Карбоциклічні нуклеозиди 6-заміщеного пурину

Изобретение относится к аналогам нуклеозидов пурина, содержащим ненасыщен ное карбоциклическое кольцо вместо са харного остатка, их фармацевтически приемлемым производным и применение их в медицинской терапии, в частности для лечения некоторых ви русных заболеваний. СПИД (синдром приобретенного иммунодефи цита) представляет собой иммуносуппрессивное или иммунодеструктивное заболевание, которое предрасполагает субъектов к фатальным внезапным инфекциям. Типично СПИД ассоциируется с постепенным истоще нием Т-клеток, в особенности поднабора индуктор-помощник, содержаще го поверхностный маркер ОКТ4. Вирус иммунодефи цита че ловека (ВИЧ) был выделен воспроизводимым образом от пациентов со СПИДом или с симптомами, кото рые часто предшествуют СПИДу. ВИЧ является цитопатическим и как кажется, предпочти тельно инфи цирует и разрушает Т-клетки, содержащие маркер ОКТ4, и те перь всеми признано, что ВИЧ представляет собой этиологический агент СПИДа. Так как открытие того, что ВИЧ представляет собой этиологи ческий агент СПИДа, было дано много предложений в отноше нии химиотерапевтических агентов против ВИЧ, которые могут быть эффективными при лечении потерпевши х от СПИДа. Так, например, описан (патент США № 4724232) 3'-азидо-3'-дезокситимидин (который имеет принятое назва ние зидовудин), его фармацевтически приемлемые производные и их применение при лечении инфекций от ретровируса человека, включая СПИД и связанные с ним клинические состояния. Vince et al. Antiviral Research, 9 (1/2), 120 (1988) описывают некоторые аналоги карбоциклических нуклеозидов и их использование против ВИЧ. На Второй международной конференции по противовирусным исследованиям (Уильямсбург, Виргиния, 10–14 апреля 1988), был описан (+)-9-(цис-4-(оксиметил)-2-циклопентенил) гуа нин (NSC–614846), также известный как карбовир. Распространенный по всему све ту ви рус гепати та В (ВГВ) представляет собой другой вирусный патогенный возбудитель с важнейшими последствиями. Он наиболее распространен в азиатских странах и преобладает в присахарской Африке. Этот вирус этиологически связан с первичным печеночно-клеточным раком. Соединенные Штаты в настоящее время содержат значительный круг из 500000–1-миллион носителей инфекции. Хронический активный гепатит ра зовьется у бо лее чем 25% носителей и часто прогрессирует до цирроза. Оценивается, что 5000 человек умирают ежегодно от связанного с ВГВ цирроза в США, и что возможно 1000 умирает от рака печени, связанного с ВГВ. Даже когда имеется универсальная вакцина против ВГВ, потребность в эффективных соединениях против ВГВ будет продолжаться. Значительный резервуар постоянно инфицированных носителей, оцениваемый в 220 миллионов по всему миру, не получит выгоды от вакцинации и будет продолжать при высоком риске вызванным ВГВ заболеванием печени. Это население-носитель служит источником инфекции склонных к ней лиц, увековечивая заболеваемость особенно в эндемических зонах или в группах повышенного риска, таких как, люди, злоупотребляющие внутривенным приемом наркотиков и гомосексуалисты. Таким образом, существует большая нужда в эффективных противовирусных агентах как для регулирования хронических инфекций, так и для уменьшения прогрессии впеченочно-клеточного рака. Клинические эффекты инфи цирова ния вирусом ВГВ находятся в пределах от головной боли, жара, недомогания, тошноты, рвоты, анорексии до болей в желудке. Репликация вируса обычно регулируется иммунной реакцией, с течением выздоpовления недели или месяцев у людей, но инфекция может быть более серьезной, приводя к стойкому хроническому заболеванию печени. В описании (Европейский патент № 349242) даются определенные 6-замещенные карбоциклические нуклеозиды пурина и их применение в медицинской терапии, в частности при лечении инфекций ВИЧ и ВГВ. Среди таких нуклеозидов нахо дятся соединения (+)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9ил/-2-циклопентен-1-метанол и (+)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропилметиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол, т.е. каждое в ви де рацемической смеси своих соответствующих энантиомеров. Нами обнаружено, что индивидуальные изолированные энантиомеры обоих вышеупомянутых соединений и их фармацевти ческие производные имеют полезную проти вовирусную активность, в частности против инфекций ВИЧ и ВГВ, в сочетании с низкой цитотоксичностью и/или полезны в качестве промежуточных ве ществ для получения соединений, имеющих та кую активность. Согласно одному признаку изобретения, созданы энантиомерные соединения общей формулы R N N (I) H 2N N N A где R обозначает циклопропиламино или N-циклопропил-N-мети ламиновую груп пу; А2-циклопентен-1-мета нол-4-ильную гр уппу в конфигурации (1S, 4R) или (1R, 4S) и их производных (например, сложных эфи ров, солей и солей сложных эфи ров), при этом каждое из указанных соединений и их производные находятся в форме энантиомера, практически свободного (например, в количестве менее, чем 10 вес. предпочтительно менее 5 вес.) от соответствующе го энантиомера. Целесообразно, что бы соединения формулы (I) содержали соединения, имеющие конфигурации: R R N N N H 2N N N N H2N N N HO OH IA IB где R имеет вышеуказанные значения. Энантиомерные соединения формулы (I), т.е. практически свободные от соответствующе го энантиомера, таким образом содержат: 1) (1S, 4R)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол 2) (1R,4S)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/- 2-циклопентен-1-метанол 3) (1S,4R)-цис-4-/2-амино-6-(N-циклопропил- N-метиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол 4) (1R,4S)-цис-4-/2-амино-6-(N-циклопропил- N-метиламино) -9Н-пурин-9-ил/- 2-циклопентен-1-метанол. Соединения 1 и 3, называемые как энантиомерные соединения (1S, 4R) формулы (I), с отрицательным враще нием плоскости поляризации света (–), как оказалось, имеют особо мощную активность против ВИЧ и ВГВ-инфекций, и эти соединения и их фар мацевтически приемлемые производные обозначают предпочтительные варианты выполнения изобретения. Эти соединения имеют дополнительное преимущество в том, что после введения они способны проникать в гематоэнцефа лический барьер для получения высоких уровней соединений или их активных метаболитов в центральной нервной систе ме, где проявления инфекций ВИЧ особенно расстраивают здоровье. Соединение I является особо предпочтительным с точки зрения его исключительно мощной активности против инфекций ВИЧ и ВГВ. Это соединение, как оказалось, также имеет значительно более низкую токсичность против клеток-предшественников костного мозга, чем выше указанный 3'-азидо-3'-дезокситимидин (зидовудин). Мы также обнаружили, что фосфатные производные соединений 2 и 4, которые называются, как энантиомерные соединения (1R, 4S) формулы (I), с положительным враще нием плоскости поляризации света (+), имеют мощную активность против вы шеуказанных вирусных инфекций. Эти фосфатные производные представляют собой, таким образом, дополнительный предпочтительный вариант выполнения изобретения. Ссылка на фосфатные производные энантиомерных сое динений (1R, 4S) фор мулы (I) обозначает производные, в которых фосфатная группа прикреплена к 1-метанольной группе формулы (I) и включает моно-, ди- и три-фосфа ты. Родственные энантиомерные соединения (1R, 4S) формулы (I) и их не содержащие фосфа тов производные полезны в качестве промежуточных ве ществ для получения указанных фосфа тных производных. Вышеуказанные энантиомерные соединения (1S, 4R) формулы (I) и их фармацевтически приемлемые производные, и фосфатные производные энантиомерных соединений (1R, 4S) формулы (I) согласно изобретению называются противовирусными соединениями. Согласно дополнительным признакам изобретения обеспечиваем получение: а) противовирусных соединений согласно изобрете нию для применения в медицинской терапии, в частности для лечения или профилактики ретровирусной инфекции или инфекции вируса гепатита В; б) способа лечения или профилактики ретровирусных инфекций и инфекций гепатита В в субъекте, например, млекопитающем, таком как человек, который включает лечение субъекта те рапевти ческим эффективным количеством противовирусного соединения согласно изобретению; в) применения проти вовирусного соединения согласно изобретению при изготовлении лекарственного средства для лечения или профилакти ки любых из выше упомянутых инфекций или состояний. Примеры ретровирусных инфекций, которые могут лечиться или предуп реждаться согласно изобретению, включают ретровирусные инфекции человека, такие как вирус иммунодефи цита че ловека (ВИЧ), ВИЧ–1, ВИЧ–2 и лимфотрофный вирус Т-клеток человека (ЛТВЧ), например инфекции от ЛТВЧ–1 или ЛТВЧ–2. Противовирусные соединения согласно изобретению особо полезны для лечения СПИДа и относящихся к нему клинических состояний, таких как связанный со СПИДом комплекс (АСК), прогрессивная генерализованная лимфа денопатия (ПГЛ), связанные со СПИДом неврологические состояния, такие как множественный склероз или тропический парапарез, и состояния, позитивные к анти телам противо-ВИЧ и к ВИЧ для примера у бессимптомных пациентов, и тромбоцито пеническая пурпура. Эти соединения также могут быть использованы при лечении или предупреждения псориаза. Под фармацевтически приемлемым производным по отношению к энантиомерным соединениям (1S, 4R) формулы (I) понимают любую фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или соль такого сложного эфи ра от энантиомерных соединений (1S, 4R) формулы (I), или любое другое соединение, которое, после введения его реципиенту, способно привести к получению (непосредственно или косвенным об разом) такого энантиомерного соединения, или его активный в противо вирусном плане метаболит или остаток. Предпочти тельные сложные эфиры энантиомерных соединений (1S, 4R) формулы (I) включают эфиры карбоновой кислоты, в которых не содержащая карбоновая часть сложноэфирной группы выбирается из прямого или разветвленного алкила, например, н-пропила, третбутила, н-бути ла, апкоксиалкила (например, метоксиметила), аралкила (например, бензила), арилоксиалкила (например, феноксиметила), арила (например, фенила, возможно замешанного галогеном, алкилом с С 1–4 или алкокси с С1–4 или амино); эфиры сульфо кислоты, такие как алкил- или аралкисульфонил (например, метансульфонил); эфиры аминокислот (например, a-валил или а-изолейцил); и моно-, ди- или три-фосфатные эфиры. Фосфатные сложные эфиры соединений формулы (I) могут быть дополнительно этерифи цированы с помощью, например, спирта С1–20 или его реакционноспособного производного, или 2,3–ди(С6–24)ацилглицерина, например, кислого фосфата 2,3-бис-(гексаноилокси)пропила и производных кислого фосфа та 2,3бис-(гексадеканилокси)пропила. В дополнение к таким дополнительно этерифицированным производным фосфата соединений формулы (I) изобретение дополнительно включает в себя такие производные рацемических соединений формулы (I). Что касается вышеописанных сложных эфиров, если иное не указано, любая алкильная часть в целесообразном варианте, кото рая присутствует, со держит от 1 до 18 атомов углерода, в особенности от 1 до 4 атомов углерода. Любая арильная часть, которая присутствует в та ких сложных эфи рах, в це лесообразном варианте содержит фенильную гр уппу. Фармацевти чески приемлемые соли присоединения кислот энантиомерных соединений (1S, 4R) формулы (I) включают одно и двухосновные соли с соответствующей кислотой, например, органическими карбоновыми кислотами, такими как уксусная, молочная, винная, малеиновая, изетионовая, лактобионовая и сукциновая кислоты; органические сульфо кислоты, та кие как метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфо новая и п-толуолсульфо новая кислоты и неорганические кислоты, та кие как соляная, серная, фосфорная и сульфатметансульфо натсульфаминовая кислоты. Соли соляной кислоты (т.