Трифенілалкенові похідні і їх застосування як селективних модуляторів рецепторів естрогену

1. Сполука формули: і) Х означає NH або S; a n означає ціле число від 1 до 4; і R4 і R5, які однакові або різні, означають алкіл з 14 атомами вуглецю, Н, -CH2СН2ОН або –СН2С СН; або R4 і R5 утворюють N-вмісний п'яти- або шестичленний цикл або гетероароматичний цикл; або іі) Х означає О і n означає ціле число від 1 до 4; і один з R4 і R5 означає -CH2СН2ОН або –СН2С СН, а інший означає Н або С1-С4 алкіл; або R4 і R5 утворюють імідазольне кільце або N-вмісний шестичленний цикл або гетероароматичний цикл; R2 означає b) –Y-(CH2)nCH2-O-R6, де і) Y означає О і n означає ціле число від 1 до 4; і R6 означає Н, -СН2СН2OН або –СН2СН2Сl; або іі) Y означає NH або S і n означає ціле число від 1 до 4; і R6 означає -СН2СН2OН або –СН2СН2Сl; R2 означає с)2,3-дигідроксипропокси, 2-метилсульфамілетокси, 2-хлоретокси, 1-етил-2-гідроксіетокси, або 2,2діетил-2-гідроксіетокси; і R3 означає Н, галоген, ОН або –ОСН3; або її стереоізомер або нетоксична фармацевтично прийнятна сіль або естер, або їх суміші. 2. Трифенілетилен за п.1, де R2 означає R4 X (CH2) n CH2 N R5 і Х, n, R4 і R5, такі, як визначено в п.1. 3. Трифенілетилен за п.2, де Х означає О. 4. Трифенілетилен за п.3, де n дорівнює 1 і UA (21) 2002065002 (22) 01.11.2000 (24) 15.08.2006 (86) PCT/FI00/00946, 01.11.2000 (31) 60/165,828 (32) 16.11.1999 (33) US (46) 01.08.2006, Бюл. № 8, 2006 р. (72) Седервалль Марья-Лііса, FI, Калапудас Арья, FI, Ламмінтауста Рісто, FI, Хяркенен Піркко, FI, Вяянянен Калерво, FI, Кангас Лаурі, FI (73) ХОРМОС МЕДІКАЛ КОРПОРЕЙШН, FI (56) EP 0095875 (FARMOS GROUP LTD.), 7 December 1983 WO 9607402 (ORIONYHTYMA OY), 14 March 1996 WO 9635417(CANCER RESEARCH CAMPAIGN TECHNOLOGY LIMITED), 14 Nonember 1996 2 (19) 1 3 76409 4 один з R4 і R5 означає -CH2СН2ОН або – 1-(4-{2-[2-хлоретоксі](етокси}феніл)-4-хлор-1-(4СН2С СН; а інший означає Н або С1-С4 алкіл; або хлорфеніл)-2-фенілбут-1-ен і R4 і R5 утворюють цикл піперидину або імідазолу. 1-(4-{2-[2-хлоретоксі]етокси}феніл)-4-хлор-1-(45. Трифенілетилен за п.2, де Х означає S. фторфеніл)-2-фенілбут-1-ен. 6. Трифенілетилен за п.2, де Х означає NH. 15. Сполука за п.12, що являє собою 2-[4-(4-хлор7. Сполука за п.4, яку вибирають з групи, що вклю1,2-дифенілбут-1-еніл)фенілсульфаніл]етанол. чає 16. Сполука за п.13, що являє собою 2-[4-(4-хлор1-{2-[4-(4-хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)феноксі] 1,2-дифенілбут-1-еніл)феніламіно]етанол. етил}-1Н-імідазол, 17. Сполука за п.1, яку вибирають з групи, що {2-[4-(4-хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)феноксі] включає етил}метилпроп-2-ініламін, 3-[4-(4-хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)феноксиметил] 2-({2-[4-(4-хлор-1,2-дифеніл-бут-1-еніл)феноксі] пентан-3-ол, етил}метиламіно)етанол, 2-[4-(4-хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)фенокси]бутан3-{4-хлор-1-[4-(2-імідазол-1-іл-етокси)феніл]-2-фе1-ол, нілбут-1-еніл}фенол, 3-[4-(4-хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)фенокси] про1-(2-{4-[4-хлор-2-(2-хлорфеніл)-1-фенілбут-1-еніл] пан-1,2-діол, феноксі}-етил)піперидин, 3-{4-[4-хлор-1-(4-хлорфеніл)-2-фенілбут-1-еніл] 1-(2-{4-[4-хлор-2-(3-метоксифеніл)-1-фенілбут-1фенокси}пропан-1,2-діол, еніл]феноксі}-етил)піперидин і 4-хлор-1-[4-(2-метилсульфанілетокси)феніл]-1,21-(2-{4-[4-хлор-2-(2-метоксифеніл)-1-фенілбут-1дифенілбут-1-ен, еніл]-феноксі}етил)піперидин. 4-хлор-1-[4-(2-хлоретокси)феніл]-1,2-біс(4-хлор8. Сполука за п.5, що являє собою 1-[4-(2-диметифеніл)бут-1-ен. ламіноетилсульфаніл)феніл]-1,2-дифеніл-4-хлор18. Фармацевтична композиція, що містить ефекбут-1-eн. тивну для одержання тканиноспецифічного естро9. Сполука за п.6, що являє собою N-[4-(4-хлоргенного і/ або антиестрогенного ефекту кількість 1,2-дифенілбут-1-еніл)феніл]-N',N'-диметилетанвказаного селективного модулятора рецепторів 1,2-діамін. естрогену, сполуки за п.1 або її нетоксичної фар10. Трифенілетилен за п.1, де R2 означає мацевтично прийнятної солі, і фармацевтично су-Y-(CH2)nCH2-O-R6, місного прийнятного носія. де Y, n і R6 такі, як визначено в п.1. 