Спосіб інгібування контракції клітин гладкої мускулатури

1. Спосіб інгібування контракції клітин гладких м'язів людини, що цього потребує, що включає призначення нутрицевтичної композиції, де зазначена нутрицевтична композиція містить екстракт зеленого чаю, аскорбінову кислоту, лізин, пролін, аргінін, магній, N-ацетилцистеїн, селен, мідь та марганець. 2. Спосіб за пунктом 1, де екстрактом зеленого чаю є щонайменше одна сполука, вибрана з наступної групи: епікатехін, епікатехін-3-галат, епігалокатехін та епігалокатехін-3-галат. 3. Спосіб за пунктом 2, де екстрактом зеленого чаю є епігалокатехін-3-галат. 4. Спосіб за пунктом 1, де аскорбіновою кислотою є аскорбат кальцію, аскорбат магнію або аскорбілпальмітат. 2 (19) 1 3 Дана заявка є частиною продовження Заявки США на корисну модель №10/449,828 подану 30 травня 2003 року, опис якої включений сюди як посилання в усій своїй повноті. Винахід стосується нутрицевтичної композиції та способу інгібування контракції клітин гладких м'язів, і таким чином може знижувати кров'яний тиск у пацієнтів-гіпертоників. З документальних джерел відомі численні патофізіологічні та клінічні наслідки гіпертензії. Такі наслідки можуть бути як короткотривалими і спричиняти погане самопочуття і знижену працездатність, так і довготривалими і викликати інфаркт міокарду, інсульт, зупинку серця, ниркові захворювання, ниркову недостатність та інші. Крім того, наслідки гіпертензії можуть посилюватись у зв'язку з іншими хворобами, такими як діабет За оцінками останніх років у Сполучених Штатах 50% смертей від серцево-судинних захворювань пов'язані з або є результатом гіпертензії. Гіпертензія залишається найбільш розповсюдженою причиною серцевої недостатності або інших хворобливих станів, які потребують госпіталізації. Для лікування гіпертензії проводились значні та всебічні дослідження. Однак, відомі способи лікування таких захворювань включають наприклад призначення інгібіторів ангіотензинперетворювального ферменту (АСЕ інгібіторів). Такі способи лікування мають серйозні недоліки при довготривалому використанні, серед яких найбільш суттєвими є вартість такого лікування та значні побічні ефекти. Також існують численні публікації щодо механізмів патогенезу гіпертензії. Одною з головних причин розвитку гіпертензії прийнято вважати утворення та активність ангіотензину II, оскільки його надлишок спричиняє надмірно сильне скорочення артерій, порушує процес релаксації артерій і тому призводить до підвищення кров'яного тиску. Таким чином, значні зусилля направлені на розроблення фармацевтичних сполук, здатних зменшувати утворення ангіотензину Il (тобто АСЕ інгібіторів, які блокують перетворення ангіотензину І в ангіотензин Il клітинами стінок артерій) або блокувати біологічну активність ангіотензину Il (тобто агоністи рецепторів ангіотензину). Обидва класи сполук проходять тестування в експериментальних умовах на здатність блокувати ангіотензин-залежну контракцію стінок артерій з використанням артерій вилучених у лабораторних тварин, або модель культуральних клітин гладких м'язів введених у колагеновий гель (КГМ гель). Здатність тестованої сполуки до блокування контракційної дії ангіотензину Il у таких експериментальних моделях безперечно означає, що така сполука буде блокувати і активність ангіотензинуet inаІ., іописують проціанідини з Carini Il vivo зменшуватиме ангіотензинвиноградних кісточок, які покращують релаксацію залежну гіпертензію. артерій людини [Life ScL 2003 Oct 17; 73(22): 288398]. Shen et аІ. описують катехіни зеленого чаю, які викликають стадійну контракцію аорти щурів, Chen et aІ. описують дію очищених епікатехінів зеленого чаю