е. хло ристоводородная соль и двухлористово дородная соль) являются особенно предпочтительными. Вышеуказанные противовирусные соединения согласно изобретению могут быть использованы в сочетании с други ми агентами для лечения вышеназванных инфекций или состояний. Примеры таких дополнительных те рапевтических агентов включают ве щества, которые эффективны при лечении вирусных инфекций или связанных с ними состояний, такие как 3'-азидо-3'-дезокситимидин (зидовудин), 2',3'-дидезоксинуклеозиды, та кие как 2',3'-дидезоксицитидин, 2',3'-дидезоксиаденозин и 2',3'-дидезоксиинозин, ациклические нуклеозиды (например, ацикловир), интерфероны, такие как интерфе рон, ингибито ры почечных выделений, такие как пробеницид, ингибиторы переноса нуклеозидов, такие как дипиридамол, дилазеп, мио-, лидо- или солуфлазин, или гексобендин, иммуномодуляторы, такие как интерлейкин II и стимулирующие факторы колонии макрофагов гра нулоцитов, и х производные, растворимые CD4 или генетически измененные методами инженерии, и фосфо номуравьиная кислота. Соединения компонентов такой комбинационной терапии могут быть введены одновременно, либо в отдельных или скомбинированных рецептурах, или в различные периоды времени, например, с такой последовательностью, что комбинированное воздействие достигается. Противовирусные соединения согласно изобретению, также называемые здесь активные компоненты, могут быть вве дены для терапевтического лечения любым подходящим путем, включая орально, ректально, назально, локально (включая буквально и под язык), вагинально и парентерально (включая подкожно, внутримышечно, внутривенно и внутрикожно). Необходимо отметить, что предпочтительный путь будет меняться от состояния и возраста реципиента, природы инфекции и выбранного активного ингредиента. Обычно подходящая доза для каждого из вышеназванных состояний (например, СПИД), будет лежать в диапазоне от 3,0 до 120 мг на кг веса тела реципиента (например, человека) в день, предпочтительно в диапазоне от 6 до 90 мг на кг веса тела в день и более предпочти тельно в пределах от 15 до 60 мг на кг веса тела в день. Желательная доза предпочтительно представлена в виде двух, трех, че тырех, пяти, шести или более поддоз, вводимых с соответствующи ми интервалами в течение всего дня. Эти поддозы могут вво диться в ви де единичных дозировок, например, содержащи х о т 10 до 1500 мг, предпочтительно от 20 до 1000 мг, и более предпочтительно от 50 до 700 мг активного ингредиента на единичную дозировку препарата. В идеальном случае активный ингредиент должен быть введен для достижения пиковых концентраций в плазме активного соединения от примерно 1 до примерно 75 мкМ, предпочтительно примерно от 2 до 50 мкМ, бо лее предпочтительно примерно от 3 до 30 мкМ. Это может быть достигнуто, например, при внутривенной инъекции раствора активного ингредиента с концентрацией от 0,1 до 5% возможно в физиологическом растворе, или при оральном введении в виде пищевого ша рика, содержаще го примерно от 1 до примерно 100 мг/активного ингредиента. Же лательные уровни в крови могут быть поддержаны непрерывным вливанием для обеспечения примерно от 0,01 до примерно 5,0 мг/кг/ч или путем периодических вливаний, содержащих о т примерно 0,4 до примерно 15 мг/кг активного ингредиента. В то время как для активного ингредиента может быть вводимым без добавок предпочитают представлять его в виде фар мацевти ческих составов. Соста вы согласно изобретению содержат по крайней мере один активный ингредиент, как указано выше, вместе с по крайней мере одним фармацевтически приемлемым носите лем или эксципиентом. Рецептуры включают вещества, приспособленные для орального, ректального, назального, локального (включая в рот и под язык), вагинального или парентерального (включая подкожно, внутримышечно, внутривенно и внутримышечно, внутривенно и внутрикожно) введения. Рецеп туры могут быть удобно представлены в виде единичной дозировки и могут быть приготовлены любыми методами, хорошо известными в фармацевтическом искусстве. Такие мето ды включают этап соединения активного ингредиента с носителем, который представляет собой один или более дополнительных ингредиентов. Обычно рецептуры, готовят путем равномерного и однородного активного ингредиента с жидкими носителями или с мелко измельченными твердыми носителями или с теми и други ми, а затем при необходимости придают продук ту фор му. Рецептуры согласно изобретению, предназначенные для орального вве дения, могут быть представлены как отдельные единицы, та кие как капсулы или таблетки, каждая из которых содержит заранее заданное количество активного ингредиента, в ви де порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости; или в ви де жидкой эмульсии типа "масло в во де" или жидкой эмульсии типа "вода в масле". Ак тивный ингредиент может также быть представлен в виде пище вого шарика, электуа рия или пасты. Таблетка может быть получена путем прессования или формования, возможно с использованием одного или более вспомогательных ингредиентов. Спрессованные таблетки могут быть приготовлены путем прессования в подходящей маши не активного ингредиента в сво бодно текучей фор ме, такой как порошок или гранулы, возможно смешанные со связующим (например, повидон, желатин, оксипропилметилцеллюлоза), смазочное вещество, инертный разбавитель, консервант, агент расщепления (например, щелочной крахмальный гликоллят, сши тая ще лочная карбоксиметилцеллюлоза), поверхностно-активное вещество или диспергатор. Сформованные таблетки могут быть приготовлены путем формования в соответствующей маши не смеси из порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки возможно могут по лучать покрытие или процарапываться и могут иметь такую рецептуру, что бы обеспечить медленно или регулируе мое высвобождение в ней активного ингредиента, используя, например, оксипропилметилцеллюлозу в изменяющи хся пропорциях для обеспечения желательного профиля высвобождения. Таблетки возможно могут быть снабжены энтеросолюбильным покрытием для обеспечения высвобождения в частях кишки, иных, чем желудок. Рецептуры, предназначенные для локального применения во рту, вк лючают лепешки, содержащие активный ингредиент в основе с приданным приятным вкусом, обычно сахарозе и гуттаперче или трагаканте; пастилки, включающие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или саха роза и гуттаперча; и жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в соответствующем жидком носите ле. Рецептуры, приспособленные для ректального введения, могут быть представлены с подхо дящей основной, содержащей, например, масло какао или салицилат. Рецептуры, предназначенные для вагинального вве дения, могут быть представлены в виде вагинальных суп позиториев, тампонов, кремов, гелей, паст, рецептур в виде пены или аэрозоля, содержащи х, в дополнение к активному ингредиенту, та кие носите ли, которые пригодны, как это известно в данной области. Соста вы, предназначенные для парентерального введения, включают водные и неводные изотонические стерильные растворы для инъекций, которые могут со держать антиоксиданты, буфе ры, бактериостатические факторы и растворенные вещества, которые делают этот состав изото ническим с кровью конкретного реципиента; водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать агенты суспендирования и загустите ли. Эти составы могут быть представлены в единичной дозе или в многодозовых герметизированных контейнерах, например, ампулах и фла конах, и могут храниться в высушенном на морозе (лиофи лизованном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций, непосредственно перед применением. Растворы и суспензии для немедленной инъекции могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток вышеописанного ти па. Предпочти тельные рецептуры с единичной дозировкой это такие, которые содержат дневную дозу или единицу, дневную часть дозы, как описано выше, или ее соответствующую часть от активного ингредиента. Необхо димо понимать, что в дополнение к особо упомянутым выше ингредиентам, составы согласно изобретению могут включать другие агенты, обычно применяемые в данной области, относящиеся к типу состава, о котором идет речь, например, составы, предназначенные для орального применения, могут включать такие дополнительные вещества, как подслащивающие ве щества, загусти тели и вещества, придающие приятный вкус. Изобретение дополнительно включает следующий способ приготовления энантиомерных соединений формулы (I), указанных выше и их производных. Энантиомерные исходные материалы и предшественники для таких мате риалов, кото рые используются, как описано ниже в отношении данного способа, представлены каждый в ви де энантиомера, практически свободного (например, в выше указанной степени в отноше нии соединений формулы (I) от др угого энантиомера. Способ согласно изобретению включает либо: А) обработку энантиомерного соединения формулы (II): z N N (II) H 2N N N A в которой А имеет вышеуказанные значения, а Z обозначает группу-предшественник для указанной группы R, как определено в формуле (I), или его производного с помощью средства или при условиях, обеспечивающи х превращение группы-предшественника Z в требуе мую R-груп пу; ли бо Б) вве дение в реакцию энантиомерного соединения формулы (III): R NHR 2 N (III) 3 R NH N NH A в которой А и R имеют вышеуказанные значения, R2 обозначает водород или формильную груп пу, а R3 обозначает защитную аминогруппу, например, ацильную груп пу, та кую как алканоильная С1–6-груп па, например, формил, ацетил или изобутирил, или ее производное с веществом, служащим для осуществления образования имидазольного кольца в требуемом соединении формулы (I), с последующим уда лением защитной аминогруппы R3; или В) вве дение в реакцию энантиомерного соединения формулы (IV): R N N (IV) 3 R NH N N A в которой А и R имеют вышеуказанные значения, а R3 обозначает защитную аминогруппу, например, как описано выше по отношению к формуле (III), или ее производное с веществом, служащим для обеспечения уда ления защитной аминогруп пы R3, и возможно осуществление одного или обоих нижеследующи х преобразований в любом требуемом порядке; в случае образования соединения формулы (I), преобразование названного соединения в его производное; или в случае образования производного соединения формулы (I), преобразование указанного производного в родственное соединение формулы (I) или в дополнительное такое производное. Способ А может быть осуществлен обычным образом, например, путем обработки соединения формулы (II) в которой Z обозначает покидающую гр уп пу (например, галогруп пу, та кую как хлорогруппа), соответствующим амином, т.