Похідні піридазину як інгібітори smo

Реферат: (72) Винахідник(и): Хі Фенг (CN), Пейкерт Стефан (DE/US), Міллер-Мослін Керен (US), Юсуфф Наіїм (US), Чен Жуоліанг (CN/US), Лагу Барат (US) (73) Власник(и): НОВАРТІС АГ, Lichtstrasse 35, CH-4056 Basel, Switzerland (CH) (74) Представник: Дубинський Михайло Iллiч, реєстр. №70 (56) Перелік документів, взятих до уваги експертизою: WO 2007/127475 (NORTHWESTERN UNIVERSITY), 08.11.2007 WO 2007/059157 A (GENENTECH, INC.), 24.05.2007 WO 2007/127448 A (NEUROMEDIX INC.), 08.11.2007 EP 0055583 A (PFIZER LTD.), 07.07.1982 WO 2008/110611 A (NOVARTIS), 18.09.2008 WO 2009/035568 A (AMGEN INC.), 19.03.2009 HU W. ET. AL.: "Development of a novel therapeutic suppressor of brain proinflammatory cytokine up-regulation that attenuates synaptic dysfunction and behavioural deficits." BIOORGANIC AND MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 17, no. 2, 2007, pages 414-418 MILLER-MOSLIN K. ET. AL.: "1-Amino-4benzylphthalazines as Orally Available Smoothened Antagonists with Antitumor Activity" JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 52, 2009, pages 3954-3968 UA 105181 C2 (12) UA 105181 C2 В заявці описані нові сполуки, що застосовуються при діагностиці та лікуванні патологій, пов'язаних із шляхом Hedgehog, включаючи, але не обмежуючись тільки ними, утворення пухлини, рак, неоплазію та незлоякісні гіперпроліферативні порушення. В заявці описані нові сполуки, нові композиції, способи їх застосування та способи їх одержання. Tакі сполуки зазвичай є фармакологічно корисними як засоби для лікування, механізм дії яких включає пригнічення онкогенезу, росту пухлини та життєдіяльності пухлини за допомогою засобів, які інгібують шлях передачі сигналу Hedgehog та Smo. R4 * R7 Y W Z m X R2 N N R3 L R1 p UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Передача сигналу білком Hedgehog (Hh) вперше виявлена у дрозофіл, як важливий механізм регуляції формування структури ембріону або процес, за допомогою якого клітини ембріону утворюють впорядковані просторові угрупування диференційованих тканин (NussleinVolhard et al. (1980) Nature 287, 795-801). В клітинах ссавців ідентифіковані три гени Hedgehog, Sonic Hedgehog (Shh), Indian Hedgehog (Ihh) та Desert Hedgehog (Dhh). Гени Hedgehog кодують секретовані білки, які піддаються післятрансляційним модифікаціям, включаючи аутокаталітичне розщеплення, та модифікацію ліпідів (пальмітоїлювання) на N-кінці та модифікацію холестерину на C-кінці. Модифікований ліпідом N-кінцевий білок Hedgehog викликає сигнальну активність на шляху білку та комунікація між клітинами виникає внаслідок відправлення розчинного білку Hedgehog від сигналізуючої клітини та його прийому відповідаючою клітиною. У відповідаючих клітинах рецептор Patched (Ptch), що містить 12 трансмембранних спіралей, діє як негативний регулятор передачі сигналу Hh та білок Smoothened (Smo), що містить 7 трансмембраних спіралей, як позитивний регулятор передачі сигналу Hh. В стані спокою вільний Ptch (тобто не зв'язаний з Hh) стехіометрично пригнічує активність шляху, що індукується Smo (Taipale et al. (2002) Nature 418: 892); однак на зв'язуючому ліганд білку Hh репресія Smo ослаблюється та результуючий каскад сигналів приводить до активації та ядерної транслокації факторів транскрипції Gli (Gli1, Gli2 та Gli3). Розташовані у прямому напрямку гени-мішені транскрипції передачі сигналу білком Hh включають Wnts, TGFβ та Ptc та Gli1, які є елементами регуляторної петлі позитивного та негативного зворотного зв'язку. Генами-мішенями передачі сигналу за допомогою Hh також є декілька генів клітинного циклу та генів регулюючих проліферацію, такі як c-myc, циклін D та E. Відомо, що передача сигналу за допомогою Hh регулює самі різні біологічні процеси, такі як проліферація та диференціація клітин та утворення органу тканеспецифічним та залежним від дози чином. При розвитку нервових трубок Shh експресується в вентральній пластинці нервової трубки та направляє диференціацію специфічних підтипів нейронів, включаючи моторні та допамінергічні нейрони. Також відомо, що Hh регулює проліферацію клітин-попередників нейронів, таких як невроцити-зерна мозочка та нервові стволові клітини. При розвитку шлунково-кишкового тракту для розвинення підшлункової залози необхідний низький рівень передачі сигналу білком Hh, тоді як високий рівень передачі сигналу білком Hh блокує розвинення підшлункової залози. Також відомо, що Hh грає важливу роль у проліферації стволових клітин та органогенезі шкіри, передміхурової залози, яєчок та кісткового мозку. Звичайно передача сигналу за допомогою Hh точно регулюється під час проліферації, диференціації клітин та формування структури ембріону. Однак аберантна активація шляху передачі сигналу Hedgehog внаслідок мутацій, які конститутивно активують цей шлях, наприклад, може привести до патологічних наслідків. Наприклад, мутації, що ведуть до втрати функції Patched, виявлені при синдромі Горліна (спадковий синдром, що характеризується високим ризиком ракових захворювань шкіри та головного мозку, також відомий, як синдром базально-клітинного невуса (BCNS)); та мутації Smo та Gli, що ведуть до втрати функції, зв'язані з базально-клітинною карциномою та гліобластомою. Базально-клітинна карцинома (BCC) є найбільш розповсюдженою формою раку шкіри, яка щорічно виявляється у більше, ніж 90000 американців. Виявлено, що конститутивна активація Hh стимулює онкогенез при BCC, медулобластомі (найбільш розповсюджена пухлина головного мозку), рабдоміосаркомі, раку підшлункової залози, невеликоклітинному раку легенів, раку передмізурової залози та раку молочної залози. Крім участі у онкогенезі передача сигналу білком Hh також приймає участь в метастазуванні раку передміхурової залози. Передача сигналу білком Hh може приймати участь у багатьох інших типах пухлин та такі взаємозв'язки, видно, будуть ще виявлятися; такі дослідження активно проводяться у багатьох центрах по вивченню раку у всьому світі. Для проліферації цих ракових клітин необхідна активація шляху Hh та блокування шляхів передачі сигналу Hh часто пригнічує проліферацію ракових клітин. В дійсності, антагоніст Hh циклопамін та Gli1 siРНК можуть ефективно блокувати проліферацію цих ракових клітин та можуть зменшити розмір пухлини в моделях ксенотрансплантату, вказуючи на те, що нові антагоністи Hh можуть стати новими хіміотерапевтичними засобами лікування цих типів раку. На експериментальних моделях на тваринах показано, що антагоніст Hh циклопамін пригнічує метастазування раку передміхурової залози. Крім участі у раку передача сигналу за допомогою Hh також грає важливу роль в нормальному гомеостазі та регенерації тканин. Шлях Hh активується після ураження сітківки, жовчного протоку, легенів, кістки та передміхурової залози на моделях мишей. Шлях Hh також завжди є активним у волосяних фолікулах, кістковому мозку та деяких областях центральної 1 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 нервової системи (ЦНС) та для доброякісної гіперплазії передміхурової залози та утворення кровоносних судин при ексудативній дегенерації жовтої плями необхідна активність шляху Hedgehog. Процеси регенерації клітин можна блокувати антитілами анти-Shh та циклопаміном. Тому невеликі молекули - антагоністи шляху передачі сигналу Hh можуть бути застосовні для лікування нейрональних проліферативних захворювань, доброякісної гіперплазії передміхурової залози, при ексудативній дегенерації жовтої плями, псоріазі, проліферативних захворюваннях кісткового мозку та лейкозах, остеопетрозі та випадінні волосся. Дані про те, що конститутивна активація Smo приводить до раку (наприклад, BCC) та що Smo може бути онкогенним при його вивільненні при інгібуванні за допомогою Ptch, вказують на застосовність антагоністів Smo як терапевтичних засобів для лікування таких порушень (Stone et al. (1996) Nature 384: 129). Тому молекули, які модулюють активність шляху передачі сигналу Hedgehog, наприклад, які модулюють активність Smo, застосовні в терапії. КОРОТКИЙ ВИКЛАД СУТІ ВИНАХОДУ Даний винахід в цілому відноситься до нових сполук, призначених для діагностики та лікування патологій, пов'язаних із шляхом Hedgehog, включаючи, але не обмежуючись тільки ними, утворення пухлини, рак, неоплазію та незлоякісні гіперпроліферативні порушення. Даний винахід відноситься до нових сполук, нових композицій, способів їх застосування та способів їх одержання, та такі сполуки звичайно є фармакологічно корисними як засоби для лікування, механізм дії яких включає пригнічення онкогенезу, росту пухлини та життєдіяльності пухлини за допомогою засобів, які інгібують шлях передачі сигналу Hedgehog та Smo. Сполуки та способи, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполука формули I), відноситься до інгібування активації шляху передачі сигналу Hedgehog, наприклад, шляхом інгібування аберантних станів росту, обумовлених такими фенотипами, як втрата функції Ptc, посилення функції Hedgehog, посилення функції Smoothened або посилення функції Gli, та включає взаємодію клітини із сполуками, запропонованими в даному винаході (наприклад, сполукою формули I), в кількості, достатній для пригнічення нормальної активності Ptc, пригнічення нормальної активності Hedgehog або активності Smoothened (наприклад, для обернення або пригнічення аберантного стану росту). Даний винахід відноситься до сполук формули (I): R4 * R7 p Y W Z m X R2 N N R3 L 30 35 40 R1 (I) або їх фармацевтично прийнятної солі, у якій R1 позначає C6-C14-арильну групу або 5-14-членну гетероарильну групу, яка може бути незаміщеною або заміщеною одним або більшою кількістю замісників, вибраними з C1-C8алкілу, C6-C14-арильної групи, C1-C8-галогеналкілу, C1-C8-алкоксигрупи, галогену, NH2, CN, OCF3, OH, C(O)NR6R8, C(O)R6, NR6R8, NHC(O)R6, SO2R6 або SO2NR6R8; R2 та R3 незалежно позначають C1-C8-алкіл, C1-C8-алкіл-OH, або R2 та R3 утворюють конденсовану C3-C14-циклоалкільну групу; L позначає зв'язок, C1-C8-алкілен, -C(O)O-, -C(O)NR9-, -C1-C8-алкіл-OH-, -C1-C8-галогеналкіл-, -C(O)-, -NH- або -O-; X та W незалежно позначають N або CR5, та щонайменше один з X або W позначає N; R7 позначає C6-C14-арильну групу, 5-14-членну гетероарильну групу або 3-14-членну циклогетероалкільну групу; R4 позначає C1-C8-алкіл, C2-C8-алкеніл, C3-C14-циклоалкіл, C6-C14-арильну групу, 5-14-членну 2 UA 105181 C2 5 10 15 20 гетероарильну групу, 3-14-членну циклогетероалкільну групу, C1-C8-алкоксигрупу, галоген, NR6R8, C(O)OR6, C(O)NR6R8, C1-C8-галогеналкіл, форміл, карбалкоксигрупу, C1-C8-алкіл-OH, C(O)R6, SO2R6, C(O)NHC1-C8-алкіл-R6, NR6R8, SO2NR6R8, OCF3, NHC(O)R6, CH2 °C(O)NR6R8, CH2NR6R8, NHC(O)OR6, NHC(O)NR6R8, CH2NHSO2R6, CH2NHC(O)OR6, °C(O)R6 або NHC(O)R6, які можуть бути заміщеними або незаміщеними; Z позначає C1-C8-алкіл, CN, OH або галоген; m та p незалежно дорівнюють 0-3; Y позначає зв'язок, C1-C8-алкілен, -C(O)-, -C(O)O-, -CH(OH)- або -C(O)NR10; R5 позначає H, галоген, CN, нижч. алкіл, OH, OCH3 або OCF3; R9 та R10 незалежно позначають C1-C8-алкіл або H; R6 та R8 незалежно позначають H, C1-C8-алкіл, C2-C8-алкеніл, C3-C14-циклоалкіл, C6-C14арильну групу, 5-14-членну гетероарильну групу, 3-14-членну циклогетероалкільну групу, C1-C8галогеналкіл, C1-C8-алкіл-OH, C1-C8-алкоксигрупу або два R6 або R6 та R8, приєднані до одного атому, можуть утворювати кільце, що містить гетероатом; та де R4, R6, та R8 можуть бути незаміщеними або заміщеними одним або більшою кількістю замісників, вибраними з C1-C8-алкілу, C3-C14-циклоалкілу, C6-C14-арильної групи, 5-14-членної гетероарильної групи, 3-14-членної циклогетероалкільної групи, C 1-C8-алкіл-OH, OH, оксогрупи, C1-C8-галогеналкілу, карбокси-C1-C8-алкілу або SO2C1-C8-алкілу, галогену, -OCH3, OCF3, -OH, NH2. В одному варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R7 позначає N N N N N , , , , , H N H N N N N , N N 25 N , , або . В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I) за п. 1, у якій R1 позначає N N N , , , N O N O , N N N N N N , або , . В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R7 позначає N 30 N N N , або , , та R1 позначає N 35 N N N , , , або . В ще одному варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R4 позначає C(O)OC1-C8-алкіл, CF3, C(O)OR6, C(O)NR6R8, C1-C8-галогеналкіл, C1-C8-алкіл-OH, C(O)R6, SO2R6, C(O)NHC1-C8-алкіл-R6, C(CH3)(CH3)(OH), C(O)CH3, C(CH2)CH3 або C(CH3)(CH2OH)OH; та R6 та R8 незалежно позначають H, C1-C8-алкіл, C1-C8-алкеніл, C3-C14 3 UA 105181 C2 циклоалкіл, C6-C14-арильну групу, 5-14-членну гетероарильну групу або 3-14-членну циклогетероалкільну групу. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R7 позначає R4 N N R4 R4 p p 5 , , , R4 N N N R4 R4 p p N , N , , N N R4 R4 p , p N , H N R4 N p N 10 15 20 25 30 35 40 або , та R4 позначає C1-C8-алкіл, такий як метил, етил, пропіл або бутил; C 2-C8-алкеніл, такий як етиніл або пропеніл; C3-C14-циклоалкіл, такий як циклопропіл, циклобутил, циклопентил або циклогексил; C6-C14-арильну групу, таку як феніл; 5-14-членну гетероарильну групу, таку як піридиніл або імідазоліл, 3-14-членну циклогетероалкільну групу, таку як піперидиніл, морфолініл, піролідиніл або піперазиніл; C1-C8-алкоксигрупу, таку як метоксигрупу, етоксигрупу або пропоксигрупу; галоген, такий як Cl, F, Br або I; NR6R8, такий як NHC1-C8-алкіл; C(O)OR6, такий як C(O)OC1-C8-алкіл або C(O)OH; C(O)NR6R8, такий як C(O)NHC 6-C14-арил, C(O)NC6-C14арил-C1-C8-алкіл або C(O)-5-14-членну гетероарильну групу або C(O)-3-14-членну циклогетероалкільну групу, C1-C8-галогеналкіл, такий як CF3; форміл, карбалкоксигрупу, C1-C8алкіл-OH, такий як CH2OH, етил, у будь-якому положенні заміщений групою OH, пропіл, у будьякому положенні заміщений групою OH, або бутил, у будь-якому положенні заміщений групою OH; C(O)R6, такий як C(O)C1-C8-алкіл; SO2R6, такий як SO2C1-C8-алкіл або SO2CF3; C(O)NHC1C8-алкіл-R6, такий як C(O)NHC1-C8-алкіл-OH або C(O)NHC1-C8-алкіл-CF3; SO2NR6R8, такий як SO2NHC1-C8-алкіл; OCF3, NHC(O)R6, такий як NHC(O)C1-C8-алкіл; CH2 °C(O)NR6R8, CH2NR6R8, NHC(O)OR6, NHC(O)NR6R8, CH2NHSO2R6, CH2NHC(O)OR6, °C(O)R6 або NHC(O)R6, та у якій R4 може бути незаміщеним або заміщеним; та p дорівнює 0, 1 або 2. В іншому варіанті здійснення R6 та R8 незалежно позначають H, C 1-C8-алкіл, такий як метил, етил, пропіл або бутил; C2-C8-алкеніл, такий як алкеніл, пропеніл; C3-C14-циклоалкіл, такий як циклопропіл, циклобутил, циклопентил або циклогексил; C 6-C14-арильну групу, таку як феніл; 5-14-членну гетероарильну групу, таку як піридиніл або піримідиніл; 3-14-членну циклогетероалкільну групу, таку як морфолініл, піперидиніл, піролідиніл або піперазиніл; C 1-C8галогеналкіл, такий як CF3; C1-C8-алкіл-OH, C1-C8-алкоксигрупу, таку як метоксигрупу або етоксигрупу; або два R6 або R6 та R8, приєднані до одного атому, можуть утворювати кільце, що містить гетероатом, таке як 5-14-членну гетероарильну групу або 3-14-членну циклогетероалкільну групу. В іншому варіанті здійснення даного винаходу R4 може бути незаміщеним або містити один або більше наступних замісників: C1-C8-алкіл, такий як метил, етил, пропіл, бутил або пентил; C3-C14-циклоалкіл, такий як циклопропіл, циклобутил, циклопентил або циклогексил; C 6-C14арильну групу, таку як феніл; 5-14-членну гетероарильну групу, таку як піридиніл або піримідиніл; 3-14-членну циклогетероалкільну групу, таку як морфолініл, піперидиніл, піролідиніл або піперазиніл; C1-C8-алкіл-OH, такий як CH3OH; OH, оксогрупу, C1-C8-галогеналкіл, такий як CF3; карбокси-C1-C8-алкіл або SO2C1-C8-алкіл, галоген, такий як Cl, F, Br, або I; -OCH3, OCF3, або –NH2. В іншому варіанті здійснення та R4 позначає метил, феніл, піридиніл, метоксигрупу, Cl, F, C(O)OC1-C8-алкіл, C(O)OH, C(O)NHC6-C14-арил, C(O)NC6-C14-арил-C1-C8-алкіл, C(O)-5-14-членну 4 UA 105181 C2 5 гетероарильну групу, C(O)-3-14-членну циклогетероалкільну групу, CF3; CH2OH, CH2CH2OH, C(CH3)(CH3)OH, C(O)CH3, C(O)CH2CH3, SO2C1-C8-алкіл, SO2CF3, C(O)NHC1-C8-алкіл-OH, C(O)NHC1-C8-алкіл-CF3, SO2NHC1-C8-алкіл, OCF3, NHC(O)CH3 або CH2 °C(O)NHCH3; кожен з яких може бути незаміщеним або заміщеним; та p дорівнює 0, 1 або 2. В іншому варіанті здійснення R4 позначає C(O)CH3, C(O)NH-феніл, C(O)OH, CF3, C(CH3)(CH3)OH, C(O)OCH3, CF3, C(O)OCH2CH3, або C(O)NCH2CH3, необов'язково заміщений піперазинілом, морфолінілом або піридинілом. В кращому варіанті здійснення R7 позначає R4 R4 R4 N N N N 10 N , , або , та R4 позначає C(O)CH3, C(O)NH-феніл, C(O)OH, CF3, C(CH3)(CH3)OH, C(O)OCH3, CF3 або C(O)OCH2CH3. