Середовище токсинонакопичення для clostridium chauvoei

Середовище токсинонакопичення для Clostndium Chauvoei, до складу якого входять пептон, глюкоза, натрію хлорид, цистеїну пдрохлорид, яке відрізняється тим, що додатково містить сіль бензилпеніциліну, натрію фосфат двозаміщений, воду печінкову та м ясну при співвідношенні інгредієнтів, мас % пептон глюкоза натрію хлорид натрію фосфат двозаміщений цистеїну пдрохлорид вода печінкова вода м'ясна сіль бензилпеніциліну вода дистильована Винахід відноситься до ветеринарної мікробіологи, імунологи та епізоотології і може бути використаним в процесі виготовлення вакцини проти емфізематозного карбункула Емфізематозний карбункул - дуже поширена в Україні ґрунтова інфекція Найефективнішим заходом профілактики хвороби є активна імунізація сприйнятливого поголів'я тварин концентрованою пдроокис-алюмінієвою формолвакциною (Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты /Ф И Каган, А И Колесова - М Сельхозгиз, 1963-516с) Недоліком цієї вакцини є те, що технологія и виготовлення є застарілою і матеріально затратною, а імуногенні властивості не відповідають сучасним вимогам до біологічних препаратів такого типу Зміна технології виробництва вакцини передбачає, в першу чергу, зміну живильного середовища, на якому культивують вакцинний штам ВІДОМІ результати досягнень по застосуванню середовищ для вирощування СІ chauvoei, які складаються з пептону (4,0), глюкози (1,0), натрію хлориду (0,85), цистеїну пдрохлориду (0,05), дистильованої води до 100,0 (Gadala М S , Ikbal Farrag, Lotty О , Mahmoud M S , El-Danaf N , Doreya Scharaf, Mugeda Hussam The immunogeniciti of alum precipitated multicomponent clostndial vaccines //J Egept Vet Med Ass -1971 - Vol 31 - N 3-4 P 135-152 і Jajaraman M S , Lai R , Dhanda M R Toxin production by Clostndium chauvoei - // Indian vet J -1962 -Vol 39 - N 9 -P 754-768) Недоліком цих середовищ є те, що всі вони мають певну вузьку мету - збільшення виходу спорових форм, виявлення гемолізину, тощо і не стосувалися зміни технології виробництва вакцини з метою підвищення м імуногенних властивостей В основу винаходу поставлено задачу розробити середовище, яке забезпечує контрольоване підвищення імуногенних властивостей вакцини шляхом збільшення КІЛЬКОСТІ мікробних клітин та рівня екзотоксину в 1см , за одночасного зменшення затрат і прискорення виробництва Поставлена задача вирішується таким чином, що середовище, яке складається з пептону, глюкози, натрію хлориду, цистеїну пдрохлориду, додатково містить сіль бензилпеніциліну, натрію фосфат двозаміщений, воду печінкову та м'ясну при наступному співвідношенні інгредієнтів, в мас Пептон Глюкоза Натрію хлорид Натрію фосфат двозаміщений Цистеїну пдрохлорид Вода печінкова Вода м'ясна Сіль бензилпеніциліну Вода дистильована наступному 1,0 1,0 0,5 0,2 0,1 30,0 30,0 0,018 решта 1,0 1,0 0,5 0,2 0,1 30,0 30,0 0,018 решта (О о (О 60761 Печінкова і м'ясна вода разом із пептоном, глюкозою, хлоридом і фосфатом натрію в повній мірі забезпечують ростові потреби СІ chauvoei Цистеїну пдрохлорид в розчинній фазі середовища відіграє роль окислювально-відновної системи, що забезпечує ріст в анаеробних умовах навіть такого вибагливого анаероба, яким є СІ chauvoei Хімічно-активна і динамічна система, якою є окислювально-відновна система цистеїнцистин, що утворюється у середовищі при додаванні цистеїну пдрохлориду, ефективно захищає вегетативні клітини анаеробів від впливу перекисів, що утворюються в процесі обміну речовин Бензилпеніцилін гальмує синтез клітинної стінки мікробів Відомо, ЩО молекулярний каркас клітинної стінки мікроорганізмів формується за рахунок пептидоглікану Останній являє собою з'єднані за допомогою коротких пептидних ланцюжків гліканові полімери двох ацетильованих аміноцукрів N-ацетилглюкозамшу та N-ацетилмурамовоі кислоти Солі ПЄНІЦИЛІНОВОІ кислоти, що відносяться до Р -лактамів, блокують включення Nацетилмурамової кислоти до складу гліканових полімерів Це веде до припинення синтезу клітинної стінки Остання, маючи високу ригідність, надає мікробній КЛІТИНІ ТІЄЇ форми та розмірів, які генетично властиві даному виду мікроорганізмів Відсутність клітинної стінки призводить до виникнення різноманітних форм, так званих L-форм або форм незбалансованого росту (ФНР) При цьому утворюються різної величини кулясті форми, як це ми спостерігаємо у збудника сибірки при постановці проби "перламутрового намиста", коли під впливом пеніциліну мікробні клітини, що розташовуються у виді ланцюжків, приймають однакову круглу форму, нагадуючи при цьому намисто Величина і розміри ФНР визначаються інтенсивністю обмінних процесів мікробної клітини, що є видовим показником СІ chauvoei під впливом бензилпеніциліну проявляєзначний поліморфізм - кулясті форми Комп'ютерна верстка Н Лисенко різної величини, від дуже великих (Юмкм і більше) до дрібних кокоподібних, розташування хаотичне поодинці, парами, короткими ланцюжками Крім цього культивування СІ chauvoei на середовищі токсинонакопичення пригнічує, а на 2-3му пасажі зовсім гальмує спорогенез Це в свою чергу веде до збільшення КІЛЬКОСТІ вегетативних форм та виходу екзопродуктів, зокрема розчинного мікробного білка, який наділений токсичністю (летальною, гемолітичною та ш) і якому відводиться найбільше значення у формуванні імунітету Поєднання цих трьох феноменів покладено в основу безперервної культури з метою максимального отримання екзотоксину СІ chauvoei Технологія отримання середовища наступна 3 В 30см дистильованої води розчиняють 0,5г натрію хлориду, 1,0г глюкози, 0,2г натрію фосфату двозаміщеного, 0,1г цистеїну пдрохлориду та 1,0г пептону До цієї суміші додають по 30см3 печінкової та м'ясної води Після змішування інгредієнтів добавляють дистильовану воду, встановлюють рН 7,8 і фільтрують через фільтрувальний папір Середовище фасують в скляний посуд (колби, пробірки) Обов'язково вказують об'єм середовища в посудині Стерилізують при 0,5атм протягом ЗОхв Сіль бензилпеніциліну додають до середовища перед посівом досліджуваної культури з розрахунку 0,018г (ЗООД) на 100см3 середовища або 0,18мг/см3 (О.ЗОД/см3) Розрахунок концентрації повинен бути точним, тому що границі росту є дуже вузькими і для СІ chauvoei лежать в межах 0,12-0,24мг/см3 (0,2-0,4ОД/см3) Запропоноване нами середовище токсинонакопичення для СІ chauvoei збільшує вихід мікробного позаклітинного білка, що продукується клітинами СІ chauvoei, майже в 1,5 рази, дає можливість використання його в системі безперервного культивування Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119