Спосіб одержання циклічного пентапептиду

1. Спосіб одержання циклічного пентапептиду цикло(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal) шляхом циклізації лінійного пентапептиду, вибраного з групи: H-Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-OH, H-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-ОН, H-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-OH, H-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-OH або H-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-DPhe-OH наступного вилучення захисної групи та, при необхідності, подальшого перетворення продукту у фізіологічнo прийнятну сіль. 2. Спосіб за п.1, який відрізняється тим, що циклізують лінійний пентапептид H-Asp(OBzl)-DPheNMeVal-Arg(Pbf)-Gly-OH. 3. Спосіб за пп.1 або 2, який відрізняється тим, що синтез лінійного пептиду H-Asp(OBzl)-DPhe 2 71608 1 3 71608 4 були розроблені різні типи захисних груп для фувому ланцюзі аспарагінової кислоти можна виданкціональних аміногруп і карбоксильних, гідролити за відомими методиками (див.: T.W.Greene, ксильних, тіолових або карбоксамідних функціоP.G.M.Wuts, Protective Groups in Organic нальних груп, а також для гуанідинової Chemistry, 2-ге вид., Wiley, Нью-Йорк, 1991 чи функціональної групи або імідазолу азоту; комбіP.J.Kocienski, Protecting Groups, 1-ше вид., нування цих захисних груп відкриває широкі можGeorge Thieme Verlag, Штуттгарт-Нью-Йорк, 1994, ливості оптимізації вищезгаданих реакцій. Синтез H.Kunz, Η.Waldmann у Comprehensive Organic лінійних молекул-попередників - лінійних пептидів Synthesis, том.6 (ред. В.Μ.Trost, I.Fleming, - можна робити двома способами: шляхом тверE.Winterfeldt), Pergamon, Оксфорд. 1991, дофазного пептидного синтезу або в розчині. У стор.631-701), наприклад, шляхом обробки водцьому випадку можна здійснювати поетапне зв'янем у присутності каталізатора (наприклад, катазування амінокислот або сегментів конденсуванлізатора з благородного металу, зокрема паладію ня фрагментів амінокислот. Відповідні етапи зв'яна вугіллі). Придатними розчинниками є спирти, зування можна, у свою чергу, здійснювати або за наприклад метанол або етанол, а також аміди, допомогою різних реагентів, що конденсують, зокрема - DMF, або їх суміші з іншими інертними наприклад - карбодиімідів, карбодиімідазолу, розчинниками, наприклад - з водою. Як правило, реагентів уронового типу, зокрема - TBTU (ТБТУ), гідрогеноліз проводять при температурах в інтерабо застосовуючи методи змішаних ангідридів валі приблизно від 0 до 100°С і тисках в інтервалі або методи активних складних ефірів. приблизно від 1 до 200 бар, переважно при 20Предмет винаходу полягає в розробці нового, 30°С і 1-10 бар. поліпшеного щодо прототипу, способу одержання Захисну груп у Pbf (Пбф), введену в пептидну цикло (Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal). хімію L.A.Саrpino та інш. Tet. Lett. 1993, 34, 7829Було виявлено, що при синтезі циклопептиду 7832, видаляють, наприклад, шляхом обробки цикло (Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal) шляхом циклі95% трифтороцтовою кислотою (ТРА(ТФО)). Зазації лінійної молекули-попередника, комбінація хисна група Pbf(Пбф) у цьому випадку виявляє захисних груп 2,2,4,6,7велику нестійкість стосовно ТРА(ТФО), ніж захиспентаметилдигідробензофуран-5-сульфонилу ні групи, що мають аналогічну структур у, 4(Рbf(Пбф)) для гуанідинової групи в боковому метокси-2,3,6-триметилфенілсульфоніл ланцюзі аргініну і бензилу (Bzl (Bзл) ) для карбок(Mtr(MTp)) і 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6сильної групи в боковому ланцюзі аспарагінової сульфоніл (Рmс(Пмх)),які теж можна застосовукислоти, дозволяє оптимізувати процес відносно вати як захисні групи для бокового ланцюга при виходу го тового продукту. синтезі цикло(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal). Таким чином, винахід стосується способу ТРА(ТФО) переважно застосовують у надлиодержання циклічного пентапептиду цикло (Argшку, без додавання іншого розчинника. Gly-Asp-DPhe-NMeVal) шля хом циклізації лінійноТРА(ТФО) можна також використовувати в суміші го пентапептиду, вибраного з групи, що складаз інертним розчинником, наприклад, можна викоється з: ристовувати комбінацію ТРА(ТФО)/ди хлорметан H-Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)-DFhe-NMe Val-OH, у співвідношенні 6:4. Крім того, ТРА(ТФО) можна H-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-OH, застосовувати з додаванням -10% води, переваH-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-OH, жно - 2%. Реакцію розкладання доцільно провоH-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBz)-OH дити при температурі в інтервалі приблизно від 0 або до 50°С, переважно - від 15 до 30°С (кімнатна H-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-DPhe-OH, температура). наступного видалення захисної групи і, при Абревіатури, які використовуються в даному необхідності, подальшого перетворення в його описі, стосуються радикалів наступних амінокисфізіологічно прийнятні солі. лот: Крім того, винахід стосується способу одерAsp Аспарагінова кислота жання циклічного пентапептиду Arg Аргінін цикло(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal) як описано Gly Гліцин вище, що відрізняється тим, що циклізують лінійPhe Фенілаланін ний пентапептид H-Asp(OBzl)-DPhe-NMeValVal Валін Arg(Pbf)-Gl y-OH. Крім того, вище і далі наступні скорочення Для цієї реакції циклізації лінійні пептидивимають такі значення: бирають із групи, що складається з Вос Бік трет-Бутоксикарбоніл H-Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NmeVal-OH, Bzl Бзл Бензил H-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg (Pbf)-OH, СНА ЦГА Циклогексиламін H-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-OH, D D Характеристика D-амінокислоти H-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-OH DCCI ДЦКІ Дициклогексилкарбодиімід або DMAP ДМАП Диметиламінопіридин H-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-DPhe-OH. DMF ДМФ Диметилформамід Умови проведення цієї реакції стосовно виEDCI ЕДКІ N-етил-N'-(3диметиламінопропіл) бору дегідратуючого агента, інертного розчинникарбодиімиду карбохлорид ка і температури реакції, а також наступної реакEt Ет Етил ції перетворення продукту у фізіологічно Fmoc Фмок 9-фторетилметоксикарбоніл прийнятні солі вже розкриті в ЕР 0770622. HOBt ГОБт 1-Гідроксибензотриазол Залишок бензильної захисної групи в бокоMe Me Метил 5 71608 6 МТВЕ МТБЕ Метил трет-бутиловий ефір 104, 375-391. Mtr Мтр 4-метокси-2,3,6Особливо краще проводити синтез одного з триметилфенілсульфоніл зазначених вище лінійних пептидів конвергентно, Nme Nму N-метильована α-аміногрупа шляхом конденсації фрагментів. ΝΜΡ Ν ΜΠ N-метилпіролідон Крім того, винахід стосується способу одерOtBu ОТБу Трет-б утиловий ефір жання циклічного пентапептиду цикло(Arg-GlyОmе ОМе Метиловий ефір Asp-DPhe-NMeVal), який відрізняється тим, що Oet Оет Етиловий ефір