Вакцинна композиція,спосіб лікування ссавців, що страждають або сприйнятливі до інфекції, спосіб лікування ссавців, що страждають на рак, спосіб одержання вакцинної композиції, композиція ад’ювантів

1. Вакцинная композиция, содержащая антиген и/или антигенную композицию и адъювант, отличающаяся тем, что в качестве адъюванта она содержит комбинацию очищенной фракции сапонина (QS21) и 3 де-0-ацилированного монофосфориллипида А (ЗД-МФЛ). 2. Вакцинная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что соотношение QЗ 21 и ЗД-МФЛ составляет от 1 :10 до 10 : 1. 3. Вакцинная композиция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что она представляет собой композицию, вызывающую цитолитический Т-клеточный ответ у млекопитающих на антиген или антигенную композицию. 4. Вакцинная композиция по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что она представляет собой композицию, стимулирующую выработку g-интерферона. 5. Вакцинная композиция по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что соотношение QЗ 21 : ЗДМФЛ составляет от 1:1 до 1:2,5. 6. Вакцинная композиция по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что в качестве антигена или антигенной композиции она содержит антиген или антигенную композицию, выделенные из вируса иммунодефицита человека, вируса иммунодефицита кошек, вируса Herpes Simplex типа 1, вируса Herpes Simplex типа 2, цитомегаловируса человека, вируса гепатитов А, В, С или Е, респираторно-синцитиального вируса, вируса папилломы человека, вируса гриппа, Salmonella, Neisseria, Borrelia, Chlamydia, Bordetella, Plasmodium или Toxoplasma. C2 (54) ВАКЦ ИННА КОМПОЗИЦІЯ,СПОСІБ ЛІКУВАННЯ ССАВЦ ІВ, ЩО СТРАЖД АЮТЬ АБО СПРИЙНЯТЛИВІ ДО ІНФЕКЦІЇ, СПОСІБ ЛІКУВАННЯ ССАВЦІВ, ЩО СТРАЖДАЮТЬ НА РАК, СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ВАКЦИННОЇ КОМПОЗИЦІЇ, КОМПОЗИЦІЯ АД'ЮВАНТІВ 40597 Настоящее изобретение относится к новым рецептурам вакцин, способам их производства и использованию в медицине. Конкретно, настоящее изобретение относится к вакцинам, содержащим QS 21, очищенную посредством жидкостной хроматографии высокого разрешения фракцию, выделенную из коры Quillaja Saponaria Molina и 3 де-0-ацилированному монофосфориллипиду А (3 Д-МФЛ). 3-де-0-ацилированный монофосфориллипид А известен из GB2220 211 (Ribi). С химической точки зрения он представляет смесь 3-деацилированного монофосфориллипида А с 4,5 или 6 ациллированными цепями и производится компанией Ribi Immunochen Montana. QS21 представляет очищенную посредством жидкостной хроматографии высокого разрешения нетоксичную фракцию сапонина из коры южноамериканского дерева Quillaja Sapоnaria Molina, а способ его получения раскрывается (как QA21) в патенте США № 5 057 540. Настоящее изобретение основывается на открытии того факта, что препараты, содержащие комбинации QS21 и 3 Д-МФЛ, синергически усиливают иммунные ответы к данному антигену. Например, вакцина малярийного анти гена, RTS, S в сочетании с 3 Д-МФЛ и QS21 вызывает мощную синергическую индукцию специфического по КС белку ответа цитотоксических Т-лимфо цитов (ЦТЛ) в селезенке. RTS является гибридным белком, включающим большую часть С-концевой порции белка кольцевого спорозоита (КС) Р. falciparum связанную че рез четыре аминокислоты пре-S2 порции поверхностного антигена гепатита В с поверхностным (S) антигеном вируса гепатита В. Его полная структура раскрывается в международной патентной заявке № РСТ/EP92/02591, опубликованной под номером WO 93/10152, заявляющим приоритет перед патентной заявкой Великобритании № 9124390.7. При экспрессировании в дрожжах RTS вы рабатывается в ви де липопротеиновой части цы, а при со-экспрессировании с S антигеном ВГБ он вырабатывается в виде смешанной частицы, известной как RTS, S. Это наблюдение о возможности