е. циклопропиламином или N-циклопропил-N-метиламином, предпочтительно в избытке, для введения аминогруппы R, как определено выше, целесообразно при кипячении с обратным холодильником или притемпературе выше 50оС, предпочтительно в присутствии органического растворителя, например, метанола или этанола. Способ Б может быть осуществлен, например, путем введения в реакцию формулы (III) с муравьиной кислотой или с реакционноспособным производным муравьиной кислоты (например, триэтилортоформиат или диэтоксиметилацетат), возможно с совместным растворителем, таким как диметилацетамид или диметилформамид, при повышенной температуре, предпочтительно при 75–90оС. Эта реакция обычным образом осуществляется путем добавления несколько большего, чем один эквивалент, количества сильной безводной кислоты, например, с помощью 1, 1 эквивалента этансульфо кислоты на эквивалент соединения формулы (III), в этом случае используют более низкие температуры, например, 25оС. Способ В может быть осуществлен, например, путем введения в реакцию соединения формулы (IV) с кислотным агентом, например, разбавленной водной соляной кислотой. Соединения формулы (II), используе мые в качестве исходных материалов в процессе А могут быть получены, например, аналогичным образом по процессу Б, т.е. путем введения в реакцию соответствующе го энантиомерного соединения формулы (V) Z NHR 2 N (V) 3 R NH N NH A в которой А, Z, R2 и R3 имеют вышеуказанные значения, или его производного с веществом, служащим для образования имидазольного кольца в необхо димом соединении формулы (II) и для осуществления удаления аминозащитной группы R3. Эта реакция может быть осуществлена с использованием веществ и условий, описанных для процесса Б. Соединения формулы (III), используемые в качестве исходных материалов в процессе Б, могут быть приготовлены, например, путем обработки энантиомерного соединения формулы (V), приведенного выше, веществом или условиями, обеспечивающими преобразование группы-предшественника Z в желаемую груп пу R, аналогичным образом для процесса А. Соединения формулы (IV) могут быть приготовлены, например, путем введения в реакцию энантиомерного соединения формулы (VI) Z N N (VI) 3 R NH N N A в кото рой А, Z и R3 имеют выше указанные значения с веществом или при условиях, служащи х для преобразования группы-предшественника Z в тре буемую гр уппу R, т.е. аналогичным образом для процесса А. Соединения формулы (VI) могут быть получены, например, путем введения в реакцию энантиомерного соединения формулы (IV), с агентом, служащим для осуществления образования имидазольного кольца в желаемом соединении формулы (VI), например, путем образования муравьиной кислотой или реакционноспособным производным муравьиной кислоты, как описано в отношении процесса Б. Энантиомерные соединения формул (II), (III), (IV), (V) и (VI) представляют собой дополнительные признаки изобрете ния, в частности соединения, в которых R 2 обозначает формильную группу, а/или R3 обозначает алканоильную С 1–6-гр уппу, в частности ацетил или изобутирил, а/или Z-обозначает галогруппу, такую как хлорогруппа. Особенно предпочти тельными промежуточными соединениями для приготовления (1S, 4R)-цис-4-/2амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол, т.е. предпочтительного вышеназванного соединения I, являются включающие: (1R, 4S)-цис-N-/6-(циклопропиламино)-9-(4-(оксиметил)-2-циклопентен-1-ил)-9Н-пурин-2-ил/изобутиламид; (1R, 4S)-цис-N-/4/хлор-5-формамидо-6-(4-(оксиметил)-2-циклопентен-1-ил)амино)-2-пиримидинил/изобутирамид; (1R, 4S)-цис-N-/4-хлор-5-формамидо-6-((4-(оксиметил)-2-циклопентен-1-ил)амино)-2-пиримидинил/ацетамид; (1S, 4R)-цис-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен- 1-метанол; (1R, 4S)-цис-N-/6-(хлор-9-(4-(оксиметил)-2-циклопентен-1-ил) -9Н-пурин-2-ил/изобути рамид. Энантиомерные соединения формулы (V), используемые в качестве исходных мате риалов, как описано выше, могут быть приготовлены, например, путем введения в реакцию соединения формулы (VII) Z NHR 2 N (VII) 3 R NH N R 4 в которой Z, R2 и R3 имеют выше указанные значения, а R4 обозначает покидающую гр уппу, например, галогруппу, та кую как хлорогруп па) или его производного с энантиомерным соединением формулы (VIIIA) или (VIIIB) NH 2 NH 2 HO OH (VIIIB) (VIIIA) или с его производным. Последнюю упомянутую реакцию целесообразно проводить в присутствии основания, такого как третичный амин, например, триэтиламин или триметиламин, целесообразно в органическом растворителе, таком как диметоксиэтан или этанол. Соединения формулы (VIIIA) или (VIIIB), имеющие соответствующую энантиомерную конфигурацию, могут быть получены путем перевода в комплексное соединение соответствующе го рацемического соединения, т.е. (+)-4-амино-2-циклопентен-1-мета нола, с оптически активной карбоновой кислотой (например, дибензоил-D-винной кислотой), а затем фракционной кристаллизацией полученных диастереомерных солей. В качестве альтернати вы, может быть использовано растворение с помощью ферментов, как описано в (J. Med. Chem. 1987, 30, 746 и J. Med. Chem. 1985, 28, 1385). Энантиомерные соединения формулы (VIIIA) или (VIIIB) и их производные, в частности, и х соли, оптически активными карбоновыми кислотами, такими как дибензоил-D-винная кислота, например, (1S, 4R)-4амино-2-циклопентен-1-мета нол, и ее дибензоил-D-тартрат обозначают дополнительный признак изобретения. Соединения формулы (VII), используемые в качестве исходных материалов, как указано выше, могут быть приго товлены обычным образом, например, путем восста новления соединения формулы (IX) Z NO 2 N (IX) 3 R NH N R 4 (в которой Z, R3 и R4 имеют вышеуказанные значения), для осуществления преобразования NO2-группы в груп пу NH2 и возможно превраще ния полученной группы NH2 в гр уппу фор мамидо, например, обработкой муравьиной кислотой/уксусным ангидридом. Соединения формулы (IX) могут быть приготовлены обычным образом. Те соединения, в кото рых обозначает галогруппу, например, хлорогруп пу, могут быть получены, например, галогенирова нием, например, с использованием хлорокиси фосфо ра, соответствующе го соединения формулы (Х) O NO 2 HN (X) H 2N N R 4 в котором R3 и R4 имеют выше указанные значения. Соединения формулы (Х) могут быть также приго товлены обычным образом, например, путем введения в реакцию соединения формулы (XI) O NO 2 HN (XI) H 2N N R 4 в которой R4 имеет вышеуказанные значения, с соответствующим веществом, служащим для введения защитной аминогруппы, например, путем реакции с соответствующей карбоновой кислотой или ее функциональным производным, например, изомасляным ангидридом. Соединение формулы (XI) может быть приготовлено нитрацией соответствующего соединения формулы (XII) O HN (XII) H 2N N R 4 в которой R4 имеет вышеуказанное значение. Соединение формул (VII), (IX), (X), (XI) обозначают дополнительные признаки изобретения, в частности та кие, в которых обозначают га логруппу, та кую как хлорогруппа, и/или R3 обозначает алканоил С1–6груп пу, в частности ацетил или изобутирил, и/или R4 обозначает галогруппу, та кую как хлорогруппа. Особые предпочтительные соединения формул (VII), (IX) и (X) согласно изобретению включают: N-(4,6-дихлор-5-формамидо-2-пиримидинил) изобутирамид; N-(4,6-дихлор-5-нитро-2-пиримидинил)изобути рамид; и N-(4-хлор-1,6-дигидро-5-нитро-6-оксо-2-пиримидинил)изобутирамид. Соединение А из формулы (I) может быть преобразовано в его сложный эфир путем реакции с соответствующим эте рифи цирующим веществом, например, галоидангидридом или ангидридом. Соединение формулы (I), включая его сложные эфиры, может быть преобразовано в его соли обычным образом, например, путем обработки соответствующей кислотой. Сложный эфир или соль соединения формулы (I) могут быть превраще ны в родственное соединение, например, путем гидролиза. Таким образом, О-монофосфат соединения формулы (I) может быть приготовлен путем обработки родственного соединения соответствующим фосфо рилирующим веществом, например, хло рокисью фосфо ра, как описано в (М.Yoshikawa, T. Kato and T. Takenishi, Bulletin Chem. Soc. Japan, 1969, 42, 3505). Соответствующие О-ди- и О-три фосфа ты могут быть приготовлены методами, описанными в (Nucleotidi Analogs, K. H. Sheit, John Wiley and Sons, N–Y 1980, pp. 211.215, и D.E. Hoard and D. G. Ott, J. Amer. Chev. Soc. 1965, 87, 1786), например, путем получения имидазолятного производного соответствующего О-монофосфата и путем последующей реакции этого производного с фосфатом для получения О-дифосфата, или с пирофосфа том для получения О-трифосфа та. Для приготовления этерифи цированных производных фосфата, указанных вы ше, родственное соединение формулы (I) может быть обработано соответствующим производным ди-алканоил-фосфа тидилхолина в присутствии соответствующей фосфолипазы, например, фосфо липазы D, как описано в (S. Shuto et al. Nucleic Acid Research, 1988, 20, c. 35) или путем введения в реакцию соединения формулы (I) с соответствующим фосфорилирующим веществом, таким как хлорокись фосфо ра, за чем следует обработка соответствующим спиртом, как описано в (А. Rosowsky и S. Kim. Nucleic Acid Chеmistry, Part 3. Z. B. Townsend и R.S. Tipson (Editors), John Wikey and Sons, N–Y, 1986, 255). Энантиомеры соединений формулы (I) могут быть растворены или выделены обычным образом, например, путем хроматографического разделения диастереомерных сложных эфи ров, приготовленных ацилированием гидроксида на циклопентенильной части, с помощью соответствующих оптически активных производных карбоновой кислоты как, например, с помощью напроксена (J. Org. Chem. 1986, 51, 1287). Нижеследующие примеры предназначены только для иллюстрации изобретения и не предназначены для ограничения его объема.В примерах значения вращения плоскости поляризации света были установлены по отношению к линии плотности натрия (589 нм) при 20оС. Выражение "активный ингредиент", как оно используется в примерах от А до G означает противовирусное соединение согласно изобретению, в частности, вы шеназванное соединение 1. Пример 1. (+)-Цис-4-/(2-амино-4-хлор-6-пиримидинил)амино/-2- циклопентен-1-метанол. Цис-4-ацетамидоциклопентен-2-енметилацетат (патент США № 4268672) (14,88 г, 0,073 моль) и октагидрат гидроокиси бария (46,19 г, 0,146 моль) кипятили с обратным холодильником в воде (300 мл) в атмосфере азота в течение 18 ч. Полученный раствор нейтрализовали двуокисью углерода. Осадок промывали водой, затем этанолом. Слитый вместе фильтрат-промывка выпаривали до сиропа (11,16 г), который конденсировали с 2-амино-4,6-дихлорпиримидином (23,91 г, 0,146 моль) и триэтиламином (30,5 мл, 0,219 моль) при кипячении с обратным холодильником 1-бутанола (100 мл) в течение 1,5 ч. После добавления 1Н NaOH (73 мл), полученную смесь выпаривали до сухости и остаточное твердое вещество переводили в суспензию в СНСl 3 (200 мл). Непрореагировавший 2-амино-4,6-дихлорпиримидин отфильтровывали и промывали хлороформом (100 мл). Фильтрат-про мывку с хлороформом концентрировали и пропускали через хроматографическую колонку с силикагелем. Дополнительный ис ходный материал пиримидин элюировали с 25% метанолом-хлороформом. Целевое соединение элюировали с 3,5% метаноломхлороформом в виде твердой пены нечистого белого цвета (15,90 г, 91%). 