синтез лінійного пептиду H-Asp(OBzl)-DPhePbf Пбф 2,2,4,6,7NMeVal-Arg(Pbf)-Gly-OH проводять конвергентно пентаметилдигідробензофуран-5-сульфоніл шляхом конденсації фрагментів трипептиду ΗРmс Пмх 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-OH, де R1 є захисною сульфоніл групою аміногрупи, з дипептидом H-Arg(Pbf)-GlyРОА ФОА Феноксиацетил R2, де R2 є захисною групою карбоксильної групи, Рr Пр Пропіл і захисні групи R1 і R2 згодом видаляють. Su Су С укцинімід R1, як описано вище, є захисною гр упою аміTBTU ТБТУ те трафтороборат 2-(1Нногрупи. Вираз «захисна група аміногрупи» шибензотріазол-1-іл)-1,1,3,3-тетраметилуронію роко відомий і стосується груп, що підходять для TFA ТФО Три фтороцтова кислота захисту (чи блокування) аміногрупи від хімічних Ζ Ζ Бензилоксикарбоніл реакцій. Типовими групами цього типу є, зокрема, Крім того, було виявлено, що конкретний винезаміщені або заміщені ацильна, арильна, аралбір саме захисної групи Pbf (Пбф) для бокового коксиметильна чи аралкільна групи. Так само ланцюга Arg і Вzl(Бзл) для Asp навіть при синтезі після проведення цільової реакції (чи послідовлінійних пептидів, що як згадано раніше, є проміності реакцій) захисні групи аміногрупи видаляжними продуктами при синтезі цикло(Arg-Gly-Aspють, їхня природа і розмір не мають істотного DPhe-NMeVal), забезпечує підвищення виходу значення, проте, кращими є захисні групи, що готового продукту на відповідних стадіях синтезу. містять 1-20 атомів С. У контексті даного винахоУ результаті, вихід цикло(Arg-Gly-Asp-DPheду, вираз «ацильна група» варто інтерпретувати NMeVal) у цілому зростає, що приводить до відв широкому значенні. Воно включає ацильні груповідного зниження вартості синтезу. пи, які є похідними аліфатичних, араліфатичних, Підвищення виходу досягається в цьому виаліциклічних, ароматичних або гетероциклічних падку як при твердофазному пептидному синтезі, кислот, або сульфонових кислот, а також алкоктак і при синтезі в розчині лінійних пептидів сикарбонільH-Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-OH, ну,алкенілоксикарбонільну,арилоксикарбонільну H-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-OH, і, особливо, аралкоксикарбонільну групи. ПриH-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-OH, кладами ацильних груп цього типу є формілові H-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-OH або алканоїлові групи, наприклад - ацетил, пропіабо оніл, бутритил; аралканоїл, зокрема - фенілацеH-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-DPhe-OH, тил; ароїл, наприклад, бензоїл або толуїл; аралозокрема ксиалканоїл, зокрема феноксиацетил; H-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-OH. алкоксикарбоніл, наприклад, метоксикарбоніл, Захи щені амінокислоти або амінокислотні етоксикарбоніл, 2,2,2-трихлоретоксикарбоніл, фрагменти, що застосовуються в цих двох метоВос(Бік), 2-ідоетоксикарбоніл; алкенілоксикарбодах синтезу, звичайно одержують шляхом аміноніл, такий як арилоксикарбоніл (Aloc(Алок)); аракислотного і пептидного синтезу, описаного в лкілоксикарбоніл, наприклад,-CBZ (синонім Ζ), 4класичних роботах Principles of Peptide Synthesis, метоксибензилоксикарбоніл (ΜΟΖ), 4ред. М.Bodansky, Springer Verlag Берлін 1984; нітробензилоксикарбоніл або 9Houben Weyl, Methoden der organischen Chemie фторенілметоксикарбоніл (Fmoc(Фмок)); 2[Methods of Organic Chemistry], I.e., Tom 15/11, (фенілсульфоніл)етоксикарбоніл; триметилсилі1974, сторінки 1-806, Georg