индуцировать мощный цитолитический ответ Т-лимфо цитов очень важно, поскольку на некоторых животных было показано, что этот ответ обеспечивает защи ту от заболевания. Авто рами настоящего изобретения показано, что сочетание двух адъювантов – QS21 и 3ДМФЛ с рекомбинантным корпускулярным антигеном RTS, S приводит к мощной индук ции специфи ческих по КС белку ЦТЛ в селезенке. QS21 также сам по себе усиливает индукцию ЦТЛ, в то время как 3Д-МФЛ этим свойством не обладает. Можно сказать, что комбинация действуе т синергически, поскольку она обладает большим эффектом, чем сумма отдельных эффектов каждого из адъювантов. Синергизм этих двух адъювантов при индукции ЦТЛ имеет большое значение при применении рекомбинантных молекул в качестве вакцин для индукции ЦТЛ-опосредованного иммунитета. Индук цию ЦТЛ легко видеть, когда антигенмишень синтезируется внутриклеточно (например, при вирусных инфекциях; инфекциях, вызванных внутриклеточными бактериями или в опухо лях), поскольку пепти ды, полученные в результате протеолитического распада антигена могут претерпевать соответствующий процессинг, приводящий к презентации в ассоциации с молекулами класса 1 на клеточной мембране. Однако обычно растворимый антиген не достигает этого процессинга и презентации и не выявляет ограниченных по классу 1 ЦТЛ. Таким образом, стандартные неживые вакцины, вызывая ответы по антите лам и Т-хелперам, обычно не индуцируют ЦТЛ-опосредованного иммунитета. Сочетание этих двух адъювантов, QS21 и 3Д-МФЛ, может преодолеть это серьезное ограничение, касающееся вакцины, основанных на рекомбинантных белках, и выз вать более широкий спектр иммунных ответов. Показано, что ЦТЛ, специфичные к КС белку, защищают о т малярии мышей (Romero и др. Nature 341:323 (1989). В испытаниях на добровольцах, когда людей иммунизировали с помощью облученных спорозоитов Р.falciparum они оказались защищенными от заражения малярией и демонстрировали индукцию ЦТЛ, специфичных в отноше нии эпитопов КС (Malic и др., Proc. Nate, Acad. Sci. USA 88:3300 (1991)). Способность индуцировать ЦТЛ, специфичные в отноше нии антигена, вве денного в ви де рекомбинантных молекул, весьма ценна для разработки вакцины против малярии, поскольку применение облученных спорозоитов непрактично с точки зрения их производства и природы иммунного ответа. В добавление к малярийным вакцинам, способность индуцировать ЦТЛ ответы улучшит также вакцины против вируса Herpes simplex, цитомегаловируса, вируса иммунодефи цита человека, а также во всех случаях, при которых патоген имеет стадию внутриклеточной жизни. Подобно этому, ЦТЛ, специфичные к известным опухолевым антигенам; могут быть индуцированы сочетанием рекомбинантного опухо левого антигена и этих двух адъювантов. Это позволит разработать противораковые вакцины. В некоторых систе мах комбинация 3Д-МФЛ и QS21 оказалась способной синергически усиливать выработку интерферон g. Авторы настоящего изобретения продемонстрировали синергический потенциал 3Д-МФЛ и QS21 посредством использования анти гена Herpes simplex, известного как gD2t является растворимым усеченным гликопротеином D из ВГС-2 и вырабатывается клетками яичника китайского хо мячка, согласно методике Berman и др. Sience 222 524–527. Секреция интерфе рона g связана с защитными реакциями против вн утриклеточных патогенов, включая паразитов, бакте рии и вирусы. Активация макрофагов интерфе роном g усиливает внутриклеточное уничтожение микроба и повышает экспрессию рецепто ров F c. Может наблюдаться также прямая цитотоксичность, особенно в синергизме с лимфотоксином (другим продуктом клеток ТН1). Интерфе рон g является также как индуктором, так и продуктом клеток NK, которые являются основными врожденными эффекторами защиты. Ответы типа ТН1, как через интерферон g , так и посредством