19. Спосіб продукування тканиноспецифічного 11. Трифенілетилен за п.10, де Y означає О. естрогенного і/або антиестрогенного ефекту у па12. Трифенілетилен за п.10, де Y означає S. цієнта, для якого вказана дія є бажаною, при якому 13. Трифенілетилен за п.10, де Y означає NH. вказаному пацієнту вводять вказаний селективний 14. Сполука за п.11, яку вибирають з групи, що модулятор рецепторів естрогену, сполуку за п.1 включає або її нетоксичну фармацевтично прийнятну сіль, 2-{2-[4-(4-хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)фенокси] в кількості, достатній для створення необхідної дії. етокси}-етанол, Даний винахід стосується похідних трифенілалкену і їх використання як селективних модуляторів рецепторів естрогенів (SERMs-СЕРМів). Публікації і інші матеріали, що використовуються для освітлення обґрунтування створення винаходу, і, зокрема, описи випадків, що дають додаткові подробиці, що стосуються практичного застосування, включені тут як посилання. Естрогени відомі як жіночі статеві гормони. Однак, пізніше були описані багато які тканеспецифічні характеристики естрогенів в органах, які по класичних уявленнях не вважаються естроген-чутливими або естроген-реагуючими. Під час менопаузи секреція естрогенів різко знижується. Згодом у немолодих жінок розвиваються звичайно клімактеричні симптоми, що включають припливи, пітливість, безсоння, депресію, головний біль, вагінальну сухість, серцево-судинні симптоми, недержання сечі, відчуття набухання, болючості молочних залоз і стомлюваність. Тривалий дефіцит естрогенів викликає серцево-судинні розлади і остеопороз, який підвищує ризик переломів кісток і госпіталізацій, які є такими, що дорого коштують для суспільства. Для лікування клімактеричних симптомів всі в більшій мірі використовують естрогени. Але, з іншого боку, естрогени підвищують ризик раку матки і молочних залоз (Lobo, 1995). Показано, що естрогени корисні також для профілактики хвороби Альцгеймера (Henderson, 1997) і для зниження LDL-показників холестерину і тим самим попередження серцево-судинних захворювань (Grodstein & Stampfer, 1998). Необхідні нові терапевтичні способи, які мали б переваги естрогенів, але без ризику виникнення раку. Були розроблені селективні модулятори рецепторів естрогенів (СЕРМи), що повністю задовольняють вказаним вимогам (Macgregor & Jordan, 1998). Однак, ті, що використовуються в цей час СЕРМи володіють властивостями, які далекі від оптимальних. Наприклад, застосування ралоксифену обмежене внаслідок його сильних антиестрогенних властивостей, які викликають і посилюють клімактеричні симптоми, при сприятливому впливі на кістки (Khovidhunkit & Shoback, 1999). Особливо бажано одержати тканеспецифічні естрогени, які можна було б використати для лікування клімактеричних симптомів у жінок, остеопорозу, хвороби Альцгеймера і/або серцево-судинних захворювань 5 76409 6 без ризику виникнення раку. В оптимальному випадку нові СЕРМи можна буде давати чоловікам для попередження остеопорозу, серцево-судинних захворювань і хвороби Альцгеймера без вияву в 4-положенні фенілу, шкідливих впливів естрогенів (гінекомастія, зниде R4 і R5 ження статевого потяга і т.д.). і) однакові, або метил, або етил; або Одна з цілей даного винаходу полягає в ствоіі) утворюють N-утримуючий п'ятичленний ренні нових селективних модуляторів рецепторів цикл; естрогенів. то R1 і R3 не можуть одночасно означати Н; і Іншою метою даного винаходу є створення b) коли R2 означає фармацевтичної композиції, що включає ефективне для одержання тканеспецифічного естрогенної і/або анти-естрогенної дії кількості вказаного в 4 - положенні фенілу, нового селективного модулятора естрогенних реде R4 і R5 однакові або різні і означають мецепторів - сполуки або її нетоксичної фармацевтитил або Н; або коли R2 означає -О-СН2СН2-ОН або чно прийнятної солі і фармацевтично сумісного -О-СН2СООН в 4-положенні фенілу, прийнятного носія. то R1 і R3 не можуть одночасно означати H Інша мета даного винаходу полягає в розробці або ОН в 4-положенні фенілу; і способу продукування тканеспецифічного естроякщо R1 означає ОН в 4 - положенні фенілу, генного і/або антиестрогенного ефекту у пацієнта, R3 не може означати Н. для якого вказаний ефект є бажаним, що включає Згідно з іншим аспектом винахід стосується введення вказаному пацієнту вказаного нового фармацевтичної композиції, що включає ефектиселективного модулятора рецепторів естрогену вну для одержання тканиноспецифічного естросполуки або її нетоксичної фармацевтично прийнгенного і/або антиестрогенного ефекту кількість ятної солі, в кількості, достатній для створення вказаного нового селективного модулятора рецепнеобхідної дії. торів естрогену - сполуки або її нетоксичної фарОтже, згідно з одним з аспектів даний винахід мацевтично прийнятної солі, і фармацевтично сустосується нових сполук - селективних модулятомісного прийнятного