Полімерний кон’югат, фармацевтична композиція з протипухлинною активністю

1. Полимерный конъюгат, состоящий по существу из: 90-99,9 мол.% звеньев формулы: (13) , , а другой - атом водорода, не более 9,9 мол.% звеньев формулы: , UA (19) в которой один из R1 и R2 представляет остаток сополимера формулы: (ІІ) где один из А2 и А3 означает химическую связь и другой означает А, значения R, R3 и А указаны выше, с активированным полимером, состоящим по существу из: 90-99,9 мол.% звеньев формулы: (11) 39926 0,1-5 мол.% звеньев формулы: 39926 и 10-0,1 мол.% звеньев формулы: 2. Полимерный конъюгат по п. 1, в котором R=фенил, R3=ацетил А=Phe-Leu-Gly или Phe-LeuGly-b Ala. 3. Полимерный конъюгат по пп. 1 или 2, являющийся сополимером 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана, (метакрилоилглицил-фенил-аланиллейцил-глицил)-3-амино-2-гидроксипропана и (метакрилоилглицил-фенилаланил-лейцил-глицилbаланил)паклитакселя. 4. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, включающая действующее средство и разбавитель или носитель, отличающаяся тем, что в качестве действующего средства она содержит соединение по пп. 1, 2 или 3 в эффективном количестве. , с последующей обработкой полученного конъюгата, который содержит от 2,65 до 7,8 мас./мас. % звена, образованного из активного соединения формулы II, 2-гидроксипропиламином, причем процесс проводят в безводном полярном растворителе при температуре от 15 до 40°С в течение от 1 до 24 часов в присутствии органического или неорганического основания. Настоящее изобретение направлено на связанный с полимером паклитаксель и связанные с полимером производные паклитакселя, обладающие противоопухолевой активностью, на способ их получения и на содержащие их фармацевтические препараты. Паклитаксель (в некоторых публикациях называемый также таксолом) принадлежит к таксановому семейству дитерпенов, и был выделен с последующей характеристикой из экстрата коры Taxus brevifolia L. Известны также и аналоги паклитакселя, полученные на основе 10-дезацетибаккатина III, экстрагированного из игл Taxus baccata L. (см. Wain и др., JACS, 93, 2325 (1971); Lovelle и др., Proc. Am. Assoc. Cancer. Res., 31 (1990)). Эти соединения, как показано, обладают ярко выраженной противоопухолевой активностью, но в то же время плохо растворимы в воде, и их введение инъектированием или внутривенным вливанием при использовании в качестве носителя кремофора ЕL (фирменное название) сопровождается некоторыми токсичными побочными эффектами. Настоящим изобретением дается полимерный конъюгат формулы I, состоящий по существу из: 90-99,9% мол. звеньев формулы: 0,1-5% мол. звеньев формулы: , а другой - представляет атом водорода; 0-9,9% мол. звеньев формулы: , где R представляет фенил или трет-бутоксигруппу, R3 представляет водород или ацетил, А и А1 , которые могут быть одинаковыми или различными, представляют простую химическую связь, аминокислотный остаток или пептидный спейсер, выбранный из: b-АІа, Gly, Phe-Gly, Phe-Phe, LeuGly, VaI-Ala, Phe-Ala, Leu-Phe, Leu-Ala, Phe-LeuGly, Phe-Phe-Leu, Leu-Leu-Gly, Phe-Tyr-Ala, PheGIy-Phe, Phe-Leu-Gly-Phe, Gly-Phe-Leu-Gly-Phe, Gly-b-Ala, Phe-Gly-bAIa, Phe-Phe-b-Ala, Leu-Gly-bAla, Val-Ala-b-Ala, Phe-Ala-b-АІа, Leu-Phe-b-Ala, Leu-Gly-b-Ala, Phe-Leu-Gly-b-Ala, Phe-Phe-Leu-bAla, Leu-Leu-Gly-b-Ala, Phe-Tyr-Ala-b-Ala, Phe-GlyPhe-b-Ala, Phe-Phe-Gly-b-Ala, Phe-Leu-Gly-Phe-bAla