иных механизмов, обеспечивают предпочти тельную помощь для выработки изотипов IgG2a. 2 40597 Гликопротеин D нахо дится в ви русной оболочке и обнаруживается также в цитоплазме инфи цированных клеток (Eisenberg R.I., и др., J. of Virol, 1980 35 428–435). Он состоит из 393 аминокислот, вк лючая сигнальный пептид, и имеет молекулярный вес приблизительно 60 кДа. Из всех гликопротеинов оболочки вируса Herpes simplex (ВГС) этот гли копротеин изучен наиболее полно (Cohen и др., J. Virology 60 157–166). Известно, что in vivo он играет главную роль при присоединении вируса к клеточной мембране. Помимо этого, гликопротеин D способен вызывать выработку нейтрализующих анти тел in vivo (Eing, и др., J. Med. Virology 127:59–65). Тем не менее, латентный ВГС2 может реактивироваться и индуцировать рецидив заболева ния, несмотря на присутствие в сыворотке пациента вы сокого титра нейтрализующи х антител. Оче видно, поэтому, что способность индуцировать только нейтрализующие анти тела является недостаточной для адекватного контроля над заболеванием. Чтобы предотвратить рецидив заболевания, необхо дима стимуляция вакциной не только выработки нейтрализующи х анти тел, но и клеточного иммунитета, опосредованного Т-клетками, в частности, ци тотоксическими Т-клетками. С этой точки зрения, gD2t представляет гликопротеин ВГС2 из 308 аминокислот, который включает с 1 по 306 аминокислоты натурального гликопротеина с добавочными аспарагином и глутамином на С-конце усеченного протеина. Эта форма белка включает сигнальный пептид, который отщепляется, в результате чего получается зрелый белок из 283 аминокислот. Выработка такого белка клетками яичника китайского хо мячка описывается в Европейском патенте ЕР-В-139 417. Зрелый усеченный гликопротеин (rgD2t) или эквива лентные белки, секрети руемые клетками млекопитающи х, предпочти тельно используются в вакцинных препаратах настояще го изобретения. Препараты настояще го изобретения являются очень эффективными в отноше нии выработки защитного иммунитета в модели генитального герпеса на морских свинках. Даже при очень низких дозах анти гена (например, 5 mг rgD2t) препараты защи щают морских сви нок от первичной инфекции, а также стимулируют вы работку специфи ческих нейтрализующих ан тител. Авторы, используя препарат настояще го изобретения, продемонстрировали также ответы ти па ТН1, опосредованные эффекторными клетками, у мышей. Настоящее изобрете ние создает вакцину или фармацевти ческую композицию, включающую анти ген, в сочетании с 3 деацилированным монофосфориллипидом А и QS21. Та кая композиция удобна для целого ряда моновалентных или поливалентных вакцин. Предпочти тельно, вакцинные препараты должны содержать антиген или антигенную композицию, способные вызвать иммунный ответ против патогена человека или животных, и выделенные из ВИЧ-1 (такие как gp120 или gp160), любого из вирусов кошачьего иммунодефицита, ви русов герпеса человека или животных, та кие как или его производные или прямой ранний белок, такой как ICP27 из ВГС1 или ВГС2, цитомегаловирусов (такие как В или его производные), вируса Varicella Zoster (такие как gpI, II или III) или из вируса гепатита, таких как вирус ге патита В, например, поверхностный антиген ге патита В или его производные, вирус ге патита А, ви рус ге патита С и ви рус гепатита В, или из других па тогенных ви русов, таких как респираторно-синцитиальный вирус, ви рус папилломы человека или вирус гриппа, или выделенные из пато генных бактерий, таких как Salmonella, Neisseria, Borrelia (например, 0 рА или 0 сВ или их производные), хламидий или Вerdetella (например, Р.69, РТ и FHA) или выделенные из паразитов, та ких как плазмодий или токсоплазмы. Препараты могут содержать также противоопухо левый антиген и применяться для иммунотерапевтического