Сполуки ряду андростанів та прегнанів для алостеричної модуляції рецептора g-аміномасляної кислоти

1 Производное ряда андростана или прегнана, выбранное из группы, состоящей из За-окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5р-прегнан20-она, За-окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5апрегнан-20-она, За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-она, За-окси-Зр-трифторметил-5а-прегн-11 -ен-20-она, За,21-диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5апрегнан-20-она, Зр-(циклопропил)этинил-3а-окси-5р-прегнан-20она, За,20а-диокси-3р-этинил-5а-прегнана, За,21 -диокси-3р-этинил-5а-прегнан-20-она и За,21-диокси-3р-фторметил-5а-прегнан-20-она, или его физиологически приемлемые 3-эфир,20-эфир, 21-эфир, 3,20-диэфир или 3,21-диэфир 2 Производное ряда андростана или прегнана, выбранное из группы, состоящей из За,21-диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5апрегнан-20-он,21-гемисукцината, натриевой соли, За,20а-диокси-21-метил-5а-прегнан, бисгемисукцината, За,21 -диокси-3р-этинил-5а-прегнан-20-он,21 гемисукцината, За,21 -диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он,21 ацетата, За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20он,21-гемифумарата, натриевой соли, За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20он,метил 21-сукцината, За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20он,21-пропионата, бис(3а,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20он)21-гемисукцината, бис(3а,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он)21 гемисукцината и І\І-(За-окси-Зр-метил-5а-прегнан20-илидин)этаноламина 3 Производное по п 1, которое является За-оксиЗр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5а-прегнан-20ононом 4 Производное по п 1, которое является За-оксиЗр-трифторметил-5а-прегнан-20-оном 5 Производное по п 1, которое является За-оксиЗр-трифторметил-5а-прегн-11 -ен-20-оном 6 Производное по п 1, которое является За,21диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5а-прегнан-20он,21-гемисукцинатом, натриевой солью 7 Производное по п 1, которое является За,21диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5а-прегнан-20оном 8 Производное по п 1, которое является Зр(циклопропил)этинил-3а-окси-5р-прегнан-20-оном 9 Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество производного, описанного в любом из пп 1-8, а также фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель 10 Способ лечения стресса или тревожности у животных, предусматривающий введение указанному животному эффективного количества производного, описанного в любом из пп 1-9 11 Способ облегчения эпилептических припадков у животных, предусматривающий введение указанному животному эффективного количества производного, описанного в любом из пп 1-8 12 Способ уменьшения или облегчения бессонницы у животных, предусматривающий введение указанному животному эффективного количества производного, описанного в любом из пп 1-8 13 Способ лечения нарушений настроения у животных, предусматривающий введение указанному животному эффективного количества производного, описанного в любом из пп 1-8 14 Способ по п 13, где нарушение настроения О Ю 00 48154 представлено депрессией 15 Способ лечения предменструального синдрома (PMS) или послеродовой депрессии (PND) у животных, предусматривающий введение указанному животному эффективного количества произ Настоящее изобретение посвящено способам, композициям и соединениям для модуляции возбудимости головного мозга животных с помощью рецептора у-аминомасляной кислоты А (ГАМКд)хлоридного ионофорного комплекса (GCR) В частности, настоящее изобретение направлено на способы, композиции и соединения для модуляции возбудимости головного мозга посредством связывания сайта нестероидного рецептора на GRC Возбудимость мозга определяется как уровень возбуждения животного, состояние в диапазоне от комы до судорог, и регулируется различными нейромедиаторами В общем случае нейромедиаторы ответственны за регуляцию проводимости ионов через мембраны нейронов В состоянии покоя мембрана нейрона обладает потенциалом (или мембранным напряжением) приблизительно -80 мв, при этом внутренняя часть клетки является отрицательно заряженной по сравнению в наружной частью клетки Потенциал (напряжение) является результатом равновесия ионов (К+, Na+, CI, органические ионы) в полупроницаемой мембране нейрона Нейромедиаторы находятся в пресинаптических пузырьках и высвобождаются под влиянием потенциала действия нейрона При выходе в синаптичекое углубление химический медиатор раздражения, такой как ацетилхолин, будет вызывать деполяризацию мембраны (изменение потенциала от -80мв до -50мв) Этот эффект передается постсинаптическими никотиновыми рецепторами, которые стимулируются ацетилхолином с целью повышения проницаемости мембраны для ионов Na+ Пониженный мембранный потенциал стимулирует нейронное возбуждение в форме постсинаптического потенциала действия В случае GRC эффект возбудимости головного мозга переносится нейромедиатором ГАМК ГАМК имеет сильное влияние на общую возбудимость головного мозга, потому что до 40% нейронов головного мозга используют ГАМК как нейромедиатор ГАМК регулирует возбудимость отдельных нейронов регуляцией проводимости ионов хлорида через мембрану нейронов ГАМК взаимодействует со своим сайтом узнавания на GRC для облегчения потока ионов хлорида по электрохимическому градиенту GRC в клетку Повышение уровней этого аниона внутри клетки вызывает гиперполяризацию трансмембранного потенциала, делая нейрон менее чувствительным к возбуждающим сигналам (например, пониженная возбудимость нейронов) Другими словами, чем выше концентрация иона хлорида в нейроне, тем ниже возбудимость головного мозга (уровень возбуждения) 4 водного, описанного в любом из пп 1-8 16 Способ индукции анестезии у животных, предусматривающий введение указанному животному эффективного количества производного, описанного в любом из пп 1-8 Хорошо документировано, что GRC отвечает за проведение тревожности, припадочной активности и