1 Н–ЯМР: (Me2SO-d6) d 1,15–1,28 и 2,26–2,41 (2м, 2, СН2); 2,60–2,71 (m, l, l'–H); 3,4 (m перекрывает Н2О, СН2ОН); 4,625 (t, J 5,3, l, CH 2OH); 4,95 (dr, s, l, CH–N); 5,67–5,87 (m, 2, CH=CH); 6,38 (dr, s, l, NH 2); 7,12 (dr, s, l, NH); MS (Cl) M+1, 241,243. Анализ: Рассчитано для С 10Н13N4OCl · 0,2H2O C 48,99; H 5,55; N 22,85; Cl 14,46. Найдено: С 49,10; Н 5,57; N 22,81; Cl 14,40. Пример 2. (+)-Цис-4-/(2-амино-6-хлор-5-/4-хлорфе нил)азо/-4-пиримидинил/ амино/-2- циклопентен-1метанол. (+)-цис-4-/(2-амино-4-хлор-6-пиримидинил)-амино/2-циклопентен-1-мета нолиз примера 1 (11,58 г, 48,1 ммоль) и тригидрат ацетата натрия (97 г) растворяли в ледяной уксусной кислоте (225 мл) и в воде (225 мл). Холодный раствор (0–5оС) 4-хлорбензолдиазонийхлорида готовили из 4-хлораналина (6,74 г, 52,8 моль), концентрированной соляной кислоты (14,7 мл), воды (52 мл) и нитрита натрия (4,01 г, 58,2 ммоль в 47 мл воды). Этот хо лодный раствор добавляли по каплям в течение 5 мин к перво му раствору. Полученный желтый осадок фильтровали спустя 18 ч, промывали водой и экстрагировали этанолом для получения целевого соединения в виде темно-желто го порошка (12,56 г, 69%), т. пл. 218–220оС. 1 Н–ЯМР: (Me 2SO-d6) d 10,25 (d, l, NH); 7,69 и 7,54 (оба, d, J 8,9, C6H4) перекрывает 7,6 (br, 6, NH2); 5,80–5,95 (m, 2, CH=CH); 5,24 (m, l, CH); 4,75 (t, l, CH 2OH); 3,41 (t, 2, CH 2OH); 2,75 (m, l, CH); 2,41 (m, l, CH); 1,44–1,53 (m, l, CH). Анализ: Рассчита но для С 16Н16N6Cl2O C 50,67; Н 4,25; N 22,16; Cl 18,70. Найдено: C 50,59; H 4,29; N 22,10; Cl 18,66. Пример 3. (+)-Цис-4-/(2,5-диамино-4-хлор-6-пиримидинил)амино/-2-циклопентен-1-метанол. Целевое соединение из примера 2 (11,67 г) суспендировали в этаноле (235 мл), ледяной уксусной кислоте (30 мл) и воде (235 мл). Смесь нагревали до кипения с обратным холодильником в атмосфере азота. Небольши ми порциями добавляли цинковую пыль (13,5 г) в течение 30 мин, в это время соединение растворялось. Реакцию нагревали еще в течение 20 мин, а затем избыточный цинк отфильтровывали от горячего раствора и его промывали этанолом. Фильтраты выпарива ли и оста ток очищали на колонке с силикагелем, элюируя хлороформом (1 л) и хлорофор мом метанолом 1/4 1 (1,8 л). Фракции, содержащие продукт, сое диняли и растворитель уда ляли при пониженном давлении до получения целевого соединения в виде красно-оранжевого масла (11,2 г, 100% выход). Чистая проба была получена в течение другой реакции малого масштаба для получения продук та в виде светло-желто го твердого вещества с 76%-ным выходом. 1 Н–ЯМР: (Me2SO-d6) d 1,29 и 2,39 (m, 2, CH 2); 2,69 (t, 1, 1'–H); 3,37 (d, 2, CH 2 OH); 3,91 (br, 2, NH 2); 4,60 (br, 1, CH 2OH); 5,02 (m, l, CHNH); 5,56 (br, s, 2, NH 2); 5,74 (m, l, CH); 5,86 (m, l, CH); 6,36 (d, l, CHNH). Пример 4. (+)-Цис-4-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2- циклопентен-1-метанол. Целевое соединение из примера 3 (примерно 9,7 г) растворяли в диэтоксиметилацетате (100 г) и кипятили с обратным холодильником в течение двух дней. Растворитель удаляли под глубоким вакуумом при 50оС и добавляли диоксан (40 мл) и 0,5Н НСl (60 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в те чение 1,25 ч и затем резко охлаждали. Реакцию нейтрализовали до рН 7 холодной 5Н гидроокисью натрия, а затем экстраги ровали хлороформом метанолом 1/3 1 несколько раз. Органические слои суши ли сульфатом магния, фильтровали и выпаривали. Остаток очища ли хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя с 2% МеОН–СHСl3 до получения 3,7 г (46%-ный выход) целевого соединения, т. пл. 138–139оС. 1 Н–ЯМР: (Me2SO-d6) d 1,63 и 2,61 (m, 2, CH2); 2,87 (m, I, I'-H); 3,44 (d, 2, CH2OH); 5,44 (m, 1, CH–N); 5,89 (m, 1, CH); 6,14 (m, l, CH); 6,82 (br s, 2, NH 2); 8,02 (s, 1, 8–H); (CH 2OH не ви ден под пиком Н 2О). УФ: рН I 1max 315 (x 7370); 218 (26200); Ish 239,5 (5650). рН 7,4 lmax 307 (x 8000); 245,5 (4600); 223 (26400); MS (El) 265,267 (m) (Cl) 266, 268 (m+1). Анализ: Рассчитано для С 11Н12N5ClO х х 2H2O) C 43,79; H 5,35; N 23,21; Cl 11,75. Найдено: С 43,67; H 5,29; N 23,05; C; 11,70. Пример 5. (+)-Цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-мета нол. Целевое соединение из примера 4 (0,50 г) растворяли в этаноле (40 мл) и добавляли циклопропиламин (0,65 мл, 5 эквивалентов). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в атмосфе ре азота в те чение 6 ч. Добавляли дополнительно 0,65 мл циклопропиламина, а затем реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение еще 5,5 ч. Растворители выпарива ли и добавляли хло рофор м (25 мл) и насыщен ный раствор бикарбоната натрия (5 мл). Водный слой экстрагировали несколько раз с помощью СНСl3 для получения сырого продукта. Этот продукт очища ли на колонке с силикагелем, элюируя с помощью 3% метанол-этилацетата для получения 0,43 г (80%) (+)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанола. Последний перекристаллизовали из ацето нитрила для получения 0,30 г белого порошка; т. пл. падает при 93–130оС, расплавление при 165оС. 1 Н–ЯМР: (Me2SO-d6)d 0,56 и 0,63 (2m, 4,2-циклопропил СН2); 1,56 и 2,60 (2m, 2, циклопентенил-СН2); 2,85 (m, I, I'-H); 3,02 (m, I, циклопропил СН–NH); 3,43 (m, 2, CH 2OH); 4,71 (t, I, CH 2OH); 5,40 (m, I, 4'-H); 5,77 (s, 2, NH2); перекрыва ние 5,84 (m, I, CH2); 6,09 (m, 1, CH); 7,23 (d, I, NH–CH); 7,58 (s, I, пурин-8-Р). ms (Cl) 287 (m+I). УФ: рН 1: lmax 296 (x 14000), 255 (10700); рН 7,0; lmax 284 (15900); 259 (9200); рН 13 lmax 284 (15800), 259 (9100). Анализ: Рассчитано для C14H18N6O х х 0,25H2O C 57,82; H 6,41; N 28,90. Найдено: С 57,84; H 6,45; N 28,86. Пример 6. (+)-Цис-4-(2-амино-6-(циклопропилметиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанол. (+)-цис-4-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанол (0,53 г, 2 ммоль) из примера 4, N-метил-Nциклопропиламин (Kari Industries, Aurora, OH; 0,8477 г, 12 ммоль) и метанол (20 мл) помеща ли в сосуд Парра и нагревали при 62 оС в течение 5 ч. Раствор концентрировали и затем разбавляли этанолом до доведения до рН 12 добавлением l, OHNaOH. Этот раствор концентрировали и остаток очища ли элюированием из колонки с силикагелем с помощью 3% метанола-хлороформа (0,547 г, 91,2%). Кристаллизация такой пробы из воды-этанола давала белый порошок, т. пл. 130–131 оС. 1 Н–ЯМР: (Me2SO-g6) d 7,61 (S, 1H, пурин Н-8), 6,10 (m, 1H, CH=), 5,84 (m, 1H, CH) 5,7 (br, s, 2H, NH 2), 5,40 (m, 1H, CH); 4,70 (br t, 1H, OH), 3,43 (m, 2H, CH 2OH) 3,24 (br s, 4H, CH 3, NCH циклопропил), 2,85 (m, 1H, CH), 2,66–2,57 и 1,61–1,51 (m, 2, циклопентил СН2), 0,90–0,65 (m, 4H, 2CH2 из циклопропила). Анализ: Рассчитано С15H20N6 O · 0,5 H2O: C 58,24; H 6,84; N 27,16. Найдено: С 58,15; Н 6,86; N 27,14. Пример 7. (+)-Цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-мета нол. Целевое соединение из примера 5 (0,600 г, 2,00 ммоль) растворяли в 1,3-ди метил-3,4,5,6-тетрагидро-2-(1Н)-пиримидиноне (Aldrich, 12 мл). Добавляли фосфо рилхлорид (0,76 мл), 8,0 ммоль) к перемешиваемому, охлаждаемому (-10оС) раствору. Спустя 3 мин, добавляли холодную во ду (100 мл) и полученный раствор нейтрализовали гидроокисью аммония 3М. Нейтрализованный раствор разбавляли до 1 л водой и подавали в колонку 2,5 х 20 см Sephadex A25 c диэтиламиноэтилом (Pharmacia), которая была предварительно уравновеше на с помощью 50 мМ бикарбоната аммония. Колонку вначале промывали с использованием 4 л 50 мМ бикарбоната аммония. О-монофосфат из (+)-ис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанола, затем элюировали при 2 литровом градиенте из 50 до 300 мМ бикарбоната аммония. Фракция, содержащая нуклеотид (т. е. вы шеуказанный О-монофосфат), выпаривали до белого порошка с целью удаления бикарбоната аммония; 71% рассчитан по поглоще нию в УФ; один пик с помощью ВЭЖХ (см. ниже). 5'-нуклеотидазу из змеиного яда (ЕС 3.1.3.5) от Crotalus atrox (1000 международных единиц; Sigma) добавляли к 1,4 ммоль нуклеотида, растворенного в воде (20 мл). Раствор инкубировали при 37 оС в течение 22 ч, в это время добавляли дополнительный штамм (1000 международных единиц). Инкубирование продолжали в течение еще 3 дн. Анализ с помощью ВЭЖХ (0,4 х 10 см обменной колонки с сильным анионом Whatman Partisi 1 10; элюирование с помощью градиен та от 20 мМ до 1 М фо сфа та аммония, рН 5,5, содержание метанола 5% де текти рова ние в УФ при 284 нм) в этой то чке показана, что 50% исходного нук леоти да было фосфо рилирова но до родственного н ук леозида. Э ту смесь вновь вво дили в ко лонку Sephadex с ди эти ламиноэти лом вышео писанного ти па. Элюи рова ние с использова нием 4 л 50 мМ бикарбоната ам мония давало фракции, со держащие це левое сое динение. Выпаривание во ды оста вляло белый порошок. Это т мате риал далее очи ща ли хро матографией на си ликаге ле с Ме ОН : СHСl3/ 1 : 9 до получе ния бесцветного стек ла. Это стекло отверждали в ацето нитриле для получения (+)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин- 9-ил/-2-циклопентен-1-мета нола в ви де бе лого клейкого твер дого ве щества, кото рое вы суши ва ли до твер дой пены при 0,5 мм рт.ст. при 68 оС (260 мг, 86% из ра цемата); 1 Н–ЯМР в ДМСО-d6 и масс-спектр, идентичные с аналогичными рацемата (целевое соединение из примера 5); (a )20 D 20 –59,7o, (a )436 –127,8o, (a )20 – 218,1o 365 (c 0,15, метанол). Анализ: Рассчитано для С 14Н18N6O–0,8 H2O: C 55,91; H 6,57; N 27,94. Найдено: С 56,05; H 6,65; N 27,88. Непрерывное элюирование последней упомянутой колонки Sephadex c 2-литровым градиентом от 500 до 300 мМ бикарбоната аммония давало О-монофосфат (из (+)энантиомера, соответствующего целевому соединению), который был стабилен к 5'-нуклеотидазе; приготовление этого монофосфа та описано более подробно в примере 9. Пример 8. (-)-Цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол О-монофосфат. Целевое соединение из примера 7 (0,35 г, 1,2 ммоль) растворяли в 1,3-диметил-3,4,5,6-диметил-3,4,5,6тетрагидро-2-(1Н)-пиримидинов (Aldrich, 5 мл). Добавляли фосфорилхлорид (Aldrich, 0,43 мл, 4,6 ммоль) к перемешиваемому, охлаждаемому (-10 оС) раствору. Спустя 3 мин добавляли холодную воду (20 мл) и полученный раствор нейтрализовали с помощью гидроокиси аммония 3М. Ионообменная хроматография, как описано в примере 7, дала нуклеотид в виде диаммонийной соли после выпаривания воды, в виде белого порошка (выход 95% количество определено с помощью УФ); анализ с помощью ВЭЖХ, как в примере 7, показал один пик; УФ lmax нМ (0,1М NaOH): 259, 284. Соотношение основание/фосфат бы ло 1,0/1,3, как определено по методу В. Ames (Methods in Enrymolоgy 8: 115, 1966). (a )20 – 69,9 o , (a )20 –73,0o , (a )20 – 84,0o D 578 546 (с 0,52 MeOH:H 2 O (4:1). Пример 9. (+)-Цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол О-монофосфат. Элюирование колонки Sephadex с диэтиламиноэтилом, описанное в примере 7, после инкубирования 5'-нуклеотидазы с 2-литровым градиентом от 50 до 300 мМ бикарбоната аммония давало нуклеотид-содержащие фракции, которые, после выпаривания воды, давали целевое соединение такое, как соль диаммония; белый порошок (56% от целевого соединения из примера 5); анализ с помощью ВЭЖХ, как в примере 7, показывает один пик; УФ l max нМ (0,1М НСl): 254, 297; (рН 7, фосфатный буфер): 259, 284; (0,1 М NaOH); 259, 284. Соотноше ние основание/фосфат бы ло 1,0/0,098. (a )20 + 62,0 o, (a )20 + 65,2 o, (a )20 + 75,0 o, D 578 546 (c 0,54, MeOH: H 2O /4:1). Пример 10. (+)-Цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол. Целевое соединение из примера 9 (0,67 ммоль) растворяли в воде (20 мл) и добавляли щелочную фосфатазу (ЕС 3.1.3.1 из кишки теленка (3000 международных единиц, Bochringer Mannheim). Раствор инкубировали при 37оС в течение 19 ч, в этой точке анализ с ВЭЖХ, как описано в примере 7, показал, что весь нуклеотид был дефосфо рилирован. Раствор выпарива ли до сухости и остаточные твердые вещества извлекали этанолом в