носія. рів рецепторів естрогену, загальної формули: R2 Ще один аспект винаходу стосується способу продукування тканиноспецифічного естрогенного і/або антиестрогенного ефекту у пацієнта, для якоR3 го вказаний ефект є бажаним, що включає вве(I), дення вказаному пацієнту вказаного нового селекR1 тивного модулятора рецепторів естрогену - сполуки або її нетоксичної фармацевтично прийнятної солі, в кількості, достатній для створення необхідCl ної дії. де R1 і R2, які однакові або різні і позначають Даний винахід стосується застосування нових а) Н, галоген, ОСН3, ОН або селективних модуляторів рецепторів естрогену b) (СЕРМів) і їх фармацевтичних препаратів чоловіR4 ками і жінками для лікування дегенеративних заX (CH2)n CH2 N хворювань і симптомів, викликаних дефіцитом R5 естрогену. Звичайно СЕРМи діють як естрогени в кістці і серцево-судинній системі, тоді як вони є де X означає О, NH або S; a n означає ціле чиантиестрогенними в тканині молочної залози. СЕсло від 1 до 4; і РМи можуть володіти агоністичними і антагоністиR4 і R5, які однакові або різні і означають алкіл чними ефектами також і в інших тканинах. У залез 1-4 атомами вуглецю, Н, -СН2С=СН або жності від їх хімічної структури і гормональних СН2СН2ОН; або характеристик деякі сполуки можуть особливо підR4 і R5 утворюють той, що N-містить п'ятиходити для немолодих жінок з метою попереабо шестичленний цикл або гетероароматичний дження остеопорозу, тоді як інші (не фемінізуючі цикл; або естрогени) можуть також бути використані чоловіc)-Y-(CH2)nCH2-O-R6, ками для попередження остеопорозу, серцеводе Y означає О, NH або S і n означає ціле чисудинних захворювань і хвороби Альцгеймера. сло від 1 до 4; і Деякі сполуки особливо підходять для лікування R6 означає H, -СН2СН2ОН або -СН2СН2С1; або клімактеричних симптомів у жінок в період меноd) 2,3-дигідроксипропокси, 2-метилсульфаміпаузи. Загальна характеристика вищезгаданих летокси, 2-хлоретокси, 1-етил-2-гідроксіетокси, 2, сполук полягає в тому, що вони є антиестроген2-діетил-2-гідрокси-етокси або карбоксиметокси, і ними в молочній залозі і перешкоджають розросR3 означає H, галоген, ОН або -ОСН3; і їх нетанню ракових клітин молочної залози. Вони є токсичних, фармацевтично прийнятних солей і слабими естрогенами в матці і не викликають раскладних ефірів, і їх сумішей, кових пухлин матки (побічна дія добре відомого при умові, що СЕРМа, тамоксифену). а) коли R2 означає Нові СЕРМи згідно з даним винаходом, таким чином, володіють тканиноспецифічними естроген 7 76409 ними і/або антиестрогенними ефектами in vitro і in vivo і корисні для попередження і лікування остеопорозу, серцево-судинних захворювань і хвороби Альцгеймера у чоловіків і жінок, а також для лікування клімактеричних симптомів і раку молочної залози у жінок. Сполуки формули (І) можуть бути одержані способом, який включає взаємодію сполуки формули (II), де R7 має ті ж значення, що вказані вище для R1 або R2, або є захищеною вказаною групою, R3' означає вищезгаданий R3 або захищений ОН, R8 означає бензил або тетрагідропіраніл, з металлоорганічною сполукою формули (III), де R9 означає Н, вищезгадані R1 і R2 або є захищеною вказаною групою, і М означає -Mg-галоген або Li, з одержанням сполуки формули (IV), 8 (VI), Гідроксисполука (VI) може бути перетворена у відповідний хлорид обробкою тіонілхлоридом або трифеніл-фосфін-чотирьоххлористим вуглецем в органічному розчиннику з одержанням формули (VII), Заявлені сполуки (І) одержують із сполук формули (VII), де R7' і/або R9' означають бензил-захищений -XCH2CH2OR6, обробкою Zn і ацетилхлоридом в органічному розчиннику або шляхом каталітичного гідрування. Інший спосіб одержання сполук формули (IV) представляє реакцію гідроалюмінування похідного "стиролу" формули (VIII), де R10 означає -СНО, -СН2ОН, -СООН або відповідний складний ефір і R3 приймає вищезгадані значення, з похідним бензофенону формули де R3', R7, R8 і R9 приймають вищезгадані значення. R8 означає тетрагідропіраніл, коли R7 або R9 означає -X-(CH2)nCH2-OR6, де X і n приймають значення, вказані для (І). Сполуку (IV) дегідратують за допомогою відповідного кислотного каталізатора, переважно з оцтовим ангідридом/ацетилхлоридом, одержуючи похідне трифенілетилену формули X (IX), Ще один спосіб одержання сполук по винаходу включає О-алкілування сполуки формули (V), де R7' і/або R9' означають ОН, алкілгалогенідним похідним формули R11-(СН2)m-галоген (X), де m означає ціле число від 1 до 5 і R11 означає галоген, R4 (CH2)n (V), CH2 N R5 