или Gly-Phe-Leu-Gly-Phe-b-Ala. Если более конкретно, то настоящим изобретением даются полимерные конъюгаты паклитакселя и производных паклитакселя с улучшенной растворимостью в воде и пониженной токсичностью. Рекомендуется, чтобы % мол. звеньев, содержащих паклитаксель и производные паклитакселя, составлял 0,5-2, более предпочтительно, если содержание паклитакселя в полимере составляет 2-10% (мас./масс.), и к наиболее предпочтительным относятся те соединения, в которых содержание паклитакселя составляет 4-7% (масс./масс.). Волнистая линия в формуле означает, что кислород, присоединенный в 7-положении формулы паклитакселя, может находится в обоих конфигурациях, т.е. иметь b- (природный) или a-конфигурацию. Рекомендуется, чтобы R представлял фенил, R3 - ацетил, и A - остаток Phe-Leu-GIy или PheLeu-GIy-b-АІa. Все аминокислотные остатки характеризуются природной 1-конфигурацией. Согласно рекомендуемому воплощению изобретения поли , в которой один из R1 и R2 представляет остаток сополимера формулы: 2 39926 мерный конъюгат является сополимером 1-метакрил-иламино-2гидроксипропана, (метакрилоилглицил-фенилаланил-лейцилглицил)-3-амино-2гидроксипропана и 2-(метакрилоил-глицилфенилаланил-лейцилглицил-b-аланил)паклитакселя. Содержание в % масс./масс. определяют после ферментативного гидролиза с помощью ВЭЖХ по методике, аналогичной методике, приведенной в работе Саncer Treatment Rep. 71, 5359 (1987). Ферментативный анализ К 1 мл мышиной или человеческой плазмы добавляют в различных концентрациях связанный с полимером паклитаксельи в определенное время (24, 48, 72, 96 ч) отбирают по 100 мкл и хранят при -70°С до дополнительной обработки. Методика экстрагирования Образцы экстрагируют добавлением 75 мкл 0,5 М тетрабутиламмойфосфата (ТБАФ), 1250 мкл СН3СN и 150 мкл 5 М NaСl и интенсивным встряхиванием 20' при 4°С. По окончании указанного периода образцы центрифугир уют 10' при 15000´g, надосадочную жидкость собирают и испаряют в высоковакуумной центрифуге. Образцы восстанавливают добавлением 500 мкл смеси МеОН-вода (75:25 об./об.) и инъектируют в ВЭЖХ колонку для определения полного содержания паклитакселя (в %). ВЭЖХ система Колонка - Нова-Пак С18(Уотерс) 3,9´300 мм Скорость потока - 1,5 мл/мин Детектор - УФ, 231 нм Инъектировоние - 20 мкл Подвижная фаза - 57,5% Н2О с рН 2 + 42,5% СН3СN Настоящим изобретением кроме того дается способ получения полимерного конъюгата, состоящий в реакции соединения формулы II: , где А1 принимает вышеуказанные значения, с последующей обработкой полученного полимерного конъюгата 2-гидроксипропиламином. Реакцию соединений формулы II с активированным полимером рекомендуется проводить в безводном полярном органическом растворителе, таком как диметилсульфоскид или диметилформамид, возможно в присутствии органического или неорганического основания, такого как щелочной карбонат, диметиламинопиридин или триэтиламин. Реакция обычно продолжается 1-24 часа. Реакцию обычно проводят при температуре 15-40°С, предпочтительно при комнатной температуре. Примеры щелочного карбоната включают карбонаты щелочных металлов и карбонаты щелочноземельных металлов. Некоторые