Спосіб одержання комплексного пробіотичного бактерійного препарату

$6 &S МПК-6 А6І К 3-//00 СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ КОМПЛЕКСНІ 10 ПРОБІОТЖНОІО БАКТЕРІЙНОЮ ПРЕПАРАТУ В ина х і д , що з а явл я єт ь с я с т о с у єт ь с я ме д иц ин и т а ве т е р і на р і ї . Для боро тьб и з д исба кт еріо за ми - с ті йкими по ру ше ннями но рмаль но го с кл ад у кіл ко во ї мі кр о пор и , яке пр из во д ит ь до ва жких у кт ад не нь пі с я о пе ра ці йних вт р уч а нь, пр о ме не во ї х во р о б и, а нт иб і от ико т е р а пії, кишко вих І нфе кці й, зл оякіс них пух л ин, ура же нь це нтр ал ь но ї нер во вої систе ми т а І нших - з вича йно викор ист ову ют ьс я вису ше ні жив і ба кте рі йні пре па рат и но р ма л ь но ї фло р и кише ч нику ( "пр о бі от ики") . До них ві д но с ят ь с я з да вня вир о б л юва ні ко яі б акте р і н , ла кт о б а кт єр ин , б і фі ду м б а кте р ин т а П О Х ІД Н І ко мб і на ці ї на з р а з о к б і фі ко л а та І нші. ( С м« ФС42.253 БС-69; ФС-42 .252 ВС-89; ФС-42-І32 ВС-88) . Ал е вж ива ння вис у ше них ба кте рі йних кул ьт ур про бі от икі в су пр ово д жу єт ьс я пе ре ва жним по тр а пл янням ї х у кишко вий хі мус . Бі д ньо го д у же не з на ч на К І Л Ь К І С Т Ь з о с е р е джу єт ь с я б іл я по ве р х ні с л из о во ї о б о л о нки І ко л о ні з у є I I , вс е ж о с т а нно- з х і му с о м в иво д ит ь с я з о р га ні зму на зо вні о Т о му о с но вна мет а за с то с у ва ння пр о б іот икі в - ві дно вл е ння с кла д у мі кр о фло р и - вико ну ват ьс я з ос ер е д же ними б іл я сл из о во ї оболо нки нез нач но ю част ино ю вве де нного пре па рату. П і с л я а ва р і ї на ЧА Е С у т во р ил ис я ве л икі т е р ит о р і ї з а бр уд не ні р а д іо ну кл і д а ми, з о кр е ма це з І е м- 1 3 7 , Р о з т а шо ва ні в х і му с і б а кт е р і ї а кт ивно с пр ияют ь з а с во єнн ю мі кр о е л е м е нті в , а л е с ер е д них з 'явивс я не б а жа ни й с пі л ьни к - р а д і о це з ій. Т о м у р о з т а шо ва ні в х і му с і б а кт е р і ї не ті л ьки с т а но вл я т ь за йву б і о ма с у пр е пар а т у , а л е й ве л ь ми шкі д л иву , ч е р е з з на ч ну ( у 2 - 5 р а з і в) а кт и ві з а ці ю з а с в о є н ня р а д і о ну кл і д ів це зІ ю-13 7. Зад аче ю вина хо ду ,що про по ну єть ся , бул о ст вор е ння с уб ста нці ї пре па рат у ,що ма кс иа мль но с пр ияла б пер ер оз по ді лу ба кт ер і й х і му су д о с л из о во ї о б о л о нк и . З а цих у мо в б у л а 6 пі д ви ще на л і ку ва л ь на д і я І не йт р а л і з о ва на з да т ні с т ь д о з а л у ч е ння д е зІ ю - 1 3 7 з х і му с у І на с т у пно го по тр а пл яння в о р га ні зм х во ро го . У пр о т о т ипі (І ) з а знач е на з а дач а не вир І ше на ,х о ч ме х а ні з м пе р е р о з по д і л у б а кт е р і й з х і му с у д о с л из о во ї о б о л о н ки ч а с т ко во з а с т о с о ва ний: ч ас т ина б а кте р і й пр и виго .