або – OR6', де R6' означає R6 або захищений R6, або -COOR, з утворенням сполуки формули де R8' означає H або бензил, R7' і R9' означають R1 і R2 або бензил-захищений ОН, або бензил-захищений -ХСН2СН2OR6. Можливі захисні тетрагідропіранільні групи в R3, R7, R8 і R9 видаляють вказаним способом, одержуючи радикали R3, R7', R8' і R9'. Видалення можливої бензильної групи R8' може бути здійснене обробкою Zn і ацетилхлоридом в толуолі, що дає трифенілбутенол формули (XI), Сполуку формули (XI), де R11 означає гало (CH2)n 9 ген, піддають взаємодії з аміном формули R4 CH2 N R5 одержуючи сполуку формули 76409 10 ного. По завершенні періоду інкубування видаляють середовище. Експозицію для вивчення лікарських засобів починають негайно ж, додаючи свіже середовище з 5% десорбованою сироваткою. Половину клітин вирощують з естрадіолом, половину - без естрадіолу. Додають сполуки, що вивчаються (розчинені в етанолі при концентрації 0,01М і відповідно розбавлені поживним середовищем). Кінцеві концентрації сполук рівні 1, 10 і 100нМ, і 1 і 10мкМ. Клітини інкубують протягом чотирьох днів. Кількість живих клітин визначають через 4 дні (XII) за допомогою люмінометру на основі кількості АТФ і взаємодії люциферази, як описане Kangas'oм et al, 1984. Вказаний спосіб дозволяє провести оцінку екстрогенності на основі здатності сполук стимулювати зростання естроген-залежних Ще один спосіб одержання сполук формули клітин у відсутність естрадіолу. Естрогенність оці(VII) включає реакцію Мак-Маррі (McMurry) взаєнюють, порівнюючи максимальний стимул зросмодії похідного бензофенону формули тання (при будь-якій концентрації) для сполуки, що вивчається як процент від стимулу зростання під впливом естрадіолу (100% стимул). У даному до(XIII) слідженні антагонізм оцінюють при концентрації 1мкмоль/л як процент від теоретично повного (100%) антагонізму, що означає повне інгібування де R7' і R9' приймають вищезгадані значення, з естрадіол-стимулу. При високих концентраціях похідним 3-хлорпропіофенону формули молекули також можуть виявляти токсичність. Токсичність оцінюють як фракцію мертвих клітин (тоб(XIV) то 100% означає, що всі клітини при експозиції загинули). Результати представлені в таблиці 2. Оцінка естрогенності і антиестрогенності in де R3 приймає вищезгадані значення. vivo. Заявлена сполука формули (І), де R1 або R2 Класичний спосіб оцінки естрогенної і антиесозначає 2,2-діетил-2-гідроксіетокси, може бути трогенної дії представляє використання недорозодержана взаємодією сполуки формули (XI), де m винених маток мишей або пацюків (Terenius, дорівнює 1 і R11 означає -COOR, з етилмагнійб1971). Тварин у віці 18 днів піддають впливу споромідом. лук, що досліджуються протягом 3 днів. На четвеЗаявлена сполука формули (І), де R1 або R2 ртий день викликають асфіксію тварин за допомоозначає 1-етил-2-гідроксіетокси, може бути одергою СО2 і реєструють масу тіла і масу матки. жана О-алкілуванням сполуки формули (V), де R7' Естрогени збільшують розмір і масу маток (гістеабо R9' означає ОН, етила-бромбутиратом і відноротропний ефект), тоді як антиестрогени інгібують вленням одержаного складного ефіру літійалюмовказану дію. Сполуки, таким чином, дають нарізно гідридом. або з естрадіолом з метою оцінки як агоністичної, Оцінка естрогенних і антиестрогенних властитак і антагоністичної дій. Обидва результати привостей сполук в експериментах по зростанню кліведені в таблиці 3 у вигляді процента від стимулятин MCF-7 in vitro. ції естрогеном (100%) і як інгібування дії естрогену Естроген-чутливі людські ракові клітини моло(повне інгібування дорівнює 100%). значення дані чної залози, MCF-7 (McGrath clone), зберігають в при двох рівнях доз, низькому, тобто 3-5мг/кг, і RPMI-1640 середовищі, доповненою 10% навковисокому, тобто 10-50мг/кг. Естрогенна активність лоплідною сироваткою теляти, 2мМ L-глутаміну, може також бути оцінена після 4-тижневого ліку10мкг/мл інсуліну і 10мкг/мл гентаміцину. Клітини вання підданих оваріектомії пацюків на основі ровирощують як одношарові культури в 75см2 пласзміру матки. Вказане випробування здійснюють із тиковій колбі для тканинних культур (Nunc, сполуками структур, вказаних в таблиці 4. Roskilde, Denmark) в 25мл середовища при 37°С в Оцінка впливів на холестерин і кістки. атмосфері 95% повітря, 5% СО2 і пасивують два Сполуки дають р.о (per os) - п.