експериментах використовували 30 мишей лінії F1 (CBA 57BL), які надійшли з розплідника "Крюково" РАМН РФ. Годували тварин відповідно до наказу Мінздраву СРСР №1179 від 10.10.83 року "Про затвердження нормативів витрат кормів для лабораторних тварин в установах охорони здоров'я". Забій тварин для визначення імуностимулюючої активності запропонованої сполуки досліджуваної серії проводили на четверту добу після імунізації. Результати наведені в Таблиці 3. Таблиця 3 Імуностимулююча активність запропонованої сполуки Кількість антитілоутворюючих клітин контроль Розведення комплементу 1:15 11,7 n=15 48,1 Індекс стимуляції (1C) імунної відповіді = 4,1 Отримана величина індексу стимуляції (1C) імунної відповіді даної серії становила 4,1, що говорить про високу імуностимулюючу активність запропонованої сполуки. Спосіб одержання запропонованої сполуки ілюструється таким прикладом. Приклад 1: Спосіб одержання N-(2,4-діоксо-6-метил-5піримідил)-сульфоніл-N'-(4піридинкарбоніл)гідразину Змішують 137г (1 моль) гідразиду ізонікотинової кислоти і 224,5г (1 моль) 6-метилурацил-5сульфохлориду в ацетонітрилі протягом 5 годин при температурі кипіння розчинника. Дослід n=15 Фільтрують, сушать на повітрі. Фільтрат нейтралізують. Потім очищають отриману речовину шляхом переосадження з ацетону, або шляхом перекристалізації з N,N-диметилформаміду. Одержують 311,5г (86%) дрібно кристалічного порошку від білого до кремового кольору N-(2,4-діоксо-6метил-5-піримідил)сульфоніл-N'-(4піридинкарбоніл)-гідразину (С11Н11N5O5S) із Тпл=247-256°С. Знайдено, %: С 40,44; Н 3,91; N 21,24; О 24,76; S 9,65. Розраховано, %: С 40,61; Н 3,41; N 21,53; О 24,59; S 9,86. Вміст Н2O за Карлом-Фішером, % - 0,15. 7 16929 8 11,61м.ч. ІЧ-спектр ( , см-1, КВr) Наведені нижче приклади ілюструють одер3308, 3192, 3150 (NH); жання названих вище готових форм. 3068,2816(=C-H, C-H); Приклад А: 1744, 1728, 1692, 1644 (С=O); Одержання лікарської форми у вигляді табле1588, 1544, 1528(C=C,C=N); ток. 1336, 1164(SO2). Змішують основну і допоміжну речовини в ПМР спектр у ДМСО: (3Н, урацил) - 2,37м.ч.; співвідношеннях, зазначених у таблиці 4 (розраху(4Н, піридин) - 7,66м.ч., 8,73м.ч.; (2Н, NH урацил) нок на масу таблетки): 9,3м.ч, 10,86м.ч.; (2Н; NH-NH) - 11,52м.ч., Таблиця 4 Маса таблетки (МТ), г 0,250 Запроп. сполука Лактоза Аеросил Стеарат Са 0,1 0,144 0,004 0,002 0,500 Запроп. сполука Лактоза Аеросил Стеарат Са Діаметр кульок - 5мм. Маса кульок на 100м готової форми - 500г. Пресування таблеток здійснюють на пресі РТМ-12. На таблетки наносять покриття на основі ацетилфталілцелюлози (АФЦ) на апараті "Strea-1". Склад покриття (масові частини): ацетон - 56,4; етиловий спирт 96% - 37,6; касторова олія - 1,0; АФЦ - 5,0; тропеолін - додають до світло Масовий склад, % 0,2 0,288 0,008 0,004 40 57,6 1,6 0,8 коричневого забарвлення розчину. Витрата покриття: кількість покриття (мл) = 50% від маси таблеток (г). Приклад Б Одержання лікарської форми у вигляді комбінованої таблетки Таблетки одержують за відомою технологією. Склад наведено в таблиці 5. Таблиця 5 Складові Запроп. сполука Изоніазид Рифампицин Пиразинамід Етамбутол 1 до 400 до 100 2 до 400 до 150 до 300 Використовують стандартні цільові добавки і допоміжні речовини для формування лікарської форми. Приклад В: Одержання лікарської форми у вигляді желатинових капсул Запропоновану сполуку в желатинових капсулах по 0,1г і по 0,2г одержують фасуванням ручним способом у капсули №1 і №0 за допомогою капсульниць із запірним пристроєм. Склад: Запропонована сполука - 0,1г і 0,2г без наповнювачів і консервантів. Наважку запропонованої сполуки 10,0г приміщують на пластину капсульниці, розподіляють по поверхні пластини і далі відповідно до опису процесу роботи з капсульницею. Желатинові капсули складаються з: хіноліну епу - 0,05%, титану діоксиду -1,0%, желатину - до 