Спосіб підсилення імунної відповіді мімікринами з бактерій при вакцинації проти вірусних і деяких бактеріальних інфекцій

Реферат: Спосіб підсилення імунної відповіді мімікринами з бактерій при вакцинації проти вірусних і деяких бактеріальних інфекцій включає використання ад'ювантів. Як ад'юванти у вакцинах застосовують вуглеводовмісні мімікрини з бактерій. UA 89485 U (54) СПОСІБ ПІДСИЛЕННЯ ІМУННОЇ ВІДПОВІДІ МІМІКРИНАМИ З БАКТЕРІЙ ПРИ ВАКЦИНАЦІЇ ПРОТИ ВІРУСНИХ І ДЕЯКИХ БАКТЕРІАЛЬНИХ ІНФЕКЦІЙ UA 89485 U UA 89485 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до ветеринарії та медицини і може бути використана для підсилення імунної відповіді вакцинних препаратів. В останні роки значно зріс інтерес до ідеї використання ад'ювантів при вакцинації [1]. Тривалий час при імунізації людей застосовували лише такі ад'юванти, як гідроокис і фосфат алюмінію. Однак, для більшості антигенів ці сполуки виявилися слабшими імуностимуляторами, ніж неліцензовані ад'юванти з бактерій. Недоліком похідних алюмінію з'явилась їх нездатність активувати продукцію інтерлейкіну-2 та γ-інтерферону Т-клітинами-хелперами. Більшість з неліцензованих ад'ювантів виявилися ефективнішими за похідних алюмінію при стимуляції як антитільної, так і клітинно-опосередкованої імунної відповіді. Найбільш перспективними серед них є бактеріальні ад'юванти [2]. Серед бактеріальних ад'ювантів перше місце займають повний та неповний ад'ювант Фрейнда, який є хорошим індуктором клітинного та гуморального імунітету, однак його токсичні властивості не дають можливості використовувати його в комерційних вакцинних препаратах. Варіантом ад'юванту Фрейнда є ад'ювант Detox, який складається з монофосфорилліпіду А і очищених клітинних стінок мікобактерій. Незважаючи на виражені потенційні властивості, Detox також не рекомендований при вакцинації, так як призводить до побічних реакцій. В останні роки ідентифіковані бактеріальні ад'юванти - холерний токсин В субодиничний, правцевий токсоїд, молочно-кислі бактерії, рекомбінантний термолабільний ентеротоксин Escherichia соІі і його субодиниця В, компоненти клітинних стінок бактерій, фібронектинзв'язуючий білок 1 Streptococcus pyogenes та інші ад'юванти, які здатні індукувати антитільну відповідь на поверхні слизових оболонок, що особливо важливо для такої інфекції, як грип. В даний час активно розвивається вчення про антигенну мімікрію різних біологічних об'єктів і, зокрема, бактеріальних, вірусних, паразитарних, пухлинних пептидів і вуглеводних рецепторів. Властивість мімікрії антигенів є новим стратегічним напрямком в створенні сучасних вакцин та антивірусних препаратів. "Мімотопи", які мають лінійно або конформаційно подібні структури, взаємодіють з широким колом нейтралізуючих моноклональних антитіл, успішно використовуються при експериментальних вірусних інфекціях (респіраторно-синцитіальні віруси, кор, гепатит С та ін.). В основу корисної моделі поставлена задача створення способу підсилення імунної відповіді мімікринами з бактерій при вакцинації проти вірусних і деяких бактеріальних інфекцій, в якому за рахунок застосування нового агента специфічної ад'ювантної дії забезпечується підвищення титрів захисних антитіл після вакцинації у 2-5 разів. Для вирішення поставленої задачі спосіб підсилення імунної відповіді мімікринами з бактерій при вакцинації проти вірусних і деяких