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R1 позначає N N N O , , , N O N 15 20 25 N H N , або , кожна з яких може бути незаміщеною або заміщеною одним або більшою кількістю замісників, вибраними з C1-C8-алкілу, такого як метил, етил, пропіл (наприклад, ізопропіл), бутил, пентил або гексил; C6-C14-арильної групи, такої як феніл; C1-C8-галогеналкілу, такого як CF3; C1-C8-алкоксигрупи, такої як метоксигрупа або етоксигрупа; галогену, такого як Cl, F, Br, або I; NH2, CN, OCF3, OH, C(O)NR6R8, C(O)R6, NR6R8, NHC(O)R6, SO2R6 або SO2NR6R8. В іншому варіанті здійснення R1 позначає N N , , або , кожен з яких може бути незаміщеним або заміщеним одним або більшою кількістю замісників, вибраними з метилу, етилу, CF3, метоксигрупи, Cl, F, NH 2, CN, OCF3, або OH. В іншому варіанті здійснення R1 може бути незаміщеним або заміщеним CH 3, Cl, F, метоксигрупою або CH. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R7 позначає N N R4 R4 R4 p p , N p або N , та R1 позначає N N 35 , N N N 30 N N , , або , який може бути незаміщеним або заміщеним одним або більшою кількістю замісників, вибраними з метилу, етилу, ізопропілу, Cl, F, CN, метоксигрупи або CF 3. В ще одному варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R4 позначає C(O)OC1-C8-алкіл, CF3, C(O)OR6, C(O)NR6R8, C1-C8-галогеналкіл, C1-C8-алкіл-OH, C(O)R6, SO2R6, C(O)NHC1-C8-алкіл-R6, C(CH3)(CH3)(OH), C(O)CH3, CH2-CH2-CH3 або C(CH3)(CH2OH)OH. 5 UA 105181 C2 5 В одному варіанті здійснення R6 та R8 незалежно позначають H, метил, етил, циклопентил, циклогексил, феніл, піридиніл, морфолініл, піперидиніл, піролідиніл або піперазиніл, CF 3, метоксигрупу, два R6 або R6 та R8, приєднані до одного атому, можуть утворювати кільце, що містить гетероатом, таке як 5-14-членну гетероарильну групу, таку як піридиніл або піримідиніл; або 3-14-членну циклогетероалкільну групу, таку як піперидиніл або піперазиніл. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R4 позначає O O N O N N O 10 15 20 25 NH , , або , який може бути незаміщеним або заміщеним. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R2 та R3 позначають C1-C8-алкіл, такий як метил, етил або разом з атомами вуглецю, до яких вони приєднані, утворюють C4-C7-циклоалкільну групу. В іншому варіанті здійснення R2 та R3 обидва позначають метил або утворюють циклопентильну або циклогексильну групу. В ще одному варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій R2 та R3 позначають CH3. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій L позначає -O-, -NH-, -C(O)-, -CH(OH)-, CH2-, -CF2-, -CHF-, -C(OH)- або зв'язок. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій L позначає -CH2-. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполук формули (I), у якій обидва X та W позначають N та Z позначає CH3 та m дорівнює 1. В іншому варіанті здійснення p дорівнює 0, 1 або 2. В іншому варіанті здійснення p дорівнює 0 або 1. В ще одному варіанті здійснення p дорівнює 1. В іншому варіанті здійснення Y позначає зв'язок, C1-C8-алкілен, такий як метилен, етилен, пропілен -C(O)-, -C(O)O-, -CH(OH)- або -C(O)NR10, де R10 позначає C1-C8-алкіл, такий як метил, етил, пропіл або бутил або H. В іншому варіанті здійснення Y позначає зв'язок, метилен, C(O)O- або C(O)NH. В іншому варіанті здійснення Y позначає зв'язок. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполуки формули (Ia): R11 N N N N N N R12 30 35 40 45 50 (Ia) або її фармацевтично прийнятної солі, у якій R11 позначає C1-C8-алкіл, C2-C8-алкеніл, C3-C14-циклоалкіл, C6-C14-арильну групу, 5-14членну гетероарильну групу, 3-14-членну циклогетероалкільну групу, C1-C8-алкоксигрупу, галоген, NR13R14, C(O)OR13, C(O)NR13R14, C1-C8-галогеналкіл, форміл, карбалкоксигрупу, C1C8-алкіл-OH, C(O)R13, SO2R13, C(O)NHC1-C8-алкіл-R13, NR13R14, SO2NR13R14, OCF3, NHC(O)R13, CH2 °C(O)NR13R14, CH2NR13R14, NHC(O)OR13, NHC(O)NR13R14, CH2NHSO2R13, CH2NHC(O)OR13, °C(O)R13 або NHC(O)R13, які можуть бути заміщеними або незаміщеними; R12 позначає H, C1-C8-алкіл, C6-C14-арильну групу, C1-C8-галогеналкіл, C1-C8-алкоксигрупу, галоген, NH2, CN, OCF3, OH, C(O)NR13R14, C(O)R13, NR13R14, NHC(O)R13, SO 2R13, SO2NR13R14; R13 та R14 незалежно позначають H, C1-C8-алкіл, C2-C8-алкеніл, C3-C14-циклоалкіл, C6-C14арильну групу, 5-14-членну гетероарильну групу, 3-14-членну циклогетероалкільну групу, C1-C8галогеналкіл, C1-C8-алкіл-OH, C1-C8-алкоксигрупу або R13 та R14, приєднані до одного атому, можуть утворювати кільце, що містить гетероатом; та де R11, R13, та R14 можуть бути незаміщеними або заміщеними одним або більшою кількістю замісників, вибраними з C1-C8-алкілу, C3-C14-циклоалкілу, C6-C14-арильної групи, 5-14членної гетероарильної групи, 3-14-членної циклогетероалкільної групи, C 1-C8-алкіл-OH, OH, оксогрупи, C1-C8-галогеналкілу, карбокси-C1-C8-алкілу або SO2C1-C8-алкілу, галогену, -OCH3, OCF3, -OH, -NH2. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполуки, вибраної з групи, що включає: 2-[(R)-4-(4,5-диметил-6-феноксипіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H 6 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [1,2']біпіразиніл-5'-іл]пропан-2-ол; 2-{(R)-4-[6-(гідроксифенілметил-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H[1,2]біпіразиніл-5’-іл]пропан-2-ол; 2-[(R)-4-(4,5-диметил-6-піридин-4-ілметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H[1,2']біпіразиніл-5'-іл]пропан-2-ол; 2-[(R)-4-(4,5-диметил-6-піридин-2-ілметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H[1,2']біпіразиніл-5'-іл]пропан-2-ол; 2-[(R)-4-(6-бензил-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл5'-іл]пропан-2-ол; 2-[4-(6-бензил-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2"]біпіразиніл5’ил]пропан-2-ол; 2-[(S)-4-(6-бензил-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл5'-іл]пропан-2-ол; 2-[(R)-4-(6-бензил-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-2-етил-3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл5'-іл]пропан-2-ол; 2-[4-(4-бензил-6,7-дигідро-5H-циклопента[d]піридазин-1-іл)-3,4,5,6-тетрагідро-2H[1,2']біпіразиніл-5'-іл]пропан-2-ол; 2-[(R)-4-(4-бензил-6,7-дигідро-5H-циклопента[d]піридазин-1-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро2H-[1,2']біпіразиніл-5'-іл]пропан-2-ол; 1-[(R)-4-(6-бензил-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл5'-іл]етанон; та 2-[(R)-4-(6-бензил-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл5'-іл]пропан-1,2-діол. Одним об'єктом даного винаходу є способи застосування сполук для інгібування залежного від Smo шляху активації. Іншим об'єктом даного винаходу є способи застосування сполук для інгібування незалежного від Hedgehog (ліганду) шляху активації. У деяких варіантах здійснення способи, запропоновані в даному винаході, можна використовувати для протидії фенотиповим ефектам небажаної активації шляху Hedgehog, таким як мутації, обумовлені посиленням функції Hedgehog, втратою функції Ptc або посиленням функції Smoothened. Наприклад, спосіб, запропонований у даному винаході, може включати взаємодію клітини (in vitro або in vivo) з антагоністом Smo, таким як сполука, запропонована в даному винаході (наприклад, сполука формули I), або інша невелика молекула в кількості, достатній для пригнічення залежного від Smoothened та/або незалежного від Hedgehog шляху активації. Сполуки та способи, запропоновані в даному винаході, можна використовувати для регулювання проліферації та/або диференціації клітин in vitro та/або in vivo, наприклад при формуванні тканин із стовбурових клітин, або для попередження росту гіперпроліферативних клітин. В іншому кращому варіанті здійснення взаємодію клітини зі сполукою, запропонованою у даному винаході (наприклад, сполукою формули I), або її введення в клітину приводить до пригнічення проліферації клітин, пригнічення росту та/або життєдіяльності пухлинних клітин, та/або пригнічення онкогенезу. Таким чином, інший кращий варіант здійснення має відношення до способів уповільнення та/або пригнічення шляху Hh шляхом використання сполук, запропонованих у даному винаході (наприклад, сполуки формули I) у пухлинних клітинах. У способах, запропонованих у даному винаході, можна використовувати сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I), приготовлені у вигляді фармацевтичних препаратів, що включають фармацевтично прийнятний інертний наповнювач або носій, та зазначені препарати можна вводити пацієнтові для лікування патологічних станів, включаючи небажану проліферацію клітин, таку як ракові захворювання та/або пухлини (такі як медулобластома, базально-клітинна карцинома тощо) та незлоякісні гіперпроліферативні порушення. Один варіант здійснення даного винаходу відноситься до сполуки та способу пригнічення синтезу, експресування, продукування, стабілізації, фосфорилювання, зміни положення в клітині та/або активності білку Smo у клітині in vitro або in vivo, що включає взаємодію зазначеної клітини зі сполукою, запропонованою у даному винаході (наприклад, сполукою формули I), або її введення в зазначену клітину. Іншим об'єктом даного винаходу є сполука та спосіб діагностики, попередження та/або лікування ослаблень, порушень та/або дисфункцій клітин; гіперпластичних, гіперпроліферативних та/або злоякісних патологічних станів; та/або метастазування пухлинних клітин у ссавця, що характеризуються наявністю та/або експресуванням гену або генного продукту Smo (наприклад, білку Smo), що включає сполуки формули (I) та їх введення ссавцеві в терапевтично ефективній кількості. 7 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції, що включає сполуку формули I у терапевтично ефективній кількості. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до способу лікування ссавця, що страждає від патології, пов'язаної зі шляхом Hedgehog, який включає введення зазначеному ссавцеві, що потребує такого лікування, сполуки формули I у терапевтично ефективній кількості. У даному описі термін "лікування" включає профілактичне або попереджувальне лікування, а також лікування, що виліковує або пригнічує захворювання, включаючи лікування пацієнтів, які піддані ризику виникнення порушення, зазначеного в даному винаході (наприклад, порушення, пов'язаного з Hedgehog (наприклад, раку)), а також хворих пацієнтів. Цей термін також включає лікування, призначене для затримки прогресування захворювання. "Пригніченням та/або оберненням", наприклад, пов'язаного з Hedgehog порушення (наприклад, раку), заявники вважають усунення зазначеного пов'язаного з Hedgehog порушення (наприклад, діабету) або його приведення в менш важкий стан, ніж до лікування або без проведення лікування. "Вилікування" при використанні в даному винаході означає забезпечувану шляхом лікування ремісію пов'язаного з Hedgehog порушення (наприклад, раку) або його безперервних нападів у пацієнта. Терміни "профілактика" або "попередження" означають блокування виникнення або рецидиву метаболічних порушень, наприклад, діабету. "Лікування" означає терапію, попередження та профілактику та переважно означає введення пацієнтові лікарського засобу або виконання лікувальних процедур для профілактики (попередження) або вилікування, або зменшення ступеня прояву або ймовірності виникнення порушення, захворювання або патологічного стану або прояву, якщо пацієнт страждає на захворювання. "Діагностика" означає встановлення діагнозу, прогноз, моніторинг, опис, підбір пацієнтів, включаючи учасників клінічних досліджень, та виявлення пацієнтів, що схильні до ризику виникнення порушення або страждають від конкретного порушення або клінічного прояву, і тих, які з найбільшою ймовірністю будуть реагувати на конкретне лікування, або оцінку або моніторинг реакції пацієнта на конкретне лікування. "Суб'єкт" або "пацієнт" означає ссавця, переважно - людину, що потребує лікування патологічного стану, порушення або захворювання. "Сполука (сполуки), запропоновані в даному винаході" при використанні в даному винаході включають, але не обмежуються тільки ними, сполуки формули I (наприклад, сполуки формул (I), включаючи всі їх варіанти). Сполуки, запропоновані в даному винаході, включають сполуки, спеціально перераховані в даному винаході, включаючи перераховані в прикладах, наведених у даному винаході. "Затримка прогресування" при використанні в даному винаході означає, що введення сполуки, запропонованої в даному винаході (наприклад, сполуки формули I), пацієнтам на попередній стадії або ранній стадії пов'язаного з Hedgehog порушення (наприклад, раку) попереджає подальший розвиток або уповільнює розвиток захворювання в порівнянні з розвитком захворювання без введення активної сполуки. "Посилення функції Hedgehog" означає аберантну модифікацію або мутацію гену Ptc, гену Hedgehog або гену Smoothened, або зміну (наприклад, зменшення) ступеня експресування такого гену, яка приводить до фенотипу, який подібний із взаємодією клітини з білком Hedgehog, наприклад, аберантну активацію шляху Hedgehog. Посилення функції може включати втрату здатності генного продукту Ptc регулювати ступінь експресування генів Gli, наприклад, Gli1, Gli2, та Gli3, або втрату здатності регулювати процесинг, стабільність, локалізацію або активність білків Gli, наприклад, Gli1, Gli2, та Gli3. Термін "посилення функції Hedgehog" у даному винаході також використовується для зазначення будь-якого подібного клітинного фенотипу (наприклад, прояв надмірної проліферації), який спостерігається внаслідок зміни шляху передачі сигналу Hedgehog, що відбувається де-небудь, включаючи, але не обмежуючись тільки ними, модифікацію або мутацію самого Hedgehog. Наприклад, пухлинна клітина з аномально високою швидкістю проліферації внаслідок активації шляху передачі сигналу Hedgehog буде мати фенотип "посилення функції Hedgehog" навіть якщо в цій клітині Hedgehog не піддався мутації. "Втрата функції Patched" означає аберантну модифікацію або мутацію гену Ptc або зменшення ступеню експресування такого гену, що приводить до фенотипу, який подібний із взаємодією клітини з білком Hedgehog, наприклад, аберантну активацію шляху Hedgehog. Втрата функції може включати втрату здатності генного продукту Ptc регулювати ступінь 8 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 експресування, процесинг, стабільність, локалізацію, регуляцію або активність генів та білків Gli, наприклад, Gli1, Gli2 та Gli3. "Посилення