из исходных соединений формулы II являются известными соединениями, например: паклитаксель или аналоги паклитакселя, или же могут быть получены на основе известных соединений. К примеру, 7-эпи-производные могут быть получены кипячением в толуоле паклитакселя или его аналогов в присутствии основания (Na2CO3 или диазабициклоундецен). Другие соединения формулы II являются новыми соединениями, в частности, те соединения, в которых A3 представляет остаток b-Аlа, и те соединения, в которых либо А2, либо А3 представляет ди-, три-, или тетрапептидный спейсер согласно вышеприведенному определению А, и такие соединения охватываются объемом изобретения. Соединения формулы II, в которых A2 отличен от простой химической связи, могут быть получены реакцией паклитакселя или аналога паклитакселя с защищенной аминокислотой или пептидом в присутствии конденсирующего средства, а также в присутствии или отсутствии катализатора, предпочтительно при комнатной температуре с последующим удалением по известным методикам защитной группы. Конденсация может быть также осуществлена использованием активных эфиров, например, пнитрофенилового эфира пептида или аминокислоты. Приемлемые конденсирующие средства включают карбодиимиды, например, дициклогексилкарбодиимид (ДЦК). Приемлемые катализаторы включают: 4-диметиламинопиридин, (ДМАП), пиридин или триэтиламин. Для защиты аминогруппы могут быть применены различные известные защитные группы, и в качестве исходных соединений могут быть использованы продажные защищенные пептиды или аминокислоты. Могут быть использованы аминокислоты или пептиды, защищенные трет-ВОС. тритилом, ФМОК или карбобензилоксигруппой (СВZ). Рекомендуются аминокислоты или пептиды, защищенные трет-ВОС, тритилом или ФМОК. Соединения формулы II, в которых А3 отличен от простой химической связи, могут быть получе (ІІ) в которой один из А2 и, А3 представляют химическую связь, а другой представляет А, где А, R и R 3 принимают вышеуказанные значения, с активированным полимером, состоящим на 90-99,9% мол. из звеньев формулы: , и на 10-0,1% мол. из звеньев формулы: 3 39926 ны защитой или блокированием 2-гидроскигруппы, затем этерифицированием гидроксила в 7-положении с последующим удалением защитной или блокирующей гр уппы 2-положении. Соединения формулы II, в которых А3 представляет остаток Gly или b-AIa, более предпочтительно получать реакцией паклитакселя с 2-3 эквивалентами N-защищенной аминокислоты с образованием 2,7-дизамещенного паклитакселя, отщеплением аминокислоты в 2-положении и затем деблокированием аминокислоты в 7-положении. Реакцию паклитакселя с защищенной аминокислотой проводят в присутствии конденсирующего средства и катализатора, аналогичных вышеуказанным. Отщепление 2-аминокислоты осуществляет установлением рН 7-7,4 в растворе 2,7-ди(минокислоты) паклитакселя, например, смешиванием 2,7-ди (минокислоты)паклитакселя с фосфатным буфером (рН 7-7,4) или небольшим избытком NaHCO3. Деблокирование аминокислоты проводят по известным методикам деблокирования аминокислот, например, обработкой слабой кислотой, такой как уксусная кислота или восстановлением. Так, например, паклитаксель оставляют реагировать с 2-3 мол. эквивалентами N-защищенной аминокислотой (трет-ВОС, СВ или ФМОК защищенной) в хлористом метилене в присутствии ДЦК и каталитического количества 4-диметиламинопиридина. Таким путем в 2 и 7-положения вводят защищенную аминокислоту. 