режиме кипения с обратным холодильником (100 мл). Растворимый в этаноле материал поглоща ли на силикагель и подава ли на колонку для силикагеля. Целевое соединение элюировали метанолом: хлороформом/1:9. Выпаривание раствора ацетонитрил-этанол давало белую твер дую пену (164 мг, 79%); 1 Н–ЯМР в ДМСО-d6 и масс-спектр, идентичные с аналогами у рацемата (целевое соединение из примера 5); (a )20 D ( 20 ( 20 +58,7o, a )436 +126,2o, a )365 +217,5o, (c 0,10, метанол). Анализ. Рассчитано для С 14Н16N6O–0,60 H2O- · 15 EtOH: C 56,49; H 6,66; N 27,64. Найдено: C 56,60, H 6,63; N 27,55. Пример 11. (-)-Цис-4-/2-амино-6-циклопропилметиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-мета нол. Целевое соединение из примера 6 (2,00 г, 6,50 ммоль) растворяли в 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро2(1Н)-пиримидиноне (Aldrich, 20 мл). Добавляли фосфо рилхлорид (2,28 мл, 24,0 ммоль) к перемешиваемому, о хлаждаемому (-10оС) раствору. Спустя 3 мин добавляли хо лодную воду (80 мл). Раствор экстрагировали хло роформом (3х80 мл). Водный слой разбавляли эта нолом (4000 мл) и рН регулировали до 6 с помощью насыщенного водного NaOH. Осажденные неорганические соли были отфильтрованы. Фильтрат далее разбавляли этанолом до объема в 1 л и рН регулировали до 8 дополнительным количеством NaOH. Полученный осадок фильтровали и высуши вали для получения О-монофосфа та (+)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропилметиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2- циклопентен-1-метанол в виде белого порошка (4,0 ммоль, 62% подсчитаны количественно с помощью поглощения в УФ); анализ с помощью ВЭЖХ, как в примере 7, показывает один пик. Этот рацемический О-монофосфат растворяли в воде (200 мл) и 5'-нуклеотидазе из яда змей (ЕС 3.1.3.5) от Crotalus atrox (5,000) международных единиц, Sigma) добавлялась потом. После инкубирования при 37оС в течение 10 дн. анализ с помощью ВЭЖХ, как описано в примере 7, показал, что 50% исходного нуклеоти да было дефосфорилировано до нуклеозида. Их о тделяли на колонке 5х14 см Sephadex A25 с диэтиламиноэтилом (Pharmacia), кото рая была предварительно уравновеше на с помощью 50 мМ бикарбоната аммония. Выпаривание воды дало белый порошок, который был растворен в мета ноле, его абсорбировали на силикагеле и наносили на колонку с силикагелем. Целевое соединение элюировали с помощью метанола : хлороформа/1:9 в виде бесцветного стекла. Раствор ацетонитрила выпаривали до получения белой твердой пены, сушили при 0,3 мм рт.ст. над Р2О 5; 6,49 мг (72% из рацемата); 1 Н–ЯМР в ДМСО-d6 и масс-спектр идентичен аналогам у рацемата (целевое соединение из примера 6); (a )20 D ( 20 ( 20 – 48,0o, a )436 – 97,1o, a )365 – 149o (c 0,14, метанол). Анализ: Рассчитано для С 15Н20N6O–0,10 СН3CN; C 59,96; H 6,72; N 28,06. Найдено: C 59,93; H 6,76; N 28,03. Непрерывное элюирование из колонки Sephadex с помощью 2 лв 100 мМ бикарбоната аммония и затем с помощью 2 литров 200 мМ бикарбоната аммония давало О-монофосфат (+)энантиомера, соответствующе го целевому соединению, который был стабилен к 5'-нуклеотидазе. Пример 12. (+)-Цис-4-/2-амино-6-(циклопропилметиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол. Фракции, содержащие О-монофосфат (+)энантиомера, элюированного из колонки Sephadex из примера 11, соединяли и добавляли щелочную фосфатазу (ЕС 3.1.3.1) из желудка теленка (4800 международных единиц). Boehringer Mannheim). Раствор инкубировали при 25оС в течение 18 ч, в этот момент анализ с помощью ВЭЖХ показал, что весь нуклеотид был дефосфарилизирован. Раствор выпаривали до сухости и остаточные твердые вещества экстрагировали с помощью этанола, который кипятили с обратным холодильником (100 мл). Этанол – растворимый материал адсорбировали на силикагеле и наносили на колонку с силикагелем. Целевое соединение элюи ровали метанолом : хлороформ/1:9 в виде бесцветного стекла. Раствор ацетонитрила выпаривали, получая белую твердую пену, сушили при 0,3 мм рт.ст. над Р2О 5; 659 мг (73% из рацемата); 1 Н–ЯМР в ДМСО-d6 и масс-спектр идентичны аналогичным рацемата (целевое соединение из примера 6) (a )20 D ( 20 ( 20 +47,0o, a )436 +93,0o, a )365 +141,3o. (с=0,11, метанол). Анализ: Рассчитано для С 15Н20N6O–0,1 CH 3CN: C 59,95; H 6,72; N 28,06. Получено: С 59,92; Н 6,80; N 27,96. Пример 13. (1S, 4R)-4-амино-2-циклопентен-1-метанолдибензоил-D-тартрат. (+)-Цис-4-ацетамидоциклопент-2-енметилацетат (патент США № 4268672) (14,88 г, 0,073 моль) и октагидрат гидроокиси бария (46,19 г, 0,146 моль) кипятили с обратным холодильником в воде (300 мл) в атмосфере азота в течение 18 ч. Полученный раствор нейтрализовали двуокисью углерода. Осадок промывали водой, затем этанолом. Собранный вместе фильтрат с промывкой выпаривали до сиропа (уксусная соль (+)-4-амино-2-циклопентен-1-метанола), который преобразовывали в свободный амин при перемешивании с избытком смолы Amberlite IRA–400 (OH- в воде. Смолу отфильтровывали, промывали водой и фильтрат-промывку выпаривали до бледно-желтого сиропа, который суши ли выпариванием порций этанола. Такую пробу амина (2,26 г, 20,0 ммоль) и дибензоил-D-винную кислоту (Aldrich, 3,62 г, 10,0 ммоль в виде 99%) растворяли в горячем абсолютном этаноле (35 мл). Кипящий с обратным холодильником ацетонитрил (примерно 150 мл) добавляли до температуры помутнения и раствору давали остыть медленно до комнатной температуры. Белые иглы, которые образовывались, перекристаллизовывали три раза из того же сочетания растворителей для получения целевого соединения в виде белых пластинок (1,07 г, 37%); т. пл. 160–162 о; (a )20 D ( 20 ( 20 + 66,9, a )436 +165o, a )365 +325o (c=0,28, метанол). Кристаллография в рентгеновских лучах этой соли способствовала фиксации абсолютной конфигурации катиона известной конфи гурацией дианиона D-дибензоилвинной кислоты. Эта соль кристаллизовалась в пространственной группе С2 с одним катионом С 6Н12NO и половиной дианиона С 18Н14О 8 в ви де асимметричной единицы. Анализ. Рассчитано для С 6Н11NO-1/2 (C18H14O 8): C 61,63; H 6,21; N 4,79. Найдено: C 61,56; H 6,24; N 4,74. Пример 14. (1R, 4S)-4-амино-2-циклопентен-1-метанолдибензоил-L-тартрат. Эта соль была образована и кристаллизована как описано в примере 13, за исключением того, что использовали дибензоил-L-винная кислота. Три кристаллизации из этанола-ацето нитрила давали целевое соединение в ви де белых пластинок (1,00 г, 34%); т. пл. 160–162о; (a )20 D ( 20 ( 20 -68,2o, a )436 -169o, a )365 -333o (c=0,24, метанол). Анализ. Рассчитано для С 6Н11NO-1/2 (C 18H14 O8): C 61,63; H 6,21; N 4,79. Найдено: С 61,59; Н 6,21; N 4,76. Пример 15. (+)-Цис-N-/4-хлор-5-формамидо-6-//4-(оксиметил)-2-циклопентен-1-ил/амино/-2пиримидинил/ацетамид. N-(5-амино-4,6-дихлорпиримидин-2-ил)ацетамид (J. Org. Chem. 1975, 40, 3141) формилировали добавлением 96%-ной муравьиной кислоты (20 мл) к раствору в (0,75 г, 3,4 ммоль), растворенному в уксусном ангидриде (20 мл). Полученный раствор перемешивали при 25оС в течение 1 ч и затем выпаривали до получения N-(4,6-дихлор-5-формамидо-2-пиримидинил)ацетамида в виде рыжевато-коричневого порошка (0,77 г 91%); структура подтверждена с помощью 1Н-ЯМР и масс-спектра. Этот рыжевато-коричневый порошок (840 мг, 3,37 ммоль), (+)-цис-4-амино-2-циклопентен-1-метанол (940 мг, 8,2 ммоль) и триэтиламин (0,80 г, 8,0 ммоль) нагревали в эта ноле (50 мл) в масляной ванне (70–80оС) в атмосфе ре азота в те чение 50 мин и выпаривали до темного масла, кото рый подверга ли хроматографии на силикагеле. Целевое соединение элюировали с помощью 5% мета нола-хлороформа в виде твердой пены персикового цвета (840 мг). Кристаллизация из метанола давала белые гранулы (575 мг, 52%); т. пл. 189–193о; 1 Н–ЯМР (ДМСО-d6) d 10,23 (br, 1,0, NHAc), 9,3 (br, 1,0, NHCHO), 8,15 и 7,90 (оба синглет, всего 1,0 НС=0 из двух аген тов конформации, пики коалесцируют при 60оС), 7,42 и 7,22 (оба дублет, j 8,3, всего 1,0, СН–NH из двух агентов конформации, пики коалесцируют при 60 оС), 5,9 и 5,7 (оба m, 2,0, CH=CH), 5,05 (m, l, CH–N), 4,73 (m, l, OH), 3,39 (m, 2, CH 2OH), 2,72 (m, l, CH), 2,40 (m, l, 1/2 CH 2), 1,36 (m, l, 1/2 CH 2). Анализ. Рассчита но для С 13Н16N5O3Cl: C 47,93; H 4,95; N 21,50; Cl 10,88. Найдено: C 47,99; H 4,96; N 21,42; Cl 10,96. Пример 16. (+)-Цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанола. Целевое соединение из примера 15 (0,91 г, 2,79 ммоль) растворяли в сухом ДМФ (1 мл). Добавляли триэтилортоформиат (10 мл) и этансульфо кислоту (0,29 мл, 3,4 ммоль) и раствор нагревали при 65оС в течение 24 ч. Раствор выпаривали до сиропа. Сироп растворяли в IH HCl (15 мл) и перемешивали в течение 3 ч. рН регулировали до 7 с помощью 5Н гидроокиси окиси натрия и полученную смесь (в ви де масла) экстрагировали i-пропанолом : хлороформом/1 : 3 (3х100 мл). Собранные вместе орга нические слои сушили ((MgSO4)) и вы паривали до красного стекла (0,93 г). Раствор этого стекла в мета ноле (20 мл) нагревали с циклопропиламином (2 мл) в сосуде Парра при 70 оС в течение 18 ч. Полученный раствор выпаривали до темного стекла, кото рое адсорбировали на силикагеле. Элюирование с помощью 7% метанолэтилацета та давало целевое соединение (148 мг, 19%) в ви де белого порошка, после расти рания с аце то нитрилом; 1 Н–Я МР (ДМС О-d 6) и ден тично с ана логи чными показате лями це ле вого со е динения из при мера 5. Пример 17. (+)-(1R, 4S)-цис-N-/4-хлор-5-формамидо-6-{/4-(оксиметил)-2-циклопентан-1-ил/ амино}-2пиримидинил/-ацетамид. (1S, 4R)-4-амино-2-циклопентен-1-мета нолдибензоил-D-тартрат готовили как описано в примере 13 (2,76 г, 9,02 ммоль) растворяли в во де (20 мл) и наносили на колонку из 65 мл анионообменной смолы Amberliti 1A–400 (форма ОН-). Колонку промывали водой. Базовые собирали вместе и выпаривали до остаточного масла, которое высушивали выпариванием абсолютного спирта и затем на 0,5 мм для получения (1S, 4R)-4-амино-2-циклопентен-1-мета нол (1,2 г) в виде бледно-желтого масла (быстро темнеет на воздухе), кото рое использовали немедленно. Это масло растворяли в этаноле (5 мл) и добавляли к раствору N(4,6-дихлор-5-формамидо-2-пиримидинил)ацетамида (2,07 г, 8,31 ммоль), полученного как описано в примере 15, и триэтиламина (2,50 г, 24,8 ммоль). Полученный темный раствор нагревали (масляная ванна 75– 80оС) в атмосфе ре азота в течение 50 мин. Этот раствор выпаривали до спирта, который вводили в колонку с си ликагелем. Целевое соединение элюировали 35% метанолом-хлороформом в виде бледно-желтой твердой пены (1,59 г, 54%); 1Н–ЯМР идентично аналогичным показателям кристаллизованной пробы. Такую пробу кристаллизовали из этанола для получения белых гранул, т. пл. 194–195оС; 1Н–ЯМР (ДМСО 6) идентично показате лям целевого соединения из примера 15; (a )20 D ( 20 ( 20 ( 20 ( 20 +2,7 o, a )578 +3,6 o, a )546 +2,9 o, a )436 2,5o, a )365 – 41,2o (c=0; 238, метанол). Пример 18. (-)-(1S,4R)-цис-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанол. Целевое соединение из примера 17 (1,15 г, 3,53 ммоль) осторожно кипятили с обратным холодильником в диэтоксиметилацета те (45 мл) в атмосфере азота в те чение 3,5 ч. Полученный бледно-желтый раствор концентрировали при 0,5 мм рт.