т о вле нні пр е пар ат у- пр от от ипу з 'еднува ла сь з з ер на ми а кт ивно го ву гл я , яке , пр ихо пл ю юч ис ь с кла дч іс т ю - 2 ~ слизової поверхні, сорбувалось у сяизовому шарі, передаючи йому бактерії пробіотикуо Але значна КІЛЬКІС ТЬ бактерій не зв'язаних з частками вуглю залишалась в хімусі, що несумісне з потребами заощадження щодо пезІю-137. Притому, в прототипі МІЦНІСТЬ зв'язку вуглю з бактеріями не можливо,бо починає руйнуватись комплекс вугольбактеріїо Для вирішення задачі ми пропонуємо замість сорбційного поєднання мікробів з основою в бактерійній масі, перетворювати основу в твердий споживний субстрат І на ньому відрощувати бактерії. Для цього на першоу етапі активоване вугілля насичується споживним середовищем І поєднується з концентратом бактерійної культури за умов зниженої температури (4° - І0°С), а на другому етапі суміш перекоситься в свіже споживне середовище І відррщуеться при оптимальній для росту температурі з періодичним помішуванням (залежно від утворення осаду). Ознаки, котрі відрізняють спосіб одержання комплексного пробіотичного бактерійного препарату, що заявляється, від способу-прот оти п у ( І) та кі: - К ІЛЬКІСТЬ отриманого препарату ставиться в залежність від КІЛЬКО СТІ часток вуглю І не потребує витримування СПІВВІДНОСИН з КІЛЬ КІСТЮ мікробів,як цього вимагає прототип, оскільки "вихід" препа рату залежить від обрастания кожної частки мікробними клітинами. Але мінімальна КІЛЬКІСТЬ аа 10 бактерій не може бути менше 2,5 мкг, а максимальна -4 г. -^К ІЛЬКІСТЬ мікробів,що не зв'язалися з вуглем, ставиться в залежність від КІЛЬКОСТІ вуглю в першому етапі І цим може регулюватись від майже повної відсутності, до якої завгодно КІЛЬКОСТІ , ЩО підбирається емпарично. Але мінімальна КІЛЬКІСТЬ на І Г вуязяю мусить бути 10 бактерійних * -, х КЛІТИН, максимальна - не обмежена. - ЩІЛЬНІСТЬ, МІЦНІСТЬ поєднання бактерій з основою максимальні для кожної пари компонентів, оскільки механізм злучення Інший ніж у прототипі: частки вуглю обростають мікробами вспродовж всього процесу, а не одноактно адгезують, - В способі, що заявляється, не застосовується вібрагтія, яка підси лює Броунівський рух,здатний вивільняти бактерії обростання* Додатково спосіб,що заявляється, дає такі технологічні переваги: -З— - Не вимагає обов'язкового застосування ферментерів І відрощування надконцентрованих бактерійних мас, отже може обмежуватись простою технологією відрощування в бутіях з напіврідкими споживними середовищами, ~ Має широкий діапазон варіювання в співвідношеннях вугяю, поєднаних з ним бактерій та вільних бактерій. - Без суттввих змін може застосовуватись у виробництві бактерійних препаратів як на бутля х,так І у ферментерах. Спосіб,що заявляється, здійснюється сяідуючим чином: - з наявної культури бактерій (наприклад,біфідобактерій) готують "маточну" культуру для зараження споживного середовища шляхом зро стання пресівів. Окремо наважка порошку активованого вуглю стерілізованого в автоклаві при 2 атг/. одну годину заливається рівним об'ємом споживного середовища І настоюється 4 години. Надлишок зливайть І дода ють рівний об'єм питомої рідкої (напірідкої) бак теріальної культури. Суміш витримують за обережного помішування 1-2 години при зниженій температурі (4-І0°С). Перший етап закін чено. На другому етапі отриману суміш додають до споживчого середовища в співвідно шенні від 1:1 до 1,10 І біль ш за умови помішування витримують при оптимальній температурі росту в термостаті 24-72 години. Після закінчення відрощування обросле вугілля відокремлюють від надлишку вільних бактерій одним з відомих способів,наприклад, центрифугуванням у сольовому розчині або рідині для