на контракцію. Sanae et аІ., описують дію катехінів на судинний тонус грудної аорти з 82879 4 ендотелієм у щурів. Huang et аl., описують роль ендотеліального оксиду азоту у судинній відповіді на флавоноїди та епікатехіни [Acta Pharmacol. Sin. 2000 Dec; 21(12): 1119-24]. Тоді як ці посилання припускають можливу роль екстрактів зеленого чаю у регулюванні судинного тонусу, його прямий вплив на клітини гладких м'язів залишається менш зрозумілим. Невідомо, чи інші інгредієнти зможуть покращити дію екстракту зеленого чаю на контракцію клітин гладких м'язів. У зв'язку з вищенаведеними даними, існує потреба у нутрицевтичній композиції та способі прямого інгібування клітин гладких м'язів для лікування гіпертонічної хвороби, існує також потреба у способі застосування нутрицевтичної композиції для попередження та відновлення чутливості артерій до подразників, який забезпечить адекватне скорочення та релаксацію клітин гладкої мускулатури артерій. Даний винахід стосується способу інгібування контракції клітин гладких м'язів який полягає в дії на клітини гладких м'язів з використанням нутрицевтичної композиції, яка містить екстракт зеленого чаю, аскорбінову кислоту, лізин, пролін, аргінін, магній, N-ацетилцистеїн, селен, мідь та марганець. Переважно, екстрактом зеленого чаю є щонайменше одна сполука, обрана з наступної групи: епікатехін, епікатехін-3-галат, епігалокатехін та епігалокатехін-3-галат. Більш переважно, екстрактом зеленого чаю є епігалокатехін-3-галат. Переважно, аскорбінова кислота знаходиться у вигляді аскорбату кальцію, аскорбату кальцію, аскорбату магнію або аскорбілпальмітату. Переважно, лікування полягає у призначенні людині Переважно, призначена нутрицевтична композиція містить 1000мг екстракту зеленого чаю, 710мг аскорбінової кислоти, 1000мг лізину, 750мг проліну, 500мг аргініну, 1мг магнію, 30мг Nацетилцистеїну, 30мкг селену, 2мг міді та 1мг марганцю. Переважно, нутрицевтична композиція додатково містить щонайменше одну сполуку з групи, що складається з ресвератролу та геністеїну. Задачею даного винаходу є забезпечення способу призначення нутрицевтичної композиції, корисної для зниження кров'яного тиску. Також задачею винаходу є застосування нутрицевтичних сполук з природних джерел, які є безпечними. Ще однією задачею даного винаходу є забезпечення способу уповільнення несприятливої дії подразника, яка веде до скорочення клітин гладких м'язів, що в свою чергу підвищує кров'яний тиск і викликає гіпертензію. Іншою задачею даного винаходу є забезпечення способу призначення нутрицевтичної композиції, коли нутрицевтичну композицію призначають у денних кількостях, зазначених у Таблиці 1. Короткий опис малюнків Фіг.1 зображує дію 0,1IU/мл тромбіну на клітини гладких м'язів у КГМ гелі, що містить композицію 1 ("композиція EF") у порівнянні зі зразком без композиції EF. Контрольний КГМ гель не містить тромбіну. 5 82879 6 Екстракт зеленого чаю є комерційно доступним від Фіг.2 зображує дію 1,0мкМ ангіотензину Il на US Pharma Lab. (Somerset, NJ) (назва продукту: клітини гладких м'язів у КГМ гелі, що містить GreenHerb - екстракт зеленого чаю у вигляді композицію 1 ("композицію EF") порівняно до порошку). Екстракт зеленого чаю містить загалом зразку без композиції EF. Контрольний КГМ гель біля 80мас.% поліфенолів. Серед поліфенолів, не містить ангіотензину II. катехіни присутні у кількості 60мас.%. Серед Фіг.3 зображує скорочення КГМ гелю 1мкМ катехінів, ЕГКГ знаходиться у кількості біля ангіотензину Il та в присутності різних кількостей 35мас.%. Екстракт зеленого чаю також містить композиції EF. кофеїн (біля 1,0мас.