2,7-Бисаминокислотное производное паклитакселя оставляют на 25 часов в присутствии NaHCO3 в смеси Н2ОМеОН, в результате чего происходит слективное деблокирование 2-положения с образованием 7замещенного производного паклитакселя. Защитные группы удаляют с помощью приемлемых деблокирующи х агентов (например: кислоты, мягкого основания или гидрогенолизом). Активированный полимер представляет собой синтетический водорастворимый полимер, полученный мополимеризацией N'(-2-гидроксипропил)метакриламида с п-нитрофениловыми эфирами N-метакрилоилолигопептидов согласно патентам США 4062831 и 4097470. Полимерные конъюгаты формулы I и новые производные паклитакселя формулы II отличаются хорошей растворимостью в воде, боисовместимостью, и выделяют паклитаксель или производные паклитакселя в плазму или после попадания вовнутрь в клетки путем отщепления олигопептидных спейсеров. Биологическая активность Анализ на соединение и разъединение микротрубочек Тубулин мозга теленка получают в двух циклах соединения-разъединения (Shelanski. M.L, Caskin F., Cantor C.R., Proc. Natl. Acad. Sci. США 70, 765-768, 1973) и хранят в жидком азоте в МАВ (0,1 M MES, 2,5 мМ ЕGTA, 0,5 мМ MgSО4 , 0,1 мМ ЕДТА, 0,1 мМ ДТТ, рН, 6,4). Все опыты проводят на белке, хранившейся менее 4 недель. Перед каждым опытом тубулин выдерживают 30 мин при 4°С. Ансамбли регистрируют по методике Caskin и др. (Caskin F., Саntor C.R., Shelanski M.Y. Molec. Biol. 89, 737-753, 1874). Кювету (толщиной 1 см) с тубулином (1 мг/мл) и 1 мМ ГТФ нагревают до 37°С и при 340 на двухволновом двухлучевом спектрофотометре Перкин-Эльмер 557, снабженным самописцем и термостатически регулируемой камерой для образца, непрерывно проводят определенные мутности. Через 30 мин добавляют 4 мМ СаСl2 и в течение 10 мин по уменьшению мутности определяют деполимеризацию. Через регулярные промежутки времени в 15 мин добавляют определенные дозы испытуемых соединений и регистрируют изменение мутности. Данные выражают в виде процента повторной полимеризации, вызываемой испытуемым соединением. Полученные результаты приведены в табл. 1. In vi vo анализ чувствительности к лекарственному средству Экспоненциально растущими клетками мышиной меланомы В16-F10 засевают (2´104 клеток/мл) в RРMI среде с добавкой 10% дезактивированной нагреванием околоплодной телячьей сыворотки и 2 мМ глютамина в планшеты с 24 ячейками (Костар). Сразу же после высева добавляют в определенных концентрациях испытуемое соединение. Ингибирование роста клеток определяют подсчетом числа клеток с помощью разделяющего счетчика после инкубирования в течение 72 часов. Для каждого испытуемого соединения используют культуры с тремя концентрациями соединения. Антипролиферирующую активность испытуемых соединений подсчитывают по кривым зависимости реакции от дозы и выражают как ИК50 (доза, вызывающая 50%-ное ингибирование роста клеток в обработанных культурах в сравнении с необработанными контрольными культурами). Полученные результаты приведены в табл. 1. Таблица 1 Соединение, полученное в Примере 1 Примере 9 Примере 3 Примере 4 Примере 6 Ссылочное соединение Паклитаксель