о. самицям парази на тиждень. цюків протягом 4 або 5 тижнів щодня. По закінДля експериментів, що включають обробку гоченні відбирають пробу крові. Сироватку відділярмоном або антигормоном, клітини на експонентють центрифугуванням і заморожують до аналізу ній фазі зростання прекультивують у відсутності на загальну кількість холестерину. Зразки кістки естрадіолу один день. Клітини висівають на чашки беруть з хребта і великої гомілкової кістки. Фізичну при щільності 3,5 х103 клітини/лунка в 96-лункові міцність кісток вивчають, як описане Peng'oм et al., пластини для мікротитрування (Nunclon, Roskilde, 1994. Оцінка кістки включає: Denmark) і інкубують протягом 24 годин при 37°С, Зольну масу великогомілкового епіфізу. 95% повітря, 5% СО2, середовище RPMI-1640 (LЕпіфіз однієї великої гомілкової кістки обереглутамін і гентаміцин як указано вище) з 5% нажно відділяють і спалюють. Проби спалюють для вколоплідної сироватки теляти (двічі десорбована видалення води і органічного матеріалу. Зольна вугіллям, покритим шаром декстрану, для видамаса відповідає мінеральному вмісту кістки. Крім лення стероїдів) і у відсутності фенолового черво 11 76409 12 того, беруть проби кістки для вивчення гістомородній стороні кожного отвору прорізана борозенка фометрії. У деяких випадках остеогенез вивчають для третини рожен стегнової кістки. Стегнову кісшляхом уприскування тетрацикліну (50мг/кг тку пропилюють точно між серединою і нижньою 1.р.(в.б.) за 10 днів до аутопсії) і кальцеїну (20мг/кг третю тіла стегнової кістки. Кістку вставляють перв.б. за 3 дні до аутопсії). Спосіб заснований на пендикулярно і щільно у відповідний отвір на штабезповоротному скріпленні тетрацикліну зростаютиві. Малий рожен кожної кістки стикається з повечою кісткою і його визначенні за флуоресценцією рхнею пластини. Вказаний спосіб дає можливість (Peng et al., 1994). швидкої і стабільної фіксації кістки без викорисМеханічне тестування кісток. тання яких-небудь додаткових матеріалів. Угнуту Механічне тестування кісток здійснюють за компресійну головку 2,5мм в діаметрі виготовлядопомогою апарату для тестування матеріалу, ють з алюмінію. Комплекс головки-шийки стегнової сконструйованого в Університеті Oulu (Технічний кістки піддають випробуванню на руйнування, допоміжний відділ при медичному факультеті). створюючи паралельну тілу навантаження на гоТестуючий апарат заснований на принципі плеча ловку. важеля. Один кінець стального важеля фіксоваОцінка протипухлинної активності in vivo. ний. Пресуючий стрижень і мотор з приводом поПротипухлинну активність оцінюють, застосов'язані з плечем важеля при співвідношенні момевуючи модель DMBA - ДМБА (диметилнтів 12,5см/50см=1/4. Як мотор з приводом для бенз[а]антрацену). Однією разовою пероральною досягнення постійного вертикального рушення дозою ДМБА (12мг) ініціюють онкогенез молочної (0,62см/с) застосовують лінійний механізм (SEY 10 залози. Нові сполуки вводять протягом 5 тижнів, Magnetic Elektromotoren AG, Switzerland). На предо появи пухлин, що пальпуються. Розмір пухлин і суючий стрижень встановлюють взаємозамінну число нових пухлин уважно оцінюють раз на тижкомпресійну насадку для різних випробувань, що день до завершення терміну. Модель описана депередає стискаюче зусилля зразку і рухається з тально Kangas'oм et al., 1986. Зростання пухлин постійною швидкістю 0,155мм/с до максимального вимірюють один раз на тиждень. Всі пухлини клаповного навантаження 1200Н. Пресуючий стерсифікують, згідно з їх здатностями до зростання, жень прямує за допомогою осьового кулькопідшина ті, що прогресують, стабільні і що регресують. пнику для забезпечення вертикального переміПухлини, що щезли підраховують окремо. Пухлини щення. Стискаюче зусилля вимірюють за вважаються такими, що прогресують, якщо об'єм допомогою датчика температури - компенсованого пухлини виріс більш ніж у 8 разів за 5-тижневий зусилля, який сполучений з нерухомою частиною період дозованого введення лікарського засобу, і компресійної платформи. Електронні вимірюючі що регресують, якщо об'єм пухлини скоротився до пристрої включають калібрування датчика і регуоднієї четвертої або менше за величину від початлювання. кового об'єму. Якщо об'єм пухлини змінився меМіцність шийки стегнової кістки. нше або залишився незмінним, то пухлини вважаМаксимальне навантаження на шийку стегноються стабільними. вої кістки визначають за допомогою тесту на конЗагалом вищезгаданими способами оцінено сольне згинання. Штативом для кістки служить 46 сполук, які включені в список прикладів характовста пластина з поліметилметакрилату, в якій терних сполук, пронумерованих і перерахованих в просвердлено декілька отворів різного