лечения раковых опухо лей. Эти препараты могут также применяться с легкими герпети ческим частицами, как описано в международной патентной заявке № РСТ/GB92/00824 и в международной патентной заявке № РСТ/GB92/00179. Производные поверхностного антигена гепатита В хорошо известны специалистам и включают, среди прочих, преS1, преS2 антигены, описанные в Европейских патентных заявках ЕР-А414 374, ЕР-А-0304 578 и ЕР 198 474. Настоящее изобретение обеспечивает вакцину, которая описывается в настоящем документе, для использования в медицине. Соотношение QS21:3Д-МФЛ обычно составляет от 1:10 до 10:1, предпочтительно, от 1:5 до 5:1, значительно чаще – 1:1. Предпочтительное соотношение для оптимального синергизма составляет от 2,5:1 до 1:1 3Д-МФЛ:QS21. При использовании для человека QS21 и 3Д-МФЛ присутствуют в вакцине в количестве 1 г – 100 г, предпочтительно, 10 г–50 г на дозу. Часто вакцина не требует какого-либо специфи ческого носителя и приготавливается на основе водного или другого фармацевтически приемлемого буфе ра. В некоторых случаях предпочтительно, чтобы вакцины настояще го изобретения содержали квасцы или были представлены в виде эмульсии "масло в воде", или с другим подхо дящим носителем, например, липосомами, микросфе рами или инкапсулированными антигенными частицами. Приготовление вакцин в целом описано в New Trends and Developments' in Vaccines изданном Voller и др. University Park Press, Baltimore, Maryland, USA 1978. Инкапсуляция в липосомы описана, например, Fullerton патент США 4 235 877. Конъюгация белков с макромолекулами раскрывается, например, Likhite, патент США 4 372 945 и Armor и др., патент США 4 474 757. Количество белка в каждой дозе вакцины подбирается таким образом, чтобы индуцировать иммунозащитный ответ без значительных неблагоприятных побочных эффектов типичных вакцин. Это количество варьирует в зависимости от ви да специфического иммуногена и от того, в какой форме он представлен. Обычно каждая доза содержит 1–1000 г белка, предпочтительно, 2–100 г, наиболее предпочтительно, 4–40 г. Оптимальное количество для конкретной вакцины можно установить с помощью стандартных исследований, включая наблюдение соответствующи х иммунных ответов у субъектов экспериментов. Вслед за пер 3 40597 воначальной вакцинацией, субъекты могут получать одну или несколько активных иммунизаций, через адекватные промежутки времени. Препараты настояще го изобретения могут применяться как для профи лактических, так и для лечебных це лей. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает также способ лечения, включающий введение эффективного количества вакцины настоящего изобретения пациенту. Приме ры 1.0. Синергизм между 3Д МФЛ и QS21 в отноше нии индук ции секреции интерфе рона g. С целью исследовать способность препаратов rgD2t, содержащи х адъюванты 3Д МФЛ и QS21, индуцировать иммунный ответ, опосредованный эффекторными клетками, вакцинировали груп пы мышей Balb/c и исследовали клетки их лимфа тических узлов на способность секретировать интерфе рон g, как описано ниже. 1.1. Препараты rgD2t. В этом эксперименте сравнивали три препарата, со держащие адъюванты: 1) rgD2t в 3Д-МФЛ 2) rgD2t в QS21 3) rgD2t в 3Д-МФЛ/QS21 Эти препараты приготови ли следующим образом: rgD2t производился клетками яичника китайского хомячка и соответствовал зрелому 1–283 аминокислот ВГС-2 gD, произве денному согласно методике Berman (Supra) и ЕР 0139417. *rgD2t/3Д-МФЛ 5 mг gD2t/на дозу инкубировали 1 час при перемешивании при комнатной температуре, затем смешивали с суспензией 3Д-МФЛ (25 mг/на дозу). Объем доводили до 70 mл/на дозу с помощью раствора хлорида натрия (5М, рН 6,5±0,5) и воды для инъекций, до получения конечной концентрации 0,15 М хлорида натрия. рН сохраняли на уровне 6,5±0,5. *rgD2t/QS21 5 mг rg D2t/на