Лікарський засіб та пептид для лікування вірусних інфекцій, сніду та/або снід-асоційованого комплексу

1 Лекарственное средство для лечения вирусных инфекций, СПИДа и/или СПИД-ассоциированного комплекса, содержащее активное вещество, отличающееся тем, что в качестве активного вещества оно содержит фармацевтически эффективное количество по крайней мере одного соединения с аминокислотной последовательностью общей формулы I Ac-D-Nal(2)-D-Phe-(4-CI)-xxx-A-B-yyy-zzz-Arg-C-DAla-NH2, где ххх = D-Pal(3), D-Phe(4-CI), D-Trp, yyy= D-Cit, D-Lys(R), D-Arg, D-Hci, причем R выбран из группы, состоящей из (Сі С4)-ацила и (Сі - Сю)-алкила, zzz = L-Leu, Nle, Nva, t-Leu, A = Ser, Ser(caxap), причем сахарный остаток выбран из группы, состоящей из глюкозы, галактозы, аллозы, альтрозы, маннозы, гулозы, идозы и талозы, В = Туг, Lys(Nic), Mop, С = Pro, Ala или его фармацевтически приемлемая соль, такая как гидрохлорид, трифторацетат, ацетат, сульфат, фосфат, мезилат или тозилат 2 Лекарственное средство по п 1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой пептид со следующей аминокислотной последовательностью Ac-D-Nal(2)1-D-Phe(4-CI)2-D-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D-Cit6Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10 (формула II) или его фармацевтически приемлемую соль 3 Лекарственное средство по п 1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет со вш бой пептид со следующей аминокислотной последовательностью 1 2 3 4 5 Ac-D-Nal(2) - D-Phe(4-CI) - D-Pal(3) - Ser - Туг 6 7 8 9 10 D-Cit - Nva - Arg - Pro - D-Ala (формула III) или его фармацевтически приемлемую соль 4 Лекарственное средство по п 1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой пептид со следующей аминокислотной последовательностью Ac-D-Nal(2)1 - D-Phe(4-CI)2 - D-Trp3 - Ser4 - Туг5 - DCit6 - Leu7 - Arg8 - Pro9 - D-Ala10 (формула IV) или его фармацевтически приемлемую соль 5 Лекарственное средство по п 1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой пептид со следующей аминокислотной последовательностью Ac-D-Nal(2)1 - D-Phe(4-CI)2 - D-Pal(3)3- Ser4- Туг5 D-Cit6 - Leu7 - Arg8 - Pro9 - D-Ala10 (формула V) или его фармацевтически приемлемую соль 6 Лекарственное средство по п 1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой пептид со следующей аминокислотной последовательностью Ac-D-Nal(2)1 - D-Phe(4-CI)2 - D-Pal(3)3 - Ser4 - Туг5 D-HCi6 - Leu7 - Arg8 - Pro9 - D-Ala10 (формула VI) или его фармацевтически приемлемую соль 7 Лекарственное средство по п 1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой пептид со следующей аминокислотной последовательностью Ac-D-Nal(2)1 - D-Phe(4-CI)2 - D-Pal(3)3 - Ser4 - Туг5 D-Cit6 - t-Leu7 - Arg8 - Pro9 - D-Ala10 (формула VII) или его фармацевтически приемлемую соль 8 Лекарственное средство по п 1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой пептид со следующей аминокислотной последовательностью Ac-D-Nal(2)1 - D-Phe(4-CI)2 - D-Pal(3)3 - Ser4 - Туг5 D-Cit6 - Leu7 - Arg8 - Ala9 - D-Ala10 (формула VIII) или его фармацевтически приемлемую соль 9 Пептид со следующей аминокислотной последовательностью общей формулы I Ac-D-Nal(2)-DPhe(4-CI)-xxx-A-B-yyy-zzz-Arg-C-D-Ala-NH2, где ххх = D-Pal (3), D-Phe(4-CI), D-Trp, yyy= D-Cit, D-Lys(R), D-Arg, D-Hci, причем R выбран из группы, состоящей из (С1-С4)ацила и (СгСю)-алкила, zzz = L-Leu, Nle, Nva, t-Leu, О 00 го 41938 A = Ser, Ser (сахар), причем сахарный остаток выбран из группы, состоящей из глюкозы, галактозы, аллозы, альтрозы, маннозы, гулозы, идозы и талозы, В = Туг, Lys(Nic), Mop, С = Pro, Ala или его фармацевтически приемлемая соль, такая как гидрохлорид, трифторацетат, С 1981 г у мужчин-гомосексуалистов большей частью в Нью-Йорке и Сан-Франциско наблюдались до настоящего времени редкие неизлечимые инфекционные заболевания У всех пациентов находили тяжелые дефекты иммунозащиты Вскоре после этого Люком Монтанье в Институте Пастера был обнаружен новый вирус, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) В настоящее время для лечения СПИДа используется только аналог дидезоксинуклеозида 3'ацидо-З'дезокситимидин (AZT) или цидовудин (INN) Он смягчает симптомы болезни и увеличивает среднюю продолжительность жизни пациентов, болеющих СПИДом (Европейская заявка на патент № 206497) При лечении с помощью AZT получают образование устойчивых штаммов вируса и отягчающие побочные действия на костный мозг Другие медикаменты находятся в клиническом испытании В выложенной заявке ФРГ № 3935580 описывается применение 1-октадецил-2метил-глицеро-3-фосфохолина для получения лекарственных средств для борьбы с ВИЧ-инфекциями В Европейской заявке на патент № 493378 описывается применение 2'-3'-дидеоксигуанозина или моно- или трифосфатов 2'3'-дидеоксигуанозина для той же цели Все эти вещества находятся еще на этапе клинической разработки и еще не достигли рыночной готовности Лекарственные средства, используемые в области антивирусной химиотерапии, не обладают в настоящее время желательной избирательностью Таким образом существует большая потребность в хорошо переносимых, сильнодействующих медикаментах, которые не только замедляют течение болезни, но и препятствуют размножению вирусов, и, кроме того, могут стабилизировать ослабленную имунную систему пациентов Неожиданно было обнаружено, что в опыте по скринингу СПИДа на клетках CEM-IW декапептиды, аналогичные LHRH, согласно формулам IIVIII имеют анти-ВИЧ действие, а также стимулируют рост клеточных культур Предметом изобретения является получение лекарственного средства на основе пептидных LHRH-антагонистов и бомбезин-антагонистов Сами соединения имеют незначительную токсичность при самой высокой дозировке при применении Аминокислотная последовательность LHRH имеет следующую форму LHRH = p-Glu1-His2-Trp3-Ser4-Tyr5-Gly6-Leu78 Arg -Pro9-Gly10-NH2 Общая формула I описывает предложенные в изобретении пептиды ацетат, сульфат, фосфат, мезилат или тозилат, за исключением следующего пептида Ac-D-Nal(2)1 - D-Phe(4-CI)2 - (D-Pal(3) или D-Trp)3 Ser4 - Туг5 - (D-Cit или D-Hci)6 -Leu7 - Arg8 - Pro8 - DAla10 - NH2 для лечения вирусных инфекций, СПИДа и/или СПИД-ассоциированного комплекса Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4CI)-xxx-A-B5-yyy-zzz-Arg-Pro-D-Ala-NH2 Формула I причем ххх = D-Pal (3), D-Phe (4CI) ууу = D-Cit, D-Lys (R), D-Hc1 R может иметь значения (СгС4)-ацил или (С-і-Сю)-алкил zzz = L-Leu, Nle, Nva, t-Leu A = Ser, Ser (сахар) Сахар