розміру. На таблиці 1. Таблиця 1. Перелік номерів (№) і назв характерних сполук № 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Сполука (Е)-(2-{4-[4-Хлор-1-(4-фторфеніл)-2-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)диметиламін (Z)-(2-{4-[4-Хлор-1-(4-фторфеніл)-2-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)диметиламін (Е)-(2-{4-[4-Хлор-1-(4-хлорфеніл)-2-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)диметиламін (Е)-(2-{4-[4-Хлор-1,2-біс(4-хлорфеніл)бут-1-еніл]фенокси}етил)-диметиламін (Z)-(2-{4-[4-Хлор-1,2-біс(4-хлорфеніл)бут-1-еніл]фенокси}етил)-диметиламін (Е)-4-Хлор-1-[4-(2-хлоретокси)феніл]-1,2-біс(4-хлорфеніл)-бут-1-ен (Z)-4-Хлор-1-[4-(2-хлоретокси)феніл]-1,2-біс(4-хлорфеніл)-бут-1-ен (Е)-2-{4-[4-Хлор-2-феніл-1-(4-фторфеніл)бут-1-еніл]фенокси}-етанол (Е)-2-{4-[4-Хлор-1,2-біс(4-хлорфеніл)бут-1-еніл]фенокси}етанол (Е)-3-{4-[4-Хлор-1-(4-хлорфеніл)-2-феніл-бут-1-еніл]фенокси}-пропан-1,2-діол (Z)-4-Хлор-1-[4-(2-метилсульфанілетокси)феніл]-1,2-ди-феніл-бут-1-ен (Е)-{4-[4-Хлор-1-(4-хлорфеніл)-2-фенілбут-1-еніл]фенокси}-оцтова кислота (Z)-{4-[4-Хлор-1-(4-хлорфеніл)-2-фенілбут-1-еніл]фенокси}-оцтова кислота (Е)-1-(4-{2-[(2-Хлоретокси]етокси}феніл)-4-хлор-1-(4-хлорфеніл)-2-феніл-бут-1-ен (Е)-1-(4-{2-[(2-Хлоретокси]етокси}феніл)-4-хлор-1-(4-фторфеніл)-2-феніл-бут-1-ен 2-(4-{4-Хлор-1-[4-(2-гідроксіетокси)феніл]-2-феніл-бут-1-еніл}-фенокси)-1-етанол (Е)-2-{4-[4-Хлор-2-феніл-1-(4-хлорфеніл)бут-1-еніл]фенокси}етанол (Z)-2-[3-(4-Хлор-1,2-дифеніл-бут-1-еніл)фенокси]етанол 13 76409 14 Продовження таблиці 1. № 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 3233 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 Сполука (Е)-2-{2-[4-(4-Хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)фенокси]етокси}етанол (г)-3-[4-(4-Хлор-1,2-дифеніл-бут-1-еніл)фенокси]пропан-1,2-діол (г)-1-{2-[4-(4-Хлор-1,2-дифеніл-бут-1-еніл)фенокси]етил}-1Н-імідазол (2)-2-({2-[4-(4-Хлор-1,2-дифеніл-бут-1-еніл)фенокси]етил}метил-аміно)етанол (Z)-(2-{4-[4-Хлор-2-(4-хлорфеніл)-1-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)диметиламін (Е)-(2-{4-[4-Хлор-2-(4-хлорфеніл)-1-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)диметиламін (Z)-(2-{4-[4-Хлор-2-(4-фторфеніл)-1-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)диметиламін (Z)-(2-{4-[4-Хлор-2-(4-хлорфеніл)-1-(4-метоксифеніл)бут-1-еніл]-фенокси}етил)диметиламін (Е)-(2-{4-[4-Хлор-2-(4-хлорфеніл)-1-(4-метоксифеніл)бут-1-еніл]-фенокси}етил)диметиламін (Z)-1-(2-{4-[4-Хлор-2-(3-метоксифеніл)-1-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)піперидин (E)-1-(2-{4-[4-Хлор-2-(3-метоксифеніл)-1-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)піперидин (Z)-1-(2-{4-[4-Хлор-2-(2-метоксифеніл)-1-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)піперидин (Е)-1-(2-{4-[4-Хлор-2-(2-метоксифеніл)-1-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)піперидин (Z)-1-[4-(2-Диметіламіноетілсульфаніл)феніл]-1,2-дифеніл-4-хлор-бут-1-ен (Z)-{2-[3-(4-Хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)фенокси]етил}диметиламі (E)-3-[4-Хлор-1-[4-(2-гідроксіетокси)феніл]-2-фенілбут-1-еніл}-фенол (Z)-3-[4-(4-Хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)фенокси]пропан-1-ол (Z)-2-[4-(4-Хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)феніл сульфаніл]етанол (г)-2-{4-[4-Хлор-2-(4-хлорфеніл)-1-(4-метоксифеніл)бут-1-еніл]-фенокси}етанол (Z)-1-(2-{4-[4-Хлор-2-(2-хлорфеніл)-1-фенілбут-1-еніл]фенокси}-етил)піперидин (Е)-3-{4-Хлор-1-[4-(2-імідазол-1-іл-етокси)феніл]-2-феніл-бут-1еніл}фенол (Z)-3-{4-Хлор-1-[4-(2-імідазол-1-іл-етокси)феніл]-2-феніл-бут-1-еніл}фенол (Z)-2-[4-(4-Хлор-1,2-дифеніл-бут-1-еніл)феніламіно]етанол (Z)-4-{1-(2-Хлоретіл)-2-[4-(2-гідроксіетокси)феніл]-2-феніл-вініл}фенол (Е)-4-{1-(2-Хлоретіл)-2-[4-(2-гідроксіетокси)феніл]-2-феніл-вініл}фенол (Z)-{2-[4-(4-Хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)фенокси]етил}метилпроп-2ініламін (Z)-3-[4-(4-Хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)феноксиметил]пентан-3-ол (Z)-2-[4-(4-Хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)фенокси]бутан-1-ол N-[4-(4-хлор-1,2-дифенілбут-1-еніл)феніл]-N',N'-диметилетан-1,2-діамін Структури характерних сполук представлені далі: Сполуки диметиламіноетокси фрагментів №32 R1 4-F 4-СІ 4-СІ H H 4-ОСН3 R3 H H 4-СІ 4-СІ 4-F 4-СІ № 1і2 3 4і5 23 і 24 25 26 і 27 №33 15 76409 16 №18 №47 Сполуки з диметиламіноетокси фрагментiв R1 R3 R № H H CH2CH2імідазоліл 21 H H CH2CH2N(CH3)CH2CH2OH 22 H 3-ОСН3 