Штам гриба penicillium aculeatum raper et fennell 225 – продуцент інулінази

Штам гриба Penicillium aculeatum Raper et Fennell 225 - продуцент інулінази, з підвищеною здатністю до синтезу інулінази, що не синтезує протеазу, який характеризується високою швидкістю синтезу ферменту. (19) (21) u200815008 (22) 25.12.2008 (24) 10.07.2009 (46) 10.07.2009, Бюл.№ 13, 2009 р. (72) АЙЗЕНБЕРГ ВІКТОРІЯ ЛЕОНІДІВНА, ЗАХАРЧЕНКО ВАЛЕНТИНА ОЛЕКСІЇВНА, СТОЙКО ВІКТОРІЯ ІШТВАНІВНА, ЖДАНОВА НЕЛЛІ МИКОЛАЇВНА, КУРЧЕНКО ІРИНА МИКОЛАЇВНА, КАПІЧОН ГАННА ПАВЛІВНА, КОНОВАЛОВА ВІКТОРІЯ ВАЛЕРІЇВНА, БУРБАН АНАТОЛІЙ ФЛАВІАНОВИЧ 3 42451 Конідієносці відходять в основному від гіфальних тяжів, 50-100мкм довжиною, 3,0-3,5мм в діаметрі, з зернистою оболонкою. Китички за характером розгалуження дворядні і симетричні (секція Biverticillata), але зустрічаються фракційні і однорядні (секція Monoverticillata). Конідії кулясті до напівкулястих, 3-3,5мкм, з товстою оболонкою, помітно шипуваті. Колонії на сусловому агарі тонкоповстисті, жовтувато-зелені, з вузьким білим краєм; реверзум буруватий. Конідіальні структури подібні до описаних вище. Колонії на картопляно-глюкозному агарі темно-зелені, тонкоповстисті до бархатистих, з світложовтуватим краєм, з дрібними безбарвними краплями ексудату. Реверзум світло-пурпуровий. Конідіальні структури подібні до описаних вище. Штам добре росте на живильних середовищах з інулінвмісною сировиною (жом топінамбуру, подрібнених коренях цикорію). Фізіолого-біохімічні властивості гриба Penicillium aculeatum Raper et Fennell 225 Гриб засвоює глюкозу, арабінозу, рамному, галактозу, фруктозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, крохмаль, інулін, маніт, сорбіт. Засвоює амонійний, нітритний, нітратний азот; асимілює сечовину, пептон, кукурудзяний екстракт, мелясу, солодові паростки. Росте в широких межах рН 2,5-8,0. Аероб. Оптимальна температура росту 25-26°С. Максимум утворення ферменту в культуральній рідині при рості на рідкому поживному середовищі з індуктором та мінеральними солями в умовах глибинного культивування спостерігається на 72 годину вирощування. Гриб Penicillium aculeatum 225 не синтезує протеолітичні ферменти. При зберіганні на сусло-агарі високий рівень ферментативної активності не знижується і зберігається протягом 2-х років. При культивуванні на рідкому поживному середовищі певного складу штам гриба Penicillium aculeatum 225 синтезує інуліназу. Приклад 1. Посівний матеріал вирощують при 25-26°С в колбах об'ємом 750мл на кругових качалках з 160об/хв. протягом 48 годин на середовищі, що містить, %: калій азотнокислий - 0,2; калій фосфорнокислий однозаміщений - 0,1; магній сірчанокислий - 0,05; калій хлористий - 0,05; інулінвмісний індуктор - жом топінамбуру - 2,0; вода дистильована 150мл. Посівний матеріал, що складає 10% від загального об'єму середовища, додають в ферментаційне середовище, що містить ті ж компоненти і в Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко 4 тих же кількостях, що і при приготуванні посівного матеріалу. Культивування проводять при 25-26°С в колбах об'ємом 750мл на кругових качалках з 160об/хв. протягом 72 годин. По закінченню ферментації культуральну рідину фільтрують, відокремлюючи від біомаси і невикористаного субстрату. У фільтраті визначають активність інулінази згідно методики [5]. За одиницю інуліназної активності приймають кількість ферменту, що каталізує утворення 1мкМ фруктози з інуліну за 1хв в стандартних умовах (t=50°С, рН 4.6). Величина інуліназної активності складає 27,7од/мл. Приклад 2. Посівний матеріал вирощують при 25-26°С в колбах об'ємом 750мл на кругових качалках з 160об/хв. протягом 48 годин на середовищі, що містить, %: калій азотнокислий - 0,2; калій фосфорнокислий однозаміщений - 0,1; магній сірчанокислий - 0,05; калій хлористий - 0,05; інулінвмісний індуктор - жом топінамбуру - 2,0; вода дистильована 150мл. Посівний матеріал, що складає 10% від загального об'єму середовища, додають в ферментаційне середовище, що містить ті ж компоненти і в тих же кількостях, що і при приготуванні посівного матеріалу. Культивування проводять при 25-26°С в колбах об'ємом 750мл на кругових качалках з 160об/хв. протягом 72 годин. По закінченню ферментації культуральну рідину центрифугують та піддають ультрафільтрації, використовуючи полісульфонову мембрану Nadir RM UH 050Р 1060. Величина інуліназної активності складає 62,2од/мл. Джерела інформації: 1. Gupta A.K., Singh D.P., Kaur N., Singh R. Production, purification and immobilization of inulinase from Kluyveromyces fragilis, NCIM. J.Chem. Technol. and Biotechnol. - 1994. - 59, №4. - с.377385. 2. Корнеева О.С., Жеребцов Н.А., Шуваева Г.И. и др. Инулаза микромицета Aspergillus awamori 808. Препаративное получение и некоторые физико-химические свойства. - Биотехнология. - 1993, №7, с.31-35. 3. Пидопличко Н.М. Пенициллии. - К.: Наукова думка. - 1972, с.31. 4. Ramirez С. Manual and atlas of the Penicillia. Amsterdam, New-York, Oxford: Elsevier Biomedical Press. - 1982. - P.34-36. 5. Айзенберг В.Л., Стойко В.Л., Демиденок Е.А. Методика количественного определения активности грибной инулиназы с использованием реактива Самнера. - Биотехнология, 2007, №5, с.95-96. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601