Соединение тубулина 0,5 мкМ 5 мкМ 0 15 78 145 46 86 0 10 0 10 41 96 ИК50 (мкМ) 19 47 23 11 51 39 Испытание сополимер-паклитакселя, полученного в примере 6, in vivo против В16-Р10 мышиной меланомы в сравнении с паклитакселем Мыши Самки мышей линии С57В16 получены с фермы Чарльз Ривер, Италия. В начале опытов возраст животных 810 недель. Лекарственные средства Из-за ограниченной растворимости паклитакселя в воде его растворяют в носителе, состоящем из 50% полиоксиэтилированного касторового масла (кремофор EL) и 50% этанола, с последующим разбавлением 5%-тным раствором глю 4 39926 козы до целевой концентрации. Раствор несколько мутноват и спустя небольшой промежуток времени наблюдается образование осадка. Соединение примера 6 легко растворяется в 5%-ом растворе глюкозы, и полученный раствор остается прозрачным длительное время (более 2 часов). Конечные концентрации относятся к содержанию паклитакселя в соединении (в общей сложности 4%). Опухоль Используют мышиную меланому В16-Р10. Суспензию 105 клеток опухоли в 0,2 мл инъектируют подкожно в бок мыши. Циркулем измеряют размер опухоли, массу опухоли подсчитывают по формуле: а2 +в ное паклитакселя в количестве, эквивалентном 0,5; 1,5; 10; 20; 25 или 50 мг активного паклитакселя/производного паклитакселя. Полимерные конъюгаты могут быть приготовлены в виде фармацевтических препаратов с фармацевтическими приемлемыми носителями или разбавителями. Может быть использован любой подходящий носитель или разбавитель. Растворы для внутривенных инъекций или вливаний могут содержать в качестве носителя или разбавителя, например, стерильную воду, или что предпочтительнее, они могут иметь вид стерильных водных или изотонических солевых растворов. Нижеследующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение. Пример 1 Сополимер 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана, 1-(метакрилоил-глицил-фенилаланиллейцил-глицил)амино-2-гидроксипропана и 2'(метакрилоил-глицил-фенилаланил-лейцил-глицил)паклитакселя. К раствору 1,4 г сополимера 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана и N-(метиленкарбонил-Phe-Leu-Gly-4-нитрофенокси)метакриамида, полученного по методике І. Коресек и др. (Makzomol Chem. 177, 2833 (1976)), в 15 мл безводного диметилформамида добавляют 100 мг паклитакселя и 15 мг диметиламинопиридина. Желтый раствор перемешивают 8 часов в безводных условиях при комнатной температуре. Затем в реакционную колбу по каплям прибавляют 0,2 мл 2-гидроксипропиламин и содержимое колбы перемешивают 30 минут. Реакционную смесь нейтрализуют 0,3 мл ледяной уксусной кислотой, концентрируют в вакууме до небольшого объема и затем переносят в 200 мл ацетона. После перемешивания 30 минут осадок отфильтровывают и промывают ацетоном с получением 1,25 г заглавного соединения. Содержание паклитакселя составляет 4,5% (установлено ферментативным гидролизом и ВЭЖХ анализом), Из раствора ацетона выделяют непрореагированный паклитаксель. Пример 2 2'-(N-Тритил-фенилаланил-лейцил-глицил) паклитаксель К раствору 170 мг паклитакселя в 16 мл ацетонитрила добавляют 24 мг диметиламинопиридина и 150 мг N-тритил-фенилаланил-лейцилглицила-4-нитрофенилового эфира. Желтый раствор перемешивают 20 часов при комнатной температуре, после чего испаряют досуха в вакууме. Остаток хромируют на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетат-гесан (35:25) и получением 380 мг заглавного соединения. 