функції Gli" означає аберантну модифікацію або мутацію гену Gli або підвищений ступінь експресування цього гену, що приводить до фенотипу, який подібний із взаємодією клітини з білком Hedgehog, наприклад, аберантну активацію шляху Hedgehog. "Посилення функції Smoothened" означає аберантну модифікацію або мутацію гену Smo або підвищений ступінь експресування цього гену, що приводить до фенотипу, який подібний із взаємодією клітини з білком Hedgehog, наприклад, аберантну активацію шляху Hedgehog. При використанні в даному винаході "невелика органічна молекула" означає органічну сполуку (або органічна сполука, що утворювала комплекс із неорганічною сполукою (наприклад, металом)), яка має молекулярну масу, рівну менше 3 кДа, та переважно - менше 1,5 кДа. При використанні в даному винаході термін "репортерний ген" використовується взаємозамінним чином із терміном "маркерний ген" та означає нуклеїнову кислоту, яка легко виявляє та/або кодує генний продукт, який легко виявляється, такий як люцифераза. Транскрипційні та трансляційні контрольні послідовності являють собою регуляторні послідовності ДНК, такі як промотори, підсилювачі, термінатори тощо, які забезпечують експресування кодуючої послідовності у клітині-хазяїні. В еукаріотних клітинах контрольними послідовностями є сигнали поліаденілювання. "Промотуюча послідовність" являє собою регуляторну ділянку ДНК, здатну зв'язувати РНКполімеразу в клітині та ініціювати транскрипцію кодуючої послідовності у прямому напрямку (у напрямку 3'). Для визначення даного винаходу промотуюча послідовність зв'язана по своєму 3'кінцю сайтом ініціації транскрипції та розташовується у зворотному напрямку (у напрямку 5') із включенням мінімальної кількості основ або елементів, необхідних для ініціювання транскрипції у ступені, що відрізняється від фону. У промотуючій послідовності виявляється сайт ініціації транскрипції (звичайно обумовлений, наприклад, шляхом картування з нуклеазою S1), а також домени зв'язування білку (консенсусні послідовності), що забезпечують зв'язування РНКполімерази. Кодуюча послідовність "знаходиться під контролем" транскрипційної та трансляційної контролюючих послідовностей у клітині, коли РНК-полімераза транскрибує кодуючи послідовність у мРНК, яка потім зазнає сплайсингу за допомогою транс-РНК та транслюється в білок, що кодується кодуючою послідовністю. Вираз "фармацевтично прийнятний" означає сполуки та композиції, які при введенні людині є фізіологічно переносимими і звичайно не приводять до алергійних або аналогічних небажаних реакцій, таких як розлад шлунку, запаморочення тощо. При використанні в даному винаході, термін "фармацевтично прийнятний" переважно означає затверджений регулятивним органом федерального уряду або уряду штату, або зазначений у Фармакопеї США або іншій загальновизнаній Фармакопеї, як застосовний для тварин та більш переважно - для людини. Термін "носій" означає розріджувач, допоміжну речовину, інертний наповнювач або розчинник, разом з яким вводять сполуку. Такі фармацевтичні носії можуть являти собою стерильні рідини, такі як вода або масла, включаючи масла, отримані з нафти, та масла тваринного, рослинного або синтетичного походження, такі як арахісове масло, соєве масло, мінеральне масло, кунжутне масло тощо. Як носії, особливо для розчинів, призначених для ін'єкцій, краще використовувати воду або водні фізіологічні розчини та водні розчини декстрози та гліцерину. Підходящі фармацевтичні носії описані в публікації "Remington's Pharmaceutical Sciences" by E. W. Martin. Вираз "терапевтично ефективна кількість" використовується в даному винаході для вказування кількості, достатньої для щонайменше приблизно 15 %, переважно - щонайменше приблизно 50 %, більш переважно - щонайменше приблизно 90 % ослаблення клінічно значимого дефіциту активності, функції та відповіді реципієнта, та найбільш переважно - його попередження. Альтернативно, терапевтично ефективна кількість достатня для забезпечення поліпшення клінічно значимого стану/симптому у реципієнта. "Засіб" означає всі речовини, які можна використовувати для готування фармацевтичних та діагностичних композицій, або якими можуть бути сполуки, нуклеїнові кислоти, поліпептиди, фрагменти, ізоформи, варіанти або інші речовини, які незалежно можна використовувати для таких цілей, усі відповідно до даного винаходу. "Аналог" при використанні в даному винаході означає невелику органічну сполуку, нуклеотид, білок або поліпептид, який має подібну або таку ж активність або функцію (функції), як сполука, нуклеотид, білок або поліпептид або сполука, що має необхідну активність та терапевтичний вплив відповідно до даного винаходу (наприклад, пригнічує ріст пухлини), але не обов'язково включає послідовність або структуру, яка подібна або ідентична з послідовністю 9 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 або структурою кращого варіанту здійснення. "Похідна" означає сполуку, білок або поліпептид, який включає амінокислотну послідовність вихідного білку або поліпептиду, яка змінена шляхом заміщень, видалень або додатків амінокислотних залишків, або нуклеїнову кислоту або нуклеотид, який модифікований шляхом введення або видалення, додавання або мутації нуклеотидних замісників. Похідна нуклеїнової кислоти, нуклеотиду, білку або поліпептиду виконує подібну або таку ж функцію, як вихідний поліпептид. "Інгібітори," або "антагоністи" означають інгібуючі молекули, ідентифіковані за допомогою проведених in vitro та in vivo досліджень функції шляху Hh, наприклад, антагоністи Smo. Інгібітори та антагоністи переважно означають сполуки або засоби, які ослабляють передачу сигналів для шляху Hh. Інгібітори можуть являти собою сполуки, які ослабляють, блокують або попереджають передачу сигналів для цього шляху. "Порушення, пов'язане з Hedgehog" при використанні в даному винаході включає порушення, пов'язані з руйнуванням або аберацією шляху Hedgehog, а також порушення, пов'язані з нормальними, але небажаними станами росту, пов'язані з активацією шляху Hedgehog. "Порушення, пов'язані з Hedgehog" включають, але не обмежуються тільки ними, утворення пухлини, рак, неоплазію, злоякісні гіперпроліферативні порушення та незлоякісні гіперпроліферативні порушення. "Порушення, пов'язані з Hedgehog" також включають доброякісну гіперплазію передміхурової залози, псоріаз, ексудативну дегенерацію жовтої плями, остеопетроз та небажаний ріст волосся. При використанні в даному винаході, термін "рак" включає сóлідні пухлини ссавців, а також злоякісні захворювання крові. "Сóлідні пухлини ссавців" включають ракові захворювання голови та шиї, легенів, мезотеліому, захворювання средостенія, стравоходу, шлунку, підшлункової залози, гепатобіліарної системи, тонкого кишечнику, ободової кишки, ободової та прямої кишки, прямої кишки, анусу, нирок, уретри, сечового міхура, передміхурової залози, пенісу, яєчок, статевих органів жінок, яєчників, молочної залози, ендокринної системи, центральної нервової системи, включаючи головний мозок; саркоми м'яких тканин та кісток; та меланому шкірного та внутріочного походження. Термін "злоякісні захворювання крові" включає дитячі лейкози та лімфоми, хворобу Ходжкіна, лімфоми лімфоцитарного та шкірного походження, гострий та хронічний лейкоз, плазмоклітинну неоплазію та ракові захворювання, пов'язані зі СНІД (синдром набутого імундефіциту). Крім того, можна лікувати рак на будь-якій стадії прогресування, такій як первинний, метастатичний та рецидивуючий рак. Інформація про численні типи раку наведена, наприклад, у публікаціях American Cancer Society або, наприклад, Wilson et al. (1991) Harrison's Principles of Internal Medicine, 12th Edition, Mcgraw-hill, Inc. В обсяг даного винаходу входять застосування в медицині та ветеринарії. Ракові захворювання, які особливо добре піддаються лікуванню сполуками та способами, запропонованими в даному винаході, включають, але не обмежуються тільки ними, гліоми, медулобластоми, примітивні нейроектодермальні пухлини (PNETS), базально-клітинну карциному (BCC), дрібноклітинні ракові захворювання легенів, великоклітинні ракові захворювання легенів, пухлини шлунково-кишкового тракту, рабдоміосаркоми, саркоми м'яких тканин, пухлини підшлункової залози, пухлини сечового міхура та пухлини передміхурової залози. При використанні в даному винаході, термін "злоякісне гіперпроліферативне порушення" включає, але не обмежується тільки ними, ракові захворювання, нейрональні проліферативні порушення, проліферативні захворювання кісткового мозку та лейкози. При використанні в даному винаході, термін "незлоякісне гіперпроліферативне порушення" включає, але не обмежується тільки ними, незлоякісні та ненеопластичні проліферативні порушення, такі як гіперплазія гладких м'язів у кровоносних судинах, утворення фляків на шкірі та фіброз легенів. При використанні в даному винаході "галоген" означає фтор, хлор, бром або йод. При використанні в даному винаході "алкіл" означає насичену вуглеводневу групу, що має лінійний або розгалужений ланцюг. В деяких варіантах здійснення алкільна група може містити від 1 до 10 атомів вуглецю (наприклад, від 1 до 6 атомів вуглецю). Приклади алкільних груп включають метильну (Me), етильну (Et), пропільні (наприклад, н-пропільну та ізопропільну), бутильні (наприклад, н-бутильну, ізобутильну, втор-бутильну, трет-бутильну), пентильні групи (наприклад, н-пентильну, ізопентильну, неопентильну) та т.п. Приклади нижч. алкільних груп включають метильну, етильну, пропільні (наприклад, н-пропільну та ізопропільну) та бутильні групи (наприклад, н-бутильну, ізобутильну, втор-бутильну, трет-бутильну). При використанні в даному винаході "алкеніл" означає алкільну групу, що має лінійний або розгалужений ланцюг, що містить один або більше вуглець-вуглецевих подвійних зв'язків. В 10 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 деяких варіантах здійснення алкенільна група може містити від 2 до 10 атомів вуглецю (наприклад, від 2 до 8 атомів вуглецю). Приклади алкенільних груп включають етинільну, пропенільну, бутенільну, пентенільну, гексенільну, бутадієнільну, пентадієнільну, гексадієнільну групи тощо. Один або більше вуглець-вуглецевих подвійних зв'язків можуть бути внутрішніми (як у 2-бутені) або кінцевими (як у 1-бутені). При використанні в даному винаході "алкініл" означає алкільну групу, що має лінійний або розгалужений ланцюг, що містить один або більше вуглець-вуглецевих потрійних зв'язків. В деяких варіантах здійснення алкінільна група може містити від 2 до 10 атомів вуглецю (наприклад, від 2 до 8 атомів вуглецю). Приклади алкінільних груп включають етиніл, пропініл, бутиніл, пентиніл тощо. Один або більше вуглець-вуглецевих потрійних зв'язків можуть бути внутрішніми (як у 2-бутині) або кінцевими (як у 1-бутині). При використанні в даному винаході "алкоксигрупа" означає групу –O–алкіл. Приклади алкоксигруп включають метоксигрупу, етоксигрупу, пропоксигрупу (наприклад, н-пропоксигрупу та ізопропоксигрупу), трет-бутоксигрупу тощо. При використанні в даному винаході "алкілтіогрупа" означає групу–S–алкіл. Приклади алкілтіогруп включають метилтіогрупу, етилтіогрупу, пропілтіогрупу (наприклад, н-пропілтіогрупу та ізопропілтіогрупу), трет-бутилтіогрупу тощо. Термін "карбалкоксигрупа" означає алкоксикарбонільну групу, у якій приєднання до головного ланцюгу відбувається через карбонільну групу (C(O)). Приклади включають, але не обмежуються тільки ними, метоксигрупу карбоніл, етоксигрупу, карбоніл тощо. При використанні в даному винаході "оксогрупа" означає кисень, зв'язаний подвійним зв'язком (тобто =O). Також слід розуміти, що позначення C(O) означає групу –C=O, яка може входити в кетон, альдегід, кислоту або похідну кислоти. Аналогічним чином, S(O) означає групу –S=O. При використанні в даному винаході "галогеналкіл" означає алкільну групу, що містить один або більшу кількість галогенідних замісників. В деяких варіантах здійснення галогеналкільна група може містити від 1 до 10 атомів вуглецю (наприклад, від 1 до 8 атомів вуглецю). Приклади галогеналкільних груп включають CF3, C2F5, CHF2, CH2F, CCl3, CHCl2, CH2Cl, C2Cl5 та т.п. Пергалогеналкільні групи, тобто алкільні групи, в яких всі атоми водню замінені на атоми галогенів (наприклад, CF3 та C2F5), включені у визначення "галогеналкілу". Наприклад, C 1-C10галогеналкільна група може описуватися формулою –CiH2i+1-jXj, у якій X позначає F, Cl, Br або I, та є цілим числом в діапазоні від 1 до 10, та j є цілим числом в діапазоні від 0 до 21, за умови, що j менше або дорівнює 2i+1. В даному винаході, коли після алкільної групи йде функціональна група, наприклад, алкілOH, слід розуміти, що це означає алкільну групу, що містить одну або більше заміщуючих функціональних груп, які можуть знаходитися в будь-якому положенні алкільного ланцюгу. Приклади груп C1-C8-алкіл-OH без накладання обмежень включають CH2OH, CH2CH2OH, C(CH3)(CH3)OH, C(CH3)(CH2OH)OH, та т.п. При використанні в даному винаході "циклоалкіл" означає неароматичну карбоциклічну групу, включаючи циклізовану алкільну, алкенільну та алкінільну групи. Циклоалкільна група може бути моноциклічною (наприклад, циклогексил) або поліциклічною (наприклад, що містить конденсовані, місткові та/або спіранові кільцеві системи), у яких атоми вуглецю знаходяться всередині кільцевої системи або зовні. Циклоалкільна група, як ціле, може містити від 3 до 14 кільцевих атомів (наприклад, від 3 до 8 атомів вуглецю у випадку моноциклічної циклоалкільної групи та від 7 до 14 атомів вуглецю у випадку поліциклічної циклоалкільної групи). Будь-яке підходяще положення циклоалкільної групи може бути ковалентно зв'язане з певною хімічною структурою. Приклади циклоалкільних груп включають циклопропільну, циклобутильну, циклопентильну, циклогексильну, циклогептильну, циклопентенільну, циклогексенільну, циклогексадієнільну, циклогептатриєнільну, норборнільну, норпінільну, норкарильну, адамантильну та спіро[4.5]деканільну групи, а також їх гомологи, ізомери тощо. При використанні в даному винаході "гетероатом" означає атоми будь-якого елементу крім вуглецю та водню та включає, наприклад, азот, кисень, сірку, фосфор та селен. При використанні в даному винаході "циклогетероалкіл" означає неароматичну циклоалкільну групу, яка містить щонайменше один (наприклад, 1, 2, 3, 4 або 5) кільцевий гетероатом, вибраний з групи, що включає O, N та S, та необов'язково містить один або більше (наприклад, 1, 2 або 3) подвійних або потрійних зв'язків. Циклогетероалкільна група, як ціле, може містити від 3 до 14 кільцевих атомів та містити від 1 до 5 кільцевих гетероатомів (наприклад, 3-6 кільцевих атомів у випадку моноциклічної циклогетероалкільної групи та від 7 до 14 кільцевих атомів у випадку поліциклічної циклогетероалкільної групи). Циклогетероалкільна група може бути ковалентно зв'язана з певною хімічною структурою по 11 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 будь-якому гетероатому (гетероатомам) або атому (атомам) вуглецю, що приводить до стабільної структури. Один або більше атомів N або S в циклогетероалкільному кільці можуть бути окислені (наприклад, утворювати морфолін-N-оксид, тіоморфолін-S-оксид, тіоморфолін-S, S-діоксид). Циклогетероалкільні групи також можуть містити одну або більше оксогруп, наприклад, фталімідил, піперидоніл, оксазолідиноніл, 2,4(1H, 3H)-діоксопіримідиніл, піридин2(1H)-оніл та т.