%). Фіг.4 зображує скорочення КГМ гелю Нутрицевтична композиція відповідно до зростаючою концентрацією 110нМ, 330нМ та даного винаходу містить екстракт зеленого чаю, 1000нМ ангіотензину Il та в присутності 100мкг/мл аскорбінову кислоту, лізин, пролін, аргінін, магній, композиції EF. N-ацетил цистеїн, .селен, мідь та марганець. Фіг.5 зображує скорочення КГМ гелю Переважно, нутрицевтична композиція ангіотензином Il та в присутності композиції EF, відповідно до даного винаходу містить 500мг - 2 аскорбінової кислоти (AK), ЕГКГ та комбінації 000мг екстракту зеленого чаю, 400мг - 1,500мг аскорбінова кислота - ЕГКГ. аскорбінової кислоти, 400мг -1,500мг лізину, 500мг Фіг.6 зображує скорочення КГМ гелю - 1,500мг проліну, 200мг - 1000мг аргініну, 0,5мг ангіотензином Il та в присутності аргініну у різних 2мг магнію, 10мг - 60мг N-ацетилцистеїну, 10мкг концентраціях. 60мкг селену, 0,5мг - 5мг міді та 0,5мг - 2мг Фіг.7 зображує скорочення КГМ гелю марганцю. ангіотензином Il та в присутності хлориду кальцію, Більш переважно, нутрицевтична композиція хлориду магнію та комбінації хлорид кальціювідповідно до даного винаходу містить 1 000мг хлорид магнію. екстракту зеленого чаю, 710мг аскорбінової Фіг.8 зображує скорочення КГМ гелю кислоти, 1 000мг лізину, 750мг проліну, 500мг ангіотензином Il та дія ресвератролу та геністеїну аргініну, 1мг магнію, 30мг N-ацетилцистеїну, 30мкг та в присутності 100мкг/мл композиції EF. селену, 2мг міді та 1мг марганцю. Фіг.9 зображує скорочення КГМ гелю Переважно, нутрицевтична композиція ангіотензином Il та в присутності різних додатково містить ресвератрол або геністеїн. концентрацій N-ацетилцистеїну. Переважні дози ресвератролу та геністеїну Фіг.10 зображує скорочення КГМ гелю 1мкМ складають 10-50мкМ; а більш переважною є доза ангіотензину Il у присутності різних концентрацій 1,0мкМ - 30мкМ. лізину та проліну. Нутрицевтична композиція відповідно до В даному тексті терміну "EF" відповідає даного винаходу призначена для введення нутрицевтична композиція, що містить 1000мг ссавцю, зокрема - людині, у зручній дозованій екстракту зеленого чаю, 710мг аскорбінової формі, відомій з рівня техніки. Відомі з рівня кислоти, 1000мг лізину, 750мг проліну, 500мг техніки форми призначення включають аргініну, 1мг магнію, 30мг N-ацетилцистеїну, 30мкг парентеральну, ентеральну та особливо оральну. селену, 2мг міді та 1мг марганцю; лізин включає LТверді та рідкі оральні дозовані форми є особливо лізин та його похідне, пролін включає L-пролін та переважними. Тверді оральні дозовані форми його похідні, аргінін включає L-аргінін та його добре відомі з попереднього рівня техніки і похідні; скорочення КГМ позначає клітини гладких включають таблетки, капсули та споживних м'язів, позначенню ЕГКГ відповідає (-)нутрицевтичних виробів. Тверді оральні дозовані епігалокатехін-3-галат, позначенню EK форми можуть вміщувати один або більшу епікатехін, а саме (-)-епікатехін, ЕКГ позначає кількість фармацевтично прийнятних епікатехін-3-галат, а саме (-)-епікатехін-3-галат, наповнювачів. Фармацевтично прийнятні ЕГК відповідає назві епігалокатехін і позначає (-)наповнювачі сприяють або роблять можливим епігалокатехін. Біофлавоноїди рослинного виготовлення дозованої форми для біологічно походження включають катехіни (які в свою чергу активного матеріалу і включають розріджувачі, включають ЕГКГ, ЕГ, ЕКГ та EK) які відповідають зв'язувальні агенти, лубриканти, змащувальні за структурну цілісність стінок артерій та речовини, дезінтегранти, барвники та смакові взаємодіють з численними подразниками, що добавки. Наповнювач є фармацевтично спричиняють атеросклероз. тлумачення у даній Гіпертензія має наступне прийнятним, якщо