ст. до желтого сиропа. Сироп перемеши вали в 1Н НСl (50 мл) в течение 1,0 ч. Этот раствор нейтрализовали бикарбонатом натрия и выпаривали до сухости. Оста точные твердые вещества экстрагировали метанолом и растворимый в метаноле материал вводили в колонку силикагеля. Элюирование колонки с помощью 10%-ного метанолэтилацетата давало целевое соединение в виде бледно-желтой твердой пены (730 мг), 78%); 1Н–ЯМР (ДМСО d6): идентично с показателями рацемата (целевое соединение из примера 4); (a)D20 114,9о (с 0,26, МеОН). Пример 19. (-)-(1S, 4R)-цис-4-/2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол. Целевое соединение из примера 18 (560 мг, 2,11 ммоль) в метаноле (12 мл) нагревали с циклопропиламином (2,4 мл) в сосуде Парра при 78оС в течение 17 ч, растворитель выпарива ли и остаток хроматографи ровали на силикагеле. Целевое соединение элюировали с 57% метанол-этилацетата в виде бесцветной твердой пены (367 мг, 59%); 1Н–ЯМР (ДМСО d6) и идентично показателям из примера 7; (a )20 D 20 59,0o (c 0,28, MeOH), подтверждает абсолютную конфигурацию целевого соединения из примера 7. Пример 20. (1S, 4R)-4-амино-2-циклопентен-1-метанолдибензоил-D-тартат. 2-азабицикло /2.2.1/гепт-5-ен-3-он/ (Daluge and vince, J. Org. Chem. 1978, 43, 2311 и патент США № 4268672) (44,0 г, 0,400 моля) перемешивали в 2Н НСl в метаноле (0,5 л) при 25оС в течение 1,5 ч. Летучие вещества выпаривали, оставляя (+)-цис-метил-4-амино-2-циклопентен-1-карбоксилатгидрохлорид, в виде неопределенного белого порошка (17,1 г). Расти рание такой пробы простым диэтиловым эфиром давало белый порошок, т. пл. 92,5–95оС (J. Org. Chem. 1981, 46, 3271; т.пл. 82–83оС); 1Н–ЯМР (ДМСО-d6) d 8,25 (br s, NH3+), 6,1 и 5,9 (оба m, 2, CH= CH), 3,64 (s) перекрывает 3,75 3,6 (m, всего 4, ОМе и СН), 2,65–2,45 и 2,05 1,85 (оба m, 2, CH 2). Анализ. Рассчитано для С 7Н11NO2–HCl; C 47,33; H 6,81; N 7,89; Cl 19,96. Найдено: C 47,41; H 6,84; N 7,85; Cl 19,89. (+)-цис-метил-4-амино-2-циклопентен-1-карбоксилатгидрохлорид (17,7 г, 0,100 моль) и диизобутил-алюминийгидрид (0,500 моль в виде раствора 1М в гексане) кипятили с обратным холодильником в гексане (200 мл) в течение 6 ч. Полученный раствор охлаждали и 10 мл водного хлористого аммония и затем метанол (200 мл) были добавлены. Эту смесь кипятили с обратным холодильником в течение 30 мин и добавляли MgSO 4 (10 г). Твердые вещества отфильтровывали и промывали дополнительным количеством метанола. Фильтрат-промывку выпаривали до темного масла (15,5 г); 1Н-ЯМР (ДМСО-d 6) идентично показателям (+)-4-амино-2-циклопентен-1-метанола, приготовленного как описано в примере 13. Такой образец, после очистки хроматографией на силикагеле (EtOH: CHCl 3 : NH4OH/10: 90:1) кристаллизации с помощью дибензоил-L-винной кислоты для получения целевого соединения. Пример 21. /Цис-4-(2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-ил/метил R-2,3бис-(гексадеканоилокси)-пропил-кислый фосфат. Раствор а-a-дипалмитоилфосфатидилхо лина (150 мг), 0,2 ммоль, Sigma) в 6 мл хлороформа добавляли в сосуд, содержащий (+)-цис-4-(2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-мета нол (300 мг, 1,03 ммоль), фосфолипазу D, тип VII (из Streptomyces, 1,0 мг, удельная активность 1,85 ед/мг, Sigma и буфер с рН 4,5 (1,5 мл, 250 мМ в СаСl2, 250 мМ в NaOAc, с регулированием рН до 4,5 добавлением 0,1 Н НСl). Полученную бифазу перемешивали при 45оС (масляная ванна) в течение 1 ч. Слои разделяли и водный слой экстраги ровали хлороформом (3х6 мл). Собранные вместе органические слои промывали 1Н НСl, высушивали и концентрировали. Такую пробу очищали элюированием из 2 колонок силикаге лем с 12% мета нола-хлороформа, получая целевое соединение, 120 мг (47%). Этот мате риал отверждали с использованием этилацета та-ацетонитрила для получения легкого желтого порошка, т. пл. 155–157оС; 1 Н–ЯМР (CD3CD–CDCl3) d 7,78 (S, перекрывающий растворитель, пурин Н-8), 6,12 и 5,88 (m, 2, HC= =CH), 5,53 (m, l, CHN циклопентен), 5,22 (m, l, CO2CH), 4,37 (dd, J 3,12; l, 0,5 POCH2 глицерин), 4,12 (m, l, 0,5 POCH2 глицерин), 3,42 (m, 4, OCH 2 глицерин, ОСН2), 3,11 (br, m, l, CH); 2,90 (m, l, CH), 2,78 (m, 0,5 CH 2 циклопентен), 2,27 (m, 4, 2CH2CO2), 1,70 (m, l, 0,5 CH2 циклопентен), 1,56 (br, m, 4, 2CH2CH2CO2), 1,27 (br, m, 38, 24 CH2), 0,88 (m, 6, 2CH 2), 0,83 (m, 2, CH 2 циклопропил), 0,60 (m, 2, CH 2 циклопропил). Анализ. Рассчитано для С 49Н85N6O 8O – 2.4 H 2 O: C 61,28; H 9,42; N 8,75; P 3,22. Найдено: С 60,97; Н 9,12; N 8,78; P 2,96. Пример 22. /Цис-4-(2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-ил/метил/ R-2,3-бис(гексадеканоилокси)пропил кислый фосфат. Раствор а–a дикапроилфосфати дилхо лина (300 мг, 0,66 ммоль, Sigma) в 15 мл СНСl3 добавляли в сосуд, со держащий (+)-цис-4-(2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-цикломентен-1-мета нол (378 мн, 1,32 ммоль), фосфо лидазу D, тип VII (из Streptomyces, 1,04 мг, удельная активность 185 ед/мг, Sigma), буфер с рН 4,5 (4,5 мл, 250 мМ в СаСl2, мМ в NaOAc, с регулировкой рН до 4,5 добавлением РСl) и СHСl3 (3 мл). Полученную би фазу перемешивали при 45оС (масляная баня) в течение 4 ч. Слои разделяли и органический слой промывали в 1Н HCl (2х4 мл). Собранные вместе водные слои промывали обратной промывкой хлороформом (10 мл). Собранные вместе органические слои высушивали (MgSO 4) и концентрировали. Оста ток помещали в колонку с силикагелем и целевое соединение элюирова ли 16% мета ноломхло роформом и концентрировали до получения мелкого желтого порошка. Этот материал растворяли в этаноле и концентрировали (3х50 мл) перед сушкой под глубоким вакуумом для получения 103 мг (выход 21%) легкого желто го порошка, т.пл. 182–185оС. 1 Н–ЯМР: (ДМСО-d6) d 7,61 (S, l, пурин H8), 7,22 (dr s, l, NH), 6,09 (m, l, 0,5 CH= CH), 5,89 (m, перекрывание br s при 5,83, 3, 05 СН= СН, NH2), 5,41 (br m, l, CHN), 5,09 (br m, l, CO2CH), 4,30 (dd, J, 2,7, 12, 1, 0,5 POCH2 глицерин), 4,08 (m, l, 0,5 POCH2 глицерин), 3,80 (br m перекрывает br m при 3,75 4 ОСН2 глицерин, ОСН2) 3,02 (br m, 2, CH, NCH циклопропил), 2,65 (m, l, 0,5 CH2 циклопентен), 2,23 (+, J 7,5; 4, 2 CH2CO2), 1,48 (br m, 5, 2CH 2CH2CO2, 0,5CH2 циклопентен), 1,23 (br m, 8, 2 (CH 2)2), 0,84 (m, 6, 2 CH 3), 0,67 и 0,58 (m, 4, 2 CH2 циклопропил). Анализ. Рассчитано для С 29Н45N6O 8P – 3,9 H 2O, 0,2 CHCl 3, 0,05 EtOH: C 48,00; H 7,33; N 11,46; Cl 2,9. Найдено: С 48,65; Н 6,61; N 10,81; Cl 2,5. Предыдущий пример представляет собой адаптацию мето дики описанной Satoshi Shuto et al Tetrahedron Zetters, Vd. 28, 1987, № 2, c. 199– 202. Пример 23. N-(4-хлор-1,6-дигидро-5-нитро-6-оксо-2-пиримидинил)изобути рамид. 6-хлор-5-нитроизоцито зин (J. Chem. Soc. 1960, 5041, J. Org. Chem. 1975, 40, 3141) защища ли разогревом желтого твер дого вещества (14,88 г, 78,09 ммоль) до 100оС в течение 1 ч в изомасляном ангидриде (250 мл) и в концентрированной серной кислоте (3–4 капли). Полученный раствор обрабатывали безводным метанолом (100 мл), перемеши вали при 50оС в течение получаса, концентрировали до одной трети от исходного объема и целевое соединение (14,97 г, 74%) собирали фильтрованием в виде бледно-желтых кристаллов; т. пл. 196 0 199оС; 1 Н–ЯМР (ДМСО-d6) d 1,12 (d, j 6,9, HZ, 6H, (CH 3)2CH), 2,75 (m, J 6,9, HZ 1H, (CH 3)2CH), 12,41 (br s; 1H). Анализ. Рассчита но для С 8Н9N4O4Cl: C 36,87; H 3,48; N 21,50; Cl 13,60. Найдено: С 36,94; Н 3,48; N 21,44; Cl 13,53. Пример 24. N-(4,6-дихлор-5-нитро-2-пиридинил)изобутирамид. Целевое соединение из примера 23 (100 г, 38,37 ммоль) нагревали до кипения с обратным холодильником в хлорокиси фосфо ра (200 мл) и N, N-диэтиланилине (3–4 капли) в те чение 5 ч в атмосфе ре азота. Раствор затем охлаждали до комнатной температуры, концентрировали до сухости и си роп растворяли в хо лодном (» -10oC) метиленхлориде (200 мл). Органический слой обрабаты вали насыщенным водным бикарбонатом натрия (100 мл) с сильным перемеши ванием, и температуру поддерживали ниже 5оС, когда добавляли порциями твердый бикарбонат натрия для повышения рН в пределах от 5 до 7. Слои отделяли и водную фа зу экстраги ровали мети ленхлоридом. Собранные вместе орга нические слои фильтровали на фа зоразделительной бумаге, концентрировали и вы сушивали под вакуумом для получения целевого соединения (7,71, 72%) в ви де желто-белого твердого ве щества, достаточное для использования на следующей ста дии. Перекристаллизация твердого вещества из гексана/метиленхлорида давала аналити ческую пробу, т.пл. 166–169оС, 1 Н–ЯМР (ДМСО-d6) d 1,09 (d, J 6,9 H, 6H, (CH 3)2CH), 2,79 (m, J = 6,9 HZ, 1H, (CH 3)2CH), 11,61 (S, 1H). Анализ. Рассчитано для C8H8N4O3Cl2 : C 34,43; H 2,89; N 20,08; Cl 25,41. Найдено: C 34,53; H 2,89; N 20,02; Cl 25,40. Пример 25. N-(4,6-дихлор-5-формамидо-2-пиримидинил)изобутирамид. Целевое соединение из примера 24 (6,77 г, 24,26 моль) помещали в со суд Парра, содержащий 220 мл абсолютного Е ОН и 10,0 г (влажный вес) никелевого катализатора Ранея, который предварительно встряхи вали в атмосфере водорода (40 пси 2,8 кг/см 2) в течение 10 мин. Смесь встряхи вали в атмосфе ре водорода (40 пси 2,8 атм) в течение 1 ч фильтровали на целите и фильтрат концентрировали до желто-белого твердого вещества, которое высуши вали под вакуумом всю ночь. Это твердое вещество перемешивали в 1,2-дихлорэта не (250 мл) при 0оС. Добавляли ук сусный ангидрид (30 мл), за чем следовала муравьиная кислота (30 мл), по каплям в атмосфе ре азота. Полученную смесь перемешива ли при комнатной темпера туре в течение 2 ч, концентрировали до половины исходного объема и переводили в азеотропную смесь с толуо лом для удаления остаточных муравьиной/уксусной кислот. Сырое твердое вещество растирали с метанолом для получения целевого соединения (4,92 г, 73%) в виде твердого вещества неопределенного белого цве та, т. пл. 206–209оС (дес.); 1 Н–ЯМР (ДМСО-d6) d 1,08 (d, J, 6,8 HZ, 6,0 (CH3) 2CH); 2,74 (m, J 6,8 HZ, 1,0 (CH3) 2CH); 8,18 (d, J 10,3HZ) и 10,26 (br, s)/всего 1,0, NHCHO из двух аген тов конформации/. 11,17 (br s, 1,0). Анализ. Рассчитано для С 9Н10N4O2Cl2 : C 39,01; H 3,64; N 20,22; Cl 25,59. Найдено: C 39,13; H 3,68; N 20,12; Cl 25,67. Пример 26. (+)-(1R, 4S)-цис-N-/4-хлор-5-формамидо-6-{/4-(оксиметил)-2-циклопентен-1-ил/ амино}-2пиримидинил/изобутирамид. (1S, 4R)-4-амино-2-циклопентен-1-метанолдибензоил-D-тартрат (2,44 г, 8,15 ммоль), приготовленный согласно описанному в примере 13, растворяли в 90% этаноле (20 мл) и этот раствор добавляли в колонку со смолой Amberlite 1RA–400 (ОН-) (30 мл), которую предварительно промывали тем же самым растворителем. Элюирование с 90% этанолом давало базовые фракции, которые после концентрирования и выпаривания порций толуо ла-этанола оставляли (1S, 4R)-4-амино-2-циклопентен-1-метанол в ви де бледно-желтого масла (1,4 г), которое немедленно конденсировали с N-(4,6-дихлор-5-формамидо-2-пиримидинилизобутирамидом (2,26 г, 8,15 ммоль), приго товленным согласно описанному в примере 25, в 1,2-диметоксиэтане (100 мл) с триэтиламином (2,3 мл, 16,3 ммоль) при 95–110оС в течение 1,5 ч. Полученный раствор выпаривали до темно-желтого сиропа, который подвергали хроматографии на силикагеле. Элюирование колонки с 5–7% мета нолом-хлороформом давало целевое соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (2,45 г, 84%). Кристаллизация такой пробы из ацето нитрила давала целевое соединение в виде мелких белых кристаллов, т. пл. 194,5–195,5оС. 1 Н–ЯМР (ДМСО-d6) d 10,21 (S, l, NHCOCH–Me2), 9,29 (S, l, NHCHO), 8,12 (S, l, CHO), 7,18 (d, J 7,9, l, CHNH), 5,8 и 5,7 (оба m, 2, CH= CH), 5,08 (m, l, CHN), 4,71 (t, J 5,06, l, OH), 3,37 (m, 2, CH 2OH), 2 ,9–2,6 (m, 2, CHMe2 и CH); 2,40 (m, l, 0,5 СH2), 1,33 (m, l, 0,5 CH 2); (a )20 D ( 20 +4,4 o , a )365 -20,7o (c 