может принимать значения глюкозы, галактозы, аллозы, альтрозы, маннозы, гулозы, идозы или талозы В = Туг, Lys (Nic), Mop Бомбезин имеет следующую аминокислотную последовательность Бомбезин = p-Glu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn6Gln7-Trp8-Ala-Val10-Gly11His12-Leu13-Met14-NH2 Формула IX Аналогичный бомбезину пептид согласно формуле X имеет следующую структуру [D-Tpib, Leu-psi-Leu' - I4]BN(6-14) Формула X Далее для терапии СПИДа могут применяться бомбезин-антагонисты согласно общей формуле XI X-A 1 -A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-psi-A£ Формула XI причем Q обозначает -NH2 или OQ1 причем Q1 обозначает водород, (С-Сю)-алкил, фенил или фенил, одно- или многократно замещенный через алкильные группы, содержащие от 7 до 10 углеродных атомов, X обозначает водород или простую связь для радикала А2, ацильный радикал органической кислоты с 1-6 углеродными атомами или группу R -СО причем 1 R1 может иметь значения, приведенные выше при Q1 или 2 R СО может иметь значения 41938 -NH-C-NR o R r 'N С О О 2 3 причем R и R могут быть одинаковыми или различными и могут обозначать водород или метил, далее R2 может обозначать алкильную группу с 110 углеродными атомами, фенильную группу, фенильную группу, замещенную через одну или несколько алкильных групп с 1-10 углеродными атомами, фенильную группу, замещенную через один или несколько галогенных атомов, например, фтор, хлор, бром или йод А1 обозначает D-, L-, или D-, L-p-Glu, Nal, Phe, Thi, Туг, Нса, Tri, Hpp, Mpp, Trp, или Тгр, замещенный на бензольном кольце, причем один или несколько заместителей отобраны из группы галогенов, -NO2, -NH2, -ОН, Сі-Сз-алкил, С-і-Сзалкокси и галоген может обозначать фтор, хлор или бром, А2 обозначает Asp, Dpa, Gin, His, Met, His, His (Bz), His (z) или формулу из группы Dpa (x), Asp (у) Glu [-] и Glu [у] причем X обозначает ацильную группу, алкильную группу (C-I-C-IO) или простую связь и -OR6 или Y имеют значение R1 -N причем R и R могут быть одинаковыми или различными и R5 обозначает водород, Сі-Сз-алкил или фенил, R6 обозначает водород или С-і-Сз-алкил или -NH-C-NH, О или Формула (II) = Формула (III) = Формула (IV) = Формула (V) = Формула (VI) = Формула (VII) = Формула (VIII) = [Ac-DNal(2)1, [Ac-DNal(2)1, [Ac-DNal(2)1, [Ac-DNal(2)1, [Ac-DNal(2)1, [Ac-DNal(2)1, [Ac-DNal(2)1, D-Phe(pCI)2, D-Phe(pCI)2, D-Phe(pCI)2, D-Phe(pCI)2, D-Phe(pCI)2, D-Phe(pCI)2, D-Phe(pCI)2, и [-] является простои связью, соединяющей карбоксильную группу с а-аминогруппой, если X является простой связью А3 обозначает Nal, Pal, Tpi, Trp, MeTrp, Trp (For) или Trp с замещенным бензольным кольцом, причем бензольное кольцо замещено через одно или несколько звеньев из группы галоген, NO2, NH2, ОН, метил, этил или С-і-Сз-алкокси, причем галоген может обозначать фтор, хлор и бром, А4 обозначает Ala А5 обозначает Val или MeVal, А6 обозначает Glu, Phe, или D-Ala, А7 обозначает His, MeHis, His(Bz), His(Z), Lys(Z) или Pal, А8 обозначает восстановленный изостер из Leu или Phe, А9 обозначает Leu, Met, Phe, Tpi или замещенный Tpi, причем бензольное кольцо замещено одинаковыми заместителями, как в А и бензольный радикал Тгр замещен одинаковыми заместителями, а также фармацевтически