седативного эффекта Таким образом, ГАМК и лекарственные средства, которые действуют как ГАМК или облегчающие эффекты ГАМК (например, терапевтически используемые барбитураты и бензодиазепины (BZs), такие как валиум) производят свои терапевтически используемые эффекты при взаимодействии с специфическими регуляторными сайтами на GRC Показано также, что серии стероидных метаболитов взаимодействуют с GRC для изменения возбудимости головного мозга (Majewska M D et al , Science 232 1004-1007 (1986), Harrison N L et al , J Pharmacol Exp Ther 241 346-353 (1987)) До настоящего изобретения терапевтическая применимость этих стероидных метаболитов не была известна исследователям, работающим в данной области, вследствие неполного понимания активности и области действия Изобретение заявителей частично связано с фармацевтическим применением знаний, полученных из более полного понимания активности и области действия определенных стероидных соединений Было продемонстрировано, что гормон яичников прогестерон и его метаболиты обладают сильным действием на возбудимость головного мозга (Backstrom Т et al , Acta Obstet Gynecol Stand Suppl 130 19 - 24 (1985), Pfaff D W and McEwen В S , Science 219 808 - 814 (1983), Gyerm e k e t a l . J Med Chem 11 117 (1968), и Lambert J et al , Trends Pharmacol 8 224 - 227 (1987) Уровни прогестерона и его метаболитов изменяются в зависимости от фазы менструального цикла Было хорошо документировано, что прогестерон и его метаболиты снижаются перед началом менструации Ежемесячное повторение определенных физических симптомов перед началом менструации также было хорошо документировано Эти симптомы, которые стали ассоциироваться с предменструальным синдромом (PMS) включают стресс, тревожность и мигренозные головные боли (Dalton К, Premenstrual Syndrome and Progesterone Therapy, 2nd edition, Chicago Chicago yearbook, 1984) Пациенты с PMS имеют ежемесячный рецидив симптомов, которые присутствуют перед менструацией и отсутствуют после менструации Подобным образом снижение прогестерона также временно коррелирует с повышением частоты припадков у женщин-эпилептиков (например, менструальная эпилепсия, LaidlawJ , "Catamemal epilepsy", Lancet, 1235 - 1237 (1956)) Более прямая корреляция была отмечена в отношении снижения метаболитов прогестерона (Rosciszewska et at, J Neurol Neurosurg Psych 49 4 7 - 5 1 (1986)) 48154 Кроме того, у пациентов с первично генерализованной малой эпилепсией время припадков коррелировало с временем симптомов предменструального синдрома (Backstorm T et al , J Psychosom Obstet Gynaecol 2 8-20(1983)) Было обнаружено, что стероидный дезоксикортикостерон эффективен при лечении пациентов сэпилептическими приступами, коррелирующими с их менструальными циклами (Aird R В и Gordan G , J Amer Med Soc 145 715-719(1951)) Синдром, также связанный с низкими уровнями прогестерона, является послеродовой депрессией (PND) Сразу после родов уровни прогестерона резко падают, приводя к началу PND Симптомы PND варьируют от мягкой депрессии до психоза, требующего госпитализации, PND ассоциируется с острой тревожностью и раздражительностью PND-ассоциированная депрессия не поддается лечению классическими антидепрессантами, а у женщин с PND повышена частота встречаемости PMS (Dalton К , 1984) Совместно эти наблюдения позволяют предположить существенную роль прогестерона и дезоксикортикостерона и, более специфически, их метаболитов в гомеостати чес кой регуляции возбудимости головного мозга, которая проявляется какусиление эпилептической активности или симптомов, ассоциированной с менструальной эпилепсией, PMS и PND Корреляция между пониженными уровнями прогестерона и симптомами, ассоциированными с PMS, PND и менструальной эпилепсией (Backstorm et al , 1983, Dalton k , 1984) подсказала применение прогестерона в их лечении (Mattson et al , в Advances in epileptology XVth Epilepsy International Symposium, Raven Press, New York, 279 - 282, 1984 и Dalton K, 1984) Однако, прогестерона не является постоянно эффективным при лечении вышеупомянутых синдромов Например, не существует связи доза-ответ для прогестерона при лечении PMS (Maddocks et al , Obstet Gynecol 154 573-581 (1986), Dennerstem, et al , British Medical Journal, 290 16 -17 (1986)) Публикации и ссылки, упомянутые выше и далее в этом описании, включены здесь как ссылки Сущность изобретения Настоящее изобретение посвящено способам, композициям и соединениям для модулирования возбудимости головного мозга В частности, изобретение касается применения Загидроксилированных стероидных производных, действующих на недавно идентифицированный сайт комплекса GR, для модуляции возбудимости головного мозга таким образом, чтобы облегчить стресс, тревожность, бессонницу, нарушения настроения (например, депрессию), на которые действуют GR-активные агенты, а также эпилептическую активность Композиции и соединения, эффективные для такого лечения, находятся в составе изобретения Применяемые и образующие часть изобретения соединения являются модуляторами возбудимости центральной нервной системы, как следует из их способности регулировать каналы ионов хлорида, ассоциированные с комплексом рецептора ГАМК В экспериментах заявителей установлено, что соединения изобретения и при меняемые в нем обладают активностью против судорог и против тревожности, подобной действию известных агентов против тревожности, таких как BZ (бензодиазепины), но они действуют на определенный участок комплекса GR Связь эндогенных метаболитов прогестерона с процессами, ассоциированными с размножением (цикл эструса и беременность) хорошо установлена (Marker R E , Kamm О и McGrew R V , "Isilation of epi-pregnanol-3-one-20 from human pregnancy urine", J Am Chem Soc 59 6 1 6 - 6 1 8 (1937)) Однако, до настоящего изобретения не было понятно, как лечить заболевания модуляцией возбудимости головного мозга посредством применения метаболитов прогестерона Поэтому это изобретение направлено на способы, композиции и соединения для лечения нарушений модуляцией возбудимости головного мозга с использованием соединений