0,337, MeOH). Анализ: подсчитано для С 15Н20N5ClO3: Рассчитано: C 50,92; H 5,70; N 19,79; Cl 10,02. Найдено: С 50,67; H 5,78; N 19,62; Cl 9,92. Пример 27. (-)-(1R, 4S)-цис-N-/6-(циклопропиламино)-9-(4-оксиметил)-2-циклопентен-1-ил)- 9Н-перин2-ил/изобути рамид. (+)–(1R, 4S)-цис-N-/4-хлор-5-формамидо-6-{/4-(оксиметил)-2-циклопентен-1-ил/амино}-2-пиримидинил/изобутирамид (1,949 г, 5,44 ммоль), приго товленный согласно описанному в примере 26, перемешивали с триэтилортоформиатом (30 мл) в водоледяной бане, в то время как концентрированную соляную кислоту (2,0 мл) добавляли по каплям в течение 2 мин. Полученный светлый раствор перемешивали всю ночь при окружающей температуре. Летучие вещества удаляли под вакуумом и остаточный сироп (содержащий (1R,4S)-цис-N-/6-хлор-9-(4-оксиметил)-2-циклопентен-1-ил)-9Н-пурин-2-ил/изобути рамид-ортоэфирконъюгат) кипяти ли с обратным холодильником в этаноле (30 мл) с циклопропиламином (10 г) в течение 2,5 ч. Вы паривали сироп, который растворяли в 10% изопропиноле-хло роформе (200 мл). Этот раствор сильно перемешивали с насыщенным водным бикарбонатом натрия (25 мл). Органический слой отделяли и водный слой промывали дополнительным количеством 10% изопропанола-хло роформа. Собранные вместе органические слои высуши вали (MgSO4). Выпаривание дало бледно-желтое стекло (2,4 г), которое подвергали хроматографии на силикагеле. Целевое соединение элюировали 2–3% метанол-этилацетатом в виде твердого вещества (1,02 г, 53%); перекристаллизация такой пробы из метанола-ацето нитрила давала целевое соединение в виде белых иго лок; т. пл. 197,5–198,5о. 1 Н–ЯМР (ДМСО-d6) d 9,75 (S, l, NHCO), 7,93 (S, l, пурин Н–8), 7,82 (br s, l, NH-циклопропил), 6,12 и 5,92 (оба m, 2, СH= CH), 5,50 (m, l, CH–N), 4,73 (t, J 5,3, l, OH), 3,46 (m, 2, CH 2–O), 3,25–3,00 (m, 2, CHMe2 и CH); 2,91 (m, l, CH), 2,75–2,6 (m, l, 0,5 CH 2), 1,7–1,6 (m, l, 0,5 CH 2), 1,07 (d, J 68,6, CHMe2), 0,75–0,6 (m, 4, 2 циклопропил, СН2); (a )20 D ( 20 –70,7o, a )436 –159,0o (c 1,02, MeOH). Анализ: подсчитано для С 16Н24N6O2: Рассчитано: С 60,66; H 6,79; N 23,58. Найдено: C 60,62; H 6,83; N 23,51. Продолжаемое элюирование колонки с помощью 5% метанолэтилацетата давало дополнительное количество целевого соединения, загрязненного приблизительно (10%-ми (-)-(1S, 4R)-цис-4-/2-амино-6(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/ -циклопентен-1-метанола в ви де бледно-желтой твердой пены (928 мг). Пример 28. (-)-(1R, 4S)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-циклопентен-1-метанол. (-)-(1R,4S)-цис-N-/6-(циклопропиламино)-9-(4-оксиметил)-2-циклопентен -1-ил)- 9Н-пурин-2-ил/изобутирамид (1,33 г, 3,73 ммоль), приготовленный как описано в примере 27, перемешивали с соляной кислотой 1Н (40 мл) в течение 2 дн при окружающей температуре. Величина рН регулировалась до 7,0 с помощью гидроокиси натрия, и смесь выпаривали до сухости. Остаточные твердые вещества перетирали с EtOH (3х25 мл). Этанол выпаривали, получая в остатке желтое стекло, которое хроматографировали на силикагеле. Целевое соединение было элюировано 3% метанолом-этилацетатом в виде бесцветной твердой пе( 20 ны (857 мг, 80%). 1Н–ЯМР и a )D идентичны аналогичным показателям целевого соединения из примера 19. Пример 29. (-)-(1S,4R)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-циклопентен-1-метанолгидрохлорид. (-)-(1S,4R)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-циклопентен-1-метанол (1,90 г, приблизительно 6,3 ммоль при 1Н–ЯМР) растворяли в соляной кислоте 1Н (7,0 мл) и этаноле. Раствор выпаривали до сухости и остаток вновь растворяли в этаноле (15 мл). Этилацетат добавляли медленно, до полного объема 80 мл. Порошок неопределенного белого цвета, который образовывался, отфильтровывали и высушивали под вакуумом для получения целевого соединения (2,07 г, 97%); т. пл. коллапсирует при 125– 130оС, дес.выше 138оС. (a )20 589 ( 20 –27,1o, a )436 –52,3o (c 0,199, MeOH). Анализ, подсчитанный для С 14Н18N6O. HCl. O. 8H 2O: Рассчитано: C 49,87; H 6,16; N 24,92; Cl 10,51. Найдено: C 49,91; H 6,16; N 24,96; Cl 10,52. Пример 30. (-)-(1S, 4R)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-циклопентен-1-метанолдигидрохлорид. (-)-(1S, 4R)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-ил/-2-циклопентен-1-метанол (857 мг, 3,00 ммоль) растворяли в этаноле-этилацетате и добавляли эфирной соляной кислоты 1Н (12 мл). Мелкий белый осадок промывали этилацетатом и высуши вали под вакуумом для получения целевого соединения (642 мг, 75%); т. пл. 176–180о дес. Анализ, подсчитанный для С 14Н18N6O. 2HCl: Рассчитано: C 46,81; H 5,61; N 23,39; Cl 19,74. Найдено: C 46,82, H 5,64; N 23,33; Cl 19,67. Пример 31. (1R,4S)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол Одифосфат. (+)–(1R, 4S)-цис-4 -(2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанол O-дифосфат, приготовленный согласно описанному в примере 9, преобразовывали в соль триэтиламмония путем использования раствора, содержаще го 0,5 ммоль монофосфа та в качестве соли аммония, соединение его в 10 мл бикарбоната триэтиламмония 0,5 М и с сушкой в вакууме, за чем следовало другое добавление 10 мл бикарбоната триэтиламмония 0,5М, затем суши ли. После это го трижды добавляли по 10 мл ацетонитрила и высуши вали в вакууме. Затем растворяли в 10 мл 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинона (Aldrich), затем 0,43 г 1,1’-карбонилдиимидазола (Aldrich, 2,6 ммоль) добавляли и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Добавляли метанол (0,18 мл, 4,5 ммоль) и перемешивали в течение 30 мин. Добавляли трибутиламмоний фосфат (Sigma, 12 г, 26 ммоль), перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре, затем добавляли 1 г до полнительно трибутиламмонийгидрофосфа та (2,2 ммоль) и перемеши вали 8 ч при 40оС, затем 50 мл воды было добавлено. Были получены как О-дифосфат, так и О-трифосфат, так как трибутиламмонийпирофосфат со держал примесь ортофосфата. Продукты реакции были разделены с помощью ионнообменной хроматографии Sephadex с диэтиламиноэтилом в колонке 2,5 х 18 см Sephadex A25 (Pharmacia) с диэтиламиноэтилом, которая была уравновешена с помощью 50 мМ бикарбоната аммония. Колонку промывали с 1 л 50 мМ бикарбоната аммония (БКА), затем с 2 л линейного градиента от 50 до 800 мМ БКА для элюи рования целевого соединения, за чем следовал трифосфат, более подробно описано в примере 32. Фракции, содержащие дифосфат, со бирали вместе, вы сушивали в вакууме, вновь растворяли в воде, а затем вновь сушили, получая аммониевую соль целевого соединения (0,077 ммоль, выход 15%). Сканирование в УФ: в 0,1 М НСl lmax 254 и 298 нм, при рН 7 lmax 259 и 284 нм; в NaOH 0,1М l max 259 и 284 нм. Аликвотное количество дифосфа та обрабатывали щелочной фосфа тазой (желудок теленка, Boehringer Mannheim), отбирали несколько раз пробы и проявляли на тонкослойной хроматографии (полиэтиленимин-целлюлоза, Бринкман, 1М LiCl/IM муравьиная кислота 1: 1). Отмечая последующее превраще ние дифосфа та в монофосфат нук леозида. Конечное количество высвобожденного фосфа та определяли с помощью метода Бенчини (Bencini D. A. Wild J. R. и O’Donavan, G.A. Analytical Biochemystry 132: 254–258, 1983), и соотношение основания/фосфат определяли равным 1,0/11,5, что указывает на присутствие неорганического фосфа та. Чистота в УФ составляла 99,8% на аналити ческой ВЭЖХ (обменная колонка с сильным анионом, элюируе мая градиентом от 10 мМ до 1М фосфа та аммония, рН 5,5). Пример 32. (+)-(1R, 4S)-4-(2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-мета нол Oтрифосфат. Непрерывное элюирование колонки, описанной в примере 31, давало после выпаривания аммониевую соль целево го соединения. Эту соль преобразовывали в натриевую соль пропусканием через колонку со смолой Dabex AG 50 W–X8 (Bio–Rad) (в форме натрия, 20 мл). Фракции, содержащие нуклеотид, концентрировали в ва кууме для получения 0,31 ммоль (61%). Сканирование в УФ: в 0,1 М lmax 254 и 299 нм; при рН7 lmax 259 и 284 нм; в 0,1М NaOH lmax 259 и 284 нм; Значение враще ния плоскости поляризации света в воде при 3,83 г/100 мл составляло (a)20+43,2о при 589 нм. Чистота в УФ составляла 99,1% на ана литической ВЭЖХ (обменную колонку с сильным анионом элюировали с градиентом от 10 мМ до 1М аммонийфосфата, рН 5,5), с 0,9% присутствующего дифосфа та. Аликвотное количество трифосфата обрабатывали щелочной фосфатазой (желудок теленка, Boehringer Mannheim), отбирали пробы несколько раз и проявляли на тонкослойной хроматографии (полиэтилениминцеллюлоза, Бринкман, 1М LiCl/1M муравьиной кислоты 1: 1). Последова тельное преобразование трифосфа та в ди фосфат в монофосфат в н уклеозид было отмечено. Конечное количество фосфа та, вы деленного при этом, определялось по методу Бен чини (Bencini D. A. Wild. J. R. и O'Donovan, G.A. Analytical Biochemistry 132; 254–258, 1983), и соотношение основание/фосфат бы ло определено как 1,0/2,7. Пример 33. (1R,4S)-4-(2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанол O-дифосфат. О-монофосфат (-)-(1R, 4S)-цис-4-(2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанола, приготовленный как описано в примере 8, преобразовывали в соль триэтиламмония путем раствора, содержащего 0,49 ммоль монофосфа та в качестве соли аммония, соединяли с 5 мл бикарбоната триэтиламмония 0,5 М и сушили в ва кууме, за чем следова ло еще 5 мл бикарбоната триэти ламмония 0,5М, затем повторяли дважды. После этого три раза добавляли 5 мл ацетонитрила и высушивали в вакууме. Растворяли в 7 мл 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинона (Aldrich), затем 0,39 г 1,1'-карбонилдиимидазола (Aldrich, 2,4 ммоль) добавляли и перемешивали в те чение 30 мин при комнатной температуре. Добавляли мета нол (0,16 мл, 4,0 ммоль) и перемешивали в те чение 30 мин. Трибутиламмонийпирофосфат (полученный путем обмена с солью тетранатрийпирофосфата на водород на ионообменной смоле, затем нейтрализовали трибутиламином и сушили, 2,4 ммоль), перемеши вали в те чение 18 ч при комнатной температуре, затем добавляли 50 мл воды. Как О-дифосфат, так и О-трифосфат были получены, так как пирофосфат три бутиламмония содержал примесь ортофосфа та. Продукты реакции разделяли с помощью ионообменной хроматографии Sephadex с диэтиламиноэтилом в колонке 2,5 х 18 см Sephdex A25 (Pharmacia) с диэтиламиноэтилом, кото рая была уравновешена с помощью 50 мМ бикарбоната аммония (БКА), колонку промывали с помощью 1 л 100 мМ БКА, затем с 2 л линейного градиента от 100 до 800 мМ БКА для элюирования целевого соединения, за чем следовала трифосфатаза, более подробно описано в примере 34. Фракции, содержащие дифосфат, со бирали вместе, высушивали в вакууме, вновь растворяли в во де, а затем дважды повторяли до получения выхо да аммонийной соли целевого соединения (0,032 ммоль, выход 6%). Сканирование в УФ: в 0,1М HCl lmax 254 и 298 нм; при рН7 lmax 259 и 284 нм; в 0,1 М NaOH l max 258 и 284 нм. Аликвотное количество дифосфа та было обработа но щелочной фосфа тазой (желудок теленка Boehrenger Mannheim), отбирались несколько раз пробы и проявлялись на тонкослойной хроматографии (полиэтилениминцеллюлоза, Бринкман, 1М LiCi/1М муравьиной кислоты 1: 1). Последующее превраще ние дифосфа та в монофосфат в нуклеозид было отмечено. Конечное количество высвобожденного фосфа та определяли по методу Бенчини (Bencini D.A. Wild J. R. и O'Donovan, G. A. Analytical Biochemistry 132; 254, 1083), и соотноше ние