окрім своїх цільових функцій він заявці та визначена відповідно до директив є нетоксичним, добре переноситься при прийнятті Американської Асоціації Серця (AHA) і включає всередину та не абсорбує біологічно активні обидва стани: гіпертензивний та інгредієнти. У іншому втіленні винаходу ці прегіпертензивний. Прегіпертензивний стан інгредієнти призначають у формі таблеток. визначається AHA як такий, що характеризується Таблетки виготовляють за допомогою відомих систолічним кров'яним тиском від 120 до 139мм Hg технік пресування з використанням методів сухого та діастолічним кров'яним тиском від 80 до 89мм і вологого гранулювання та гранулювання у Hg. Гіпертензивний стан визначається систолічним псевдорозрідженому шарі. Ефективні кількості кров'яним тиском більшим за 140мм Hg та кожного з конкретних інгредієнтів (в рамках EF діастолічним кров'яним тиском більшим за 90мм композиції) поєднують з бажаною кількістю Hg. Нутрицевтична композиція відповідно до фармацевтично прийнятного наповнювача даного винаходу включає щонайменше один (наприклад, лактози, крохмалю, декстрину, флавоноїдний компонент. Флавоноїдний етилцелюлози та подібних. Інгредієнти змішують у компонент включає екстракт зеленого чаю. 7 82879 8 2. Колаген людини типу І. змішувачі. Використовують змішувачі таких типів: з 3. Ангіотензин II. подвійною камерою, планетарного типу та 4. Тромбін. швидкісний змішувач ножового типу, відомі 5. Композиція EF (лізин, пролін, аргінін, вітамін спеціалістам у даній галузі техніки. Таблетки C (як аскорбінова кислота, аскорбат кальцію, роблять з покриттям або без нього. Капсули, які аскорбат магнію, або аскорбілпальмітат), магній, ще називають капсулами сухого наповнення, є N-ацетилцистеїн, селен, мідь та марганець. 6 твердими оральними дозованими формами, в яких капсул композиції EF містять 1000мг лізину, 750мг композиція знаходиться у контейнері для ковтання проліну, 500мг L-аргініну, 710мг вітаміну C, 50мг зручного розміру, який типово виготовляють з магнію, 1000мг стандартизованого екстракту желатину. Тверді незаповнені капсули, зручні для зеленого чаю (80% поліфенолів - 800мг (без вміщування нутрицевтичної композиції відповідно кофеїну)) 30мг N-ацетилцистеїну, 30мкг селену, до даного винаходу, є комерційно доступними. 2мг міді, 1мг марганцю (всі інгредієнти є Способи наповнення капсул є добре відомим з комерційно доступними)). (ЕГКГ). 6. Епігалокатехін галат рівня техніки [Edward Rudnic та Joseph B. 7. Ресвератрол. Schwartz, Oral Solid Dosage Forms, Volume II, 8. Культуральне середовище для клітин Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (OMEM). Chapter 92,1615,1642-1647 (під ред. Alfonso R. 9. 24-лунковий пластиковий планшет з Gennaro, 19е вид., 1995)]. культурою клітин, попередньо інкубований з Протокол експерименту 2мг/мл сироватки бичачого альбуміну. Під час експерименту застосовували наступні 10. Цифрова камера. вихідні матеріали та обладнання. 11. Програмне забезпечення для аналізу 1. Культуральні клітини гладких м'язів судин цифрових знімків (Scion Согрогаііоп). (КГМ) виділені з аорти людини. Використовують клітини з 4 по 8 пасажів. Таблиця 1 Композиція 1 ("Композиція EF") Сполука L-Лізин L-Пролін L-Аргінін Вітамін C, як аскорбінова кислота, аскорбат кальцію, аскорбат магнію або аскорбілпальмітат Магній Стандартизований екстракт зеленого чаю, 80% поліфенолів - 800мг (без кофеїну) Методики: Ми випробували здатність екстрактів зеленого чаю (тобто біофлавоноїдів) та різних інгредієнтів до інгібування контракційної активності клітин гладких м'язів. Культуральні клітини гладких м'язів аорти людини (КГМ) (комерційно доступні від Clonetics) використовували