этого изобретения Репрезентативными нарушениями, которые лечили в настоящем изобретении, являются эпилепсия, тревожность, предменструальный синдром (PMS), послеродовая депрессия (PND), нарушения настроения (такие, как депрессия), на которые действуют GR-активные агенты, а также бессонница Соединения изобретения могут быть также использованы для анестезии Детальное описание предпочтительных вариантов Выполнения Соединения изобретения и используемые в нем являются производными различных Загидроксилированных-прегнан-20-онов, За-21прегнандиол-20-онов, За-20-прегнандиолов и Загидроксилированных андоростанов и их простыми и сложными эфирами, сульфонатом, сульфатом, фосфонатом, фосфатом, оксимовыми(имино) и тиазолидиновыми производными, которые описаны как пролекарства Выражение "пролекарство" относится к производному известного лекарственного средства прямого действия, производное которого имеет улучшенные характеристики доставки и терапевтической ценности по сравнению с лекарственным средством и трансформируется в активное лекарственное средство энзиматическим или химическим способом, см Notan R Е , "Theory and Practice of Prodrag Kinetics", Methods in Enzymology, 112 309-323 (1985), Bodor N "Novel Approaches in Prodrug Design", Drugs of the Future, 6(3)165-182 (1981) и Bundgaard H ," Design of Prodrugs Bioreversible Derivatives for Various Functional Groups and Chemical Entities" в Design of prodrugs (H Bundgaard, ed), Elsevier, New York (1985) Следует отметить, что некоторые из синтетических производных, составляющих часть настоящего изобретения, могут не быть настоящими пролекарствами, потому что в дополнение к упомянутым характеристикам они также обладают собственной активностью Однако, в рамках этой заявки они будут упоминаться как пролекарства Наши исследования (Gee KW et al , Eurepean Journal of Pharmacology, 136 419 - 423 (1987)) продемонстрировали, что За-гидроксилированные стероиды, использованные в изобретении, на несколько порядков более активны, чем другие, описанные (Majewska М D et al (1986) и Harrison N L 48154 et al , (1987)) как модуляторы комплекса GR Majewska M D et al и Harrison N L et al показывают, что За-гидроксилированные-5восстановленные стероиды способны давать значительно более низкие уровни эффективности Наши экспериментальные данные in vitro и in vivo демонстрируют, что высокая активность этих стероидов позволяет их терапевтическое применение для модуляции возбудимости головного мозга через комплекс GR Наиболее активные стероиды, применяемые в этом изобретении, включают производные главных метаболитов прогестерона и дезоксикортикостерона Эти стероиды могут быть специфически использованы для модуляции возбудимости головного мозга при стрессе, тревожности, бессоннице, нарушениях настроения (например, депрессии), на которые действуют GRактивные агенты, а также при эпилептических нарушениях терапевтически благоприятным образом Более того, мы продемонстрировали, что эти стероиды взаимодействуют с уникальным сайтом на комплексе GR, который отличается от других известных сайтов взаимодействия (например, барбитуратов, BZ и ГАМК), в которых были ранее получены терапевтически благоприятные воздействия на стресс, тревожность, сон, нарушения настроения и эпилептические нарушения (Gee KW and Yamamura HI в In Central Nervous System Disorders, стр 123 -1 47, DC Horvell ed , 1985, Lloyd KG and Morselh PL в Psych о pharmacology The Third Generation of Progress, стр 183 - 195, H Y Meltzer, ed , Raven Prss, N Y , 1987) Эти соединения являются желательными вследствие их продолжительности действия, эффективности и активности при пероральном применении (наряду с другими формами введения) Формула 3 Формула 4 Формула 5 Формула 6 Стероидные производные этого изобретения являются таковыми, имеющими одну из следующих структурных формул Формула 1 Формула 2 Настоящее изобретение также включает фармацевтически приемлемые эфиры и соли соединений Формул 1 - 6, в том числе кислые соли Считается, что За-гидроксил может быть также маскирован как фармацевтически приемлемый эфир благодаря тому факту, что эфир будет отщепляться при конвертировании в лекарственную форму Они упоминаются здесь как расщепляемые эфиры Определения В соответствии с данным изобретением и как применяется здесь, следующие термины определены следующими значениями, пока подробно не установлено другим образом Термин "алкил" относится к насыщенным алифатическим группам, включая неразветвленную цепь, разветвленную цепь, циклические группы, все их которых могут быть необязательно замещены Подходящие алкильные группы включают метил, этил и подобные группы и могут быть необязательно замещены Термин "алкенил" относится к ненасыщенным группам, которые содержат, по меньшей мере, одну углерод-углеродную двойную связь, и вклю 48154 чает неразветвленную цепь, разветвленную цепь и циклические группы, которые могут быть необязательно замещены Термин "алкинил" относится к ненасыщенным углеводородным группам, которые содержат, по меньшей мере, одну углерод-углеродную тройную связь, и включает неразветвленную цепь, разветвленную цепь и циклические группы, все из которых могут быть дополнительно ненасыщенными Присутствуя в положении 3-р, алкинильные группы могут быть замещены галогенированным или негалогенированным Сградикалом, насыщенным или ненасыщенным, галогенированным или негалогенированным неразветвленным C-z Сб-радикалом, циклическим (циклоалкильным) Сз Сб-радикалом или ароматическим Cs - Сбрадикалом или 4, 5 или 6-членным гетероциклическим радикалом, присоединенным по атому С- или N- и содержащим 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из кислорода, азота или серы, исключая гетероциклические радикалы с двумя или более смежными атомами О или S Предпочтительными алкинильными группами являются группы, содержащие от двух до четырех атомов углерода Термин "алкоксил" относится к эфир-OR, где R - алкил Термин "арилоксил" относится к эфир-OR, где R-арил Термин "арил" относится к ароматическим группам, которые содержат, по меньшей мере, один