основание/фосфат, как было определено, составило 1,0/4,7, что указывает на присутствие неорганического фосфата. Чистота в УФ составила 97% на аналитической ВЭЖХ (обменная колонка с сильным анионом, элюируемая градиентом от 10 мМ до 1 М аммонийфосфа та, рН 5,5). Пример 34. (1S, 4R)-4-(2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил)-2-(циклопентен-1-метанол Отрифосфат. Продолжение элюирования колонки, описанное в примере 33, давало после выпаривания аммонийную соль целевого соединения. Эту соль превращали в натриевую соль путем пропускания через колонку со соломой DoWex AG–50 W–X8 (Bio–Rad) (форма натрия, 20 мл). Фракции, содержащие нуклеотид, концентрировали в ва кууме, что давало 0,4 ммоль (81%). Сканирование в УФ: в 0,1 М HCl lmax 254 и 299 нм; при рН7 lmax 259 и 284 нм; в 0,1 М NaOH lmax 259 и 284 нм. Значение вращения плоскости поляризации света в воде при 6,14 г/100 мл составляло (a)20 –47,1оС при 589 нм. Чистота в УФ составила 99,5% на аналитической ВЭЖХ (обменная колонка с сильным анионом, элюируемая градиентом от 10 мМ до 1М аммонийфосфата, рН 5,5) с 0,5% присутствующе го дифосфата. Аликвотное количество три фосфа та обрабаты вали щелочной фосфатазой (желудок теленка, Bohringer Mannleim), отбирали пробы несколько раз и проявляли на тонкослойной хроматографии (полиэтилениминцеллюлоза, Бринкман, 1M LiCl/1M муравьиной кислоты 1: 1). Последующее превраще ние трифосфа та в ди фосфат в монофосфат в н уклеозид было отмечено. Конечное количество высвобожденного фосфа та определяли по методу Бенчини (Bencini D. A. Wild J. R. и O', До нобан, G. A. Analytical Biochemystry 132: 254–258, 1983), и соотношение основание/фосфат бы ло определено равным 1,0/2,8. Пример 35. (1S, 4R)-4(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанол. (1S, 4R)-4(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанол (274 мг, 1,00 ммоль). N-циклопропил-N-метиламин (0,71 г, 10 ммоль) и абсолютный эталон (6 мл). Остаток подвергали хроматографии на силикагеле. Целевое соединение элюировали с 10% метанолом-хлороформом в виде бесцветного стекла. Выпаривание раствора этанола и сушка пятиокисью фосфора при 0,2 мм рт.ст. давали це( 20 левое соединение в виде белой твердой пены (293 мг, 98%); 1Н-ЯМР и a )589 идентичны аналогичным значениям целевого соединения из примера 11. Пример А. Составы в ви де таблеток. Соста вы А, В и С гото вят гранулированием в увлажненном состоянии ингредиентов с раствором повидона, за чем следуе т до бавление стеарата магния и прессование. Состав А мг/таблетку Активный ингредиент 250 Лактоза В. Р. Повидон В. Р. Щелочной крахмальный гликоллят Стеарат магния Активный ингредиент Лактоза В. Р. Повидон В. Р. Щелочной крахмальный гликоллят Состав В Активный ингредиент Лактоза Avicel PH 101 Повидон В. Р. Щелочной крахмальный гликоллят Стеарат магния Активный ингредиент Лактоза – Avicel PH 101 Повидон В. Р. Щелочной крахмальный гликоллят Стеарат магния 210 15 20 500 250 26 9 12 300 мг/таблетку 250 150 60 15 20 5 500 250 26 9 12 3 300 Состав С мг/таблетку Активный ингредиент 100 Лактоза 200 Крахмал 50 Повидон 5 Стеарат магния 4 389 Соста вы D и E готовят прямым прессованием смешенных ингредиентов. Лактоза в составе Е представляет собой лактозу ти па непосредственного прессования (Dairy Crest "Zeparox"). Состав D Активный ингредиент Предварительно желати низированный крахмал NF 15 мг/таблетку 250 150 400 Состав Е мг/таблетку Активный ингредиент 250 Лактоза 150 Avicel 100 500 Состав F (Состав с ре гулируемым высвобождением). Этот состав готовят гранулированием во влажном состоянии ингредиентов (приведены ниже) с раствором повидона, за чем следует до бавление стеарата магния и прессование, мг/таблетку: Активный ингредиент 500 Окиси пропилметилцеллюлоза (Methocel K4M Prenium) 112 Лактоза В.Р. 53 Повидон В. Р. 28 Стеарат магния 7 700 Выделение лекарственного препарата происхо дит в течение периода примерно 6–8 ч и завершается по истечении 12 ч. Пример В. Составы в ви де капсул. Состав А. Состав в капсуле готовят смеши ванием ингредиентов соста ва D в примере А, приведенном выше, и заполнением в желати новую капсулу из двух частей. Состава B (infra) готовят подобным образом. Состав В мг/капсулу Активный ингредиент 250 Лактоза В. Р. 143 Щелочной крахмальный гликоллят 25 Стеарат магния 2 420 Состав С мг/капсулу Активный ингредиент 250 Macrogol 4000 В. Р. 350 600 Капсулы состава С го товят расплавлением Macrogol 4000 ВР, диспергированием активного ингредиента в расплаве и заполнением расплавом твердой желатиновой капсулы из двух частей. Состав D мг/капсулу Активный ингредиент 250 Лецитин 100 Арахи совое масло 100 450 Капсулы состава D готовят диспергированием активного ингредиента в лецитине и арахи совом масле и заполнением этой дисперсии в мягкие, эластичные желатиновые капсулы. Состав Е (капсулы регулируе мого высвобождения). Нижеследующий состав капсулы с контролируе мым высвобождением получают экструдирова нием ингредиентов (а), (б) и (в) с использованием экструдера, за чем следует приданное шарообразной формы экструдату и сушка. Высушенные гранулы затем покрывают мембраной контролируемого высвобождения (г) и заполняют в твердую желатиновую капсулу из двух частей, мг/капсулу: а) Активный ингредиент б) Микрокристаллическая целлюлоза в) Лактоза В. Р. г) Этилцеллюлоза Пример С. Состав для инъекций. Состав А. Активный ингредиент Раствор соляной кислоты, 0, 1М, или Раствор гидроокиси натрия, 0, 1М, к-во, достаточное для рН 250 125 13 513 125 0,200 г от 4,0 до 7,0 Стерильная вода, к-во, достаточное до 10 мг Активный ингредиент растворяют в большей части воды (35–40оС) и рН регулируют до диапазона от 4,0 до 7,0 с помощью соляной кислоты или гидроокиси натрия, по необхо димости. Порцию затем доводят до объема с помощью воды и фильтруют че рез стерильный микропористый фильтр в стерильный сосуд из янтарного стекла (тип 1) и герметизируют сте рильными пробками и средствами перегерметизации. Состав В. Активный ингредиент 0,125 г Стерильный, свободный от пирогена, фосфатный буфер рН 7, к-во, достаточное до 25 мл Пример D. Вн утримышечное инъецирование. Активный ингредиент 0,20 г Бензиловый спирт 0,10 г Гликофурол 75 1,45 г Воды для инъекций, к-во, достаточное до 3,00 мл Активный ингредиент растворяют в гликофуроле. Бензиловый спирт затем добавляют и растворяют и воду добавляют до 3 мл. Смесь затем фильтруют че рез стерильный микропористый фильтр и гермети зируют в стерильных 3 мл сосудах из янтарного стекла (типа 1). Пример Е. Сироп. Активный ингредиент 0,25 г Раствор сорбитола 1,50 г Глицерин 2,00 г Бензоат натрия 0,005 г Корригент, Peach 17, 42.3169 0,0125 мл Очищенная вода, к-во, достаточное до 5,00 мл Активный ингредиент раство ряют в смеси глицерина и большей части очищенной воды. Водный раствор бензоата натрия затем добавляют к этому раствору, за чем следует до бавление раствора сорбитола и наконец, корригента. Объем доводят до нужного очищенной водой и хорошо смешивают. Пример F. Суп позиторий, мг/суп позиторий Активный ингредиент 250 Твердый жир, ВР (Witesol H15 Dynanit Nobel) 1770 2020 Одну пятую от Witesol H15 расплавляют в котле с паровой рубашкой при не выше 45 оС. Активный компонент просеивают через сито в 200 мкм и добавляют к расплавленной основе со смеши ванием, используя аппарат сильверсона, снабженный режущей головкой, до получения мягкой дисперсии. Поддерживая температуру смеси в 45оС, до бавляют остальную часть Witesol H15 к суспензии и перемешивают для обеспечения гомогенной смеси. Всю суспензию пропускают через сито из нержавеющей стали в 250 мкм и при постоянном перемешивании дают ей остыть до 40оС. При температуре от 38 до 40оС 2,02 г смеси заполняют в подхо дящие пластмассовые формы в 2 мл. Суппозитории оставляют остывать до комнатной температуры. Пример G. Вагинальные суппозитории, мг/суп позиторий: Активный ингредиент 250 Ан гидридная декстроза 380 Карто фельный крахмал 363 Стеарат магния 7 1000 Вышеуказанные ингредиенты непосредственно и вагинальные суппозитории готовят путем прессования полученной смеси. Противовирусная активность. Активность против ВИЧ. (1S,4R)-цис-4-/2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-метанол испытывали на активность против ВИЧ в клетках ТМ4 согласно мето ду (Averetl D. R. J. Uirol. Methods, 23, 1989, 163–276), и как оказалось, имеет значение IC50 в 4,0+1,4 мкМ (среднее из 10 измерений). Активность против ВГВ. Клетка-продуцент ВГВ человека, линия НерG2, 2.2.15, описанная и охарактеризованная (Sells et al. PNAS 84: 1005, 1987 и у. Uirol, 62: 2836, 1988), как было показано, разделяет многие характеристи ки хронически инфицированного ге патоцита ВГВ. Она является инфекционной, как подтверждено способностью вызывать болезнь у шимпанзе. Для испытания соединений в отноше нии активности против ВГВ, однослойные культуры обрабатывали испытываемым соединением 50–200 мкМ на 10 дн. Всплывшую сре ду, со держащую внеклеточный вирион ДНК (частицы Дейна), собирали на дни 3, 6 и 10, обрабатывали протеиназой К (1 мг/мл) и додецилсульфа том натрия (1%), и инкубировали при 50оС в течение 1 ч. ДНК экстрагирова ли равными объемами фенола, за чем следовал хлороформ, и после этого осаждали ацетатом аммония и пропанолом. Осадок ДНК растворяли и собирали на нитроцеллюлозе, используя процедуру Schlecher и Schull (Sand S. 10 Optical Ave. Keen, NH 03431, Publication 700, 1987), и обрабатывали как описано (Southern; J. Mol. Biol. 98, 503, 1975). Клетки собирали в виде уро жая и получали внутриклеточную ДНК после лизиса клеток с помощью гуа нидинизотиоцианата. Внутриклеточную ДНК сбрасывали таким же образом, как и экстраклеточную ДНК. После осаждения ацетатом аммония и пропанолом осадок внутриклеточной ДНК растворяли, разрывали рестрикционной эндонуклеазой, Hind III, наносили на агарозный гель и затем обрабаты вали, как описано Southenn для определения количества репликативных промежуточных форм. Противови русный эффект ле карственного средства определяли измерением по крайней мере 100-кратного уменьше ния количества частиц Дейна, экструдированных и культуральную среду, и подобного снижения количества внутриклеточных репликативных промежуточных веществ. (1S,4R)-цис-4-/2-амино-6-(N-циклопропил-N-метиламино)-9Н-пурин-9-ил/-2-циклопентен-1-мета нол испытывали согласно вышеназванной процедуре, и как, оказалось, он имеет мощную активность против ВГВ при 100 мкМ. Токсичность. Соединения примеров 7 и 11 испытывались на инги бирова ние роста клеток в соответствии со следующей методикой. Клетки НерG2/G3 высевались, как при небольшой (слабой)/субконфлюэнтной 2500 клеток (ячейку), так и густой (тя желой)/конфлюэнтной 50000 клеток (ячейку) плотностях в 96-ячеистую пластину и ин кубировались в интервале концентрацией лекарственного препарата (0,8 200 ЛМ) в те чение 9 дн с ежедневными заменами сред. Рост каждой культуры определялся с использованием специфического к ДНК красителя Хе хст 33342 в чередующиеся дни. В этих анализах применялись как слабая, так и густая плотности клеток, потому что ингибирование клеточной репликации указанными соединениями должно быть более явным в субконфлюэнтных, растущи х к ультурах, чем в конфлюэнтных, стационарных культурах. Результа ты, полученные в данных испыта ниях, показаны на чертеже, где приведен график, из которого можно видеть, что сое динения проявляют низкую токсичность. Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 – 72 – 89 (03122) 2 – 57 – 03