і вміщували у тривимірну матрицю, що містить колаген типу І (1мг/мл). Колаген одержували від Sigma, а виготовлення матриці описане нижче Контракцію гелю стимулювали 1мкМолярним анпотензином Il (Ang H) у вільному від сироватки середовищі і площину гелю оцінювали за допомогою аналізу цифрового зображення через 24 години. Культура клітин гладких м’язів Конфлюентні культури КГМ видаляли з культуральної колби трипсинізацією та промивали розчином фосфатного буферу (PBS) від сироватки, яку містило середовище. Концентрацію клітин у суспензії доводили до 500000клітин/мл у DMEM, вільному від сироватки. Суспензію клітин потім перемішували у пропорції 1:1 з крижаним розчином колагену типу І (2мг/мл) у розчині фосфатного буфера (PBS). Кінцева концентрація колагену типу І складала 1мг/мл, а кінцева концентрація клітин - 250000/мл. КГМ-колагенові суспензії розподіляли по 300мкл у 24 лунковому планшеті таким чином, щоб Денна доза 1000мг 750мг 500мг 710мг 50мг 1000мг повністю вкрити дно лунок планшета. Потім планшети інкубували протягом одної години при 37°C для полімеризації гелю. До полімеризованого гелю додавали 0,5мл вільного від сироватки експериментального середовища, що не містить добавок (контроль), або 1мкМоль/л ангіотензину Il з або без сполуки, що випробовується. Планшети потім обережно перекидали на бік для того, щоб відділити гель від пластикового дна лунок, потім вміщували планшет в інкубатор з контрольованою атмосферою, зі вмістом 5% СО2 при 37°С. Після інкубування протягом 24 годин, планшети виймали з інкубатора та робили знімки планшетів з рухливими гелями за допомогою цифрової камери. Площину поверхні гелю визначали за допомогою програмного забезпечення для аналізу цифрових зображень від Scion Согрогаііоп. Експеримент здійснювали в трьох повторах та результати представляли як середні значення +/середньоквадратичне відхилення. Для спостереження дії різних компонентів композиції EF та для визначення синергічної дії різних інгредієнтів композиції EF, якщо така існує, проводили дослідження інгібування контракції клітин гладких м'язів. Такі дослідження могли б пролити світло на лікування та/або попередження гіпертензії. 9 82879 10 припущення щодо ефективності композиції EF як Вивчалися різні інгредієнти, включаючи протигіпертензивного агента. Відповідно, ці дані епігалокатехін галат (ЕГКГ). Спочатку окремо разом (Фіг.1 та 2) ясно вказують на те, що вивчали епігалокатехін галат та інші інгредієнти і композиція EF є ефективною при інгібуванні оцінювали їх дію . Потім вивчали синергічну дію контракції клітини гладких м'язів та таким чином, епігалокатехін галату з іншими інгредієнтами. може бути корисною для зниження кров'яного Результати тиску. Як ангіотензин Il так і тромбін (використані як Приклад 3 агоністи) викликали контракцію клітин гладких Фіг.3 показує залежність активності композиції м'язів у КГМ гелі. Ці агоністи надалі спричиняли EF відносно інгібування контракції клітин гладких скорочення всього гелю. Додавання ангіотензину Il м'язів, викликаної ангіотензином II, від дози. КГМ або тромбіну приводило до контракції всього гелю. гель, що містить 1,0мкМ ангіотензину Il обробляли Різницю між площею поверхні КГМ гелю, який не композицією EF зі зростаючими концентраціями містив агентів, що викликають контракцію, та 11, 33 та 100мкг/мл та порівнювали з контрольним площею поверхні гелю, що містив такий агент, яку зразком, містив ангіотензин II, але без композиції вимірювали через 24 години після заповнення EF. Це дало змогу побудувати криву відповіді на планшету, відносили до дії цього агенту. дозу, яка продемонструвала меншу контракцію Використовуючи