СН2СН2піперідініл 28 і 29 H 4-ОСН3 СН2СН2піперідініл 30 і 31 H 2-CI СН2СН2піперідініл 38 3-OH H СН2СН2імідазоліл 39 і 40 H H CH2CH2N(CH3)CH2C=CH 44 R1 4-Cl 4-Cl H 4-Cl 4-Cl 4-F H H H H H R3 4-Cl H H H H H H H H H H R CH2CH2Cl СН2СН(ОН)СН2ОН CH2CH2SCHa СН2СНООН CH2CH2OCH2CH2C1 СН2СН2ОСН2СН2С1 СН2СН2ОСН2СН2ОН СН2ОН(ОН)СН3ОН СН2СН2СН2ОН ОНО(ОН) (СН3СН3)2 СН(СН2СН3)СН2ОН № 6і7 10 11 12 і 13 14 15 19 20 35 45 46 Спирти №36 R1 4-F 4-СІ 4-ОСН2СН2ОН 4-СІ 3-ОН 4- ОСН3 H R3 H 4-Сl H H H 4-Cl 4-OH № 8 9 16 17 34 37 42 і 43 №41 17 76409 18 Естрогенні і антиестрогенні, а також цитотокних захворювань. До вказаних сполук відносяться сичні дії деяких сполук in vitro представлені в таб(з числа інших) сполуки №3, 19, 20 (також для чолиці 2, з якої можна бачити, що спектр гормональловіків) і 33 (для жінок) (таблиця 4). Передбачаної активності сполук варіює, і це створює ється також, що ті ж самі сполуки будуть корисні можливість застосування сполук при різних клінічдля лікування або попередження хвороби Альцних захворюваннях. геймера. В останньому випадку цитотоксична дія Сполуки зі слабою гормональною активністю, сполук повинна бути слабою, як, наприклад, у виякі ефективно знищують клітини MCF-7 (людські падку сполуки №33 (таблиця 2). Потрібно зазнаракові клітини молочної залози) при найбільших чити, що сполука №19 не надає ніякого естрогенконцентраціях (10мкМ), що досліджуються переного впливу на масу передміхурової залози в важно можуть бути використані при лікуванні раку дозах, які активні в моделі ДМБА-індукованої пухмолочної залози. Вказаним сполукам серед інших лини молочної залози (таблиці 6 і 7). Тому вона сполук належать номери №1, 3, 16, 19, 26, 27, 39 і може мати особливий успіх у чоловіків і може мати 40 (таблиця 2). Вказані сполуки і деякі інші є менш перевагу, крім лікування вищезгаданих станів, в ефективними естрогенами і антиестрогенами, чим лікуванні раку передміхурової залози. добре відомі лікарські засоби проти раку молочної Гормональний профіль сполук може бути в залози, тамоксифен і тореміфен (таблиця 3). Осодеяких випадках різним in vitro і in vivo, наприклад, бливий інтерес представляє сполука №19, оскісполука №1 володіє естрогенною дією in vitro льки вона є більш ефективним протираковим за(таблиця 2), але надає слабу естрогенну дію in собом in vivo в моделі ДМБА-індукованої пухлини vivo (таблиця 3). Таким чином, вищезгадані примолочної залози на пацюках, навіть при дуже никлади потрібно розглядати як приклади корисного зьких дозах, чим тамоксифен і тореміфен, що клізастосування при різних захворюваннях. Вказані нічно використовуються (таблиця 6). приклади не треба розглядати як обмежуючі можСполуки зі слабою естрогенною і антиестроливе застосування вказаних сполук при різних клігенною дією можуть бути особливо корисні для нічних показаннях. профілактики і лікування остеопорозу і клімактеПодробиці оцінок приведені в тексті. Максимаричних симптомів. До вказаних сполук (з числа льний естрогенний агонізм у відсутність естрадіінших) відносяться сполуки №3, 10, 11, 18, 19, 20, олу розраховують в процентах від естрадіол-сти25, 32, 36 і 44 (таблиці 2, 3 і 4). мулу (100%). Антиестрогенну властивість Сполуки, що знижують рівень холестерину, оцінюють при концентрації 1мкмоль/л, приймаючи можуть бути корисні як серцево-судинні лікарські теоретично повний антагонізм за 100 процентів. засоби. Для жінок допустима деяка естрогенність Токсичність при концентрації 10мкмоль/л оцінюють вказаних сполук, а сполуки, які не є естрогенами, як фракцію загиблих клітин в порівнянні з контроабо дуже слабі естрогени, і знижують рівень холелем (тобто 100 означає, що всі клітини загинули). стерину, можуть бути використані також чоловіЯк стандарти використані відомі антиестрогени. ками для профілактики і лікування серцево-судинТаблиця 2. Естрогенна, антиестрогенна і цитотоксична дії сполук, що досліджуються в клітинах MCF-7 Сполука № 1 1 2 3 4 5 6 8 9 10 11 14 15 16 17 18 19 20 21 Без естрадіолу (Е2) З естрадіолом (Е2) Максимальна загибель Антагонізм при 1мкМ Максимальна загибель Максимальний агоклітин (% фракції загиб- (% від повного анта- клітин (% фракції загибнізм (% від Е2) лих клітин) гонізму) лих клітин) 2 3 4 5 1 100 8 100 100 32 39 100 1 100 1 94 10 90 10 100 11 100 31 100 0 47 16 40 31 2 92 52 14 45 9 62 34 7 0 35 14 26 0 55 12 10 27 57 74 82 5 9 22 90 23 96 0 44 17 38 30 10 1 40 14 14 21 50 8 5 25 60 5 80 0 91 19 76409 20 Продовження таблиці 2. 