Thieme Verlag Штуттлетоксикарбоніл (Теос(Теок))або арилсульфоніл, гарт/ Calbioehem/Novabiochem Catalogue and такий як 4-метокси-2,3,6Synthesis Handbook 1999; триметилфенілсульфоніл (Mtr(Mтp)). Тритіл Synthesis Notes or Peptide Synthesis Protocols, (Trt(Tpт)) також відомий як захисна група аміноред. M.W.Pennington and B.M.Dunn у Methods in групи. Кращими захисними групами аміногрупи є Molecular Biology, Том.35, Humana Press Totowa Вос(Бік), Fmoc(Фмок) і Аlос(Алок), крім того, Z, N.J, 1994. У цих і інших, не згаданих тут, роботах, бензил і ацетил. Вос(Бік) є особливо кращим. зазначені умови проведення реакцій, необхідних R2, як зазначено вище, є захисною групою для здійснення синтезу. карбоксильної групи. Вираз «захисна група карОсновні принципи твердофазного пептидного боксильної групи» теж широко відомий і стосусинтезу були закладені B.F.Gysin і R.B.Merrifieid ється груп, що придатні для захисту від хімічних (J.Am. Chem. Soc. 1972, 94, 3102 і далі.). Тверреакцій гідроксильної групи карбонової кислоти. дофазний синтез лінійних пептидів, описаний Типовими групами цього типу є ви щезгадані нераніше, їхнє видалення і очищення можна провозаміщена або заміщена арильна, аралкільна, дити за методиками, приведеними у роботах ароїльна або ацильна групи, а також алкільні A.Jonczyk і J.Meienhofer у Peptides, Proc. 8th Am. групи, алкільна, арильна або аралкілсилільна Pept. Symp., ред. V.Hruby і D.H.Rich, Pierce групи. Природа і розмір захисних груп карбоксиСотр.Ill, стор.73-77, 1983. і Angew. Chem. 1992, льної групи і синонімічних їм захисних гр уп гідро 7 71608 8 ксильної групи несуттєві, тому що їх видаляють Gly-Asp-DPhe-NMeVal). після проведення цільової хімічної реакції або Винахід стосується способу одержання цикпослідовності реакцій; проте, кращими є групи, лічного пентапептиду цикло(Arg-Gly-Asp-DPheщо містять 1-20, особливо 1-10 атомів С. ПриNMeVal) шляхом кладами захисних груп гідроксильної групи є, зокa) проведення реакції дипептиду H-Arg(Pbf)рема, аралкільні групи, такі як бензил, 4Gly-R2, одержуваного шляхом лінійного синтезу в метоксибензил або 2,4-диметоксибензил, ароїльреакції 2-Arg(Pbf)-OH з H-Gly-R2 і наступного вині групи, такі як бензоїл або р-нітробензоїл, ацидалення захисної групи Z, з льні групи, такі як ацетил або півалоїл, рb) трипептидом R1Asp(OBzl)-DPhe-NMeValтолуолсульфоніл, алкільні групи, такі як метил OH, який одержують шляхом лінійного синтезу в або трет-бутил, а також алільні і алкілсульфоніреакції Z-DPhe-OH з Н-NMeVal-OMe і наступним льні групи, такі як триметилсиліл (TMS(ТМС)), видаленням захисної групи Ζ з метою одержання триізопропілсиліл ΤΙΡS(ΤΜΠC), третH-DPhe-NMeVal-Ome і потім - зв'язування цього бутилдиметилсиліл TBS(TБC)) або триетилсиліл, пептиду з активним ефіром R1-Asp(Obzl)-OH з триметилсилілетильні або аралкілсілільні групи, наступним видаленням метилового ефіру, конветакі як трет-бутилдифенілсиліл (TBDPS(ТБДФС)). ргентно, для одержання лінійного пентапептиду Кращими захисними групами гідроксильних гр уп є R1-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gly-R 2 , метил, бензил, ацетил, трет-бутил або TBS(TBC). c) видалення захисних гр уп R1 R2, Особливо кращі метил і трет-бутил. d) циклізації виділеного пентапептиду ΗЗагалом, кращими захисними групами карбоAsp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-OH з метою ксильної групи бокового ланцюга аспарагінової одержання цикло(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)-DPheкислоти