такі дослідження контракції (більш значне зменшення скорочення поверхні КГМ гелю, оцінювали різні сполуки щодо їх КГМ гелю) при зростанні концентрації композиції здатності інгібувати скорочення клітин гладких EF. м'язів. Серед інгредієнтів екстрактів зеленого чаю, Приклад 4 епігалокатехін галат виявився найбільш активним Далі ми випробовували відповідні складові інгібітором контракції випробовуваного гелю при композиції EF щодо інгібування контракції клітин додаванні у концентрації 30мкмоль/л. Інгібування гладких м'язів. Також ми досліджували, чи мають контракції гелю біофлавоноїдами (включаючи складові композиції EF синергічну дію. Для цього ЕГКГ) не залежало від антиоксидантної дії, різні складові композиції EF випробовували оскільки аскорбінову кислоту не використовували окремо, або в комбінації з іншими інгредієнтами на для проведення цих досліджень. їх здатність інгібувати контракцію клітин гладких Приклад 1 м'язів. Фіг.1 показує здатність композиції EF до Фіг.4 показує вплив аскорбінової кислоти, ЕГКГ інгібування контракції клітин гладких м'язів та аскорбінової кислоти в поєднанні з ЕГКГ на його спричиненої дією тромбіну. В цьому досліді КГМ здатність інгібувати контракцію клітин гладких гель без агента, що викликає контракцію, м'язів КГМ гель примушували скорочуватись за (контроль) та гель з таким агентом (тромбін допомогою ангіотензину Il (1,0мкМ). Контрольний 0,1IU/мл) порівнювали з гелем, який містив КГМ гель містив самий лише ангіотензин II. тромбін в концентрації 0,1IU/мл, після додавання Композиція EF (100мкг/мл) сильно інгібувала композиції EF у кількості 100мкг/мл. Контрольний контракцію клітин гладких м'язів. Аскорбінова КГМ гель без агента, що викликає контракцію, та кислота (100мкМ) окремо не впливала на необроблений гель продемонстрував незначне викликану ангіотензином Il контракцію клітин скорочення. Таким чином, клітини гладких м'язів гладких м'язів. ЕГКГ в кількості 15мкМ не мав мають тенденцію до скорочення, навіть без помітної інгібувальної дії. Комбінація аскорбінової присутності агента, який його викликає. кислоти та ЕГКГ також не мала будь-якого вартого КГМ гель з тромбіном в якості агента, який уваги інгібувального ефекту. Ці дані вказують, що викликає контракцію, продемонстрував більше при інгібуванні контракції клітин гладких м'язів скорочення КГМ гелю. Однак, коли КГМ гель синергічно діють різні складові композиції EF. обробляли тромбіном (0,1IU/мл) та композицією Зазначаємо, що аскорбінову кислоту та ЕГКГ EF, КГМ гель не скорочувався так як КГМ гель з використовували у еквівалентних концентраціях, агентом, що викликає таке скорочення або без знайдених для композиції EF. Приклад 6 нього. Таким чином, композиція EF Фіг.5 показує окремо дію аргініну на продемонструвала значне інгібування контракції інгібування контракції клітин гладких м'язів. Аргінін КГМ гелю та протигіпертензивну дію. (0,50мМ та 1,0мМ) застосовували до КГМ гелю, що Приклад 2 містив 1,0мкМ ангіотензину Il та 0,5мМ Фіг.2 демонструє здатність композиції EF до аскорбінової кислоти. Еквівалентні концентрації інгібування контракції клітин гладких м'язів, аргініну застосовували до КГМ гелю, що містив викликаної ангіотензином Il (агентом, що викликає 1,0мкМ ангіотензину Il але без аскорбінової контракцію). КГМ гель без агента, що викликає кислоти. Концентрація аргініну у 100мкг/мл композиції контракцію (ангіотензин II), та з таким агентом у EF складає 50мкМ. Таким чином концентрації концентрації 1,0мкМ порівнювали з гелем, який аргініну які окремо застосовували до КГМ гелю містить ангіотензин Il (1,0мкМ), оброблений були відповідно в 10 разів та в 20 разів більшими