цикл с конъюгированной пи-электронной системой, и включает карбоциклический арил и биарил, оба из которых могут быть необязательно замещены Термин "карбоциклический арил" относится к группам, в которых циклическими атомами ароматического цикла являются атомы углерода Карбоциклические арильные группы включают фенильные и нафтильные группы, которые могут быть необязательно замещены Замещенный фенил предпочтительно содержит от одного до трехзаместителей, преимущественно низший ал кил, аминогруппу, гидроксил, низший алкоксил, галоген, низший алкил и нитрогруппу Термин "арил-алкил" относится к алкильной группе, замещенной арильной группой Подходящие арил-алкильные группы включают бензил и подобные группы и могут быть необязательно замещены Термин "диалкиламиногруппа" относится к NRR", где R и R" независимо друг от друга - низшие алкильные группы, или вместе они образуют остаток морфолиновой группы Подходящие диалкиламиногруппы включают диметиламино-, диэтиламино- и морфолиновую группу Термин "ацил" относится к алканоильной группе -C(O)R, где R - алкил, алкенил, алкинил, арил или арил-алкил Термин "необязательно замещенный" или "замещенный" относится к группам, замещенным одним - тремя заместителями, независимо друг от друга выбранными из низшего алкила, арила, алкенила, алкинила, алкоксила, амино-, тиогруппы, галогена, гал о ген-ал кила, тригалоген-алкила, ацила, нитрогруппы, гидроксила и кетогруппы 10 Термин "низший" относится к органическим радикалам, содержащим от одного до четырех атомов углерода Такие группы могут быть неразветвленными, разветвленными или циклическими Термин "фармацевтически приемлемые эфиры или соли" относится к эфирам или солям формул 1 - 6, полученным из комбинации соединения данного изобретения и органической или неорганической кислоты Примерами заместителей, которые могут быть использованы в соединениях формулы 1, являются следующие R - водород, низший алкил, низший алкенил или низший алкинил, Ri - метилен, р-оксиметил или р-цианогруппа, их физиологически приемлемые 3-эфиры, 20эфиры и 3,20-диэфиры, причем, если Ri - рцианогруппа, то R не может быть водородом Несмотря на это, в способе заявляется, что Ri может быть цианогруппой, если R - водород Предпочтительной группой соединений формулы 1 являются соединения, в которых R - водород Другой группой предпочтительных соединений являются соединения формулы 1, где Ri - цианогруппа Примеры предпочтительных соединений формулы 1 включают, но не ограничиваются следующими За-окси-17-метилен-5а-андростан, За~ окси-17р-оксиметил-5а-андростан, или За-окси17(20)(2)-метоксиметилен-5а-андростан Примерами заместителей, которые могут быть использованы в соединениях формулы 2, являются следующие R - водород, галоген или низший алкоксил, Ri - алкенил, алкинил, алкоксиалкил, галогеналкоксиалкил, трифторметил, азидоалкил, цианоалкил или моногалоген-метил, R2 - водород, кетогруппа или 11адиалкиламиногруппа, R3 - р-ацетильная группа, кеталь роксиацетильной группы, р-трифторацетил, роксиацетил, р-оксиацетил-17р-гидроксил, рметоксиметилацетил, р(этокси)-метил-2'метиленацетил, р-(1'-оксиэтил), р-(1'-оксипропил), Р-(2'-оксиизопропил), р-сукцинилоксиацетил, роксиацетил сукцината натрия, р-ацетоксиацетил, Р-сульфоксиацетил, р-мети л ацетил, р-галогенацетил, т е р-хлорацетил, р-этинил или р-этил, которые вместе с 17-ым атомом углерода, к которому указанная этильная группа присоединена, и атомом кислорода образуют 17(20)эпоксигруппу, и их физиологически приемлемые 3-эфиры, 20эфиры, 21-эфиры, 3,20-диэфиры и 3,21-диэфиры, причем, если R2 - iia-N.N-диалкиламиногруппа, то R не может быть водородом Предпочтительной группой соединений формулы 2 являются соединения, в которых R - водород или низший алкил Более предпочтительными являются соединения, где R - водород Другой группой предпочтительных соединений являются соединения формулы 2, где Ri - низший алкенил, низший алкинил, трифторметил, алкоксиметил и моногалоген-метил Более предпочти 12 11 48154 тельными являются соединения, где R1 - Сг - С4циклопропилэтинил-3р-окси-5р-прегнан-20-он, Зралкенил, (1'-октинил)-Зр-окси-5р-прегнан-20-он, ЗрСг - С4-алкинил или трифторметил Наиболее циклопропилэтинил-3р-окси-5р-прегнан-20-он и предпочтительными являются соединения, где Ri Зр-циклопропилэтинил-3р-окси-5а-прегнан-20-он - этинил или трифторметил Примерами заместителей, которые могут быть Дополнительной группой предпочтительных использованы в соединениях формулы 3, являютсоединений являются соединения формулы 2, где ся следующие F 3 - ацетил, оксиалкил, оксиацетил или их эфиры ? R - водород, низший алкил, низший алкенил или низший алкинил, с физиологически приемлемыми кислотами БоRi - р-ацетил, кеталь р-оксиацетильной груплее предпочтительными являются соединения, пы, р-трифторацетил, р-оксиацетил, р-оксиацетилгде R3 - ацетил или бета-сукцинилоксиацетил 17а-гидроксил, р-метоксиметилацетил, р-(этокси)Наиболее предпочтительными являются соединеметил-2'-метиленацетил, р-(1'-оксиэтил), Р-(1'ния, где R3 - ацетил оксипропил), р-(2'-оксиизопропил), рПримеры предпочтительных соединений включают, но не ограничиваются следующими Засукцинилоксиацетил, р-оксиацетил сукцината наокси-17р-этинил-5а-андростан, Зр-этенил-За-окситрия, р-ацетоксиацетил, р-сульфоксиацетил, рметилацетил, р-хлорацетил, р-этинил или р-этил, 5р-прегнан-20-он, За-окси-Зр-(2'-пропинил)-5ркоторые вместе с 17-ым атомом углерода, к котопрегнан-20-он, Зр-этенил-3а-окси-5а-прегнан-20рому указанная этильная группа присоединена, и он,3р-хлорэтенил-3а-окси-5р-прегнан-20-он,3ратомом кислорода образуют 17(20)эпоксигруппу, и этинил-3а-окси-5р-прегнан-20-он, За-окси-Зрих физиологически приемлемые 3-эфиры, 20этинил-5а-прегнан-20-он, За, 20а-диокси-3рэфиры, 21-эфиры, 3,20-диэфиры и 3,21-диэфиры, этинилпричем, указанное соединение не может быть 5а-прегнан, За,21-диокси-3р-этинил-5рЗа-окси-5а-прег-9(11)-ен-20-он,За,21 -диокси-5апрегнан-20-он, Зр-(3'-бром-1-пропинил)-За-оксипрег-9( 11 )-ен-20-он или 21 -ацетокси-3а-окси-5а5р-прегнан-20-он, За,21-диокси-3р-этинил-5рпрег-9(11)-ен-20-он