є лінійні або розгалужені алкільні групи, NMeVal), такі як метил, етил або трет-бутил або арилалкіe) видалення захисної групи бензильної грульні групи, такі як бензил; у способі по винаходу пи, бензил. f) видалення захисної групи Рbf(Пбф) за доЗагалом, кращими захисними групами для помогою TFA(TOO) і гуанідинової групи бокового ланцюга аргініну є Z, можливого перетворення трифторацетата Вос(Бік), Mtr(MTp) чи Рmс(Пмх); у способі по вицикло(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal), отриманого на находу - Рmс(Пмх). стадіях a)-f),в інші фізіологічно прийнятні солі. Способи виділення захисних груп, використоІншими фізіологічно прийнятними солями є, вуваних у кожному випадку, описані в (напр. наприклад, солі неорганічних кислот, таких як T.W.Greene, P.G.M.Wuts, Protective Groups in Orсірчана кислота, сірчиста кислота, дитіонова кисganic Chemistry, 2-ге вид., Wiley, Нью-Йорк 1991 лота, азотна кислота, гідрогалогенові кислоти, а чи P.J.Kocienski, Protecting Groups, 1-шe вид., також як соляна кислота або бромисто-воднева Georg Thieme Verlag, Штуттгарт-Ньюкислота, фосфорні кислоти, такі як, наприклад, Йорк,1994).Можна застосовувати також і інші віортофосфорна кислота, сульфамінова кислота, а домі в галузі методики. також органічні кислоти, зокрема аліфатичні, аліВинахід стосується процесу, що, як описано циклічні, араліфатичні, ароматичні чи гетероциквище, відрізняється тим, що трипептид R1личні моно- чи поліосновні карбонові, сульфонові Asp(OBzl)-Dphe-NMeVal-OH, де R1 є захисною чи сірчані кислоти, наприклад, мурашина кислогрупою аміногрупи, одержують шля хом лінійного та, оцтова кислота, пропіонова кислота, гексаносинтезу в реакції Z-DPhe-OH з H-NMeVal-OMe ва кислота, октанова кислота, деканова кислота, для одержання Н-DPhe-NMeVal-OMe, потім прогексадеканова кислота, октадеканова кислота, водять реакцію отриманого проміжного продукту півалінова кислота, діетилоцтова кислота, малоз активованим похідним R1-Asp(Obzl)-OH і відщенова кислота, бурштинова кислота, пімелинова плюють метиловий ефір. кислота, фумарова кислота, малеїнова кислота, Кращим похідним R1-Asp(OBzl)-OH є сукцинімолочна кислота, винна кислота, яблучна кисломід R1-Asp(Obzl)-OSu.Інші активні ефіри, які можта, лимонна кислота, глюконова кислота, аскорна застосовувати з цією метою, описані в класичбінова кислота, нікотинова кислота, изонікотиноній літературі по пептидному синтезу. ва кислота, метан- або етансульфонова кислота, Крім того, винахід стосується процесу, що, як бензолсульфонова кислота, триметоксибензойна зазначено вище, відрізняється тим, що дипептид кислота, адамантанкарбонова кислота, рH-Arg(Pbf)-Gly-R 2 , де R 2 є захисною групою картолуолсульфонова кислота, гліколева кислота, боксильної групи, одержують шляхом лінійного ембонова кислота, хлорофеноксиоцтова кислота, синтезу за участю реагенту Z-Arg(Pbf)-ОН, після аспарагінова кислота, глутаминова кислота, прочого видаляють захисну гр упу Ζ. лін, гліоксилова кислота, пальмітинова кислота, Таким чином, винахід стосується лінійних пепарахлорофеноксиізомасляна кислота, циклогекнтапептидів,які обираються із групи, що складасанкарбонова кислота,глюкоза-1-фосфат, нафється з: талінмоно- і нафталіндисульфонова кислота або H-Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-ОН, лаурилсульфонова кислота. H-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-OH, Особливо кращими фізіологічно прийнятними