приемлемые соли пептидов, как например, гидрохлорид, трифгорацетат, ацетат, сульфат, фосфат, месилат или тосилат Применяемые сокращения для аминокислот, пептидов и их производных рекомендованы комиссией по биохимической номенклатуре Международного союза по чистой и прикладной химии и Международного союза по биохимии (European J Biochem, 1984, 138, 9-37) Сокращения для менее употребительных аминокислот Dpa обозначает 2,2-диаминопропионовую кислоту Nal обозначает 3-(2-нафтил)-аланин, Thi обозначает р-2'-тиенилаланин, Tpi обозначает 2,3,4,9-тетрагидро-1Н-пиридо-[3,4-Ь]-индол-3- карбоновую кислоту Nic обозначает никотиноил Мор обозначает 4-(морполинометил)-фенилаланин Особенно предпочтительные соединения согласно общей формуле (I) имеют следующие аминокислотные последовательности D-Pal(3)3, D-Cit6, Nle7 D-Ala1ul-LHRH D-Pal(3)3, D-Cit6, Nva7 D-Ala1>LHRH D-Trp3, D-Cit6, D-Ala1u]-LHRH D-Pal(3)3, D-Cit6, D-Ala10]-LHRH D-Pal(3)3, D-Cit6, D-Ala10]-LHRH D-Pal(3)3, D-Cit6, t-Leu7, D-Ala10]-LHRH D-Pal(3)3, D-Cit6, Ala9, D-Ala10]-LHRH Предложенные в изобретении олигопептиды синтезируются в соответствии с общепринятыми известными в литературе способами Обобщенное описание рассматриваемого способа имеется, например, М Bodannszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York 1984 Принципы твердофазного синтеза полипептидов рассматриваются, например, в учебнике J М Stewart J D Young, Solid Phase Peptide Synthesis Pierce Chem Co, Rockford, II, 1984 (2 Auflage) и в обзорной статье L Barany et al , Int J Peptide Protein Res 30, 705-749 (1987) Синтез пептидов согласно формулам II-VIII осуществлялся согласно блок-схеме на метилбензидриламин-смоле (товарная форма-гидрохлорид) фирмы Advanced Chem Tech/Louisville 41938 (Kentucky), USA, которая соответственно до присоединения С-концевого Boc-D-аланина была превращена с помощью 10%-го триэтиламина в дихлорметане (V/V) в свободное основание Все последующие Na-Boc-защищенные аминокислоты были связаны в тройном молярном избытке в присутствии диизопропилкарбодиимида (DIC) и 1-гидроксибензотриазола (HOBt) в CH2CI2/DMF в течение 90 мин, в дихлорметан/диметилформамид-смеси состава 80/20 (V/V) и Восзащищенная группа была отщеплена путем получасового воздействия 50%-ной трифторуксусной кислоты (TFA) в дихлорметане Остатки свободных аминофункции были блокированы путем ацетилирования в пятикратном избытке ацетилимидазола в дихлорметане Последовательность стадий реакции синтеза пептидов на смоле следует из блок-схемы Для отщепления пептидов, связанных со смолой, соответствующий конечный продукт твердофазного синтеза высушивали в вакууме и обрабатывали в 500-кратном избытке HF/анизола 10 1 (V/V) в течение 45-60 минут при температуре 0°С После отгонки HF и анизола в вакууме неочищенные пептидамиды при перемешивании с безводным простым этиловым эфиром выпадали в виде белых твердых веществ Отделение от имеющихся полимерных носителей осуществлялось путем промывания 50%-ной (V/V) водной уксусной кислотой Путем щадящего концентрирования уксуснокислых растворов в вакууме могли быть получены соответствующие пептиды в виде высоковязких масел, которые после подачи абсолютного простого эфира постепенно превращались на холоде