или их эфирными производпрегнан-20-он, 21-ацетат,Зр-этинил-За-окси-5рными прегнан-11,20-дион, За,21 -диокси-3р-этинил-5рПредпочтительной группой соединений Форпрегнан-20-он 21-гемисукцинат, За,20а-диокси-3рмулы 3 являются соединения, в которых R - водоэтинил-5р-прегнан, За,20р-диокси-3р-этинил-5ррод или алкинил Более предпочтительными явпрегнан, За,20р-диокси-3р-этинил-5а-прегнан, Заляются соединения, где R - водород окси-Зр-(2'-пропинил)-5а-прегнан-20-он, ЗрДополнительной группой предпочтительных этенил-За-окси-21-метокси-5р-прегнан-20-он, Засоединений являются соединения формулы 3, где окси-3р-хлорметил-5а-прегнан-20-он, За-окси-ЗрRi - ацетил, оксиалкил, оксиацетил или их эфиры трифторметил-5а-прегнан-20-он, Зр-бромметилс физиологически приемлемыми кислотами БоЗа-окси-5а-прегнан-20-он, За-окси-Зр-подметиллее предпочтительными являются соединения, 5а прегнан-20-он, За-окси-3р-трифторметил-5агде Ri - ацетил или бета-сукцинилоксиацетил прегнан-20-он, За-окси-3р-трифторметил-5рНаиболее предпочтительными являются соединепрегнан-20-он, За,21-диокси-3р-трифторметил-5рния, где Ri - ацетил прегнан-20-он 21 -ацетат, За,21 -диокси-ЗрПримеры предпочтительных соединений трифторметил-5р-прегнан-20-он, За-окси-Зрвключают, но не ограничиваются следующими Затрифторметил-5р-прегнан-11,20-дион, За,21 окси-Зр-трифторметил-5а-прегн-9(11)-ен-20-он, и диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21За-окси-За-метил-5а-прегн-9-ен-20-он, гемисукцинат, натриевая соль, За-окси-ЗрПримерами заместителей, которые могут быть трифторметил-5р-прегнан-17(20)-ен, За,20аиспользованы в соединениях Формулы 4, являютдиокси-21 -этил-5а-прегнан, За,20а-диокси-21 ся следующие метил-5а-прегнан, За,20а-диокси-2р-изопропоксиR - водород, низший алкил, низший алкенил 5а-прегнан, За,20а-диокси-2р-этокси-5а-прегнан, или низший алкинил, За,20а-диокси-2р-н-пропокси-5а-прегнан, а,20аRi - см формулу 3, и их физиологически придиокси-3р-метил-5а-прегнан, За,20а-диокси-3ремлемые 3-эфиры, 20-эфиры, 21-эфиры, 3,20этинил-5а-прегнан, За,20р-диокси-3р-метил-5рдиэфиры и 3,21-диэфиры, прегнан, За,20-диокси-3р,20-диметил-5р-прегнан, причем, указанное соединение не может быть Заокси-5р-прег-11 -ен-20-он или его 3-эфирными Зр,20а-диокси -Зр,21 -диметил-5а-прегнан, Зр,20апроизводными диокси-3р-этинил-5р-прегнан, Зр,20р-диокси-3рПредпочтительной группой соединений форметил-5а-прегнан, Зр,20р-диокси-3р-этинил-5амулы 4 являются соединения, в которых R - водопрегнан, Зр-окси-3р-метоксиметил-5а-прегнан-20род, трифторметил или низший алкинил Более он, Зр-(этоксиметил)-3р-окси-5а-прегнан-20-он, Зрпредпочтительными являются соединения, где R (1'-гексинил)-Зр-окси-5р-прегнан-20-он, Зрводород азидометил-3р-окси-5а-прегнан-20-он, За-окси-ЗрДополнительной группой предпочтительных (2',2',2'-трифторэтоксиметил)-5а-прегнан-20-он, соединений являются соединения формулы 4, где За-окси-3р-пропоксиметил-5а-прегнан-20-он, ЗрRi - ацетил, оксиалкил, оксиацетил или их эфиры цианометил-Зр-окси-5а-прегнан-2-он, Зрс физиологически приемлемыми кислотами Бо(метилбут-2-ен-1-инил)-Зр-окси-5р-прегнан-20-он, лее предпочтительными являются соединения, Зр-(1'-гептинил)-Зр-окси-5р-прегнан-20-он, Зргде Ri - ацетил или бета-сукцинилоксиацетил 14 13 48154 Наиболее предпочтительными являются соединеПримеры предпочтительных соединений ния, где Ri - ацетил включают, но не ограничиваются следующими ЗаПримеры предпочтительных соединений окси-Зр-метил-5р-19-норпрегн-17(20)(7)-ен, Завключают, но не ограничиваются следующими Заокси-19-нор-5а-прегнан-цис-17(20)(г)-ен, За-5р-19окси-Зр-трифторметил-5р-прегн-11 -ен-20-он, норпрегн-17(20)(2)-ен, За-окси-Зр-метил-5а-19За,20р-диокси-5р-прегн-11 -ен, За-окси-Зр-метилнорпрегн-17(20)(7)-ен, Зр-этинил-За-окси-5р-195а-прегн-11 -ен-20-он, иЗа,20р-диокси-5р-прегн-11 норпрегн-17(20)(2)-ен и За-окси-Зр-трифторметилен,Зр-этинил-За-окси-5р-прегн-11 -ен-20-он 5р-19-норпрегн-17(20)(г)-ен Примерами заместителей, которые могут быть Также предпочтительными являются следуюиспользованы в соединениях Формулы 5, являютщие соединения За-окси-Зр-трифторметил-19ся следующие нор-5р-прегнан-20-он, За-окси-Зр-трифторметилR - водород, низший алкил, низший алкенил 19-нор-5а-прегнан-20-он, За-окси-Зрили низший алкинил, трифторметил-5р-19-норпрегн-17(20)(2)-ен, За,21Ri - бета-формил, метилен, бета-оксиметил, диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он метоксиметилен или бета-цианогруппа, их физиои За,21-диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5рлогически приемлемые 3-эфиры, 20-эфиры и 3,20прегнан-20-он 21 -гемисукцинат и его натриевая диэфиры соль Примеры предпочтительных соединений Также предпочтительными являются следуювключают, но не ограничиваются следующими Защие соединения За,20а-диокси-19-нор-5аокси-17р-формил-5а-19-норандростан и За-оксипрегнан, За-окси-Зр-трифторметил-19-нор-5р17(20)(7)-метоксиметилен-5а-19-норандростан прегнан-20-он, За-окси-Зр-метил-19-нор-5рПримерами заместителей, которые могут быть норпрегнан-20-он, Зр-этинил-За-окси-19-нор-5риспользованы в соединениях формулы 6, являютпрегнан-20-он,Зр-этинил-За-окси-5р-19-прегнся следующие 17(20)(7)-ен, За-окси-Зр-метил-5р-19-норпрегнR - водород, низший алкил, низший алкенил 17(20)(Z)-eH, За,21-диокси-3р-трифторметилили низший алкинил, 19нор-5р-прегнан-20-он 21 -гемисукцинат и его Ri - см формулу 3, и их физиологически принатриевая соль емлемые 3-эфиры, 20-эфиры, 21-эфиры, 3,20Наиболее предпочтительными соединениями диэфиры и 3,21-диэфиры данного изобретения являются следующие Предпочтительной группой соединений ФорЗа-окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5рмулы 6 являются соединения, в которых R - низпрегнан-20-он, ший алкенил и низший алкинил или трифтормеЗа-окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5атил Более предпочтительными являются прегнан-20-он, соединения, где R - низший алкинил или трифЗа-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он, торметил За-окси-Зр-трифторметил-5/^-прегн-И -ен-20Дополнительной группой предпочтительных он, соединений