дозу инкубировали 1 час при комнатной температуре и перемешивании. Объем доводили с помощью раствора хлорида натрия (5 М, рН 6,5±0,5) и воды для инъекций до 70 mл. Затем добавляли QS21 (10 mг/на дозу). рН сохраняли на уровне 6,5±0,5, а конечная концентрация хлорида натрия составляла 0,15 М. *rgD2t/3Д-МФЛ/QS21 5mг rgD2t/на дозу инкубировали при помешивании и комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляли 3Д-МФЛ (25mг/на до зу) в ви де водной суспензии. Конечный объем в 70mл достигался добавлением водного раствора QS21 (10 mг/ на дозу), уровень рН составлял 6,5±0,5, а концентрация хлорида натрия – 0,15 М. 1.2. Иммунизация. Мы шам инъецировали по 35 mл препарата в подушечки задних лапок. Таким образом, каждая мышь получала 70 mл. Иммунизацию производили на 0 и 14 дни. Животных умерщвляли на 21 день. 1.3. Определение интерфе рона. Клетки подколенных лимфо узлов иммунизированных мышей стимулировали in vitro с по мощью rgD2t в количестве 10, 1, 0,1, 0 mг/мл. Утроенные культуры (объемы 200 mл) помеща ли в 96-луночные микротитрационные планшеты, используя 2 х 105 иммунокомпетентных клеток и 2 х 105 облученных (3000 рад) сингенных клеток селезенки не подвергавши хся воздействию животных. Использовалась среда RPMI 1640 с 10% фетальной сыворотки теленка. Аликвоты по 100 mл культуральной среды из каждой повторности собирали для определения интерфе рона g. Культуры исследовали через 72 часа. Для всех исследований контролем была группа, в которой использовали ConA (Boehringer Mannheim) в количестве 5 mг/мл. Контроль был всегда положительным. Секрецию интерферона g определяли с помощью коммерческого ЕZISA производства Holland Biotechnology (Gibro). Исследования выполняли на 100 mл надосадочной жидкости из трех лунок. Секреция интерфе рона g свыше 50 пг/л контроля наблюдалась для всех трех групп препаратов (смотри таблицу). Помимо этого, для QS21 и 3Д-МФЛ наблюдался синерги ческий эффект. В то время как каждый адъювант в отдельности индуцировал клетки, способные секрети ровать интерфе рон g в ответ на rgD2t, их со четание индуцировало более чем в два раза больший ответ, чем сумма отдельных ответов. 1.4. Результаты. Синергизм QS21 и 3Д-МФЛ в отношении индукции секреции интерфе рона Иммунизация:стимуляция in vitro ( mг/мл rgD2t: QS21/3Д-МФЛ rgD2t QS21 rgD2t 3Д-МФЛ rgD2t 10,0 1,0 0,1 0,0 1351 914 335 101 1105 116 50 50 515 192 143 139 Количество интерферона g выражено в пг/мл. Таблица ясно показывает, что комбинированная вакцина индуцирует секрецию интерфе рона g синергически. 2.0 Синергизм 3Д-МФЛ и QS21 в отношении индук ции ЦТЛ. С целью исследования способности частиц RTS, S в 3Д-МФЛ и QS21 адъювантных препаратов индуцировать ЦТЛ, группы мышей В10.BR иммунизировали и клетки их селезенок стимулировали in vitro и исследова ли на цитоток сичность в отношении клеток, экспрессирующих КС белок. 2.1. Препараты частиц RTS, S. Частицы RTS,S помеща ли в три различные композиции: 1. Части цы RTS,S (10 mг) c QS21 (10 mг) и 3Д-МФЛ (25 mг) ; 2. Частицы RTS,S (10 mг) c QS21 (10 mг); 3. Частицы RTS,S (10 mг) c 3Д-МФЛ (25 mг). 4 40597 зом: Препараты пригото вили следующим обра Спустя две недели после повторной иммунизации брали клетки селезенки и стимулировали in vitro, используя сингенные фибропласты, трансфе цированные геном белка кольцевидного спорозоита Р. falciparum (клон 7G8). Эти КС-трансфе цированные клетки описаны в статье Kumar S. и др. (1988), Nature 334:258–260. Культуры помеща ли в среду RPM1 1640, содержащую 10% инактивированной нагреванием фе тальной сыворотки теленка и обычные добавки, хорошо известные специалистам. Иммунокомпетентные клетки культивировали в концентрации 106 клеток/мл в присутствии 105 КС-трансфектантов на мл. Для предотвраще ния пролиферации КС-трансфектантов их облучали в дозе 