в белые твердые вещества Неочищенные пептиды выделяли, промывали на фритте абсолютным простым эфиром и высушивали в вакууме Этап Препаративная очистка осуществлялась с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД) в указанных условиях Параметры для препаративной ЖХВД Насос фирмы Шимадзу LC-8A Приборы Детектор фирмы Шимадзу SPD-6A Интегратор фирмы Шимадзу С-Р4А Контроллер фирмы Шимадзу SCL=6A Ацетонитрил Lichrosolv Merck ТИП 30 Реактивы Три фтору ксусная кислота Fluka №91700 Чистая вода (Seralpur-приложение) Подвижная фаза А 970 мл воды (VE-вода чистая) + 30 мл ацетонитрила + 1 мл трифгоруксусной кислоты Подвижная фаза В 300 мл воды (VE-вода, чистая) + 700 мл ацетонитрила + 1 мл трифгоруксусной кислоты Скорость протока 40 мл/мин Давление 14 бар Среднее время пробега препаративного прохождения примерно от 30 до 40 мин Идентичность всех синтезированных пептидов была доказана после очистки с помощью ЖХВД путем аминокислотного анализа, массспектрометрии и 1Н-ЯМР-спектроскопии Блок-схема для твердофазного синтеза LHRH-пептидов Повторяющиеся циклы твердофазного синтеза объединены в нижеследующей схеме, этапы 1-17 описывают необходимую последовательность операций для связи соответственно одной аминокислоты Реактивы и операции 1 Вос-аминокислота, DIC, HOBt 1 1 1 2 Время(мин) Тест с окрашиванием на полное превращение, в случае положительно 90 повторить 1 и 2 3 МеОН, промыть 1 4 DIPEA, 10% в CH2CI2, нейтрализация 2 5 МеОН, промыть 1 6 CH2CI2, промыть, трижды 2 7 (СНзСО)2О, имидазол, 1 1, ацетилирование 30 8 МеОН, промыть, дважды 1 9 CH2CI2, промыть, трижды 2 10 TFA, 50% в CH2CI2, отщепление Вое 1 11 TFA, 50% в CH2CI2, отщепление Вое 30 12 Изопропанол, промыть и обесцветить 2 13 DIPEA, 10% в СН2СІ2, нейтрализация 3 14 МеОН, промыть 1 15 DIPEA, 10% в СН2СІ2, нейтрализация 3 16 МеОН, промыть 1 17 CH2CI2, промыть, дважды 2 41938 Продую" сикгеза согласно вышеуказанной блок-схеме Ac-D-Nal(2)-D-Phe (4CI)-Xxx-A-B-Yyy-Z-zz-ArgPro-D-Ala-NH2 (согласно формуле I) Полнота синтеза была проверена с помощью теста на хлоранил по Th Chnstensen, Acta Chem Scand, В 33, 763 (1979) и с помощью Keiserтеста на нингидрин по Stewart, Young Изобретение касается способа получения лекарственного средства для терапии вирусных инфекций, предпочтительно для лечения СПИДа Далее описываются новые пептиды и их синтез, которые можно применять для антивирусной терапии Сами пептиды имеют незначительную токсичность при очень высокой дозировке По сравнению с проверенным контрольным соединением азидотимидина величины ECso в опыте на NCI в исследуемых пептидах находятся между 5,9x10 7 моль/л и 2,0x10 5 моль/л Указанное контрольное соединение AZT (азидотимидин) имело, например, величину ЕС50 3,10x10 9 моль/л Все соединения дозировались в диапазоне от 10 4 до 10 8 моль/л Поэтому указанная величина IC50 (ингибирующая концентрация, при которой в неинфицированной культуре погибает 50% клеток) больше, чем самая высокая дозировка Обработанная инфицированная культура показывает величину ECso 4,5x10 5 моль/л Так как величины для обработанной, неинфицированной культуры не снижаются до величины ІСбо, то для величины ІС50 может указываться только величина для самой высокой дозировки, т е ICso =