являются соединения формулы 6, где Ri - ацетил, оксиалкил, оксиацетил или их эфиры За,21 -диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5рс физиологически приемлемыми кислотами Бопрегнан-20-он, лее предпочтительными являются соединения, Зр-(циклопропил)этинил-3а-окси-5р-прегнангде Ri - ацетил или бета-сукцинилоксиацетил 20-он, Наиболее предпочтительными являются соединеЗа,20сг-диокси-3р-этинил-5а-прегнан, ния, где R, - ацетил За,21 -диокси-3р-этенил-5а-прегнан-20-он, и Далее предпочтительными соединениями явЗа,21 -диокси-3р-трифторметил-5а-прегнанляются соединения формул 1 - 6, которые явля20-он, или физиологически приемлемые 3-эфиры, ются сложными эфирами по гидроксильной группе 20-эфиры, 21 -эфиры, 3,20-диэфиры или 3,21 див положениях 3 и/или 20 Предпочтительными эфиры указанных соединений сложными эфирами являются эфиры указанных Также наиболее предпочтительными являютсоединений и соответствующих кислот уксусной, ся следующие эфиры в пределах области данного пропионовой, малеиновой, фумаровой, аскорбиизобретения новой, пимелиновой, янтарной, глутаровой, бисЗа,21-диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5рметилен-салициловой, метансульфокислоты, прегнан-20-он 21-гемисукцинат, натриевая соль, этан-ди-сульфокислоты, щавелевой, винной, саЗа,20а-диокси-21 -метил-5а-прегнан, бислициловой, лимонной, глюконовой, итаконовой, гемисукцинат, гликолевой, пара-аминобензойной, аспартановой, За,21 -диокси-3р-этенил-5а-прегнан-20-он, 21 глутаминовой, гамма-аминомасляной, а-(2гемисукцинат, За,21-диокси-3р-метил-5а-прегнаноксиэтиламино)-пропионовой, глицина и других а20-он 21 -ацетат, аминокислот, фосфорной, серной, глюкуроновой и За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-201-метил-1,4-дигидроникотиновой он 21 -гемифумарат, натриевая соль, Другая более предпочтительная группа соЗа,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнанединений включает те соединения формул 1 - 6, 20-он, метил-21-сукцинатат, где Зр-заместителем является этинил или трифЗа,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнанторметил, и присоединенным к 17-му положению 20-он, 21 -пропионат, бис(3а,21-диокси-3рстероида является р-ацетил, р-(1'-оксиэтил) или 17(20)(2)-ен 15 48154 16 активные функциональные группы при необходитрифторметил-5р-прегнан-20-он) 21 мости могут быть защищены Так, 3-алкинильные гемисукцинатат, производные могут быть получены с использовабис(3а,21-диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он) нием ацетилида лития в инертном растворителе 21- гемисукцинатат и или реагента, полученного in situ из 1,2|\1-(За,21-диокси-Зр-метил-5а-прегнан-20дибромэтилена и бутиллития, в качестве металилидин)этаноламин лорганического реагента Аналогично, соединения Следующие синететические способы и примеформулы 1, где R -алкенил, могут быть получены ры направлены на получение соединений, явреакцией 3-кетостероида с винильным металлоляющихся частью и применяемых в настоящем рганическим реагентом, таким как винилмагнийбизобретении ромид Соединения, в которых ненасыщенность Синтетические способы устраняется при реакции, такие как аллилмагСоединения в соответствии с данным изобренийбромид, также могут быть использованы для тением могут быть получены любым известным получения соединений, содержащих 3способом, а именно с использованием известных алкенильную группу Аналогично, применение методик, таких как описанные в "Steroid Reactions" алкила Гриньяра, такого как метилмагнийиодид Djerassi, опубликованной в 1963 Holden-Day, Inc , будет приводить к 3-алкильным производным San-Francisco, или "Organic Reactions in Steroid Три фтор метил Chemistry" Fried and Edwards, опубликованной в 1972 Van Nostrand-Remhold Co , New York Трифторметильные группы могут быть получены реакцией 3-кетостероида с триметилтрифСоединения изобретения могут быть получеторметилсиланом, катализируемой ионом фторины любой подходящей известной в настоящее да время или разработанной позднее методикой 21-окисленные производные Основные методы Окисление 21-метила тетраацетатом свинца 20-Оксипрегнаны были получены восстановРазличные производные этого типа могут лением 20-кетопрегнанов известными восстанавбыть получены в результате последовательности ливающими агентами реакций, в которых прегнан-20-он окисляется тет21-Гемисукцинаты были получены из произраацетатом свинца для получения 21водных прегнан-20-онов, которые были сначала ацетоксипроизводного, проводится гидролиз ацепробромированы молекулярным бромом, в ретата для получения 21-спирта и ацилирование зультате чего получали соответствующие 21подходящим производным карбоновой кислоты, бромпрегнаны Бромпроизводные затем реагиротаким как ангидрид или хлорид кислоты или дрували с различными двухосновными кислотами, гие реагенты, способные замещать водород гидтакими как янтарная килота, в присутствии амина, роксильной группы, такие как метансульфонилв результате чего получали 21-окси-сложные хлорид эфиры Полученные эфиры из двойных кислотных превращали, затем в их натриевые соли известПрегнан-17-ены ными средствами Эти соединения могут быть получены реакцией 17-кетостероида с реагентом Виттига, таким как Эфиры могут быть получены с применением ил ид, полученным обработкой бромистого низвестных реакций гидроксильной группы вышепропилтрифенилфосфония сильным основанием, упомянутых соединений сорганической кислотой, например трет-бутилатом калия галогенидом кислоты, ангидридом кислоты или 3,20-Диолы эфиром, где органической кислотой является, наПрегнан-3,20-диол может быть получен реакпример, уксусная, пропионовая, малеиновая, фуцией присоединения бороводорода, например маровая, аскорбиновая, пимелиновая, янтарная, диборана, с двойной связью прегнан-17-ена и поглутаровая, бисметиленсалициловая, метансульследующим окислением полученного борорганифокислота, этан-ди-сульфокислота, щавелевая, ческого соединения, например, щелочной перекивинная, салициловая, лимонная, глюконовая, итасью водорода для получения 20-ола коновая, гликолевая, пара-аминобензойная, асАльтернативно, прегнан-3,20-диолы