2 х 104 рад. Культуральную среду за меняли наполовину на 3 и 6 дни и исследовали на цитолитическую активность, на 7 день. 2.4. Исследование анти-КС ЦТЛ на цитотоксичность. Культуры иммунокомпетентных клеток собирали, отмывали и смешивали в соотношениях от 100:1 до 0,3:1 с постоянным количеством в 2 000 клетокмишеней, в объемах 200 mл в 96-луночных планшетах с V-образным дном. Клетками-мишенями являлись сингенные фибропласты, меченные 51Сr. RTS,S/3Д-МФЛ 10 mг RTS,S частиц/на дозу инкубировали при комнатной температуре и перемешива ли в течение 1 часа, а затем смешивали с водной суспензией 3Д-МФЛ (25 mг/на дозу). Объем доводили до 70 mл/на дозу с помощью воды для инфекций и раствора хлорида натрия (5Н, рН 6,5±0,5) до конечной концентрации хло рида натрия 0,15 М (рН сохраняли на уровне 6,5±0,5). RTS,S/QS21 10 mг частиц RTS,S/на дозу инкубировали 1 час при комнатной температуре и перемешивании. Объем доводили с помощью воды для инъекций и раствора хлорида натрия (5Н, рН 6,5±0,5), а затем с помощью водного раствора QS21 (10 mг/на дозу) до конечного объема 70 mл/на дозу. рН сохраняли на уровне 6,5±0,5, а конечная концентрация хлорида натрия составляла 0,15 М. RTS,S/3Д-МФЛ/QS21 10 mг частиц RTS,S/на дозу инкубировали 1 час при комнатной температуре и перемешивании, а затем смешивали с водной суспензией 3Д-МФЛ (25 mг/на дозу). Объем доводили с помощью воды для инъекций и раствора хлорида натрия (5 Н, рН 6,5±0,5), а затем с помощью водного раствора QS21 (10 mг/на дозу) до конечного объема 70 mл/на дозу). рН сохраняли на уровне 6,5±0,5, а конечная концентрация хлорида натрия составляла 0,15 М. 2.2. Иммунизация мышей частицами RTS,S. 4–6-недельных самок мышей линии В10.BR (Н–2К) приобрели у IFFA CREDO (Франция). Группы из трех животных иммунизировали инъекцией в подушечки задних лапок, по 35 mл антигенного препарата в каждую. Животных повторно иммунизировали в такой же дозе антигена спустя две недели. 2.3. Стимуляция in vitro анти-КС ЦТЛ. Применяли два различных ти па клеток-мишеней: 1. Z клетки 2. КС-трансфе рованные Z клетки. Эти клетки подробно описываются у Kumar S. и др. (1988), 334:258–260. Планшеты инкубировали в те чение 6 часов при 37оС, а затем определяли количество радиоактивности, перешедшее в надосадочную жидкость в результате лизиса клеток-мише ней. Цитолитическая активность выражалась в % специфического лизиса: % специфического лизиса препаратом: Клетки-мишени Отношение эффектор:мишень 1.RTS,S/QS21 2. RTS,S/QS21 3. RTS,S/3Д-МФЛ КС-трансфе цированные Z клетки 100 30 10 3 1 0,3 100 30 10 3 1 0,3 58 53 47 27 11 2 3 -2 0 0 -1 3 17 10 5 1 0 -2 -2 1 -1 3 4 1 1 0 1 0 0 -1 5 4 2 4 2 2 Z клетки Иммунизация мышей В10.ВR частицами RTS,S с адъювантами QS21 и 3Д-МФЛ индуцировала в селезенке высокие уровни ЦТЛ, специфичных к КС компоненту RTS,S (препарат # 1). Иммунизация части цами RTS,S с адъювантом QS21 также индуцировала ЦТЛ в селезенке, но в количестве, составляющем лишь около 1/30 уровней препарата # 1 (препарат # 2). Части цы RTS,S с 3ДМФЛ (препарат # 3) не индуцировали ЦТЛ. Поскольку клетки-мишени, которые использовались в этом исследовании, не экспрессировали молекулы главного комплекса гистосовместимости класса ІІ, можно считать эффекторные клетки принадлежащими к ограниченным по классу 1 CD8 + ЦТЛ. 5 40597 50 mг 3Д-МФЛ 10 mг QS21 Этот препарат использовали для экспериментов на обезьянах. 