композицією EF (100мкг/мл). за концентрацію аргініну у композиції EF. КГМ гель з ангіотензином Il в якості агента, що Концентрація аскорбінової кислоти у КГМ гелі, що викликає контракцію, демонстрував більшу містив аскорбінову кислоту складала 0,5мМ, що в контракцію КГМ гелю. Коли КГМ гель обробляли 5 разів більше за концентрацію аскорбінової ангіотензином Il (1,0мкМ) та композицією EF, КГМ кислоти у EF. Незважаючи на такі підвищені гель не скорочувався так само сильно як КГМ гелі концентрації, аскорбінова кислота та аргінін, по з агентом, що викликає контракцію або без такого. Ці обидва досліди щонайменше перевірили 11 82879 12 Фіг.10 показує активність лізину та проліну, одному або разом не мали помітної дії на окремо або разом, при інгібуванні контракції клітин інгібування контракції клітин гладких м'язів. гладких м'язів. Концентрація лізину у 100мкг/мл Приклад 7 композиції EF складала 110мкМ. Концентрації Фіг.7 демонструє дію окремо та разом кальцію лізину, які додавали до КГМ гелю були відповідно та магнію (у формі хлориду кальцію та хлориду 0,25, 0,50 та 1мМ. Таким чином, концентрації, які магнію) на інгібування контракції клітин гладких застосовували до КГМ гелю були відповідно десь у м'язів. Концентрація кальцію у 100мкг/мл 2 рази, 4,5 разів та 9 разів більшими за композиції EF складає 12мкМ. Концентрація концентрацію лізину у композиції EF. Концентрація магнію у композиції EF дорівнює 50мкМ. проліну у 100мкг/мл композиції EF складає Концентрація кальцію та магнію використана у 100мкМ. Концентрації проліну, який додавали до даному досліді по скороченню КГМ гелю складала КГМ гелю, були 0,25, 0,50 та 1мМ. Таким чином, 2,0мМ. Таким чином, концентрації кальцію та концентрації, які застосовували до КГМ гелю були магнію, які застосовували до КГМ гелю були десь відповідно у 2,5 рази, 5 разів та 10 разів більшими відповідно у 160 разів та 40 разів більшими за за концентрацію проліну у композиції EF. Лізин та концентрацію кальцію та магнію у композиції EF. У пролін додавали разом до КГМ гелю у якості агента, що викликає контракцію, у всіх КГМ концентрації 0,50мМ. Як агент, що викликає гелях використовували ангіотензин Il (1мкМ). контракцію, у всіх КГМ гелів застосовували Незважаючи на це, підвищені концентрації ангіотензин Il (1мкМ). Незважаючи на підвищені хлориду кальцію та хлориду магнію окремо, або концентрації проліну та лізину, окремо, або разом разом, не вплинули помітним чином на контракцію вони не забезпечували помітного клітин гладких м'язів, спричинену ангіотензином II. протиконтракційного ефекту. Хоча композиція EF не містила ресвератрол Однак, результати досліджень вказують на те, або геністеїн, ми вивчили їх спільну дію з що нутрицевтична композиція, яка містить композицією EF. Фіг.8 демонструє вплив геністеїну екстракт зеленого чаю (і містить ЕГКГ як та ресвератролу окремо, або в комбінації один з біофлавоноїд), аскорбінову кислоту, лізин, пролін, одним, на інгібування контракції клітингладких аргінін, магній, N-ацетилцистеїн, селен, мідь та м'язів. Ресвератрол застосовували до КГМ гелю та марганець, має синергічну дію при регулюванні порівнювали з КГМ гелем, що не містив КГМ-опосередкованого скорочення. ресвератрол. Концентрація ресвератролу, який Нутрицевтична композиція має сильний потенціал застосовували до КГМ гелю складала 15мкМ та для протидії патофізіологічній активності агоністів, 30мкМ. До одного КГМ гелю додавали окремо включаючи тромбін та ангіотензин II. Не маючи геністеїн у концентрації 30мкМ, щоб дослідити конкретно визначеного механізму дії, синергічна його вплив, якщо такий існує. Концентрація дія композиції EF може бути