могут быть партановая, глутаминовая, гамма-аминомасляная, получены восстановлением группы 20-он до групальфа-(2-оксиэтиламино)-пропионовая, глицин и пы 20-ол Подходящими реагентами являются другие альфа-аминокислоты, фосфорная, серная, гидриды, такие как боргидрид натрия или раствоглюкуроновая и 1-метил-1,4-дигидроникотиновая ряющие металлы, например натрий в н-пропаноле кислоты и аналогичные Зр-заместители Примеры Галоген-метил Пример 1 Зр-моногалоген-метильные соединения дана За-окси-5р-прегнан-20-он, 20-кеталь ного изобретения могут быть получены обработСмесь За-окси-5р-прегнан-20-она (Ю,8г, кой 3-спиро-2'-оксиранового стероида источником 34ммоль), этиленгликоля (45мл) и триэтилортоионов галогенида в инертном растворителе, наформиата (30мл) перемешивают при комнатной пример галогенидом тетраметиламмония в толуотемпературе (кт) в течение 5 минут Затем доле, и предпочтительно источником протонов, набавляют п-толуолсульфокислоту (200мг) и пропример уксусной кислотой должают перемешивание при к т в течение 1,5 Насыщенный или ненасыщенный алкил часов Полученную густую пасту вливают в расДругие 3-замещенные стероиды могут быть твор насыщенного ЫаНСОз (250мл) Твердый осаполучены добавлением металлорганического реадок отфильтровывают, промывают холодной вогента к 3-кетостероиду, в котором остальные ре 17 48154 дой и высушивают Этот полу-высушенный продукт растворяют в CH2CI2 (350мл) и сушат над безводным К2СО3 Раствор кеталя затем фильтруют и применяют в таком виде на следующей стадии b 5р-прегнан-3,20-дион,20-кеталь Вышеупомянутый раствор За--окси-5рпрегнан-20-он,20-кеталя в CH2CI2 перемешивают с І\І-метилморфолин-г\І-оксидом (8,8г, 75мл) и пропускают через молекулярное сито 4 Ангстрем (58г) под азотом в течение 15 минут Затем добавляют перрутенат тетрапропиламмония (400мг) и продолжают перемешивание при к т в течение 2 часов Полученную темно-зеленую смесь пропускают через короткую колонку с Флорисилом и элюируют CH2CI2 Фракции, содержащие продукт (ТСХ), собирают и упаривают Затем сырец кристаллизуют из смеси ЕЮАс Нх (1 1) и получают целевой продукт (10,Зг) в виде длинных палочек с получение реагента лития из 1,2дибромэтилена В 100 миллилитровую трехгорлую колбу, снабженную барботером для газообразного азота, термометром и капельной воронкой, загружают 1,2-дибромэтилен (смесь цис^ранс, 98%, Aldnch, 0,164мл, 2 ммоль, m w = 186, d = 2,246) Добавляют сухой ТГФ (15мл) и раствор охлаждают до 78°С в бане сухой лед-ацетон Добавляют по каплям н-бутиллитий (2,5М в ТГФ, 1,6мл, 4ммоль) в течение 10 минут Смесь перемешивают при этой температуре в течение 1 часа и полученный реагент сразу же используют в следующей стадии d Зр-этинил-3а-окси-5р-прегнан-20-он К вышеуказанному раствору реагента в ТГФ, который выдерживается при -78°С, добавляют по каплям раствор 5р-прегнан-3,20-дион,20-кеталя (180мг, 0,5ммоль) в ТГФ (15мл) В процессе добавления поддерживают температуру ниже -70°С Продолжают перемешивание при этой температуре в течение 15 минут (100% превращение по данным ТСХ) Охлаждающую баню удаляют и проводят охлаждение полученного раствора добавлением 2N HCI (рН 6) Растворитель удаляют и осадок растворяют в ацетоне (10мл) После добавления 2N HCI (4мл) раствор перемешивают при температуре окружающей среды в течение 0,5 часа Смесь нейтрализуют разбавленным раствором ЫаНС0з Твердый осадок (158мг, 93%) отфильтровывают, промывают водой и сушат Затем сырец очищают кристаллизацией из ЕЮАс или смеси ацетон-гексан для получения целевого продукта, Т пл 196 - 197°С, ТСХRi 0,45 (гексан ацетон 7 3) Пример 2 Динатриевая соль За, 20р-диокси-5р-прегнан, бис(гемисукцината) Суспензию За,20р-диокси-5р-прегнана (Steraloids, 250мг, 0,78ммоль) в 5мл сухого пиридина обрабатывают янтарным ангидридом (200мг, 2,0ммоль) Смесь нагревают до 100°С в общем в течение 10 часов Дополнительные бммоль янтарного ангидрида добавляют тремя порциями, пока реакция нагревается Темную смесь концентрируют (0,05мм рт ст, 30°С) для удаления растворителя и затем нагревают до 90°С (0,05мм ртст) для удаления избытка янтарного ангидри 18 да Остаток перекристаллизовывают из смеси эфир/гексан, получая твердый осадок, содержащий в основном янтарную кислоту Маточник концентрируют и подвергают колоночной хроматографии (силикагель для тонкого слоя, элюирование 95/5/0,1 CH2CI2/MeOH/HOAc), получая белый твердый продукт, который перекристалл изовывают из смеси эфир/гексан Бис(гемисукцинат), Т пл 81 - 90°С, переводят в динатриевую соль Бис(гемисукцинат)( 100мг, 0,192ммоль) растворяют в минимальном объеме метанола Добавляют по каплям раствор МаНСОз (2экв , 33мг, 0,393ммоль) в 0,6мл воды После 3 часов раствор концентрируют под вакуумом для получения белого твердого продукта Пример 3 За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он и Зр-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он К раствору 5а-прегнан-3,20-дион 20этиленкеталя (356мг, 0,987ммоль) в сухом ТГФ (5мл) добавляют 0,5М F3CSi(CH3)3 (в ТГФ, 2,5мл, 1,25ммоль) Полученный бесцветный раствор охлаждают до 0°С и добавляют n-BiuNFxbhO (несколько кристаллов) Охлаждающую баню удаляют Наблюдается выделение газа (MesSiF) и реакционный раствор приобретает желтый цвет Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут ТСХ (3 1 гексан/ацетон) показывает полный расход исходного материала, новое пятно двигается почти с фронтом растворителя Далее добавляют 1N НСІ (примерно 3 мл) и полученную двухфазную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи ТСХ (3 1 гексан/ацетон) показывает одно пятно с Ri примерно 0,5 С другой стороны, когда используют хлористый метилен, наблюдают два близких пятна, верхнее из которых является минорным продуктом Добавляют диэтиловый эфир и воду Проводят реэкстракцию водного слоя этиловым эфиром Объединенную органическую фазу промывают насыщенным ЫаНСОз и солевым раствором, сушат (MgSO4), фильтруют и упаривают при пониженном давлении, получая белый кристаллический (пенистый) осадок, который хроматографируют в тонком слое, применяя в качестве элюента СН 2 Сі 2 Упаривание полученных ранее фракций заканчивается получением За-окси-Зртрифторметил-5а-прегнан-20-она (10мг) Дальнейшая элюция с колонки дает Зр-оксиЗа-трифторметил-5а-прегнан-20-он (200мг), который также содержит 1,5% минорного продукта (т е За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-она), как определено F-ЯМР-и GC-масс-спектроскопией Для удаления этой примеси пытаются провести перекристаллизацию в горячей смеси гексан/эти л ацетат 60 40, кристаллы не образуются Окончательно высокочистый Зр-окси-Затрифторметил-5а-прегнан-20-он (145мг) можно получить другим хроматографированием в тонком слое вышеупомянутой смеси 97,5 1,5 с применением СН2СІ2, Т пл 181 - 3°С Пример 4 19 48154 Зр-окси-3а-этенил-5р-прегнан-20-он и За-оксиЗр-этенил-5р-прегнан-20-он Раствор 5р-прегнан-3,20-дион, 20-кеталя (1,18г, З.