п. Приклади циклогетероалкільних груп, зокрема, включають морфолініл, тіоморфолініл, піраніл, імідазолідиніл, імідазолініл, оксазолідиніл, піразолідиніл, піразолініл, піролідиніл, піролініл, тетрагідрофураніл, тетрагідротієніл, піперидиніл, піперазиніл тощо. При використанні в даному винаході "арил" означає ароматичну моноциклічну вуглеводневу кільцеву систему або поліциклічну кільцеву систему, де щонайменше одне з кілець кільцевої системи є ароматичним вуглеводневим кільцем та будь-які інші ароматичні кільця кільцевої системи є тільки вуглеводневими. В деяких варіантах здійснення моноциклічна арильна група може містити від 6 до 14 атомів вуглецю та поліциклічна арильна група може містити від 8 до 14 атомів вуглецю. Арильна група може бути ковалентно зв'язана з певною хімічною структурою по любому атому (атомам) вуглецю, що приводить до стабільної структури. В деяких варіантах здійснення арильна група може містити тільки ароматичні карбоциклічні кільця, наприклад, фенільна, 1-нафтильна, 2-нафтильна, антраценільна, фенантренільна групи та т.п. В інших варіантах здійснення арильна група може являти собою поліциклічну кільцеву систему, у якій щонайменше одне ароматичне карбоциклічне кільце є конденсованим, тобто таким, що містить загальний зв'язок з одним або більшою кількістю циклоалкільних або циклогетероалкільних кілець. Приклади таких арильних груп, зокрема, включають бензопохідні циклопентану (тобто інданільну групу, яка являє собою 5,6-біциклічну циклоалкіл/ароматичну кільцеву систему), циклогексан (тобто тетрагідронафтильну групу, якаявляє собою 6,6-біциклічну циклоалкіл/ароматичну кільцеву систему), імідазолін (тобто бензімідазолінільну групу, яка являє собою 5,6-біциклічну циклогетероалкіл/ароматичну кільцеву систему), та піран (тобто хроменільну групу, яка являє собою 6,6-біциклічну циклогетероалкіл/ароматичну кільцеву систему). Інші приклади арильних груп включають бензодіоксанільну, бензодіоксолільну, хроманільну, індолінільну групи тощо. При використанні в даному винаході "гетероарил" означає ароматичну моноциклічну кільцеву систему, що містить щонайменше один кільцевий гетероатом, вибраний з групи, що включає O, N та S, або поліциклічну кільцеву систему, де щонайменше одне з кілець кільцевої системи є ароматичним та містить щонайменше один кільцевий гетероатом. Гетероарильна група, як ціле, може містити від 5 до 14 кільцевих атомів та містити 1-5 кільцевих гетероатомів. В деяких варіантах здійснення гетероарильні групи можуть включати моноциклічні гетероарильні кільця, сконденсовані з одним або більшою кількістю ароматичних карбоциклічних кілець, неароматичних карбоциклічних кілець або неароматичних циклогетероалкільних кілець. Гетероарильна група може бути ковалентно зв'язана з певною хімічною структурою по будь-якому гетероатому або атому вуглецю, що приводить до стабільної структури. Звичайно гетероарильні кільця не містять зв'язки O-O, S-S або S-O. Однак один або більше атомів N або S в гетероарильній групі можуть бути окислені (наприклад, утворювати піридин-N-оксид, тіофен-S-оксид, тіофен-S, S-діоксид). Приклади таких гетероарильних кілець включають піролильну, фурильну, тієнільну, піридильну, піримідильну, піридазинільну, піразинільну, триазолільну, тетразолільну, піразолільну, імідазолільну, ізотіазолільну, тіазолільну, тіадіазолільну, ізоксазолільну, оксазолільну, оксадіазолільну, індолільну, ізоіндолільну, бензофурильну, бензотієнільну, хінолільну, 2-метилхінолільну, ізохінолільну, хіноксалільну, хіназолільну, бензотриазолільну, бензімідазолільну, бензотіазолільну, бензізотіазолільну, бензізоксазолільну, бензоксадіазолільну, бензоксазолільну, цинолінільну, 1H-індазолільну, 2H-індазолільну, індолізинільну, ізобензофурильну, нафтиридинільну, фталазинільну, птеридинільну, пуринільну, оксазолопіридинільну, тіазолопіридинільну, імідазопіридинільну, фуропіридинільну, тієнопіридинільну, піридипіримідинільну, піридопіразинільну, піридопіридазинільну, тієнотіазолільну, тієнооксазолільну, тієноімідазолільну групи та т.п. Інші приклади гетероарильних груп включають 4,5,6,7-тетрагідроіндолільну, тетрагідрохінолінільну, бензотієнопіридинільну, бензофуропіридинільну групи та т.п. Як визначено в даному винаході, термін "нижч. алкіл" при використанні окремо або в комбінації означає алкіл, що містить 1-6 атомів вуглецю. Алкільна група може мати лінійний або розгалужений ланцюг та є такою, як визначено вище в даному винаході. Термін "нижч. алкеніл" означає алкенільну групу, яка містить 2-6 атомів вуглецю. Алкенільна група являє собою гідрокарбільну групу, що містить щонайменше один вуглець-вуглецевий подвійний зв'язок. Як визначено в даному винаході, вона може бути незаміщеною або 12 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 заміщеною замісниками, описаними в даному винаході. Вуглець-вуглецеві подвійні зв'язки можуть знаходитися між будь-якими двома атомами вуглецю алкенільної групи. Краще, якщо вона містить 1 або 2 вуглець-вуглецеві подвійні зв'язки та ще краще, один вуглець-вуглецевий подвійний зв'язок. Алкенільна група може мати лінійний або розгалужений ланцюг. Приклади включають, але не обмежуються тільки ними, етиніл, 1-пропеніл, 2-пропеніл, 1-бутеніл, 2бутеніл, 2-метил-1-пропеніл, 1,3-бутадієніл тощо. Термін "нижч. алкініл" при використанні в даному винаході означає алкінільну групу, що містить 2-6 атомів вуглецю. Алкінільна група являє собою гідрокарбільну групу, що містить щонайменше один вуглець-вуглецевий потрійний зв'язок. Вуглець-вуглецевий потрійний зв'язок може знаходитися між будь-якими двома атомами вуглецю алкінільної групи. Краще, якщо алкінільна група містить 1 або 2 вуглець-вуглецеві потрійні зв'язки та більш краще, один вуглець-вуглецевий потрійний зв'язок. Алкінільна група може мати лінійний або розгалужений ланцюг. Приклади включають етиніл, 1-пропініл, 2-пропініл, 1-бутиніл, 2-бутиніл тощо. В обсяг даного винаходу входять всі фармацевтично прийнятні ізотопно-мічені сполуки, запропоновані в даному винаході, тобто сполуки формули (I), у якій один або більше атомів замінені атомами, що мають такий же атомний номер, але атомну масу або масове число, що відрізняється від атомної маси або масового числа, що звичайно зустрічаються у природі. Приклади ізотопів, що підходять для включення в сполуки, запропоновані в даному 2 3 11 13 14 винаході, включають ізотопи водню, такі як H та H, вуглецю, такі як C, C та C, хлору, такі 36 18 123 125 13 15 15 17 як Cl, фтору, такі як F, йоду, такі як I та I, азоту, такі як N та N, кисню, такі як O, O 18 32 35 та O, фосфору, такі як P, та сірки, такі як S. Деякі ізотопно-мічені сполуки формули (I), наприклад, що містять радіоактивний ізотоп, застосовні для дослідження розподілення лікарського засобу або субстрату в тканинах. 3 14 Радіоактивні ізотопи тритій, тобто H, та вуглець-14, тобто C, є особливо підходящими внаслідок легкості їх включення та простих засобів детектування. 2 Заміщення більш важкими ізотопами, такими як дейтерій, тобто H, може привести до деяких терапевтичних переваг, обумовлених великою метаболічною стабільністю, наприклад, збільшеним періодом напіввиведення in vivo або можливістю використання менших доз, та отже, за деяких обставин може бути кращим. 11 18 15 13 Заміщення ізотопами, що випромінюють позитрони, такими як C, F, O та N, може бути корисно для вивчення зайнятості рецепторів субстрату за допомогою позитронної емісійної томографії (ПЕТ). Ізотопно-мічені сполуки формули (I) звичайно можна одержати за звичайними методиками, відомими спеціалістам в даній галузі техніки, або за методиками, аналогічними описаним в прикладах, що додаються, та розділах, присвячених синтезу, з використанням підходящого ізотопно-міченого реагенту замість використовуваного раніше неміченого реагенту. Фармацевтично прийнятні солі будь-яких кислотних сполук, запропонованих в даному винаході, означають солі, утворені з основами, а саме, солі катіонів, такі як солі лужних та лужноземельних металів, таких як натрій, літій, калій, кальцій, магній, а також солі амонію, такі як солі амонію, триметиламонію, діетиламонію та тріс(гідроксиметил)метиламонію. Аналогічним чином, солі приєднання з кислотами, такі як утворені з неорганічними кислотами, органічними карбоновими кислотами та органічними сульфоновими кислотами, наприклад, з хлористоводневою кислотою, малеїновою кислотою та метансульфоновою кислотою, є можливими, якщо частиною структури є основна група, така як аміногрупа або піридильна група. Згідно винаходу було встановлено, що шляхи передачі сигналу, регулюємі за допомогою Hh та/або Smo, можна модулювати сполуками, запропонованими в даному винаході. В одному варіанті здійснення сполуки та способи, запропоновані в даному винаході, включають сполуки формули (I), призначені для інгібування залежного від Smo шляху активації. Іншим об'єктом даного винаходу є сполуки та способи, призначені для інгібування незалежного від Hedgehog (ліганду) шляху активації. В деяких варіантах здійснення сполуки та способи, запропоновані в даному винаході, можна використовувати для протидії фенотиповим ефектам небажаної активації шляху Hedgehog, таким як мутації, обумовлені посиленням функції Hedgehog, втратою функції Ptc або посиленням функції Smoothened. Наприклад, сполуки, запропоновані в даному винаході, та спосіб, запропонований в даному винаході, може включати взаємодію клітини (in vitro або in vivo) з антагоністом Smo, таким як сполука формули (I) в кількості, достатній для пригнічення залежного від Smoothened та/або незалежного від Hedgehog шляху активації. В одному варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом блокування 13 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 тривимірної структури білку Smo в неактивній конформації або перешкоджання утворенню активної конформації Smo. В іншому варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом попередження ендогенно активуючих лігандів Smo від зв'язування з Smo або від активації Smo (тобто впливу шляхом негативної кооперації з ендогенними агоністами). В іншому варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом посилення зв'язування ендогенно інактивуючих лігандів Smo з Smo або інактивації Smo (тобто впливу шляхом позитивної кооперації з ендогенним антагоністом). В іншому варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом попередження локалізації Smo в плазматичній мембрані. В іншому варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом попередження передачі сигналу від Ptch до Smo у присутності або за відсутності ліганду Hh. В іншому варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом попередження стабілізації Smo. В іншому варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом попередження фосфорилювання Smo по активуючим центрам. В іншому варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом посилення фосфорилювання Smo по інгібуючим центрам. В ще одному варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом попередження активації, що здійснюється за допомогою Smo, розташованих в прямому напрямку мішеней, таких як фактор транскрипції Gli. В іншому варіанті здійснення сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) інгібують передачу сигналу за допомогою Hh шляхом здійснення інактивації, секвестрації та/або руйнування Smo. В іншому варіанті здійснення способи, запропоновані в даному винаході можна використовувати для регулювання проліферації та/або диференціації клітин in vitro та/або in vivo, наприклад, при утворенні тканини із стволових клітин, або для попередження росту гіперпроліферативних клітин. В іншому кращому варіанті здійснення взаємодія клітини із сполукою, запропонованою в даному винаході (наприклад, сполукою формули I), або її введення в клітину приводить до пригнічення проліферації клітин, пригнічення росту та/або життєздатності ракових/пухлинних клітин, та/або пригнічення онкогенезу. Таким чином, інший кращий варіант здійснення відноситься до способів гальмування та/або пригнічення шляху Hh шляхом використання сполук, запропонованих в даному винаході (наприклад, сполуки формули I) в пухлинних клітинах. В ще одному варіанті здійснення в способах, запропонованих в даному винаході використовуються сполуки, запропоновані в даному винаході (наприклад, сполука формули I), приготовлені у вигляді фармацевтичного препарату, що включає фармацевтично прийнятний інертний наповнювач або носій, та вказані препарати можна вводити пацієнту для лікування патологічних станів, включаючи небажану проліферацію клітин, таку як ракові захворювання та/або пухлини (такі як медулобластома, базально-клітинна карцинома та т.п.) та незлоякісні гіперпроліферативні порушення. Один варіант здійснення даного винаходу відноситься до способу пригнічення синтезу, експресування, продукування та/або активності білку Smo в клітині in vitro або in vivo, що включає взаємодію вказаної клітини із сполукою, запропонованою в даному винаході (наприклад, сполукою формули I), або її введення у вказану клітину. Інший варіант здійснення даного винаходу відноситься до способу діагностики, попередження та/або лікування ослаблень, порушень та/або дисфункцій клітин; гіперпластичних, гіперпроліферативних та/або злоякісних патологічних станів; та/або метастазування пухлинних клітин у ссавця, що характеризуються наявністю та/або експресуванням гену або генного продукту Smo (наприклад, білку Smo), що включає введення ссавцю терапевтично ефективної кількості засобу, який інгібує або пригнічує синтез та/або експресування, та/або активність, тобто сполуки, запропонованої в даному винаході (наприклад, сполуки формули I). Тому особливо передбачається, що сполуки формули I, які перешкоджають активності передачі сигналів для Hh, Ptc або Smoothened, також будуть здатні інгібувати проліферацію (або інші біологічні наслідки) в нормальних клітинах та/або клітинах, що мають фенотип втрати функції Patched, фенотип посилення функції Hedgehog, фенотип посилення функції Smoothened 14 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 або фенотип посилення функції Gli. Таким чином, передбачається, що в деяких варіантах здійснення ці сполуки можуть бути застосовні для інгібування активності Hedgehog в нормальних клітинах, наприклад, в тих, які не містять генетичних мутацій, які активують шлях Hedgehog. В кращих варіантах здійснення сполуки здатні інгібувати щонайменше частину біологічних активностей білків Hedgehog, переважно - специфічно в клітинах-мішенях. Таким чином, способи, запропоновані в даному винаході, включають застосування сполук формули I, які перешкоджають інгібуванню шляху передачі сигналу Hedgehog за допомогою Ptc, наприклад, шляхом інгібування активації Smoothened або розташованих в прямому напрямку компонентів шляху передачі сигналу, шляхом регулювання репарації та/або функціональних характеристик самих різних клітин, тканин та органів, включаючи нормальні клітини, тканини та органи, а також ті, які мають фенотип втрати функції Ptc, посилення функції Hedgehog, посилення функції Smoothened або посилення функції Gli. Наприклад, спосіб, запропонований у даному винаході, застосовний для терапевтичних та косметичних цілей у діапазоні, що включає регуляцію утворення та відновлення нервових тканин, кісток та хрящів, регуляцію сперматогенезу, регуляцію доброякісної гіперплазії передміхурової залози, регуляцію утворення кровоносних судин при ексудативної дегенерації жовтої плями, псоріазу, регуляцію гладких м'язів, регуляцію легенів, печінки та інших органів, що утворюються з первинної кишки, регуляцію гематопоетичної функції, регуляцію росту шкіри та волосся тощо. Крім того, спосіб, запропонований у даному винаході, можна використовувати для клітин у культурі (in vitro), або для клітин цілої тварини (in vivo). У деяких варіантах здійснення сполука формули I може інгібувати активацію шляху Hedgehog шляхом зв'язування з Smoothened або з його розташованими в прямому напрямку білками. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до застосування фармацевтичних препаратів, що включають як активний інгредієнт модулятор шляху передачі сигналу Hedgehog, такий як сполука формули I, антагоніст Smoothened, такий як описаний у даному винаході, приготовлений у кількості, достатній для інгібування in vivo проліферації або інших біологічних наслідків втрати функції Ptc, посилення функції Hedgehog, посилення функції Smoothened або посилення функції Gli. Лікування суб'єктів шляхом введення сполук, запропонованих у даному винаході (наприклад, сполуки формули I), може бути ефективним і для людей, і для тварин. Тварини, для яких застосовний даний винахід, включають і свійських тварин, і домашню худобу, яких тримають як домашніх тварин або для комерційних цілей. Прикладами є собаки, кішки, велика рогата худоба, коні, вівці, свині, кози та лами. Даний винахід також відноситься до способів та сполук, призначених для інгібування активації шляху передачі сигналу Hedgehog, наприклад, для інгібування нормальних, але небажаних станів росту, наприклад, доброякісної гіперплазії передміхурової залози або утворення кровоносних судин при ексудативній дегенерації жовтої плями, обумовленій фізіологічною активацією шляху передачі сигналу Hedgehog, що включають взаємодію клітини зі сполукою формули I, у кількості, достатній для пригнічення активності Smoothened або пригнічення активності Gli, наприклад, для обігу або пригнічення нормального стану росту. Даний винахід відноситься до способів та сполук, призначених для інгібування активації шляху передачі сигналу Hedgehog, наприклад, для інгібування аберантних станів росту, обумовлених такими фенотипами, як фенотип втрати функції Ptc, посилення функції Hedgehog, посилення функції Smoothened або посилення функції Gli, що включають взаємодію клітини зі сполукою формули I у кількості, достатній для пригнічення активності Smoothened або пригнічення активності Gli, наприклад, для обігу або пригнічення аберантного стану росту. Представники сімейства сигнальних молекул Hedgehog опосередковують численні короткі та тривалі процеси формування структурної організації при розвитку хребетних. Формування структурної організації являє собою активність, при якій ембріональні клітини утворюють впорядковані просторові структури диференційованих тканин. Фізична складність вищих організмів виникає під час ембріогенезу внаслідок взаємодії між внутрішньою лінією диференціювання клітин та зовнішніми сигналами, що йдуть до клітини. Індуктивні взаємодії важливі для формування ембріональної структурної організації при розвитку хребетних від раннього утворення плану організму до утворення системи органів та до утворення різних типів клітин під час диференціації тканини. Вплив взаємодії клітин при розвитку міняється: відповідаючі клітини переходять від одного шляху диференціації клітин до іншого шляхом індукування клітин, які відрізняються від відповідаючих клітин і в індукованих, і в неіндукованих станах (індукції). Іноді клітини приводять до диференціації сусідніх клітин, такий як власна (гомогенетична індукція); в інших випадках клітина пригнічує диференціацію сусідніх клітин, таку 15 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 як власна. Взаємодії клітин на ранній стадії розвитку можуть бути послідовними, такій що початкова індукція між двома типами клітин приводить до прогресивної ампліфікації різноманітності. Крім того, індуктивні взаємодії відбуваються не тільки в ембріонах, але і у зрілих клітинах, і може приводить до утворення та підтримки морфологічних характеристик, а також індукувати диференціацію. Група генів Hedgehog хребетних включає три представники, які існують у ссавців, відомих, як Desert (Dhh), Sonic (Shh) та Indian (Ihh) Hedgehogs, які всі кодують секретовані білки. Ці різні білки Hedgehog включають сигнальний пептид, висококонсервативну N-кінцеву ділянку та більш дивергентний C-кінцевий домен. Біохімічні дослідження показали, що аутопротеолітичне розщеплення попередника білку Hh протікає шляхом первісного утворення складного тіоефірного проміжного продукту, який потім розщеплюється при нуклеофільному заміщенні. Імовірно, що нуклеофільний реагент являє собою невелику ліпофільну молекулу, яка ковалентно зв'язується з C-кінцевим кінцем N-пептиду, приєднуючи його до поверхні клітини. Біологічні прояви є значними. У результаті приєднання на поверхні клітин, що продукують Hedgehog, створюється висока локальна концентрація N-кінцевого пептиду Hedgehog. Цей Nкінцевий пептид, який необхідний та достатній для короткої та тривалої активності шляху передачі сигналу Hedgehog. Smoothened (Smo) кодує трансмембранний білок, що містить 1024 амінокислоти, який діє як приймач сигналу Hedgehog (Hh). Білок Smo містить 7 гідрофобних вхідних у мембрану доменів, позаклітинну область із кінцевими аміногрупами та внутрішньоклітинну область із кінцевими карбоксигрупами. Smo має певну подібність із пов'язаними з білком G рецепторами та найбільш гомологічний сімейству Frizzled (Fz) серпентинових білків (Alcedo et al. (1996) Cell 86: 221). Неактивним шлях передачі сигналу Hedgehog є тоді, коли трансмембранний білковий рецептор Patched (Ptc) інгібує стабілізацію, фосфорилювання та активність Smoothened (Smo). Фактор транскрипції Gli, розташований у прямому напрямку компонент шляху передачі сигналу Hh, захищається від входу в ядро шляхом взаємодії із цитоплазматичними білками, включаючи Fused та Suppressor fused (Sufu). Внаслідок цього пригнічується транскрипційна активація генівмішеней Hedgehog. Активація шляху передачі сигналу ініціюється шляхом зв'язування кожного із трьох лігандів ссавців (Dhh, Shh або Ihh) з Ptc. Зв'язування лігандів приводить до обернення пригнічення Smo і тим самим активує каскад, що приводить до переміщення активної форми фактору транскрипції на ядра. Ядерний Gli активує експресію гену-мішені, включаючи Ptc і сам Gli. Зв'язування лігандів за допомогою Hh міняє взаємодію Smo та Ptc, обертаючи пригнічення Smo, після чого Smo переміщається від внутрішніх структур клітини до плазматичної мембрани. Локалізація Smo на плазматичній мембрані ініціює гени-мішені активації шляху передачі сигналу Hh незалежним від Hh чином. (Zhu et al. (2003) Genes Dev. 17(10):1240) Каскад, активований за допомогою Smo, приводить до переміщення активної форми фактору транскрипції Gli на ядра. Активація Smo за допомогою переміщеного ядерного Gli активує експресію гену-мішені шляху передачі сигналу Hh, включаючи Wnts, TGFβ і Ptc і сам Gli. Підвищені рівні передачі сигналу Hedgehog достатні для ініціювання утворення раку та необхідні для життєздатності пухлини. Ці ракові захворювання включають, але не обмежуються тільки ними, рак передміхурової залози ("Hedgehog signalling in prostate regeneration, neoplasia and metastasis", Karhadkar SS, Bova GS, Abdallah N, Dhara S, Gardner D, Maitra A, Isaacs JT, Berman DM, Beachy PA., Nature. 2004 Oct 7;431(7009):707-12; "Inhibition of prostate cancer proliferation by interference with SONIC HEDGEHOG-GLI1 signaling", Sanchez P, Hernandez AM, Stecca B, Kahler AJ, DeGueme AM, Barrett A, Beyna M, Datta MW, Datta S, Ruiz i Altaba A., Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Aug 24;101(34):12561-6), ("Cytotoxic effects induced by a combination of cyclopamine and gefitinib, the selective hedgehog and epidermal growth factor receptor signaling inhibitors, in prostate cancer cells, " Mimeault M, Moore E, Moniaux N, et al (2006), International Journal of Cancer; 118 (4):1022-31), рак молочної залози ("Hedgehog signaling pathway is a new therapeutic target for patients with breast cancer", Kubo M, Nakamura M, Tasaki A, Yamanaka N, Nakashima H, Nomura M, Kuroki S, Katano M., Cancer Res. 2004 Sep 1;64(17):6071-4), ("Hedgehog signaling and Bmi-1 regulate self-renewal of normal and malignant human mammary stem cells, " Liu S, Dontu G, Mantle ID, et al (2006) Cancer Res; 66 (12):6063-71), ("Constitutive activation of smoothened (SMO) in mammary glands of transgenic mice leads to increased proliferation, altered differentiation and ductal dysplasia, " Moraes RC, Zhang XM, Harrington N, et al (2007), Development; 134 (6):1231-42), медулобластому ("Medulloblastoma growth inhibition by hedgehog pathway blockade", Berman DM, Karhadkar SS, Hallahan AR, Pritchard JI, Eberhart CG, Watkins DN, Chen JK, Cooper MK, Taipale J, Olson JM, Beachy PA., Science. 2002 Aug 30;297(5586):1559-61), рак шкіри, що не є меланомою, тобто плоскоклітинну карциному (SCC) та базально-клітинну 16 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 карциному (BCC) ("Identification of a small molecule inhibitor of the hedgehog signaling pathway: effects on basal cell carcinoma-like lesions", Williams JA, Guicherit OM, Zaharian BI, Xu Y, Chai L, Wichterle H, Kon C, Gatchalian C, Porter JA, Rubin LL, Wang FY., Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 Apr 15;100(8):4616-21; "Activating Smoothened mutations in sporadic basal-cell carcinoma", Xie J, Murone M, Luoh SM, Ryan A, Gu Q, Zhang C, Bonifas JM, Lam CW, Hynes M, Goddard A, Rosenthal A, Epstein EH Jr, de Sauvage FJ., Nature. 1998 Jan 1;391(6662):90-2), ракові захворювання підшлункової залози, стравоходу, шлунку та печінки ("Hedgehog is an early and late mediator of pancreatic cancer tumorigenesis", Thayer SP, di Magliano MP, Heiser PW, Nielsen CM, Roberts DJ, Lauwers GY, Qi YP, Gysin S, Fernandez-del Castillo C, Yajnik V, Antoniu B, McMahon M, Warshaw AL, Hebrok M., Nature. 2003 Oct 23;425(6960):851-6; "Widespread requirement for Hedgehog ligand stimulation in growth of digestive tract tumours", Berman DM, Karhadkar SS, Maitra A, Montes De Oca R, Gerstenblith MR, Briggs K, Parker AR, Shimada Y, Eshleman JR, Watkins DN, Beachy PA., Nature. 2003 Oct 23;425(6960):846-51), ("Nuclear factor-cappa B contributes to hedgehog signaling pathway activation through sonic hedgehog induction in pancreatic cancer, " Nakashima H, Nakamura M, Yamaguchi H, et al (2006), Cancer Research; 66 (14):7041-9), ("Blockade of hedgehog signaling inhibits pancreatic cancer invasion and metastases: A new paradigm for combination therapy in solid cancers, " Feldmann G, Dhara S, Fendrich V, et al (2007) Cancer Research; 67 (5):2187-96), ("Oncogenic KRAS suppresses Gli1 degradation and activates Hedgehog signaling pathway in pancreatic cancer cells, " Ji Z, Mei FC, Xie J, et al (2007), J Biol Chem; 282 (19):14048-55), та дрібноклітинний рак легенів ("Hedgehog signalling within airway epithelial progenitors and in smallcell lung cancer", Watkins DN, Berman DM, Burkholder SG, Wang B, Beachy PA, Baylin SB., Nature. 2003 Mar 20;422(6929):313-7), ("Hedgehog signaling in small-cell lung cancer: Frequent in vivo but a rare event in vitro, " Vestergaard J, Pedersen MW, Pedersen N, et al (2006), Lung Cancer; 52 (3):28190). Додаткові типи раку, при яких спостерігаються підвищені рівні передачі сигналу Hedgehog, достатні для ініціювання розвитку рака та необхідні для виживання пухлини, включають, але не обмежуються тільки ними, рак товстої кишки ("Sonic Hedgehog-dependent proliferation in a series of patients with colorectal cancer, " Douard R, Moutereau S, Pernet P, et al (2006) Surgery; 139 (5):665-70), ("Hedgehog signalling in colorectal tumour cells: Induction of apoptosis with циклопамин treatment, " Qualtrough D, Buda A, Gaffield W, et al (2004), International Journal of Cancer; 110 (6):831-7), гліому, ("Cyclopamine-mediated Hedgehog pathway inhibition depletes stem-like cancer cells in glioblastoma, " Bar EE, Chaudhry A, Lin A, et al, Neuro-Oncology; 2007, 9 (4):594), ("HEDGEHOG-GLI1 signaling regulates human glioma growth, cancer stem cell self-renewal, and tumorigenicity, " Clement V, Sanchez P, de Tribolet N, et al, (2007) Current Biology 17 (2):165-72), ("Ligand-dependent activation of the hedgehog pathway in glioma progenitor cells, " Ehteshan M, Sarangi A, Valadez JG, et al (2007) Oncogene; March12, 2007, Epub ahead of print), меланому ("Melanomas require HEDGEHOG-GLI signaling reaulated by interactions between GLI1 and the RAS-MEK/AKT pathways, " Stecca B, Mas C, Clement V, et al (2007), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America; 104 (14):5895-900), недрібноклітинний рак легенів (NSCLC) ("Frequent requirement of hedgehog signaling in non-small cell lung carcinoma, " Yuan Z, Goetz JA, Singh S, et al (2007), Oncogene; 26 (7):1046-55), яєчників, ("Hedgehog signal pathway is activated in ovarian carcinomas, correlating with cell proliferation: It's inhibition leads to growth suppression and apoptosis, " Chen XJ, Horiuchi A, Kikuchi N, et al, Cancer Science; (2007) 98 (1):68-76), печінки ("Activation of the hedgehog pathway in human hepatocellular carcinomas, " Huang SH, He J, Zhang XL, et al (2006), Carcinogenesis; 27 (7):1334-40), ("Dysregulation of the Hedgehog pathway in human hepatocarcinogenesis, " Sicklick JK, Li YX, Jayaraman A, et al (2006), Carcinogenesis; 27 (4):748-57), нирок ("Clear cell sarcoma of the kidney: Up-regulation of neural markers with activation of the sonic hedgehog and Akt pathways, " Cutcliffe C, Kersey D, Huang CC, et al (2005), Clinical Cancer Research; 11 (22):7986-94), рабдоміосаркому ("Rhabdomyosarcomas and radiation hypersensitivity in a mouse model of Gorlin syndrome, " Hahn H, Wojnowski L, Zimmer AM, et al (1998), Nature Medicine; 4 (5):619-22), ("Deregulation of the hedgehog signalling pathway: a possible role for the PTCH and SUFU genes in human rhabdomyoma and rhabdomyosarcoma development, " Tostar U, Malm CJ, Meis-Kindblom JM, et al (2006), Journal of Pathology; 208 (1):1725) та хондросаркому ("Constitutive hedgehog signaling in chondrosarcoma up-regulates tumor cell proliferation, " Tiet TD, Hopyan S, Nadesan P, et al (2006), American Journal of Pathology; 168 (1):321-30). Показано, що інгібітори шляху Hedgehog (наприклад, циклопамін) застосовні для лікування псоріазу ("Cyclopamine: inhibiting hedgehog in the treatment of psoriasis" Cutis, 2006, 78(3):185-8; Br. J. Dermatology, 2006 Apr;154(4):619-23, "Psoriatic skin expresses the transcription factor Gli1: possible contribution of decreased neurofibromin expression", Endo H, Momota Y, Oikawa A, Shinkai 17 UA 105181 C2 H.). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Злоякісна лімфома (ML) включає клітини лімфатичної системи та посідає п'яте місце серед найпоширеніших видів раку в США. ML включає хворобу Ходжкіна, а також неходжкінські хвороби, які утворюють гетерогенну групу лімфоїдних проліферативних захворювань. Неходжкінські лімфоми становлять приблизно 14 % від усіх випадків злоякісних лімфом. Неходжкінські лімфоми утворюють різнорідну групу злоякісних захворювань переважно Bклітинного походження. Згідно з робочою класифікацією зазначені лімфоми підрозділяють на низько-, середньо- та високодиференційовані лімфоми залежно від перебігу хвороби (див. "The Non-Hodgkin's Lymphoma Pathologic Classification Project, " Cancer 49:2112-2135, 1982). Низькодиференційовані лімфоми розвиваються повільно, середній термін виживання від 5 до 10 років (Horning і Rosenberg, N. Engl. J. Med. 311:1471-1475, 1984). Незважаючи на те, що хіміотерапія приводить до ремісії в більшості випадків лімфом, що повільно розвиваються, випадки виліковування спостерігаються рідко, та у більшості пацієнтів згодом знову розвивається захворювання, у зв'язку із цим виникає потреба у подальшому лікуванні. Середньо- та високодиференційовані лімфоми є більш агресивними пухлинами, але більшою мірою піддаються лікуванню хіміотерапевтичними засобами. Однак у значної частини пацієнтів згодом знову розвивається захворювання і виникає потреба у подальшому лікуванні. Множинна мієлома (MM) є злоякісною пухлиною, що складається із плазматичних клітин такого типу, які звичайно знаходяться у кістковому мозку. Ці злоякісні плазматичні клітини накопичуються в кістковому мозку та звичайно продукують моноклональні молекули IgG або IgA. Злоякісні плазматичні клітини вертаються в кістковий мозок і розмножуються в ньому, викликаючи анемію та пригнічення імунітету внаслідок порушення нормального кровотворення. У індивідуумів, що страждають від множинної мієломи, часто спостерігається анемія, остеолітичні ушкодження, ниркова недостатність, гіперкальціємія та рецидивуючі бактеріальні інфекції. MM посідає друге місце серед найпоширеніших злоякісних захворювань кровотворної системи. Даний винахід частково оснований на відкритті авторів винаходу, що свідчить про те, що розвиток лімфомних та множинних мієломних захворювань залежить від шляху передачі сигналу Hedgehog (Hh), як було встановлено з використанням лімфомних та плазмоцитомних клітин, виділених із тканин трансгенних мишей лінії Eµ-Myc та мишей, позбавлених Cdkn2a. Отримані результати свідчили про те, що ліганди Hedgehog опосередковують взаємодію між стромальними та лімфомними клітинами. Аналогічні результати були отримані з використанням клітин лімфоми та множинної мієломи зі зразків клітин пацієнтів, виділених з кістки (множинна мієлома) або лімфатичних вузлів, кісткового мозку або селезінок пацієнтів з діагнозом неходжкінської лімфоми (NHL), а також із клітин при хронічному лімфоцитарному лейкозі (CLL). Крім того, було встановлено, що пригнічення шляху передачі сигналу Hh викликає апоптоз стромо-залежних лімфомних клітин та що надекспресія компонентів шляху Hedgehog пригнічує викликаний циклопаміном апоптоз лімфомних клітин in vitro. Крім того, авторами було неочікувано встановлене, що лікування мишей інгібіторами шляху Hedgehog запобігає поширенню лімфоми in vivo. Нарешті, авторами винаходу було неочікувано встановлено, що експресія Gli3 в B-клітинах селезінки та у більшості випадків циклопамін-чутливих лімфом відсутня, але є характерною ознакою у всіх випадках резистентних до циклопаміну лімфом. Ці дані показують, що шлях передачі сигналу Hh передає важливий антиапоптотичний сигнал на початкових стадіях трансформації під дією c-Myc та відіграє важливу роль у підтримці лімфоми. Таким чином, переривання шляху передачі сигналу Hh є новим засобом лікування лімфом (наприклад, неходжкінської лімфоми), множинних мієлом, CLL та інших злоякісних захворювань кровотворної системи. Крім того, експресія Gli3 у лімфомах є чинником несприятливого прогнозу для чутливості до інгібування Hh та важливим показником для стратифікації пацієнтів. У зв'язку із цими відкриттями даний винахід має відношення до способу пригнічення росту пухлинних клітин, наприклад, лімфомних та мієломних клітин. Даний винахід має відношення до способів та композицій, призначених для лікування лімфоми та мієломи у суб'єкта шляхом пригнічення росту пухлинних клітин. Ці способи також можна використовувати для попередження онкогенезу у суб'єкта. Деякі способи призначені для лікування лімфом, при яких не спостерігається істотної експресії Gli3 у порівнянні з B-клітинами селезінки. Способи включають введення пацієнтові, що потребує зазначеного лікування, фармацевтичної композиції, що містить антагоністичний агент шляху передачі сигналу Hh (наприклад, сполука формули I). Сполука, запропонована в даному винаході, знижує рівень у клітинах або інгібує біологічну активність компоненту шляху передачі сигналу Hh. Даний винахід відноситься до способів профілактики або лікування онкологічних 18 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 захворювань крові та лімфатичної системи, включаючи лімфоми, лейкози та мієломи. У цих способах використовують антагоніст шляху передачі сигналу Hedgehog для пригнічення росту та проліферації лімфомних клітин, лейкозних клітин або мієломних клітин. Лімфома є злоякісною пухлиною лімфобластів, що утворюються з лімфоцитів В. Мієлома є злоякісною пухлиною, що складається з плазматичних клітин такого типу, які звичайно знаходяться у кістковому мозку. Лейкоз є гострим або хронічним захворюванням, що залучає кровотворні органі. Неходжкінські лімфоми характеризуються аномальним збільшенням кількості лейкоцитів у тканинах організму, з відповідним збільшенням кількості лейкоцитів у кровотоці або без нього, та зазначені лімфоми підрозділяються на групи залежно від типу лейкоцитів, що найбільшою мірою приймають участь. Наприклад, суб'єктів, що страждають від лімфоми або входять у групу ризику розвитку лімфоми (наприклад, B- клітинної лімфоми, плазмобластоми, плазмоцитоми або CLL) можна лікувати способами, запропонованими в даному винаході. Суб'єктом переважно є людина. Способи включають введення суб'єктові фармацевтичної композиції, що містить сполуку формули I в ефективній кількості для інгібування шляху передачі сигналу Hedgehog. Суб'єктом є пацієнт, у якого діагностована лімфома, що супроводжується або не супроводжується метастазуванням на будь-якій стадії захворювання (наприклад, стадії від I до IV згідно із системою класифікації стадії захворювання Ann Arbor Staging System). Лімфоми, що піддаються лікуванню способом, запропонованим у даному винаході, включають, але не обмежуються тільки ними, хворобу Ходжкіна та неходжкінську лімфому. Хвороба Ходжкіна є злоякісним порушенням лімфоїдної тканини (лімфомою) людини, яке, очевидно, спочатку розвивається в окремому лімфатичному вузлі та поступово поширюється в селезінці, печінці та кістковому мозку. Воно розвивається переважно в індивідуумів у віці від 15 до 35 років та характеризується прогресивним, безболісним збільшенням лімфатичних вузлів, селезінки та основної лімфоїдної тканини. Класичну хворобу Ходжкіна підрозділяють на чотири підтипи: (1) атеросклерозна хвороба Ходжкіна, (2) хвороба Ходжкіна зі змішаним типом клітин, (3) хвороба Ходжкіна, що супроводжується лімфопенією, та (4) класична хвороба Ходжкіна з підвищеним вмістом лімфоцитів. У деяких кращих варіантах здійснення даного винаходу способи можна використовувати для лікування неходжкінської лімфоми. Неходжкінську хворобу також називають лімфосаркомою та відносять до групи лімфом, які з важливих ознак відрізняються від хвороби Ходжкіна та класифікуються по зовнішньому вигляду ракових клітин під мікроскопом. Неходжкінська лімфома включає, але не обмежується тільки ними, (1) лімфоми та лімфоїдні лейкози, що повільно розвиваються, (наприклад, хронічний лімфоцитарний лейкоз, дрібноклітинний лімфоцитарний лейкоз, лімфоплазмоцитоїдну лімфому, лімфому клітин центрального фолікулу, дрібноклітинну лімфому з розщепленими ядрами, лімфому зі змішаними клітинами фолікулу, Bклітинну лімфому крайової зони, волосатоклітинний лейкоз, плазмоцитому, мієлому, великоклітинний гранулярний лейкоз, фунгоїдний мікоз, синдром Сезарі); (2) лімфоми середньої агресивності та лімфоїдні лейкози (наприклад, пролімфоцитарний лейкоз, лімфому клітин мантійної зони, лімфому центру фолікулу, лімфому фолікулу дрібноклітинну з розщепленими ядрами, хронічний лімфоцитарний лейкоз/пролімфоцитарний лейкоз, лімфангіому, ангіоімунобластну лімфому), (3) агресивні лімфоми (наприклад, B-великоклітинну лімфому, периферичну T-клітинну лімфому, T-клітинну лімфому кишечнику, анаплазовану великоклітинну лімфому), та (4) високоагресивні лімфоми та лімфоїдні лейкози (наприклад, Bлімфобластомний лейкоз/лімфому попередників B-клітин, лімфому Беркітта, високодиференційовану B-клітинну лімфому, Т-клітинний лімфобластний лейкоз/лімфому попередників Т-клітин, подібні лімфоми Беркітта). Способи, запропоновані в даному винаході, можна використовувати для лікування лімфом як дорослих, так і дітей, а також на будь-якій стадії лімфоми, наприклад, на стадії I, II, III, або IV. Способи, запропоновані в даному винаході, також можна використовувати для лікування інших форм лейкозу, наприклад, гострого лімфоцитарного лейкозу (ALL). Деякі способи лікування, запропоновані в даному винаході, насамперед призначені для лікування лімфом або мієлом, при яких відсутня експресія Gli3. Як описано нижче в прикладах, було встановлено, що в той час, як Gli1 та Gli2 експресуються у всіх типах лімфом, детектуєма експресія Gli3 була виявлена переважно в лімфомах, нечутливих до інгібування шляху Hh циклопаміном. Експресія Gli3 не спостерігається в нормальні В-клітинах селезінки у більшості чутливих до циклопаміну лімфом. Отже, перед лікуванням антагоністами Hh суб'єктів, що страждають від лімфом, спочатку слід провести аналіз на наявність експресії Gli3 у зразку лімфомних клітин, виділених із тканини суб'єкта. Рівень експресії Gli3 у зразку порівнюють із рівнем експресії Gli3 у нормальні В-клітинах селезінки, виділених із тканини суб'єкта. Рівні 19 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 експресії Gli3 у зразках лімфоми або мієломи, а також у контрольних клітинах, визначають стандартним способом аналізу, наприклад, як описано нижче в прикладах. Подібну чутливість до лікування антагоністами Hh, описаними в даному винаході, визначають за відсутністю детектуємої експресії Gli3 у зразках лімфом або мієлом або якщо виявлений незначний рівень експресії у зразках (наприклад, що не перевищує 25 %, 50 % або 100 %) у порівнянні з рівнем експресії Gli3 у нормальних B-клітинах. Зазначений попередній аналіз на відсутність експресії Gli3 не є додатковою стадією способу лікування, запропонованого в даному винаході, та такий аналіз можна незалежно використовувати для стратифікації пацієнтів. Описані вище способи та композиції можна використовувати для лікування не тільки лімфом, але і мієлом. Множинна мієлома є летальною пухлиною та характеризується накопиченням клону плазматичних клітин, яке в більшості випадків супроводжується секрецією ланцюгів Ig. Інвазія пухлини у кістковий мозок пов'язана з анемією, гіпогамаглобулінемією та гранулоцитопенією із супутніми бактеріальними інфекціями. Присутність у середовищі аномальних цитокінів, а головним чином підвищені рівні IL-6 і IL-1β, часто приводять до остеоклазії підвищеного ступеня, що викликає кісткові болі, переломи та гіперкальціємію. Незважаючи на активну хіміотерапію та трансплантацію, множинна мієлома завжди є летальним плазматичним проліферативним порушенням. Сполуки, запропоновані в даному винаході, застосовні для лікування порушень, пов'язаних зі шляхом Hedgehog, таких як синдром базально-клітинного невусу (інша назва синдром Горліна та/або невоїдна базально-клітинна карцинома), рідкий генетичний аутосомно-домінантний онкологічний синдром. Сполуки, запропоновані в даному винаході, застосовні для лікування базальноклітинної карциноми (BCC або канкроїд шкіри), пухлини надниркової залози, що розвивається в корковому або мозковому шарі медули надниркових залоз, та пухлини яєчників. Сполуки, запропоновані в даному винаході, застосовні для лікування порушень, пов'язаних з надлишковим ростом кісткової тканини, включаючи, але не обмежуючись тільки ними, акромегалію, макроцефалію, синдром Сотоса, прогресуючу діафізарну дисплазію (PDD або хвороба Камураті-Енгельмана), краніодіафізарну дисплазію та внутрішнкістковий гіперостоз, включаючи хворобу Ван Бюхема (типи I та II) та рубцювання тканини. Сполуки, запропоновані в даному винаході, застосовні для лікування небажаного росту волосся, наприклад, волосяного невусу та у косметичних цілях для запобігання повторного росту волосся після епіляції. Сполуки, запропоновані в даному винаході, застосовні для лікування фіброзу печінки. Таким чином, способи, запропоновані в даному винаході, включають застосування сполук, запропонованих у даному винаході, які проявляють антагоністичну активність стосовно пригнічення Ptc шляху передачі сигналу Hedgehog, наприклад, за рахунок інгібування активації компонентів smoothened або компонентів наступного каскаду шляху передачі сигналу за рахунок регуляції регенерації та/або функціональної ефективності широкого спектру клітин, тканин або органів, включаючи нормальні клітини, тканини та органи, а також клітини, тканини та органи, що характеризуються фенотипом із втратою функції Ptc, посиленням функції Hedgehog, посиленням функції smoothened або посиленням функції Gli. Наприклад, спосіб можна використовувати для лікування та косметичних процедур, включаючи регуляцію активності нервових тканин, формування та регенерацію кісткової та хрящової тканини, регуляцію сперматогенезу, регуляцію доброякісної гіперплазії передміхурової залози, регуляцію утворення кровоносних судин при вологій формі дегенерації жовтої плями, псоріаз, регуляцію гладкої мускулатури, регуляцію легенів, печінки та інших органів, що розвиваються з архентерону, регуляцію кровотворної функції, регуляції росту шкіри та волосся. Крім того, способи, запропоновані в даному винаході, можна використовувати при обробці клітин, отриманих у культурі (in vitro) або клітин із цілого організму тварини (in vivo). Відповідно до наведеного вище даний винахід також має відношення до способу попередження або лікування будь-яких описаних вище захворювань або порушень у суб'єкта, що потребує такого лікування, та зазначений спосіб включає введення зазначеному суб'єктові сполуки формули I або її фармацевтично прийнятної солі в терапевтично ефективній кількості (див. нижче розділ "Введення та фармацевтичні композиції"). Для будь-якого зазначеного вище застосування необхідне дозування змінюють залежно від способу введення, конкретного патологічного стану, що зазнає лікування, та необхідного ефекту. Введення та фармацевтичні композиції Даний винахід відноситься до застосування фармацевтичних композицій, що включають сполуки формули (I) при терапевтичному (і, у більш широкому контексті даного винаходу, профілактичному) лікування порушення (порушень), пов'язаного з Hedgehog. 