1 Н-ЯМР (400 МГц, СDСl3) d: 0,82 (д, J=6,4 Гц, 3Н, d-Leu), 0,85 (д, J=6,7 Гц, 3Н, d-Leu); 1,15 (с, 3Н, 16), 1,26 (с, 3Н, 17), 1,2-1,6 (м, 3Н, b+b+g-Leu), 1,69 (с, 3Н, 19), 1,85 (с, 1Н, ОН-1), 1,89 (м, 1Н, 6b), 1,96 (д, J=1,2 Гц, 3Н, 18), 2,14 (дв. д, J=5,9 Гц, J=13,5 Гц, 1Н, b-Phe), 2,24 (с, 3Н, СН3СО/10), 2,22,7 (м, 5Н, СН3-14+ОН-7+6a+b-Phe+NH-Phe), 2,47 (с, 3Н, СН3СО-4), 3,5 (м, 1Н, a-Phe), 3,74 (дв. д, 2 Введение лекарственного средства Паклитаксель вводят внутрибрюшинно, вследствие его плохой растворимости и токсичности носителя. Соединение пример 6 вводят внутривенно. Оба соединения вводят на 1, 5 и 9 день после имплантации опухоли. Приведенные в табл. 2 данные показывают большую активность соединения настоящего изобретения по сравнению с паклитакселем. Доза полимерного конъюгата относится к содержанию поклитакселя. Таблица 2 Соединение Контроль Паклитаксель Соединение пр. 6 Доза (мг/кг) 14,6 22 33 14,6 22 Ингибирование опухоли (%) 53 38 92 77 79 Токс. 0/10 0/10 1/7 0/9 0/10 Токс. - число мышей, погибших в результате отравления. Определение токс. проводят, если мышь погибает раньше контрольной или если наблюдается заметные потери в массе тела и/или уменьшение размера селезенки и/или печени. Из приведенных данных видно, что полимерные конъюгаты настоящего изобретения обладают прекрасной противоопухолевой активностью. Таким образом, эти соединения являются полезными противоопухолевыми средствами в следствие их низкой токсичности и повышенной растворимости в воде по сравнению с паклитакселем и его аналогами. Примеры опухолей, подлежащих лечению, включают: саркомы, карциному, лимфомы, нейробластому, меланому, опухоль Вильса, лейкозы и аденкарционому. Улучшенная растворимость и пониженная токсичность полимерных конъюгатов настоящего изобретения означает их пригодность для внутривенных инъекций или вливаний. Дозировка зависит от возраста, массы и состояния больного. Дозировки могут находиться в интервале от 1 мг/кг массы тела до 1 г/кг массы тела; предпочтительно 4800 мг/кг массы тела. Обычные составы содержат связанный с полимером паклитаксель/производ 5 39926 J=4,7 Гц, J=18,2 Гц, 1Н, a-Gly), 3,8 (м, 1Н, a-Leu), 3,83 (д, J=7 Гц, 1Н, 3), 4,17 (дв. д, J=7 Гц, J=18,2 Гц, 1Н, a-Gly), 4,22, 4,33 (два д, J=8,5 Гц, 2Н, СH2-20), 4,46 (м, 1Н, 7), 4,97 (дв. д, J=2,2 Гц, J=9,9 Гц, 1Н, 5), 5,44 (д, J=2,3 Гц, 1Н, 2'), 5,71 (д, J=7 Гц, 1Н, 2), 5,97 (дв. д, J=4,7 Гц, J=7 Гц, 1Н, NHGly), 6,07 (дв. д, J=2,3 Гц, J=9,4 Гц, 1Н, 3'), 6,2-6,3 (м, 2Н, 13+10), 6,8-9,2 (м, 30Н, 6-Ph), 6,95 (д, J=6,7 Гц, 1Н, NH-Leu), 8 (д, J=9,4 Гц, 1Н, NH-4'). Пример 3 2'-(фенилаланил-лейцил-глицил)паклитаксель В смеси ледяной уксусной кислоты (22 мл) и воды (6 мл) растворяют 2'-(N-Trit-Phe-Leu-Gly) паклитаксель (250 мг) и раствор перемешивают 1 час при комнатной температуре. Растворитель испаряют досуха в вакууме, остаток перемешивают 30 минут в смеси диэтиловой эфир-гексан (1:1) и после фильтрования получают 160 мг заглавного соединения. ББА-МС: m/z 1171/M+H/+, 1112 MCH3COOH+2Н, 1051, 1024, 911, 603, 595, 509. 