H-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-OH, солями є гідрохлорид або власні солі цикло (ArgH-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-OH Gly-Asp-DPhe-NMeVal). або Якщо R1 є Вос(Бік), a R2 є трет-бутилом, ці кіH-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y-Asp(OBzl)-DPhe-OH, нцеві трет-бутилоподібні захисні групи можна які є проміжними продуктами синтезу цикло(Argвідщепити за допомогою мурашиної кислоти, при 9 71608 10 цьому захисні групи бокових ланцюгів – Рbf(Пбф) Синтез Boc-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-OH´СНА і Bzl(Бзл) впливу не піддаються. 1. 33,0г Z-Arg(Pbf)-ОН´СН А додають при пеНаступні приклади описують конкретні здійсремішуванні до 300мл оцтової кислоти і 300мл нення окремих стадій синтезу. Н3РО4, і далі перемішують до повного розчиненВ описі даного винаходу, температура скрізь ня. Після видалення водяної фази, органічну фазазначена в °С. зу промивають водою і насиченим розчином Приклад 1: NaCI, потім сушать. Після видалення розчинника, Синтез Вос-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-OH осад розчиняють у 250мл дихлорметану з 8,38г 1. 25,3мл триметилхлорсилану крапельно H-Gly-OtBu ´НСІ і охолоджують до 0°С. Потім довводять у розчин 26,5г Z-NMeVal-OH у 200мл дають 17,12мл диізопропілетиламіну і 16,05г метанолу, і суміш перемішують протягом ночі. ТВТU(ТБТУ), і суміш перемішують протягом 60хв. Потім видаляють розчинник, а осад розчиняють у при 0°С, потім перемішують протягом ночі при метилтрет-бутиловому ефірі (МТВЕ(МТБЕ)) і кімнатній температурі. Розчинник видаляють, і промивають 5% Na2CO3 і водою. Після видалення заміняють його на 250мл етилацетату. Після розчинника, осад розчиняють у метанолі і 1Н НСІ, промивання 5% розчином Na2CO3, водою і насизмішують зі зволоженим водою Pd/C (10%) і гідченим розчином NaCI, розчинник видаляють. Вирогенізують у слабкому стр умі Н 2. Після заверхід Z-Arg(Pbf)-Gl y-OtBu складає 86%. шення реакції каталізатор відфільтровують, з 2. Розчин 30г Z-Arg(Pbf)-Gly-OtBu у 350мл фільтрату видаляють розчинник і осад перекрисTHF(TГК) змішують з 3г зволоженого водою Pd/C талізовують з етилацетату. Ви хід гідрохлориду Н(10%),і групу Ζ видаляють гідрогенізуванням у NmeVal-OMe складає 75%. слабкому струмі Н 2. Каталізатор потім відфільт2. Розчин 16,1г Z-DPhe-OH, 10г гідрохлориду ровують і розчинник видаляють. Осад розчиняH-NMeVal-OMe і 10,1мл диізопропілетиламіну в ють у етилацетаті і далі обробляють за способом, 100мл дихлорметану охолоджують до 0-5°С і зазначеним в Прикладі 2.1 Вихід H-Arg(Pbf)-Glyдодають 11,35г ЕDCI(ЕДКІ). Суміш спочатку пеOtBu складає 86%. ремішують протягом години при 0-5°С, потім проПриклад 3: тягом ночі продовжують перемішування при кімСинтез Η-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)натній температурі. Розчинник видаляють, а осад Gly-OH розчиняють у МТВЕ(МТБЕ) і промивають Na2СO3 1. 1,23г Вос-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal(5%),1НСІ і водою, потім сушать. Після видаленOH´СНА перетворюють у вільну кислоту звичайня розчинника вихід Z-DPhe-NMeVal-OMe скланим способом, після чого цю кислоту розчиняють дає 84,5%. у 12,5мл дихлорметану з 0,81г Вос-Asp(OBzl)3. 12г Z-CPhe-NMeVal-OMe розчиняють у DPhe-NMeVal-OH´СНА і 0,22г DМАР(ДМАП). 80мл THF і 20мл води, змішують з 10мг тимолфРозчин охолоджують до 0-5°С і вводять у нього талеїна і по краплях додають 10М NaOH до оде0,345г ЕDСІ(ЕДКІ). Розчин перемішують при 0ржання блакитного забарвлювання індикатора. 