Спосіб ультраморфотопометрії органел

Спосіб ультраморфотопометрії органел відноситься до біології, антропології та медицини, зокрема до топографічної, нормальної, патологічної анатомії та гістології. Спосіб дозволяє оцінити наявність структурнофункціональних порушень на клітинному рівні при фізіологічних чи патологічних станах. Ультраморфотопометрія - метод кількісної оцінки морфологічної структури клітини, зокрема її структурних компонентів - органел по даним електронної мікроскопії [Haggis G.H. Electron microscope in molecular biology. London.-Longmans, 1969. -329p.], який застосовується для вивчення та відображення структури клітини та дозволяє характеризувати структурно-просторову її організацію. Основними критеріями при проведенні ультраморфотопометрії є лінійні показники [Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. -М.: Медицина, 1990. -383с.], які характеризують розмір органел та, власне, ядра клітини; а також, кількість органел, ЇХ площа і розташування органел відносно ядра клітини. Узагальнюючим критерієм при проведенні ультраморфотопометрії в окремих випадках слугують показники кількості органел [Meek G.F. Practical electron microscope for biologist.-Wiley-Intersience.-New York, 1970.-Chapt.H13.-P.235-238], їx загальної площі [Weibel E.R. Techniques for quantitative of structure morphometry.-Intemational Review of Cytology, 1969. -№26. -pp.235-302]; відомий, також, спосіб ультраструктурної топометрії, включаючий проведення електронної мікроскопії з наступним одержанням збільшеного ультраструктурного зображення на одному із носіїв (фотоплівка, фотопапір, спеціальні фоточутливі пластини та інше) по яких виконується кількісноякісний морфометричний аналіз органел клітини [Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. -М.: Медицина, 1990. -383с.]. Цей спосіб дозволяє проводити вимір кількості органел ті їх площі на носіях ультраструктурного зображення клітини, однак при його застосуванні не враховується структурно-координатний розподіл органел клітини стосовно її ядра. Вищезгаданий спосіб є найбільш близьким по технічній суті та результату, який може бути досягнуто, тому його обрано за прототип. В основу винаходу покладено задачу підвищення точності оцінки координатного розподілу органел клітини стосовно ядра. Задача, яку покладено в основу винаходу, вирішується тим, що у відомому способі ультраморфотопометрії органел, який включає вимір їх кількості та площі на носіях зображення електронної мікроскопії, додатково визначають кількість органел клітини та їх площу у зовнішньому, серединному та внутрішньому топометричних секторах концентрично-ізометричної системи, а координатний розподіл кількості та площі органел клітини визначають за формулою: ОN = ОВ/ОЗ, де ОN - показник координатного розподілу кількості (площі) органел, ОВ кількість (площа) органел у внутрішньому топометричному секторі, ОЗ - кількість (площа) органел у зовнішньому топометричному секторі. Підвищення точності ультраморфотопометрії органел досягають тим, що враховують їх кількість, площу та розташування у зовнішньому, серединному та внутрішньому топометричних секторах, що відповідає сучасним уявленням про структурно-функціональну перебудову клітини у відповідь на зовнішній (токсичний, радіаційний, онкогенний) вплив [Лисовская Н.Ю., Кайряк О.В., Гандера В.Ф. Клинико-морфологическая оценка эффективности неоадъювантной химиотерапии. -Матер. Х з'їзду онкологів України, 2001. -С.300-301; Болгова Л.С. Метод цитологической диагностики и основные направления его развития в онкологии. -Матер. Х з'їзду онкологів України, 2001. -С.292 -293], при цьому і кількість органел, і їх площа можуть біти виміряні з урахуванням топографії органел стосовно ядра клітини. Останнє відіграє визначальну роль у проведенні ультраморфотопометрії та технологіях ультраструктурного кількісного аналізу клітини. Тобто, винахід спроможний надавати допомогу морфологам у вивченні структурнофункціональної перебудови клітини, зокрема кількісно-якісному складу органел залежно від координатної топографії стосовно ядра.. Спосіб виконують наступним чином: безпосередньо у натуральних умовах, наприклад при виконанні електронної мікроскопії, простими, легко здійснюваними засобами, одержують перенесену на носій зображення фотокопію ультраструктури клітини, після чого підраховують кількість та вимірюють площу органел у зовнішньому, серединному та внутрішньому топометричних секторах клітини та визначають координатний розподіл кількості та площі органел клітини за формулою: ОN =ОВ/ОЗ, де ОN - показник координатного розподілу кількості (площі) органел, ОВ - кількість (площа) органел у внутрішньому топометричному секторі, ОЗ - кількість (площа) органел у зовнішньому топометричному секторі. Приклад, який ілюструє спосіб. Після проведення електронної мікроскопії досліджуваної тканини виконано фотографування поля зору з виведенням зображення на фотопапір; по фотознімку ультраструктури підрахована кількість органел та їх площа у зовнішньому і внутрішньому топометричних секторах клітини. Загальна кількість органел у внутрішньому секторі становить 18, вони займають площу 1,5 см2; загальна кількість органел у зовнішньому топометричному секторі становить 6, а їх загальна площа - 1,5см2. Показник координатного розподілу кількості органел становить ОN = ОВ/ОЗ=18/6=3. Показник координатного розподілу площі органел становить ОN = ОВ/ОЗ=1,5/1,5=1,0. Висновок: одержані показники координатного розподілу кількості та площі органел свідчать про структурно-координатну різноманітність органел, що проявляється збільшенням площі та зменшенням їх кількості у напрямку від ядра до периферії клітини.