20 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Звичайно сполуки, запропоновані в даному винаході, вводять у терапевтично ефективних кількостях за будь-яким зі звичайних та застосовних шляхів, відомих у даній галузі техніки, окремо або в комбінації з одним або більшою кількістю терапевтичних засобів. Терапевтично ефективна кількість може значно мінятися залежно від важкості захворювання, віку та відносного стану здоров'я суб'єкта, активності сполуки, що використовується, та інших факторів. Звичайно вказують, що задовільні результати спостерігаються при системному введенні в добових дозах, що становлять приблизно від 0,03 до 2,5 мг/(кг маси тіла). Показана добова доза для великого ссавця, наприклад, людини, знаходиться у діапазоні від приблизно 0,5 до приблизно 100 мг та її звичайно вводять, наприклад, у вигляді розділених доз до чотирьох разів на добу або у формі пролонгованої дії. Підходящі для перорального введення разові дозовані форми містять приблизно від 1 до 50 мг активного інгредієнта. Сполуки, запропоновані в даному винаході, можна вводити у вигляді фармацевтичних композицій будь-яким звичайним шляхом, зокрема, ентерально, наприклад, перорально, наприклад, у вигляді таблеток або капсул, або парентерально, наприклад, у вигляді розчинів або суспензій для ін'єкцій, місцево, наприклад, у вигляді лосьйонів, гелів, мазей або кремів, або в назальній формі або у формі суппозиторію. До фармацевтичних композицій, що включають сполуки, запропоновані в даному винаході, у вільній формі або у формі фармацевтично прийнятної солі разом із щонайменше одним фармацевтично прийнятним носієм або розріджувачем можна виготовити звичайним чином за технологіями змішування, гранулювання або нанесення покриттів. Наприклад, композиції для перорального введення можуть являти собою таблетки або желатинові капсули, що включають активний інгредієнт разом з a) розріджувачами, наприклад, лактозою, декстрозою, сахарозою, манітом, сорбітом, целюлозою та/або гліцином; b) змащувальними речовинами, наприклад, діоксидом кремнію, тальком, стеариновою кислотою, її магнієвою або кальцієвою сіллю та/або поліетиленгліколем; для таблеток також з c) сполучними, наприклад, алюмосилікатом магнію, крохмальною пастою, желатином, трагакантовою камеддю, метилцелюлозою, натрієвою сіллю карбоксиметилцелюлози та/або полівінілпіролідоном; при необхідності з d) речовинами, що забезпечують розпадаємість, наприклад, крохмалями, агаром, альгіновою кислотою або її натрієвою сіллю, або шипучими сумішами; та/або e) абсорбентами, барвниками, смаковими добавками та підсолоджувачами. Композиції для ін'єкцій можуть являти собою водні ізотонічні розчини або суспензії, та супозиторії можна приготувати з емульсій або суспензій жирних речовин. Композиції можуть бути стерилізовані та/або можуть містити допоміжні речовини, такі як консервуючі, стабілізуючі або емульгуючі агенти, що сприяють розчиненню речовини, солі для регулювання осмотичного тиску та/або буфери. Крім того, вони також можуть містити інші терапевтично корисні речовини. Композиції, що підходять для крізьшкірного введення, включають терапевтично ефективну кількість сполуки, запропонованої в даному винаході, з носієм. Кращі носії включають фармакологічно прийнятні розчинники, що усмоктуються, призначені для сприяння проходженню через шкіру пацієнта. Наприклад, крізьшкірні пристрої являють собою пов'язку, що включає виворітний шар, резервуар, що містить сполуку необов'язково з носіями, бар'єрний елемент, що необов'язково регулює швидкість, для доставки сполуки в шкіру пацієнта з регульованою і заздалегідь заданою швидкістю протягом тривалого періоду часу та засоби для закріплення пристрою на шкірі. Також можна використовувати матричні крізьшкірні препарати. Композиції, що підходять для місцевого введення, наприклад, на шкіру або в очі, переважно являють собою водні розчини, мазі, креми або гелі, добре відомі в даній галузі техніки. Вони можуть містити солюбілізатори, стабілізатори, засоби, що підсилюють тонічність, буфери та консерванти. Сполуки, запропоновані в даному винаході, можна вводити в терапевтично ефективних кількостях у комбінації з одним або більшою кількістю терапевтичних засобів (фармацевтичні комбінації). Наприклад, синергетичний ефект може проявлятися при використанні імуномодулюючих, протизапальних, інших протипухлинних терапевтичних засобів, хіміотерапевтичних засобів, абляції або інших терапевтичних гормонів, протипухлинних засобів та/або моноклональних антитіл, застосовних проти лімфом або мієлом. Деякі з добре відомих протиракових лікарських засобів описані в даній галузі техніки, наприклад, Cancer Therapeutics: st Experimental and Clinical Agents, Teicher (Ed.), Humana Press (1 ed., 1997); and Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, Hardman et al. (Eds.), Mcgraw-hill Professional th (10 ed., 2001). Приклади підходящих протиракових лікарських засобів включають 5фторурацил, вінбластинсульфат, естрамустинфосфат, сурамін та стронцій-89. Приклади підходящих хіміотерапевтичних засобів включають аспарагіназу, блеоміцинсульфат, цисплатин, цитарабін, флударабінфосфат, мітоміцин та стрептозоцин. 21 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Коли сполуки, запропоновані в даному винаході, вводять разом з іншими засобами, зрозуміло, дози сполук, що вводяться спільно, будуть мінятися залежно від типу використовуваного спільно лікарського засобу, конкретного використовуваного лікарського засобу, патологічного стану що піддається лікуванню, тощо. Інгібітор Hh, запропонований у даному винаході, з успіхом можна поєднувати з іншим фармакологічно активною сполукою або із двома або більшою кількістю інших фармакологічно активних сполук, зокрема, для лікування раку. Наприклад, сполуку формули (I) або її фармацевтично прийнятну сіль, визначену вище, можна вводити одночасно, послідовно або окремо у комбінації з одним або більшою кількістю засобів, вибраних із групи, що включає хіміотерапевтичні засоби, наприклад, інгібітори мітозу, такі як таксан, алкалоїд барвінку, паклітаксел, доцетаксел, вінкристин, вінбластин, вінорелбін або вінфлунін та інші протиракові засоби, наприклад, цисплатин, 5-фторурацил або 5-фтор-2-4(1 H, 3H)-піримідиндіон (5FU), флутамід або гемцитабін. Такі комбінації можуть забезпечувати при лікуванні значні переваги, включаючи синергетичну активність. Сполуку формули (I) з успіхом можна використовувати в комбінації з іншими антипроліферативними сполуками. Такі антипроліферативні сполуки включають, але не обмежуються тільки ними, інгібітори ароматази; антиестрогени; інгібітори топоізомерази I; інгібітори топоізомерази II; сполуки, активні стосовно мікротрубочок; алкілуючі сполуки; сполуки, які індукують процеси диференціації клітин; інгібітори циклооксигенази; інгібітори MMP; інгібітори mTOR; протипухлинні антиметаболіти; сполуки платини; сполуки, призначені для вибіркового впливу/зменшення активності протеїн- або ліпідкінази та інші антиангіогенні сполуки; сполуки, які призначені для вибіркового впливу/зменшення або інгібування активності протеїнабо ліпідфосфатази; агоністи гонадореліну; антиандрогени; інгібітори метіонінамінопептидази; бісфосфонати; модифікатори біологічної відповіді; антипроліферативні антитіла; інгібітори гепаранази; інгібітори онкогенних ізоформ Ras; інгібітори теломерази; інгібітори протеосоми; сполуки, що застосовуються при лікуванні злоякісних захворювань крові; які призначені для вибіркового впливу, зменшення або інгібування активності Flt-3; інгібітори Hsp90, такі як 17-AAG (17-аліламіногелданаміцин, NSC330507), 17-DMAG (17деметоксигелданаміцин, NSC707545), IPI-504, CNF1010, CNF2024, CNF1010, що випускаються фірмою Conforma Therapeutics; темозоломід (ТЕМОДАЛ®); інгібітори кінезинового білку веретена, такі як SB715992 або SB743921, що випускаються фірмою GlaxoSmithKline, або пентамідин/хлорпромазин, що випускаються фірмою CombinatoRx; інгібітори PI3K; інгібітори RAF; засоби, що зв'язують EDG, протилейкозні сполуки, інгібітори рибонуклеотидредуктази, інгібітори S-аденозилметіоніндекарбоксилази, антипроліферативні антитіла або інші хіміотерапевтичні сполуки. Крім того, альтернативно або на додаток їх можна застосовувати в комбінації з іншими методиками боротьби з пухлинами, включаючи хірургію, застосування іонізуючого випромінювання, фотодинамічну терапію, імплантати, наприклад, разом з кортикостероїдами, гормонами, або їх можна застосовувати як радіосенсибілізатори. Крім того, в антипроліферативне лікування включають комбінації із протизапальними лікарськими речовинами. Також можлива комбінація з антигістамінними лікарськими речовинами, бронхорозширюючими лікарськими засобами, нестероїдними протизапальними лікарськими засобами або антагоністами хемокінових рецепторів. Даний винахід також відноситься до фармацевтичних комбінацій, наприклад, до набору, що включає: a) перший засіб, який є сполукою, запропонованою у даному винаході, описаною у даному винаході, у вільній формі або у формі фармацевтично прийнятної солі, та b) щонайменше один додатковий засіб. Набір може включати інструкції з її введення. Терміни "спільне введення" або "комбіноване введення" і т.п. при використанні в даному винаході означає введення вибраних терапевтичних засобів одному пацієнтові та включає режими лікування, при яких засоби необов'язково вводять за тим самим шляхом введення або в той самий час. Термін "фармацевтична комбінація" при використанні в даному винаході означає препарат, який отриманий змішуванням або об'єднанням більше одного активного інгредієнту та включає і фіксовані, і нефіксовані комбінації активних інгредієнтів. Термін "фіксована комбінація" означає, що активні інгредієнти, наприклад, сполука формули I і додатковий засіб, обидва вводять пацієнтові одночасно у вигляді одного препарату або дозованої форми. Термін "нефіксована комбінація" означає, що активні інгредієнти, наприклад, сполука формули I та додатковий засіб, обидва вводять пацієнтові у вигляді окремих препаратів одночасно, окремо або послідовно без накладання спеціальних обмежень за часом, і при такому введенні в організмі пацієнта створюються терапевтично ефективні рівні цих 2 сполук. Останнє також відноситься до змішаного лікування, наприклад, із введенням 3 або більшої кількості активних інгредієнтів. 22 UA 105181 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Способи одержання сполук, запропонованих у даному винаході Типові приклади синтезу сполук, запропонованих у даному винаході, наприклад, сполук формули (I), наведені в даний заявці в розділі "Приклади". Сполуку, запропоновану в даному винаході, можна одержати у вигляді фармацевтично прийнятної солі приєднання з кислотою за реакцією вільної основи сполуки з фармацевтично прийнятною неорганічною або органічною кислотою. Альтернативно, фармацевтично прийнятну сіль приєднання з основою сполуки, запропонованої в даному винаході, можна одержати за реакцією сполуки у формі вільної кислоти з фармацевтично прийнятною неорганічною або органічною основою. Альтернативно, солі сполук, запропонованих у даному винаході, можна одержати з використанням солей вихідних речовин або проміжних продуктів. Вільні кислоти або вільні основи сполук, запропонованих у даному винаході, можна одержати з відповідної молекулярної солі з основою або кислотою відповідно. Наприклад, сполуку, запропоновану в даному винаході, у вигляді солі приєднання з кислотою можна перетворити у відповідну вільну основу шляхом обробки підходящою основою (наприклад, розчином гідроксиду амонію, гідроксиду натрію тощо). Сполуку, запропоновану в даному винаході, у вигляді солі приєднання з основою можна перетворити у відповідну вільну кислоту шляхом обробки підходящою кислотою (наприклад, хлористоводневою кислотою тощо). Пролікарські похідні сполук, запропонованих у даному винаході, можна одержати за методиками, відомими фахівцях із загальною підготовкою в даній галузі техніки (додаткові подробиці див., наприклад, у публікації Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985). Похідні сполук, що містять захисні групи, запропоновані у даному винаході, можна одержати за методиками, відомими фахівцям із загальною підготовкою в даній галузі техніки. Докладний опис методик, застосовних для введення захисних груп та їх видалення, наведений в публікації T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999. Сполуки, запропоновані в даному винаході, можна легко одержати або утворити при здійсненні способу, запропонованого в даному винаході, у вигляді сольватів (наприклад, гідратів). Гідрати сполук, запропонованих у даному винаході, можна легко одержати шляхом перекристалізації з водної/ органічної суміші розчинників з використанням таких органічних розчинників, як діоксан, тетрагідрофуран або метанол. Сполуки, запропоновані в даному винаході, можна одержати у вигляді своїх індивідуальних стереоізомерів за реакцією рацемічної суміші сполуки з оптично активним розділяючим реагентом з утворенням пари діастереоізомерних сполук, з наступним розділенням діастереоізомерів та виділенням оптично чистих енантіомерів. Хоча розділення енантіомерів можна виконувати з використанням ковалентних діастереоізомерних похідних сполук, запропонованих у даному винаході, кращими є дисоціюючі комплекси (наприклад, кристалічні діастереоізомерні солі). Діастереоізомери мають неоднакові фізичні характеристики (наприклад, температури кипіння, температури плавлення, розчинності, реакційну здатність тощо) та їх можна легко розділити з урахуванням цих відмінностей. Діастереоізомери можна розділити за допомогою хроматографії, або, переважно за методиками розділення/виділення, основаними на відмінності розчинностей. Потім виділяють оптично чистий енантіомер разом з розділяючим реагентом за допомогою будь-якої придатної методики, що не приводить до рацемізації. Більш докладний опис методик, застосовних для виділення стереоізомерів сполук з їх рацемічної суміші, наведений в публікації Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981. Приклади Даний винахід додатково пояснюється, але не обмежується наведеними нижче типовими прикладами, які призначені для ілюстрації даного винаходу, та їх не слід розглядати, як обмежуючі. Структуру кінцевих продуктів, описаних у даному винаході, підтверджують за допомогою стандартних аналітичних методик, наприклад, за допомогою спектрометричних та спектроскопічних методик (наприклад, МС і ЯМР). Використані абревіатури є такими, як прийнято в даній галузі техніки. Очищення сполук проводять за допомогою стандартних методик, наприклад, за допомогою кристалізації, флеш-хроматографії або ВЕРХ зі оберненою фазою. В прикладах використовують наступні абревіатури: БІНАФ (±)-(1,1’-бінафталін-22’дііл)біс(дифенілфосфін); ДАТС діетиламінотрифторид сірки; Deoxofluor біс(2t метоксиетил)амінотрифторид сірки; ДХМ дихлорметан; Ди- bu X-Phos 2-(ди-третбутилфосфіно)-2",4",6’-триізопропіл-1,1’-біфеніл; ДІЕА діетиламін; ДІПЕА діізопропілетиламін; 23 UA 105181 C2 5 10 15 20 ДМФА диметилформамід; ВЕРХ високоефективна рідинна хроматографія; МСВР масспектрометрія високого розділення; HATU 1-[біс(диметиламіно)-метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5b]піридиний-3-оксидгексафтор-фосфат; HBTU O-бензотриазол-1-іл-N, N,N',N'тетраметилуронійгексафторфосфат; HOBt 1-гідрокси-1H-бензотриазол; ГМДС гексаметилдисилазан; МС мас-спектрометрія; NBS N-бромсукцинімід; NMMN-метилморфолін; NMO N-метилморфолін-N-оксид; NMP N-метилпіролідин; ЯМР ядерний магнітний резонанс; ДН даних немає; НВ не визначено; КТ кімнатна температура; SEM 2-(триметилсиліл)етоксиметил; ТФК трифтороцтова кислота; ТГФ тетрагідрофуран; X-Phos 2-(дициклогексилфосфіно)-2",4",6’триізопропіл-1,1’-біфеніл. Синтез сполук Піридазинарилові прості ефіри та –аніліни Як показано на схемі 1, сполуки формули Ia можна одержати з проміжних продуктів IIIa (одержання описане на схемі 6), які можна ввести в реакцію з фенолом або аніліном шляхом прямого термічного нуклеофільного заміщення або нуклеофільного заміщення, що каталізується паладієм. Сполуки Ia можна перетворити в інші сполуки прикладів шляхом перетворення функціональної групи R". СХЕМА 1 Синтез сполук прикладів 1-5 Приклад 1: Метиловий ефір (R)-4-(4,5-диметил-6-феноксипіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл-5'-карбонової кислоти N MeO2C N N N N O N 25 30 35 До розчину метилового ефіру (R)-4-(6-хлор-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл-5'-карбонової кислоти (сполука 54, 40 мг, 0,106 ммоля) в 2 мл толуолу в колбі з подвійними стінками із гвинтовою пробкою додають фенол (45 мг, 0,48 t ммоля), фосфат калію (40,6 мг, 0,19 ммоля) та ди- bu-X-Phos (5,3 мг, 0,014 ммоля). Колбу відкачують та продувають азотом, потім додають ацетат паладію(II) (2 мг, 0,01 ммоля). Реакційну суміш повторно продувають азотом та нагрівають при 100 °C впродовж 16 год. Суміш фільтрують через целіт та фільтрат концентрують та отримують коричневе масло. Неочищений продукт очищують за допомогою ВЕРХ при елююванні сумішшю 15-95 % ацетонітрилу у воді (обидві рухомі фази модифікують шляхом додавання 3 % n-PrOH) та отримують шуканий продукт у вигляді білої твердої речовини (9 мг, 22 %). 