5°С протягом 2 годин, потім, протягом ночі, при При знебарвленні індикатора, до суміші повторно кімнатній температурі. Розчинник видаляють, додають по краплях 10М NaOH. Коли знебарвосад розчиняють у МТВЕ(МТБЕ) і далі оброблялення індикатора припиняється, значення рН ють як у Прикладі 2.1. Вихід Вос-Asp(OBzl)-DPheдоводять до 2 10%-ним розчином KHSO4, метаNMeVal-Arg(Pbf)-Gly-OtBu складає 82%. нол видаляють, а продукт екстрагують 2. 2,3г Boc-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)МТВЕ(МТБЕ). Після сушіння в присутності Gly-OtBu розчиняють у 23мл 95% мурашиної кисNa2SO4, сіль СНА(ЦГА) осаджують з фільтрату лоти для видалення кінцевих захисних гр уп, і, по шляхом додавання 2,9мл СНА(ЦГА). Вихід Zпісля 30хв., концентрують у вакуумі. Отриманий DPhe-NMeVal-OH´СНА складає 90%. продукт розтирають з ефіром, відфільтровують і 4. 16,4г Z-DPhe-NMeVal-OH´СНА (солі циклосушать у вакуумі. гексиламонію) додають при перемішуванні до Вихід Η-Asp(OBzl)-DPhe-NMeVal-Arg(Pbf)-Gl y250мл МТВЕ (МТБЕ) і 100мл Н3РO4 OH´HCOOH складає 95%, (10%)/перемішування проводять до повного розПриклад 4: чинення. Після видалення водяної фази, органічСинтез цикло(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)-DPheну фазу промивають водою і насиченим розчиNMeVal) ном NaCI, потім сушать. Розчинник видаляють, а Розчин 11,9г Η-Asp(OBzl)-DPhe-NMeValосад розчиняють у 15,2мл 2Н NaOH і 150мл Arg(Pbf)-Gl y-OH´HCOOH у 60мл ΝΜΡ(ΝΜΠ) доTHF(TГК), і, після додавання зволоженого каталідають по краплях при перемішуванні до розчину затора (1г Pd/C (10%)), гідрогенізують у слабкому 7,25г ТВТU(ТБТУ) і 7,45мл N-метилморфоліну в струмі Н2. Каталізатор відфільтровують і до про180мл N-метилпіролідону. Реакційний розчин зорого розчину додають 12,1г Віс-Asp(OBzl)-OSu і перемішують протягом 20 годин, а потім додають 4,5мл триетиламіну і перемішують протягом ночі по краплях до розчину 47,5г NaHCO3 у 1800мл при кімнатній температурі. Після видалення розводи. Осад відфільтровують і сушать у вакуумі. чинника, осад розчиняють у МТВЕ(МТБЕ) і проВихід цикло(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)-DPhe-NmeVal) мивають Н3РО4 (10%), водою і насиченим розчискладає 73,4%. ном NaCI. Органічну фазу обробляють 3,3мл Приклад 5: СНА(ЦГА).Отриману сіль Вое-Asp(OBzl)-DPheСинтез цикло(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal) NMeVal-OH´СН А відфільтровують і суша ть у ва1 Розчин 2г цикло (Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBzl)куумі. Ви хід складає 93%. DPhe-NMeVal) у 26мл THF(TГК) змішують з 0,5г Приклад 2: Pd/C (10%). Протягом 2 годин через нього пропу 11 71608 12 скають водень, після чого суміш відокремлюють 2. 1,5г цикло (Arg (Pbf)-Gly-Asp-DPhe-NMeVal) від каталізатора і видаляють розчинник у вакуумі. розчиняють у 15мл 95% TFA(TФO). Через 1 годиПродукт кристалізують шляхом додавання 32мл ну розчин по краплях додають до 150мл ізопропіацетону, отриманий осад відфільтровують і сулового ефіру, потім тверду фазу відфільтровують шать. Вихід цикло(Arg(Pbf)-Gly-Asp-DPheі сушать. Висушений продукт розчиняють у 30мл NMeVal) складає 83%. суміші ізопропанолу/води 1:2, потім обробляють іонообмінником III (ацетатною формою; Merck ло(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal) у вигляді його солі KGaA). Відфільтрований розчин концентрують і складає 96%. піддають сублімаційному сушінню. Вихід цик Комп’ютерна в ерстка Н.Трухан Підписне Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601