бактеріальних інфекцій включає використання ад'ювантів. Згідно з корисною моделлю, як ад'юванти у вакцинах застосовуються вуглеводовмісні мімікрини з бактерій. Бактеріальні ад'юванти (БА) можуть бути отримані з культурального середовища після вирощування Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis або інших бактерій. Технічним результатом способу є підвищення титрів захисних антитіл після вакцинації у 2-5 разів. Приклад 1. Вивчення впливу БА на рівень антитіл при вакцинації грипозною вакциною. Дослідження ефективності вакцинації з використанням БА проводили на кролях. Для дослідження рівня антитіл до вірусів грипу типу А і В в сироватках крові дослідних та контрольних кролів в реакції пригнічення гемагютинації застосовували діагностикуми вірусів грипу A New Caledonia /H1N1/20/99, A Panama /H3N2/2007/99, грипу В Hong Kong/330/01 і В Sichuan/379/99. Результати вивчення впливу мімікрину на рівень антигемаглютинінів при вакцинації грипозною вакциною Інфлувак подані в таблицях 1-4. Таблиця 1 Рівень антигемаглютинінів до вірусу грипу типу A New Caledonia /Н1N1/20/99 Введення Вакцина Інфлувак Вакцина + БА Рівень антигемаглютинінів до вірусу грипу в динаміці спостереження (доба) 1 3 5 11 20 41 75 0 0 0 20 80 80 0 20 20 160 320 640 160 0 1 UA 89485 U Таблиця 2 Рівень антигемаглютинінів до вірусу грипу типу A Panama /H3N2/2007/99 Введення Вакцина Інфлувак Вакцина + БА Рівень антигемаглютинінів в динаміці спостереження (доба) 1 3 5 11 20 41 75 0 0 0 160 160 160 0 320 160 80 640 320 640 40 Таблиця 3 Рівень антигемаглютинінів до вірусу грипу типу В Hong Kong/330/01 Введення Вакцина Інфлувак Вакцина + БА 1 0 20 Рівень антигемаглютинінів в динаміці спостерігання (доба) 3 5 11 20 41 75 0 0 0 320 160 0 20 0 80 640 320 0 Таблиця 4 Рівень антигемаглютинінів до вірусу грипу типу В Sichuan/379/99 Введення Вакцина Інфлувак Вакцина + БА 5 10 15 20 25 30 35 1 0 20 Рівень антигемаглютинінів в динаміці спостерігання (доба) 3 5 11 20 41 75 0 0 0 160 80 0 20 0 80 1280 640 0 Аналізуючи одержані результати досліджень, слід підкреслити, що грипозна вакцина Інфлувак в дозі 5 мкг на одне введення, стимулює утворення специфічних антигемаглютинінів до вірусів грипу типу А (Н3 і Н1) в невеликих титрах 1:80 і 1:160 відповідно, починаючи з другого тижня після вакцинації. Тривалість імунітету при одноразовому введенні залишалася на рівні 1:80-1:160 протягом 7 тижнів; на 10-11 тижні після вакцинації, антигемаглютиніни до Н3 і Н1 не визначалися. Динаміка синтезу антигемаглютинінів до вірусів грипу типу В дещо відрізнялася від вищенаведеної динаміки синтезу антигемаглютинінів до вірусів грипу типу А. Спостерігалося більш пізніше, до кінця 3-го тижня, підвищення титрів антигемаглютинінів до вірусів грипу В Hong Kong/330/01 та В Sichuan/379/99, складаючи 320 і 640 відповідно. Ці показники зберігалися протягом 3-х тижнів, на 10-й тиждень після вакцинації антигемаглютиніни до вірусів грипу типу В не визначалися. В дослідних групах із застосуванням БА утворення специфічних антитіл відрізнялося в залежності від застосованого мімікрину, як ад'юванту та типу антигену вірусу грипу. Вплив мімікрину із золотистого стафілококу на синтез антигемаглютинінів до антигену вірусу грипу A New Caledonia /H1N1/20/99 було ідентичним. В низьких титрах 1:20 антигемаглютиніни до H1N1 визначалися вже в першу добу, на 5-у добу титри