4. Заключение. Комбинирование двух адъювантов, QS21 и 3Д-МФЛ, с корпускулярным рекомбинантным антигеном RTS,S приводило к мощной индукции специфичных по КС-белку ЦТЛ в селезенке. QS21 усиливает индук цию ЦТЛ, а 3Д-МФЛ не обладает этим свойством. Комбинация этих двух адъювантов действует си нергически, поскольку обладает эффектом, большим, чем сумма отдельных эффектов каждого адъюванта. Синергизм между этими двумя адъюванта ми в отношении индукции ЦТЛ является весьма значительным наблюдением, подтверждающим синергизм между QS21 и 3Д-МФЛ в отношении индукции Т-клеток, способных секретировать интерфе рон g в ответ на стимуляцию растворимым рекомбинантным белком gD2t. Это отк рытие имеет большое значение для использования рекомбинантных молекул в качестве вакцин для индукции ЦТЛ-опосредованного иммунитета, поскольку комбинация двух адъювантов, QS21 и 3Д-МФЛ, может преодолеть серьезные ограничения для вакцин, основанных на рекомбинантных белках, и индуцировать более широкий спектр иммунных ответов, чем это было ранее. Данные по иммуногенности, опосредованной эффекторными клетками, у мышей показывают, что препараты rgD2t, содержащие QS21, индуцируют значительный синергический ответ Тклеток типа ТН1 (секреция интерфе рона g ). Показано, что такие Т-клетки типа ТН1 вовлечены в индукцию реакций гиперчувствительности замедленного типа у мышей. Наши собственные данные по профилактике ВГС инфекции показывают, что совместная индукция нейтрализующи х антител и антиген специфичных DTH ответов обеспечивает наилучшую защи ту от инфекции, вызванной вирусом просто го герпеса. 3. Препарат поверхностного антигена гепатита В, гидроксид алюминия, 3Д-МФЛ и QS21. Приготовление поверхностного антигена гепатита В (НВsAg) описывается, например, Harford и др., Develop. Biol. Standard 54 стр. 125 (1983), Gregg и др. Biotechnology 5, стр. 479 (1987), ЕР-А0 226 846 и ЕР-А 229 108, включенных в настоящий документ в качестве ссылок. 3Д-МФЛ получали от Rib. Immunochem QS21 – от Cambridge Biotech, гидроксид алюминия – от Superfos' (A lhydrogel). Для исследований иммуните та, опосредованного клетками-эффекторами, у мышей и обезьян Rhesus приготавливали несколько различных препаратов. 3.1. Препарат 1 приготавливался на фосфатном буфе ре (рН 6,8) и включал следующие ингредиенты на 60 mл дозу: 20 mг HBsAg 30 mг Al(OH)3 30 mг 3Д-МФЛ 10 mг QS21 10 мМ РО430,15 М NaCl Препарат приготавливали следующим образом: 20 mг HBsAg/на дозу инкубировали с Al(OH)3 в те чение одного часа при комнатной температуре, слегка встряхивая. За тем добавляли 3Д-МФЛ в виде суспензии, QS21, фосфатный буфер и хлорид натрия и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Готовый препарат имел рН между 6,5 и 7,0 и использовался для иммунизации мышей посредством инъекций в подушечки лапок. 3.2. Препарат 2 приготавливался на фосфатном буфе ре (рН 6,8) и включал следующие ингредиенты на 200 mл дозу: 1 mг HBsAg 100 mг Al(OH)3 50 mг 3Д-МФЛ 20 mг QS21 10 мМ РО430,15 М NaCl Препарат приготавливали следующим образом: HBsAg и Al(OH)3 инкубировали совместно в течение одного часа при комнатной температуре, слегка встряхи вая. Затем добавляли Al(OH)3 3ДМФЛ в виде водной суспензии, QS21 с фосфатным буфером и раство ром хлорида натрия и снова инкубировали 30 минут. рН препарата поддерживали между 6,5 и 7,0 и использовали для изучения гуморального иммуните та у мышей. 3.3. Препарат 3 приго тавливался таким же способом, на фосфатном буфе ре (рН 6,5–7,0) и включал следующие ингредиенты на 1 мл дозу: 10 mг HBsAg 500 mг Al(OH)3 Все вместе, эти данные предполагают, что препараты rgD2t, содержащие QS21, могут быть эффективными в отношении индуцирования защитного ответа против ВГС инфекции. Представленные данные демонстрируют неожиданный синергический эффект между 3Д монофосфориллипидом А и QS21, в отноше нии индукции секретирующих интерфе рон антигенспецифичных Т-клеток. Этот синергизм может выразиться в улучшенной способности индуцировать защитный ответ против ВГС-инфекции, и, на самом деле, эти препараты являются эффективными в отноше нии защи ты против заболевания морских свинок. 6 40597 Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 – 72 – 89 (03122) 2 – 57 – 03 7 40597 8