висушквання. Препарат піддають висушиоанню (ліофільному) з наступним (або попередній) скасуванням и додаванням наповнювача* Отриманий цим способом препарат має велику площу дотикання зі слизовою,що засвідчує його посилену колонізаційну спроможність (таблиця І) . Таблиця І Площа дотикання І колонізації комерційного біф/думбакторину та комплексного препарату Назва препарату БІфІдумбактерІн ("ЕІофарма") Комплексний препарат ! Площа дотикання {W>r) 0,37 3030 - 4 Разом з тит»1 ЗМІСТ бактерій в активованому вуглі на мг препарату більший в комплексному препараті ніж в його прототипі -біфідумбактерині форте (випробовано в експерименті) -таблиц 2. Таблиця 2 Вміст бактерій в активованому вуглі препаратів у колоніевідтворюючих одиницях: ("кое") на мкг речовини Назва препарата Вміст бактерій в !К ІЛЬ К І С ТЬ В І Л ЬН И Х активованому вуглі!бактерій на на мкг) БІфІдумбактерІн форте Комплексний препарат 0, 8о хО 10' 10* 0 1, ЗЛО1 Отриманий комплексний препарат не має здатності до підсилення засвоєння радіонуклідів, иезІ#-І37, як це притаманне прототипу (таблиця 3). Таблиця З Вплив препаратів пробіотиків на засвоєння радіонуклідів,цезій -137 в кишечнику експериментальних мишей в режимі профілактики та в режимі лікування за одноразового їх введення. Назва препарата ! Контроль: ! ! рівень засвоєння! !цезІю-І37 в орга-ї ІнІзмІ мишей з пит! ниі води актив ні-! стю ІСГ Бк ! БІФІдумбактерин (з-д БІо^арма) Комплексний препарат (БК/г) 1 РІвенй засвоєння! в організмі ми- ! шей цезІя-137 з ! питної води,ак- І тивністю 10 тис,! Бк піся вживання! препарату ! (про сїїїл акт яка) ! *Б/ ! Рівень зас- ! воєння цезію 137 в мишей з питої води активністю 10 тие.Бк з наступним вживання прн парату (лікування) 6559 І г j 2667 і 1236 1205 ї 1214 1214 Дані випробувань показують, що як попередній прийом препарату перед отримання радіозабрудненої питної води з активністю Ї0Бк,так І піся отримання радіозабрудненого питва в організмі залишається незмінним рівень внутрішнього опромінення лише в тому випадку як , вживається комплексний препарат . В разі вживання звичайного біфідум бактерину попереднє введення посилює адсорбцію радіонуклідів майже — Г) — в ДВІЧІ , а при вве денні препарату аісля потраплення в організм радіонуклідів цезІю-137, зас воєння зростає ледь не у 3-5 разів. Позитивний результатно досягається введенням комплексного препарату зумовлений його пристінним розташуванням І певною власною здатністью сорбувати радіонукліди иезІю-137 за рахунок активованого вуглю* Результати випробування І порівняння показали, що комплексний препарат, виготовленими способом,що заявляється, має значно більшу площину дотику до слизової ніж звичайний біфідумбактерин, а отже,у стільки ж разів вищу колонізаційну І лікувальн у здатність. Має значно менше вільних бактерій І через иі ознаки та здатність вутло, що входить до препарату, самостійно засвоювати радіоцйзій, вчсиванш його неї супроводжується посиленням черезкишкової Інкорпорації радіонукліду. Цим він вигідно відрізняється від прототипу, бо дає можливість безпечно вживати його на теренах,що зазначи радіозабруднення, не виключаючи ефективного застосування" І в чистих регіонах, оскільки він має ще й підвищену колонізаційну здатність,, Список літератури. І. патент України & 9043, Промислова власність, 1996, №3, с