1 Н-ЯМР (400 МГц, СDСl3) d: 0,88 (д, J=5,4 Гц, 3Н, d-Leu), 0,92 (д, J=6,4 Гц, 3Н, d'-Leu), 1,13 (с, 3Н, 16), 1,16 (с, 3Н, 17), 1,4-2 (м, 4Н, b+b+g-Leu+6b), 1,69 (с, 3Н, 19), 1,91 (д, J=1,2 Гц, 3Н, 18), 2,16 (дв. д, J=6 Гц, J=13,8 Гц, 1H, 14), 2,23 (с, 3Н, COCH 310), 2,4-2,6 (м, 3Н, 6a+14+b-Phе), 2,53 (с, 3Н, СОСН3-4), 2,9 (дв. д, J=4,1 Гц, J=13,5 Гц, 1H, b'Рhe), 3,49 (дв. д, J=4,1 Гц, J=9,1 Гц, 1H, a-Phe), 3,82 (д, J=7,3 Гц, 1H, 3), 3,9-4,1 (м, 2H, a+a'-Glу), 4,22, 4,33 (два д, J=8,7 Гц, 2Н, СН2-20), 4,27 (м, 1H, a-Leu), 4,44 (дв. д, J=6,4 Гц, J=10,8 Гц, 7), 4,98 (дв. д. J=2,4 Гц, J=9,7 Гц, 5), 5,61 (д. J=3,2 Гц, 1H, 2'), 5,7 (д, J=7,3 Гц, 1H, 2), 6, 12 (дв. д, J=3,2 Гц, J=9,4 Гц, 1H, 3'), 6,21 (м, 1H, 13), 6,28 (c, 1H, 10), 6,8-8,2 (м, 21H, 4-Рh+NН Leu), 7,87 (д, J=9,4 Гц, 1H, NH-4'). Пример 4 Сополимер 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана, 1-(метакрилоил-глицил)амино-2-гидроксипропана и 2'-(метакрилоил-глицил-фенилаланил-лейцил-глицил)паклитакселя К раствору 1 г сополимера 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана и N-(метилкарбонил4-нитрофенокси) метакриламида, полученного по методике P. Rejmanovа и др. (Makromol. Chem. 178, 2159-2168), в 10 мл безводного диметилформамида добавляют 100 мг 2'-Phe-Leu-Gly паклитакселя и 10 мг диметиламинопиридина. Желтый раствор перемешивают 2 часа в безводных условиях при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляют 2-гидроксипропиламин (0,15 мл) и все перемешивают 30 минут. Реакционную смесь нейтрализуют 0,2 мл ледяной уксусной кислоты, концентрируют в вакууме до небольшого объема и переносят в 200 мл ацетона. Смесь перемешивают 1 час, осадок отфильтровывают и после промывки ацетоном получают 960 мг заглавного соединения. Содержание паклитакселя составляет 6% (определено ферментативным гидролизом и ВЭЖХ анализом). Пример 5 Сополимер 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана, 1-(метакрилоил-глицил)амино-2-гидрок сипропана и 2'-(метакрилоил-глицил)паклитакселя К раствору 1,6 г сополимера 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана и N-(метиленкарбонил-4-нитрофенокси)метакриламида в 16 мл безводного диметилформамиде добавляют 100 мг паклитакселя и 20 мг диметиламинопиридина. Желтый раствор перемешивают 20 часов при комнатной температуре, затем добавляют 2-гидроксипропиламин (0,2 мл) и смесь перемешивают 30 минут. Реакционную смесь нейтрализуют 0,3 мл ледяной уксусной кислоты, концентрируют в вакууме до небольшого объема и затем переносят в 200 мл ацетона. Смесь перемешивают 1 час, осадок отфильтровывают и после промывки ацетоном получают 1440 мг заглавного соединения. Содержание паклитакселя составляет 2,65% масс. Пример 6 Сополимер 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана, 1-(метакрилоил-глицил-фенилаланиллейцил-глицил)амино-2-гидроксипропана и 2'(метакрилоил-глицил-фенилаланил-лейцил-глицил-b-аланил) паклитакселя К раствору 620 мг сополимера 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана и N-(метилкарбонил-Phe-Leu-Gly-нитрофенокси)метакриламида в 6 мл безводного диметилформамида добавляют 62 мг 2'-(b-аланил)паклитакселя, приготовленного по методике N.F. Magr. и др., (J. Nat. Products 51, 298-306, 1988), и 10 мг диметиламинопиридина. Желтый раствор перемешивают 5 часов в безводных условиях при комнатной температуре. Затем