100%. Речовини, що входять до складу капсул, дозволені для медичного застосування в Росії. Приклад Г Одержання лікарської форми у вигляді суспензії (сиропу). На 100мл кінцевої лікарської форми беруть запропонованої сполуки - до 4г, фруктози - до 20г, ароматизатори, а також цільові добавки до збереження свіжоприготованої суспензії (шляхом дове Вага, мг 3 4 до 400 до 400 до 75 до 150 до 150 5 до 400 до 150 до 150 6 до 400 до 150 до 300 до 250 дення її кип'яченою водою до 100мл) терміном до 10 днів у прохолодному захищеному від світла місці. Цільові добавки і допоміжні речовини - пропіленгліколь, натрію цикламат, камедь ксантанова, фруктозовий сироп, натрію бензоат, натрію сахаринат моногідрат, етанол 95%, аромат апельсиновий 51.941/А, натрію цитрат дигідрат, мальтодекстрин KMS Х-50, дистильована вода - вводять у звичайних кількостях, що використовуються для приготування суспензій (сиропів), за відомою технологією. Приготовану суспензію перед кожним вживанням збовтувати. Приклад Д: Одержання лікарської форми у вигляді ін'єкцій. Препарат для ін'єкцій являє собою розсипку порошку лікарського засобу, що включає запропоновану сполуку і її фармацевтично прийнятні солі в дозуванні 0,1-0,5г. Приклад Е: Одержання лікарської форми у вигляді супозиторій. Маса однієї супозиторії для дорослих від 1 до 4г. Вміст активної речовини від 200 до 400мг. Маса однієї супозиторії для дітей від 0,5 до 1,5г. Вміст активної речовини від 100 до 200мг. Для виготов 9 16929 10 лення супозиторії використовуються традиційні при внутрішньочеревному введенні становить добавки. 163,2-382,9мг/кг. Оскільки токсичність Феназиду В якості ліпофільних основ для виготовлення майже в 10 разів вища, запропонована сполука супозиторіїв застосовують олію какао, сплави олії дає змогу одержати лікарський засіб, який може какао з парафіном чи гідрогенізованими жирами, застосовуватися при резистентних формах захворослинні і тваринні гідрогенізовані жири, твердий рювань, а також у великих дозах і протягом більш жир, ланоль, сплави гідрогенізованих жирів з востривалого часу. ком, твердим парафіном та інші основи, дозволені Крім того, заявлена запропонована сполука не для медичного застосування. має побічних ефектів, притаманних Феназиду: не Як гідрофільні основи використовують желаможе застосовуватися при серцево-легеневій нетино-гліцеринові гелі, сплави поліетиленоксидів з достатності, важких формах ішемічної хвороби різними молекулярними масами та інші речовини, серця. дозволені для медичного застосування. ЖелатиСучасна концепція лікування хворих на туберно-гліцеринову основу виготовляють з желатину кульоз передбачає разом з базисною хіміотерапімедичного, гліцерину і води. єю призначення різних імуномодулюючих засобів, При виготовленні супозиторіїв можуть застощо збільшує ризик розвитку побічних реакцій і підсовуватися бутилокситолуол, бутилоксіанізол, ливищує вартість лікування. монна кислота, емульгатор №1, емульгатор Т-1, Великі перспективи в підвищенні ефективності емульгатор Т-2, твін-80, спирти шерстного воску, хіміотерапії хворих на туберкульоз відкриває зааеросил та інші допоміжні речовини, дозволені для стосування препаратів, що мають поряд з антимімедичного застосування. кобактеріальною імунокоригуючу дію. Таким є ліПереваги заявленої сполуки засобу полягають карський засіб на основі запропонованої сполуки. у викладеному далі. Лікарський засіб на основі запропонованої При визначенні гострої токсичності запропоносполуки є стабільним в процесі збереження. Не ваної сполуки на мишах за методом Міллера і змінює зовнішнього вигляду, фізичних характерисТейнтера LD50 при внутрішньочеревному введенні тик і біологічних властивостей протягом кількох становить 1001-3000мг/кг, а токсичність Феназиду років, наприклад, 5 років і більше. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601