пов'язана з цілісністю ресвератролу, яку застосовували до КГМ гелю міжклітинних матриць. дорівнювала 15мкМ та 30мкМ. Геністеїн та Приклад 10 ресвератрол разом додавали до КГМ гелю обидва Нами досліджена дія окремих катехінів на у концентрації 15мкМ. Як агент, що викликає викликане ангіотензином Il скорочення клітин контракцію, у всіх КГМ гелях застосовували гладких м'язів аорти людини. Досліджували ангіотензин Il (1мкМ). Були проведені дві серії катехін (30мкМ), епікатехін (30мкМ), епікатехін експериментів, одна серія з КГМ гелем без галат (30мкМ) та епігалокатехін галат (30мкМ), а композиції EF та серія КГМ гелів, що містять як стимулятор контракції клітин гладких м'язів композицію ресвератрол, геністеїн та їх комбінація Тоді як EF у концентрації 100мкМ. використовували ангіотензин II. Скорочення гелю має тенденцію проявляти деяку інгібувальну дію, представлене як відсоток на який зменшувалась вона була більш вираженою за присутності площа поверхні гелю через 24 години інкубування. композиції EF. Для всіх КГМ гелів спостерігався Ангіотензин Il (1мкМ) спричиняв скорочення на адитивний протигіпертензивний ефект, який легко 85,26±1,18% (середнє значення ± визначити, причому цей ефект спостерігався середньоквадратичне відхилення). Ангіотензин Il незалежно від того, чи був це ресвератрол, (1мкМ) плюс катехін (30мкМ) спричиняв гінестеїн, або обидва. Крива відповіді на дозу була скорочення на 76,83±1,63%. Ангіотензин Il (1мкМ) очевидною для серій, що містили 15мкМ та 30мкМ плюс епікатехін (30мкМ) спричиняв скорочення на ресвератролу з або без композиції EF, однак, 78,59±7,03%. Ангіотензин Il (1мкМ) плюс епікатехін крива відповіді на дозу для серій, що містили галат (30мкМ) спричиняв скорочення на ресвератрол і композицію EF була більш 65,70±6,56%.Ангіотензин Il (1мкМ) плюс вираженою. 8 Приклад епігалокатехін галат (30мкМ) спричиняв Фіг.9 демонструє ефективність Nскорочення на 61,23±9,14%. ацетилцистеїну при інгібуванні контракції клітин Відповідно, даний винахід забезпечує для гладких м'язів. Концентрація N-ацетилцистеїну у нутрицевтичної композиції можливість 100мкг/мл композиції EF складала 20мкМ. терапевтичного впливу. Компоненти, з яких Концентрації N-ацетилцистеїну, які застосовували складається нутрицевтична композиція діють до КГМ гелю складали відповідно 2,2, 6,7, 20 та синергічно при інгібуванні контракції клітин гладких 60мкМ. Ангіотензин Il додавали у концентрації м'язів, і, таким чином, вона відновлює та мінімізує 1мкМ як агент, що викликає контракцію, до всіх недостатню чутливість артерій, яка призводить до КГМ гелів. Незважаючи на такі підвищені гіпертензії. Більш того, даний винахід забезпечує концентрації, N-ацетилцистеїн не спричиняв потенціальну терапію з використанням помітної протиконтракціиної дії. нутрицевтичної композиції, яка може уповільнити Приклад 9 13 82879 14 Зрозуміло, що дані приклади наведені не для несприятливу дію чинників, які спричиняють обмеження розкриття представленого скорочення клітин гладких м'язів, яке підвищує переважного втілення винаходу, і не претендують кров'яний тиск та призводить до хронічної на представлення всіх модифікацій та змін, які гіпертензії. Даний винахід відноситься до вибору відповідають духу та обсягу даного винаходу. Всі природних сполук та екстрактів, які є більш наведені публікації та інші посилання включені тут ефективними за фармацевтичні сполуки, не як посилання в усій своїй повноті. маючи притаманних їм небажаних побічних ефектів, вже не згадуючи про економічні переваги, а саме - вартість. 15 Комп’ютерна верстка А. Рябко 82879 Підписне 16 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601