добавляют 2-гидроксипропиламин (0,1 мл) и смесь перемешивают 30 минут. Реакционную смесь нейтрализуют 0,15 мл ледяной уксусной кислоты, концентрируют в вакууме до небольшого объема и переносят в 150 мл ацетона. Смесь перемешивают 1 час, осадок отфильтровывают и после промывания ацетоном получают 5,85 мг заглавного соединения. Содержание паклитакселя составляет 4% масс./масс. Пример 7 2',7-Ди(карбобензилокси-b-аланил)паклитаксель К раствору 200 мг паклитакселя в 15 мл ацетонитрила добавляют 400 мг N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 200 мг карбобензилокси-b-аланила и 60 мг диметиламинопиридина. Реакционную смесь перемешивают 20 часов, осадок отфильтровывают и растворитель испаряют досуха в вакууме. Хроматографированием остастка на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетат-гексан (1:1), получают 300 мг заглавного соединения. ББА-МС: m/z 1264/М+Н/+, 1204, 1130, 1070. Пример 8 7-(карбобензилокси-b-аланил) паклитаксель К раствору 171 мг 2',7-ди(карбобензилокси-bаланил) паклитакселя в 60 мл метанола добавляют 30 мг бикарбоната натрия и 7 мл воды. Реакционную смесь перемешивают 3 часа при комнатной температуре. Метанол испаряют и продукт экстрагируют этилацетатом. 6 39926 Испарением растворителя досуха в вакууме получают 134 мг заглавного соединения. Пример 9 7-(b-аланил)паклитаксель К раствору 135 мг 7-(карбобензилокси-b-аланил)паклитакселя в 20 мл метанола и 13 мл муравьиной кислоты добавляют 200 мг 5% Pd/C. Реакционную смесь перемешивают 6 часов при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывают, промывают метанолом и растворитель испаряют в вакууме досуха. Остаток растворяют в 8 мл метанола и после осаждения 150 мл диэтилового эфира получают 85 мг заглавного соединения. ББА-МС: m/z 925/М+Н/+, 947/М+11а/+. 1 Н-ЯМР (400 МГц, СDСl3) d: 1,14 (c, 3H, CH316), 1,2 (c, 3H, CH3-17), 1,79 (c, 3H, CH3-19), 1,85 (c, 3H, CH3CO-10), 2,2-2,6 (м, 6Н, СН2-14+СН26+ОСОСН2СН2NН2), 2,42 (c, 3H, CH 3СО-4), 3-3,2 (м, 2Н, ОСОСН 2СН2NН2), 3,9 (д, J=6,8 Гц, 1Н, 3), 4,18, 4,31 (два д, J=8,2 Гц, 2Н, СН2-20), 4,8 (д, J=8,5 Гц, 1Н, 2'), 4,91 (д, J=8,5 Гц, 1Н, 5), 5,62 (дв. д, J=10,2 Гц, J=7 Гц, 1Н, 7), 5,66 (д, J=6,8 Гц, 1Н, 2), 5,81 (дв. д, J=2,9 Гц, J=9,1 Гц, Гц, 1Н, 3'), 6,17 (м, 1Н, 13), 6,19 (с, 1Н, 10), 7,3-8,2 (м, 16Н, NH 4'+3-Ph). Пример 10 Сополимер 1-метакрилоиламино-2-гидроксипропана, 1-(метакрилоил-глицил-фенилаланиллейцил-глицил)амино-2-гидроксипропана и 7-(метакрилоил-глицил-фенилаланил-люйцил-глицил-bаланил)паклитакселя К раствору 1500 мг сополимера 1метакрилоиламино-2-гидроксипропана и N-(метиленкарбонил-Phe-Leu-Gly-4-нитрофенокси)метакриламида в 13 мл безводного диметилформамида добавляют 135 мг 7-(b-аланил)паклитакселя и 20 мг диметиламинопирида. Желтый раствор перемешивают 5 часов в безводных условиях при комнатной температуре. Затем добавляют 2-гидроксипропиламин (0,2 мл) и смесь перемешивают 30 минут. Реакционную смесь нейтрализуют 0,3 мл ледяной уксусной кислоты, концентрируют в вакууме до небольшого объема и переносят в 250 мл ацетона. Смесь перемешивают 1 час, осадок отфильтровывают и после промывания ацетоном получают 1520 мг заглавного соединения. Содержание паклитакселя составляет 7,8% масс./масс. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 7