підвищувалися до 1:160 і потім поступово збільшувалися до 1:320-1:640. На 10-й тиждень антигемаглютиніни не визначалися. Синтез антигемаглютинінів до вірусу грипу типу A Panama /H3N2/2007/99, при введенні БА, як і до антигену вірусу грипу типу A New Caledonia /H1N1/20/99. Але слід підкреслити статистично достовірне підсилення синтезу антигемаглютинінів до H3N2 при введенні БА стафілококу в перші дні першого тижня і більш тривале їх визначення (до 75 Діб). Для вірусів грипу типу В відмічено утворення антитіл до антигенів вірусу грипу до 3-го тижня, стимуляція синтезу антигемаглютинінів спостерігалася на 3-7 тижнях до титрів 1:640-1:1280 та припинення синтезу на 10-му тижні. Мімікрини, як ад'юванти, статистично достовірно стимулюють синтез антигемаглютинінів при вакцинації вакциною Інфлувак до антигенів вірусів грипу типів A New Caledonia /H1N1/20/99, A Panama /H3N2/2007/99, В Hong Kong/330/01, B Sichuan/379/99, при цьому слід відмітити, що найбільш ефективна була стимуляція ад'ювантом відносно до антигену H3N2. Приклад 2 Проведені дослідження по визначенню ад'ювантної дії мімікрину стафілококу при імунізації вакциною Моногриппол (штам A/H1N1/Каліфорнія). 2 UA 89485 U 5 Вакцина моногриппол - (неовакцина проти грипу, моновалентна, інактивована, субодинична, імуноад'юванта. Являє собою антигени гемаглютиніну (ГА) та нейрамініну (NA), одержані з вірусу грипу A/H1N1/, культивованого в курячих ембріонах, та пов'язані з водорозчинним високомолекулярним ад'ювантом поліоксидонієм (виробник Нідерланди Солвей Біолоджі КАПЗ Б.В). В таблиці 5 наведені дані по визначенню антигемаглютиніну в реакції РЗГА у сироватці крові мишей на 10 добу після імунізації вакциною Моногриппол. Таблиця 5 Визначення антигемаглютиніну в реакції РЗГА у сироватці крові мишей на 10 добу після імунізації вакциною Моногриппол Варіант дослідження Доза, мкг/миша № миши Вакцина моногриппол Вакцина +БА 10 10 10+0,1 мл Титр AT в РЗГА 1 2 3 4 1 2 3 4 Середній титр 80 40 80 80 320 320 640 160 70 320 Результати дослідження по визначенню ад'ювантної активності мімікрину зі стафілококу свідчать про статистично достовірне підвищування рівеня антигемаглютинінів до вірусу грипу А/Н1N1/Каліфорнія/. Розробка може бути використана наприклад при наступній розробці схем вакцинації, скорочення кратності введень вакцин, навантаження специфічного антигену та заміни повторних введень вакцинних препаратів новими бактеріальними ад'ювантами. 15 Джерела інформації: 1. Scijns V. Immunological concepts of vaccine adjuvant activity //Curr.Opin.Immunol. - 2000. Vol.12. - P. 456-463. 2. Vogel F.R. Adjuvants in perspective //Dev.Biol.Stand. - 1998. - Vol. 92. - P. 241-248/ 20 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 1. Спосіб підсилення імунної відповіді мімікринами з бактерій при вакцинації проти вірусних і деяких бактеріальних інфекцій, що включає використання ад'ювантів, який відрізняється тим, що як ад'юванти у вакцинах застосовуються вуглеводовмісні мімікрини з бактерій. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що ад'юванти можуть бути отримані з культурального середовища після вирощування Staphylococcus aureus. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що ад'юванти можуть бути отримані з культурального середовища після вирощування Bacillus subtilis. 30 Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3