1 22 23 24 25 26 27 28 30 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 Тамоксифен Тореміфен FC 1271 ІСІ 164384 2 1 14 46 17 0 0 3 5 11 20 0 45 8 4 0 0 0 54 9 78 24 15 18 31 37 23 9 3 15 89 89 42 97 99 86 91 86 0 0 50 17 39 99 68 63 0 23 80 78 6 15 100 100 50 100 Естрогенну дію оцінюють як процент від максимальної, естроген-індукованої дії. Антиестрогенну дію виражають як процент від теоретично повного інгібування дії естрогену (100%). Таблиця 3. Гістеротропна (наприклад, естрогенна) і естроген-антагоністична дія сполук, що досліджуються в 3-денному гістеротропному дослідженні на недорозвинутих матках пацюків. Естроген-антагонізм (% інгібування від естрадіолу) Введення з естрадіолом 3-5мг/кг 10-50мг/кг 3-5мг/кг 10-50мг/кг 42 74 26 31 44 54 65 38 13 37 10 44 33 62 5 20 48 72 26 39 26 39 10 20 43 66 35 32 14 29 0 5 73 72 0 12 9 19 50 70 13 9 45 54 55 75 н.д. 42 43 62 30 30 Гістеротропна дія Сполука (% від естрадіолу) № Введення без естрадіолу доза: 1 3 19 20 20 21 35 36 38 39 40 44 45 4 12 5 4 6 11 5 18 4 0 58 0 14 13 0 68 17 3 10 13 6 8 3 23 43 44 21 100 46 Тамоксифен Тореміфен Ралоксифен 5 41 93 98 27 98 100 92 92 90 80 0 50 37 41 100 78 46 47 54 22 95 19 51 100 100 80 100 77 100 0 0 44 51 51 58 26 44 45 58 11 13 90 92 Удавано оперовані (симульовані), що одержували естрадіол і ралоксифен піддані оваріектомії пацюки служили контролем. Таблиця 3 А. Розмір матки після 4-тижневого введення нових сполук підданим оваріектомії пацюкам (пероральна добова доза приведена в мг/кг). Група Симульована контрольна Піддана оваріектомії №3 3,0мг/кг №19 1,0мг/кг №19 5,0мг/кг №20 5,0мг/кг Ралоксифен 3,0мг/кг FC- 1271а 5,0мг/кг Розмір матки (г) 0,497±0,103 0,099±0,016 0,140±0,006 0,192±0,029 0,221±0,023 0,133±0,032 0,141±0,021 0,411±0,042 Естрадіол дають одній групі для порівняння. Результат показує, що оваріектомія спричиняє 21 76409 22 підвищення рівня холестерину. Естрадіол, сполуки жають як процент від загального числа пухлин. №3, 19 і 20 можуть попереджати вказане зросЧисло тварин в кожній групі становило 7. Сполука тання навіть при дуже низькій дозі і опускати вка№19 не впливає на масу тіла тварин в порівнянні з заний рівень нижче за удавано оперований рівень. контролями. Число тварин в кожній групі становило 8. Таблиця 6. Таблиця 4. Протипухлинна дія сполуки №19 на ДМБА-індукоДія сполук №3, 19 і 20 на рівень холестерину в ваний рак молочної залози на пацюках. сироватці пацюків у підданих оваріектомії (OVX) пацюків після 4-тижневого дозованого введення Група ЗросСтабі- Що ре- Зникалікарського засобу. таючі льні гресуючі ють Група Рівень холестеКонтрольна 82% 18% 0% 0% рину в сироватці №19 3мг/кг 20% 20% 40% 20% (ммоль/л) №19 15мг/кг 14% 14% 57% 14% Удавано оперований пацюк 3,8±0,4 Тамоксифен 36% 56% 8% 0% OVX-пацюк 4,6±0,7 3мг/кг OVX-пацюк + естрадіол 3мкг/кг 4,0±0,4 Тореміфен 31% 51% 11% 10% OVX+№3 3мг/кг 3,1±0,4 3мг/кг OVX+№19 0,3мг/кг 3,6±0,4 ОУХ+№19 10мг/кг 3,9±0,6 Кастрація помітно знижує масу простати, і естрогени, як відомо, роблять те ж саме. Сполука OVX+№20 1мг/кг 3,3±0,6 №19 не володіє естрогенною дією при дозі 0,5мг/кг OVX+№20 5мг/кг 2,3+0,4 і володіє слабою естрогенною дією при дозі 5,0мг/кг. Зазначено, що вказана сполука володіє Пацюків піддають оваріектомії (контролі удазначною протипухлинною дією в моделі ДМБАвано оперують). Сполуки дають протягом 4 тижнів індукованого раку молочної залози при дозі у вказаних дозах (мг/кг) п.о., починаючи через ти0,5мг/кг (таблиця 6). ждень після оваріектомії. Великогомілковий епіфіз і шийку стегнової кістки препарують для оцінки Таблиця 7. якості кістки. Таблиця 5. Дія сполук №3, 19 і 20 на кістки підданих оваріектомії пацюків після 4-тижневого дозованого введення лікарського засобу Група і доза (мг/кг) Стимульована контрольна (n=10) OVX (n=10) №3 3,0мг/кг (n=22) №19 1,0мг/кг (n=10) №19 5,0мг/кг (n=10) №20 3,0мг/кг (n=20) Ралоксифен 3,0мг/кг (n=10) Зольна маса (мг) великогомілкового епіфіза 34,0±2,9 Максимальне навантаження (Н) на шийку стегнової кістки 86,7±10,4* 32,2±2,8 36,0±3,4* 68,4±8,5 92,5±11,1* 34,8±1,3* 85,7±17,0* 35,0±3,2 81,7±15,2* 34,9+3,5 84,2±18,4* Група Маса передміхурової залози (мг) середня і sd (ст. відх.) Контрольна 2,60±0,77 Вихолощені пацюки 0,59±0,07 №19 0,5мг/кг 2,66±0,21 №19 5,0мг/кг 1,58±0,50 №19 0,5мг/кг вихолоще0,59±0,07 ним пацюкам №19 5,0мг/кг вихолоще0,62+0,07 ним пацюкам 81,6±7,9* 34,9±1,9* Дія сполуки №19 на масу передміхурової залози у невихолощених і вихолощених самців пацюків після 4-тижневого щоденного введення двох різних доз * вказує статистично значущу (р