Спосіб одержання фітосубстанції плодів перцю стручкового з протизапальними властивостями

Спосіб одержання фітосубстанції плодів перцю стручкового з протизапальними властивостя 3 34267 38,1%. У ліофілізаті, умовно позначеному „ПС” виявлені капсаїциноїди, флавоноїди, сапоніни, фенолкарбонові кислоти та інші фізіологічне активні сполуки. Вміст капсаїциноїдів становить 3,7%. Спосіб ілюструється наступними прикладами. Приклад 1. 50г подрібненої сухої лікарської рослинної сировини з плодів перцю стручкового (Capsicum annum) екстрагували в круглодонній колбі ємністю 2,0л доведеною до кипіння очищеною водою у співвідношенні сировина - екстрагент 1:15 на водяній лазні при температурі 90°С впродовж 30 хвилин. Аналогічний спосіб отримання біологічно активних речовин повторювали ще тричі, після чого об'єднані екстракти просвітлювали при температурі 8-10°С впродовж 10 годин і фільтрували. Фільтрати розливали у флакони по 250мл і висушували за допомогою сублімаційного апарату КС-30. Вихід кінцевого продукту становив 33,6%. Приклад 2. 50г подрібненої сухої лікарської рослинної сировини з плодів перцю стручкового (Capsicum annum) екстрагували в круглодонній колбі ємністю 2,0л доведеною до кипіння очищеною водою у співвідношенні сировина - екстрагент 1:20 на водяній лазні при температурі 93°С впродовж 45 хвилин. Вказане екстрагування повторювали ще двічі, після чого об'єднані екстракти просвітлювали при температурі 8-10°С впродовж 10 годин, фільтрували і проводили ліофільне висушування. Вихід кінцевого продукту становив 35,9%. Приклад 3. 50г подрібненої сухої лікарської рослинної сировини з плодів перцю стручкового (Capsicum annum) екстрагували в круглодонній колбі ємністю 2,0л доведеною до кипіння очищеною водою у співвідношенні сировина - екстрагент 1:17 на водяній лазні при температурі 95°С впродовж 60 хвилин. Аналогічний спосіб отримання біологічно активних речовин повторювали ще тричі, піфія чого об'єднані екстракти просвітлювали при температурі 8-10°С впродовж 15 годин, потім фільтрували і ліофільне висушували. Ви хід кінцевого продукту становив 38,1%. Вивчення впливу фітосубстанції плодів перцю стручкового (Capsicum annum) на перебіг асептичного запалення м'яких тканин ротової порожнини проводили в дослідах на 42 статевозрілих білих щурах-самцях лінії Вістар віком 5-6 місяців і масою 240-350г. Експеримент тривав 8 днів. Для відтворення запалення м'яких тканин ротової порожнини використано „скипидарну’’ модель асептичного запалення [2]. Дослідження проводились згідно з методичними рекомендаціями та відповідали основним вимогам Державного фармакологічного центру МОЗ України [3,4]. Для порівняльної характеристики і оцінки активності „ПС” використовували засіб „Ротокан’’, який застосовували за оптимальною для нього схемою введення: на рясно змочених ватних турундах. Тварини були поділені на 4 групи: перша група (6 тварин) - інтактні тварини; друга - контрольна (12 тварин) - модель асептичного запалення м'я ких тканин ротової порожнини без лікування; третя група - дослідна №1 (12 тварин) - після моделю 4 вання асептичного запалення як лікувальний засіб використано „Ротокан’’; четверта група - дослідна №2 (12 тварин) - після моделювання асептичного запалення як лікувальний засіб використано 4% водний розчин „ПС”. Запалення м'яких тканин ротової порожнини відтворювали шля хом введення очищеного скипидару мікрошприцом з фіксованою канюлею та нанесеним на відстані 3мм від кінця голки обмежувачем в перехідну згортку з вестибулярної сторони нижньої щелепи в зоні, яка відповідає розташуванню першого правого моляра. Об'єм введеного скипидару - 0,04мл на 1кг маси тіла. Через тричотири години після введення скипидару з'являлась асиметрія голови тварин за рахунок набряку правої щоки. Праве око щурів частково закривалось. На наступну добу приєдналась сльозотеча з ока, тризм жувальних м'язів, гіперемія слизової оболонки щоки та збільшення набряку. Методика нанесення „ПС” була наступною: 4% водний розчин фітосубстанції плодів перцю стручкового наносили на ватну тур унду в кількості 0,1 0,25мл та вводили щурам дослідної групи №2 в присінок ротової порожнини з боку запалення на 3 - 4 хвилини. Реєстрацію клінічних даних проводили щоденно, починаючи з першого дня досліду і до зникнення клінічних симптомів запалення у тварин. З великого спектру клінічних симптомів, що характеризують перебіг гострого запального процесу, для оцінки його інтенсивності були обрані і проаналізовані