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6 (диметилсульфоксид) =8,69 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,40 (t, J=7,5 Гц, 2H) 7,19 (t, J=7,5 Гц, 1H), 7,10 (d, J=7,5 Гц, 2H), 4,84-4,82 (m, 1H), 4,42-4,38 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,45-3,25 (m, 3H), 3,02-2,99 (m, 1H), 2,93-2,86 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,36 (d, J=6,6 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 435,2157, розраховано 435,2145. Приклад 2: 2-[(R)-4-(4,5-Диметил-6-феноксипіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H[1,2']біпіразиніл-5'-іл]пропан-2-ол 24 UA 105181 C2 HO N N N N N O N 5 10 15 До розчину метилового ефіру (R)-4-(4,5-диметил-6-феноксипіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл-5'-карбонової кислоти (98 мг, 0,226 ммоля) в 2 мл безводного ТГФ в колбі з подвійними стінками з мембраною при -78 °C в атмосфері азоту додають 3 M метилмагнійбромід (600 мкл, 1,8 ммоля). Реакційну суміш перемішують при -78 °C впродовж 1,5 год. та потім нагрівають до 0 °C та перемішують впродовж ще 2 год. Реакцію зупиняють насиченим водним розчином NH4Cl при -78 °C та розводять за допомогою ДХМ. Органічний розчин промивають сольовим розчином, сушать над Na2SO4 та концентрують та отримують неочищену речовину. Отриману тверду речовину очищують за допомогою препаративної ВЕРХ при елююванні сумішшю 10 % —100 % ацетонітрилу у воді (обидві рухомі фази модифікують шляхом додавання 3 % n-PrOH). Фракції, що містять шуканий продукт, об'єднують та сушать виморожуванням та отримують білу тверду речовину (58 мг, 59 %). 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) =8,33 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,41 (t, J=7,6 Гц, 2H) 7,20 (t, J=7,6 Гц, 1H), 7,11 (d, J=7,6 Гц, 2H), 5,09 (s, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,16-4,13 (m, 1H), 3,44-3,41 (m, 2H), 3,022,99 (m, 1H), 2,89-2,85 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,41 (s, 6H), 1,28 (d, J=6,6 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 435,2508, розраховано 435,2508. Приклад 3: Метиловий ефір (R)-4-(4,5-диметил-6-феніламінопіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл-5'-карбонової кислоти N N N MeO2C N N H N N 20 та Приклад 4: Феніламін (R)-4-(4,5-диметил-6-феніламінопіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл-5'-карбонової кислоти O N N N N N H 25 30 35 H N N N До метилового ефіру (R)-4-(6-хлор-4,5-диметилпіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро2H-[1,2'] біпіразиніл-5'-карбонової кислоти (сполука 54, 250 мг, 0,663 ммоля) в пробірці для мікрохвильової печі додають анілін (2,4 мл, 26,5 ммоля). Реакційну суміш нагрівають при 190 °C впродовж 30 хвил. в мікрохвильовому реакторі. Реакційну суміш завантажують в силікагель та очищують за допомогою флеш-хроматографії при елююванні сумішшю 50 %-100 % EtOAc: гептан в кількості, рівній 6 об'ємам колонки, потім за допомогою 3 %-10 % MeOH в ДХМ. Сполуки прикладів 3 та 4 збирають та концентрують та отримують білі тверді речовини. Приклад 3: 130 мг, 45 %. 1 H ЯМР (400 МГц, CDCl3) =8,83 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,41-7,32 (m, 4H), 7,14-7,10 (m, 1H), 4,79-4,77 (m, 1H), 4,39-4,35 (m, 1H), 3,96 (s, 3H) 3,52-3,45 (m, 2H), 3,35-3,42 (m, 1H), 3,24-3,21 (m, 1H), 3,12-3,07 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,44 (d, J=6,7 Гц, 3H). МС (m/z, MH+) знайдено 434,4, розраховано 434,2. Приклад 4: 30 мг, 9 %. МС (m/z, MH+) знайдено 495,6, розраховано 495,2. Приклад 5: 2-[(R)-4-(4,5-Диметил-6-феніламінопіридазин-3-іл)-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H[1,2']біпіразиніл-5'-іл]пропан-2-ол HO N N N N N H N N 40 45 До розчину метилового ефіру (R)-4-(4,5-диметил-6-феніламінопіридазин-3-іл)-2-метил3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2']біпіразиніл-5'-карбонової кислоти (приклад 3, 360 мг, 0,14 ммоля) в 2 мл безводного ТГФ в колбі з подвійними стінками з мембраною при -78 °C в атмосфері азоту додають 3 M метилмагнійбромід (554 мкл, 1,7 ммоля). Реакційну суміш перемішують при -78 °C впродовж 1,5 год., потім нагрівають до 0 °C та перемішують впродовж ще 1 год. Реакцію зупиняють насиченим водним розчином NH4Cl при 78 °C та розводять за допомогою ДХМ. 25 UA 105181 C2 5 10 15 20 Органічний розчин промивають сольовим розчином, сушать над Na2SO4 та концентрують та отримують неочищену речовину. Отриману тверду речовину очищують за допомогою препаративної ВЕРХ при елююванні сумішшю 10 %-100 % ацетонітрилу у воді (обидві рухомі фази модифікують шляхом додавання 3 % n-PrOH). Фракції, що містять шуканий продукт, об'єднують та сушать виморожуванням та отримують білу тверду речовину (25 мг, 42 %). 1 H ЯМР (400 МГц, CDCl3) =8,25 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,49 (d, J=7,5 Гц, 2H), 7,31 (t, J=7,5 Гц, 2H), 7,02 (t, J=7,5 Гц, 1H), 6,59 (b, 1H), 4,63-4,61 (m, 1H), 4,16-4,12 (m, 1H), 3,44-3,09 (m, 5H), 2,36 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,56 (s, 6H), 1,39 (d, J=7,1 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 434,2667, розраховано 434,2668. Арилпіридазини Як показано на схемі 2, сполуки формули Ib можна одержати, наприклад, шляхом заміщення хлору в 1,4-дихлорпіридазині II на піперазин з одержанням проміжних продуктів III, які вводять в реакцію сполучення Судзукі з бороновою кислотою або ефіром та отримують сполуки IV. Нуклеофільне ароматичне заміщення, наприклад, арилхлоридами в лужному середовищі забезпечує одержання сполук прикладів Ib (шлях A). Альтернативно, проміжні продукти II можна ввести в реакцію із заміщеними амінами та отримати сполуки IIIa, які є субстратами для реакцій сполучення Судзукі з бороновими кислотами або ефірами з одержанням сполук прикладів Ib (шлях B, X=N, CH). Сполуки Ib можна перетворити в інші сполуки прикладів шляхом перетворення функціональної групи R", наприклад, шляхом гідролізу складного ефіру утворення аміду або приєднання реагенту Грін'яра до складноефірних груп. СХЕМА 2 Синтез проміжних продуктів: 3-(4-Фторфеніл)-4,5-диметил-6-((R)-3-метилпіперазин-1-іл)-піридазин (сполука 1) N N HN 25 30 F N В круглодонну колбу додають 3-хлор-4,5-диметил-6-((R)-3-метилпіперазин-1-іл)піридазин (500 мг, 2,07 ммоля), 4-фторфенілборонову кислоту (580 мг, 4,15 ммоля), карбонат натрію (440 мг, 4,15 ммоля), толуол (16 мл) та воду (8 мл). Реакційну суміш продувають азотом впродовж 20 хвил. Додають тетракіс(трифенілфосфін)паладій (50 мг, 0,103 ммоля) та суміш нагрівають при 110 °C впродовж 18 год. Реакційну суміш концентрують та піддають розподіленню між етилацетатом та водою. Її двічі екстрагують етилацетатом та об'єднані органічні фази сушать 26 UA 105181 C2 5 над сульфатом натрію та концентрують. Її очищують за допомогою колонкової хроматографії (025 % метанол/метиленхлорид) та отримують 480 мг 3-(4-фторфеніл)-4,5-диметил-6-((R)-3метилпіперазин-1-іл)-піридазину (83 %). 1 H ЯМР (400 МГц, CDCl3) =7,34-7,49 (m, 2H) 7,07 (t, J=8,8 Гц, 2H) 3,35 (m, 2H) 2,84-3,13 (m, 4H) 2,63 (dd, J=12,0 Гц, 10,0 Гц, 1H) 2,20 (s, 3H) 2,14 (s, 3 H) 1,67 (br s, 1H) 1,05 (d, J=6,5 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 301,1824, розраховано 301,1829. 3-(4-Трифторметилфеніл)-4,5-диметил-6-((R)-3-метилпіперазин-1-іл)піридазин (сполука 2) N N HN 10 CF3 N Сполуку 2 отримують аналогічно отриманню сполуки 1. 1 H ЯМР (400 МГц, CDCl3) =7,69-7,80 (m, 2H) 7,60-7,70 (m, 2H) 3,38-3,52 (m, 3 H) 2,98-3,22 (m, 4H) 2,69-2,83 (m, 1H) 2,30 (s, 3H) 2,23 (s, 3H) 1,15 (d, J=6,4 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 351,1806, розраховано 351,1797. 3-Хлор-4,5-диметил-6-[4-(5-трифторметилпіридин-2-іл)піперазин-1-іл]піридазин (сполука 3) F N N F N N N Cl F 15 20 1-(5-Трифторметилпіридин-2-іл)-піперазин (10 г, 43,3 ммоля) об'єднують з 3,6-дихлор-4,5диметилпіридазином (14,4 г, 84,3 ммоля), триетиламіном (8,25 мл) та NMP (40 мл). Реакційну суміш нагрівають при 180 °C впродовж 25 хвил. та потім концентрують у вакуумі. Залишок очищують за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (0-8 % MeOH/CH2Cl2) та отримують шукану сполуку (13,2 г, 82 %). 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) =8,48-8,41 (m, 1H) 7,84 (dd, J=9,1 Гц, 2,4 Гц, 1H) 7,03 (d, J=9,1 Гц, 1H) 3,88-3,76 (m, 4H) 3,28-3,20 (m, 4H) 2,31 (s, 6H). Метиловий ефір 2-[4-(6-хлор-4,5-диметилпіридазин-3-іл)піперазин-1-іл]-4трифторметилпіримідин-5-карбонової кислоти (сполука 4) N MeO2C N N N N Cl N F3C 25 30 35 В круглодонну колбу додають 3-хлор-4,5-диметил-6-піперазин-1-ілпіридазин (1 г, 4,41 ммоля), метиловий ефір 2-хлор-4-трифторметилпіримідин-5-карбонової кислоти (2,12 г, 8,82 ммоля) та діізопропілетиламін (2,3 мл, 13,23 ммоля) в розчині в діоксані (9 мл) та перемішують впродовж 18 год. при кімнатній температурі. Реакційну суміш фільтрують та промивають водою та етилацетатом та отримують 1,35 г метилового ефіру 2-[4-(6-хлор-4,5-диметилпіридазин-3-іл)піперазин-1-іл]-4-трифторметилпіримідин-5-карбонової кислоти (71 %). 1 H ЯМР (400 МГц, CDCl3) =8,96 (s, 1H), 4,09-4,22 (m, 4H), 3,93 (s, 3H), 3,35 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,35 (s, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 431,1206, розраховано 431,1210. Синтез сполук прикладів 6-9 за допомогою шляху A. Приклад 6: Метиловий ефір (R)-4-[6-(4-фторфеніл)-4,5-диметилпіридазин-3-іл]-2-метил3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2"] біпіразиніл-5’-карбонової кислоти N MeO2C N N N N F N 40 45 В круглодонній колбі об'єднують 3-(4-фторфеніл)-4,5-диметил-6-((R)-3-метилпіперазин-1-іл)піридазин (522 мг, 1,73 ммоля), метиловий ефір 5-хлорпіразин-2-карбонової кислоти (360 мг, 2,07 ммоля), діізопропілетиламін (900 мкл, 5,19 ммоля) та діоксан (3 мл). Нагрівають при 110 °C впродовж 18 год. Реакційну суміш концентрують та очищують за допомогою колонкової хроматографії (0-100 % етилацетат/гептан градієнтний режим). Продукт розтирають з ацетонітрилом та отримують 480 мг метилового ефіру (R)-4-[6-(4-фторфеніл)-4,5диметилпіридазин-3-іл]-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2"]біпіразиніл-5’-карбонової кислоти (63 %). 1 H ЯМР (400 МГц, CDCl3) =8,87 (s, 1H) 8,21 (s, 1H) 7,46-7,60 (m, 2H) 7,19 (t, J=8,5 Гц, 2H) 4,84 (br s, 1H) 4,43 (d, J=13,0 Гц, 1H) 3,99 (s, 3H) 3,68 (d, J=12,5 Гц, 1H) 3,49-3,63 (m, 2H) 3,39 (dd, J=12,8 Гц, 3,8 Гц, 1H) 3,15-3,31 (m, 1H) 2,41 (s, 3H) 2,29 (s, 3H) 1,50 (d, J=6,5 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 437,2097, розраховано 437,2101. 27 UA 105181 C2 Приклад 7: Метиловий ефір (R)-4-[6-(4-трифторметилфеніл)-4,5-диметилпіридазин-3-іл]-2метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H-[1,2"]біпіразиніл-5’-карбонової кислоти N MeO2C N N N CF3 N N 5 10 Сполуку прикладу 7 отримують аналогічно отриманню сполуки прикладу 6 зі сполуки прикладу 2. 1 H ЯМР (400 МГц, CDCl3) =8,87 (s, 1H), 8,21 (d, J=1,3 Гц, 1H), 7,72-7,82 (m, 2H), 7,68 (d, J=8,1 Гц, 2H), 4,85 (br s, 1H), 4,44 (d, J=13,3 Гц, 1 H), 4,00 (s, 3H), 3,70 (d, J=14,1 Гц, 1H), 3,503,64 (m, 2H), 3,41 (dd, J=12,6 Гц, 3,6 Гц, 1H), 3,18-3,31 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 1,50 (d, J=6,7 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 487,2050, розраховано 487,2069. Приклад 8: (R)-4-[6-(4-Трифторметилфеніл)-4,5-диметилпіридазин-3-іл]-2-метил-3,4,5,6тетрагідро-2H-[1,2"]біпіразиніл-5’-карбонова кислота N HO2C N N N CF3 N N 15 20 До розчину сполуки прикладу 7 (0,26 г, 0,53 ммоля) та метанолу (10 мл) додають 50 % водний розчин LiOH (10 мл). Суміш перемішують при кімнатній температурі впродовж ночі. Розчинник видаляють. Залишок розчиняють у воді та підкислюють за допомогою 3 н. HCl приблизно до pH 7 та екстрагують етилацетатом. Шар, що містить етилацетат, концентрують та отримують шукану сполуку (0,25 г, 98 %) у вигляді жовтої твердої речовини. 1 H ЯМР (400 МГц, CD2Cl2) δ = 8,90 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,81 (d, J=8,0 Гц, 2H), 7,69 (d, J=8,0 Гц, 2H), 4,88 (m, 1H), 4,48 (d, J=13,0 Гц, 1H), 3,66 (m, 3H), 3,40 (m, 1H), 3,23 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,53 (d, J=6,5 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 473,1900. Приклад 9: (R)-4-[6-(4-Фторфеніл)-4,5-диметилпіридазин-3-іл]-2-метил-3,4,5,6-тетрагідро-2H[1,2"] біпіразиніл-5’-карбонова кислота N HO2C N N N N F N 25 30 35 40 45 50 До розчину сполуки прикладу 6 (0,74 г, 1,31 ммоля) та метанолу (10 мл) додають гідроксид натрію (100 мг). Суміш перемішують при кімнатній температурі впродовж ночі. Розчинник видаляють та залишок розчиняють у воді та підкислюють за допомогою 3 н. HCl приблизно до pH 7 та екстрагують етилацетатом. Шар, що містить етилацетат, концентрують та отримують шукану сполуку (0,68 г, 96 %) у вигляді жовтої твердої речовини. 1 H ЯМР (400 МГц, CD2Cl2) δ = 8,90 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 4,67 (m, 1H), 4,48 (d, J=12,0 Гц, 1H), 3,65 (m, 3H), 3,40 (m, 1H), 3,26 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 1,53 (d, J=6,5 Гц, 3H). МСВР (m/z, MH+) знайдено 423,1941. Синтез сполук прикладів 10-40 за допомогою шляху B. Загальна методика сполучення по Судзукі боронових кислот з одержанням піридизинілхлоридів IIIa. Методика A В круглодонній колбі об'єднують 3-хлорпіридазин (0,268 ммоля), боронову кислоту (0,537 ммоля) та карбонат натрію (57 мг, 0,537 ммоля) в 1 мл води та 1,8 мл ТГФ. Реакційну суміш продувають азотом впродовж 20 хвил., потім додають тетракіс(трифенілфосфін)паладій (10 мг) та нагрівають при 110 °C впродовж 18 год. Очищують за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі з використанням суміші 0 %-70 % етилацетат/гептан в градієнтному режимі. Продукти розтирають з метанолом та ацетонітрилом для видалення домішок з шуканих продуктів. Методика B В круглодонній колбі об'єднують 3-хлорпіридазин (0,268 ммоля), боронову кислоту (0,536 ммоля) та карбонат цезію (175 мг, 0,536 ммоля) в 2 мл 1,4-діоксану. Реакційну суміш продувають азотом впродовж 1 хвилин та додають тетракіс(трифенілфосфін)паладій (30 мг, 0,026 ммоля). Нагрівають при 115 °C впродовж 18 год. Реакційну суміш фільтрують через целіт та концентрують. Піддають розподіленню між етилацетатом та водою, органічний шар збирають. Повторно екстрагують етилацетатом та збирають органічні речовини. Сушать над сульфатом натрію, фільтрують та концентрують. Речовину розтирають з ацетонітрилом, потім перекристалізовують з гарячого ацетонітрилу та отримують шукані продукти. 28