такі ознаки: стан слизової оболонки щоки, наявність набряку, ступінь відкривання рота, стан слизової оболонки ока (таблиця 1). З метою вивчення механізму протизапальної дії фітосубстанції і оцінки ефективності його застосування при асептичному запаленні м'яких тканин ротової порожнини, на 4-й і 8-й день були досліджені клінічні та біохімічні показники крові (лейкоцитарна формула, активність лужної фосфатази нейтрофілів крові та вміст білка в сироватці крові) [5,6]. Гостра токсичність „ПС” вивчалась на білих мишах-самках, масою 190-200г, які знаходились на звичайному раціоні харчування та при вільному доступі до води. Фітосубстанцію вводили в очеревину (д/о) та в шлунок (д/ш) відповідно у дозах від 500 до 4000мг/кг та від 1000 до 6000мг/кг. За тваринами спостерігали протягом 14 днів. Відмічали час загибелі, зміни у поведінці та в зовнішньому вигляді тварин. При д/ш введенні загибель тварин не відмічено, тому за середньосмертельну дозу (LD50) умовно взяли максимально введену дозу 6000мг/кг (IV клас безпеки згідно з ГОСТ 12.100776). Як контрольну використовували груп у тварин, які отримували еквівалентний об'єм 0,9% розчину натрію хлориду. LD50 для білих мишей-самок при д/о визначали за .методом Лічфілда і Уїлкоксона. LD50=2800мг/кг (V клас безпеки за класифікацією Сідорова К. К.) [7,8,9]. Статистична обробка результатів проводилась за допомогою Microsoft Excel. Для оцінки розбіжностей між середніми величинами при нормальному розподілі вибіркових сукупностей використо 5 34267 вували t-критерій Стьюдента. При перевірці гіпотез використовувався рівень значимості р = 0,05. Результати проведених досліджень з вивчення динаміки клінічних показників у щурів в умовах 6 моделювання асептичного запалення м'яких тканин ротової порожнини та застосування водного розчину „ПС’’ наведено в таблиці 1. Таблиця 1 Динаміка клінічних показників у щурів із асептичним запаленням м'яких тканин ротової порожнини. Клінічні прояви Ступінь відкривання рота (%) Набряк щоки (мм) Стан слизової оболонки щоки (бал) Стан слизової оболонки ока (бал) Ступінь відкривання рота (%) Набряк щоки (мм) Стан слизової оболонки щоки (бал) Стан слизової оболонки ока (бал). Ступінь відкривання рота (%) Набряк щоки (мм) Стан слизової оболонки щоки (бал) Стан слизової оболонки ока (бал) Ступінь відкривання рота (%) Набряк щоки (мм) Стан слизової оболонки щоки (бал) Стан слизової оболонки ока (бал) Ступінь відкривання рота (%) Набряк щоки (мм) Стан слизової оболонки щоки (бал) Стан слизової оболонки ока (бал) Ступінь відкривання рота (%) Набряк щоки (мм) Стан слизової оболонки щоки (бал) Стан слизової оболонки ока (бал) Ступінь відкривання рота (%) Набряк щоки (мм) Стан слизової оболонки щоки (бал) Стан слизової оболонки ока (бал) Ступінь відкривання рота (%) Набряк щоки (мм) Стан слизової оболонки щоки (бал) Стан слизової оболонки ока (бал) Група інтакКонтрольна тних тварин група 1-й день досліду 100,0±0,0 65,61±1,49 1,00±0,00 1,12±0,02 0,00±0,00 1,33±0,16 0,00±0,00 7,75±0,20 2-й день досліду 100,0±0,0 67,04±2,17 1,00±0,00 1,19±0,02 0,00±0,00 1,92±0,19 0,00±0,00 7,25±0,14 3-й день досліду 100,0±0,0 70,02±2,02 1,00±0,00 1,18±0,01 0,00±0,00 1,92±0,19 0,00±0,00 7,42±0,16 4-й день досліду 100,0±0,0 73,92±2,23 1,00±0,00 1,15±0,01 0,00±0,00 1,83±0,12 0,00±0,00 6,00±0,30 5-й день досліду 100,0±0,0 76,16±2,34 1,00±0,00 1,12±0,01 0,00±0,00 1,58±0,16 0,00±0,00 5,17±0,30 6-й день досліду 100,0±0,0 79,62±2,02 1,00±0,00 1,09±0,01 0,00±0,00 1,06±0,12 0,00±0,00 3,92±0,28 7-й день досліду 100,0±0,0 81,81±2,05 1,00±0,00 1,08±0,01 0,00±0,00 1,08±0,16 0,00±0,00 2,50±0,34 8-й день досліду 100,0±0,0 83,32±2,35 1,00±0,00 1,06±0,02 0,00±0,00 0,75±0,20 0,00±0,00 1,66±0,46 Дослідна група №1 Дослідна група №2 70,52±1,0 1,14±0,01 1,30±0,12 7,0±0,5 69,46±1,46 1,15±0,02 1,42±0,34 7,33±0,25 71,24±2,1 1,12±0,02 1,58±0,1 5,2±0,25 73,92±2,67* 1,13±0,01 1,50±0,16 5,83±0,12* 75,45±1,9 1,10±1,01 1,17±0.12 1,08±1,09 77,43±2,91* 1,10±0,02* 1,25±0,14* 5,00±0,30* 77,33±1,12 1,15±0,01 1,08±0,09 4,91±0,28 82,73±2,15*** 1,08±0,01* 0,92±0,16* 3,83±0,35*** 80,5±1,24 1,08±0,01 1,0±0,19 4,5±0,21 88,23±2,36*** 1,06±0,015* 0,75±0,14* 3,17±0,26*** 85,16±1,80 1,05±0,01 0,075±0,11 3,08±0,21 93,14±2,42*** 1,03±0,01* 0,50±0,16* 2,00±0,30*** 87,25±2,10 1,05±0,02 0,20±0,02 1,58±0,21 97,33±1,01*** 1,01±0,00* 0,16±0,02* 0,75±0,14*** 88,50±2,9 1,03±0,01 0,00±0,00 1,0±0,28 98,75±1,53*** 1,00±0,00* 0,00±0,00* 0,00±0,00*** Примітка: * - достовірні відмінності (р