Зммоль) в сухом ТГФ (20мл) обрабатывают винилмагнийбромидом ( 1 M B ТГФ, 3,7ммоль, 3,7мл) при - 70°С После перемешивания смеси при этой температуре в течение 5 минут и затем при к т в течение 2,5 часов проводят охлаждение смеси насыщенным раствором ІЧЬЦСІ (10мл) Растворитель удаляют, а остаток экстрагируют ЕЮАс Органический слой промывают водой, разбавленным раствором ЫаНСОз, водой и солевым раствором После высушивания над безводным MgSO4 раствор фильтруют и упаривают, получая сырец (1,2г) Последний затем растворяют в ацетоне (20мл) После добавления 1N НСІ(Юмл) раствор перемешивают при к т в течение 15 часов Растворители удаляют и остаток экстрагируют СН2СІ2 Органический слой промывают водой, разбавленным раствором Nah-ІСОз, водой и солевым раствором После высушивания над безводным MgSO4 раствор фильтруют и упаривают, получая сырец (890мг) Последний затем растворяют в небольшом количестве CH2CI2 и наносят на колонку с силикагелем Элюция смесью толуол ацетон (94 6) дает За-этенил-3р-окси-5р-прегнан-20-он (126мг) в качестве первой фракции Дальнейшая элюция той же смесью растворителей дает Зрэтенил-3а-окси-5р-прегнан-20-он (189мг), Т пл 113 -116° Пример 5 а За-окси-5а-андростан-17-он К раствору Зр-окси-5а-андростан-17-она (6г) и диэтилазодикарбоксилата (5,04г) в ТГФ (50мл) добавляют трифторуксусную кислоту (3,3г), и смесь окрашивается в желтый цвет Затем добавляют трифенилфосфин (7,6г) Реакционная смесь обесцвечивается и разогревается Спустя 5 минут добавляют бензоат натрия и затем воду (100мл) Смесь экстрагируют метиленхлоридом (З х 80мл) и органическую фазу сушат над сульфатом магния Растворитель удаляют под вакуумом и сырец гидролизуют гидроксидом калия (10%, 10мл) в метаноле (150мл) в течение 1 часа Большую часть метанола затем удаляют под вакуумом и остаток распределяют между метиленхлоридом и хлоридом аммония Продукт (4,7г, 78%) очищают хроматографией (СН2СІ2 ацетон = 9 1) b За-окси-21 -метил-5а-прегн-17(20)(2)-ен За-окси-5а-андростан-17-она (2г, 6,9ммоль) добавляют к реагенту Виттига, полученного из бромида пропилтрифенилфосфония (13,Зг) и трет-бутилата калия (3,9г) в ТГФ (20мл) Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 12 часов и охлаждают до 25 °С Затем добавляют раствор хлорида аммония (60мл) и органический слой отделяют с помощью делительной воронки Водный слой экстрагируют метиленхлоридом (2 х 50мл) Органический раствор сушат над карбонатом калия и растворитель удаляют под вакуумом Сырец очищают хроматографией (ацетон метиленхлорид гексан = 1 2 7), получая 0,84г продукта (39%) Он представляет собой смесь Z и Е изомеров (Z Е = 13 1) 20 с За-трет-бутилдимбгилсилокси-21-метил-5апрегн-17(20)(7)-ен Смесь 5а-За-окси-21-метилпрегн-17(20)(2)ена (0,84г, 2,66ммоль), TBDMSCI (1,2г, 8,0ммоль) и имидазола (0,91 г, 13.Зммоль) в метиленхлориде (10мл) и ДМФА (30мл) перемешивают в течение 12 часов и затем добавляют хлорид аммония Затем смесь экстрагируют метиленхлоридом (3 х 40мл) и промывают солевым раствором (50мл) Органический раствор высушивают над карбонатом калия и затем удаляют растворитель до тех пор, пока не остается ДМФА Остаток затем растворяют в этиловом эфире и промывают солевым раствором (2 х 50мл) и затем сушат над карбонатом калия Хроматография гексаном приводит к получению 1,14г чистого продукта (100%) d За-трет-бутилдиметилсилокси-20а-окси-21 метил-5а-прегнан «раствору За-трет-бутилдиметилсилокси-21метил-5а-прегн-17(20)(2)-ена (1,14г, 2,66ммоль) в ТГФ (30мл) добавляют по каплям комплекс ТГФдиборан (1М раствор в ТГФ, 5,3мл) при 0°С Реакционную смесь нагревают до 25°С в течение 1 часа Затем очень осторожно добавляют раствор гидроксида натрия (20%, 10мл) при 0°С, после чего добавляют перекись водорода (30%, 10мл) Затем добавляют водный хлорид аммония и ТГФслой отделяют с помощью делительной воронки Водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром (2 х 40мл) Органический раствор сушат над карбонатом калия, и растворитель удаляют под вакуумом Чистый продукт получают колоночной хроматографией (0,52г, 44%) е За,20а-диокси-21 -метил-5а-прегнан Раствор, полученный смешиванием HF(48%, 5мл) и CH3CN (30мл), добавляют в колбу с Затрет-бутилдиметилсилокси-20а-окси-21-метил-5апрегнаном (0,51 г), получая белый осадок Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа и затем фильтруют Твердый белый продукт промывают диэтиловым эфиром три раза, что дает удовлетворительные аналитические результаты (0,Зг, 79%), Т пл 227 - 231 °С Пример 6 За,21 -диокси-Зр-трифторметил-5а-19норпрегнан-20-он К раствору За-окси-Зр-трифторметил-5р-19норпрегнан-20-она (300мг, 0,87ммоль) в толуоле (15мл) добавляют МеОН (1мл) и BF3OEt2 (1,4мл, 1,13ммоль) Полученную смесь охлаждают до 0°С и добавляют РЬ(ОАс)4 (0,54г, 1,21ммоль) Реакционную смесь нагревают до 25°С при перемешивании в течение 45 минут и затем добавляют раствор ЫаНСОз (насыщенный, 30мл) и смесь перемешивают в течение 1 часа Затем ее приливают в делительную колонку с водой (50мл) и экстрагируют диэтиловым эфиром (3 х 40мл) Эфирный раствор промывают солевым раствором (50мл) и сушат над К2СО3 Сырец, полученный после удаления растворителя, растворяют в МеОН (25мл) и добавляют раствор К2СО3 (насыщенный, 8мл) Реакционную смесь перемешивают в течение 5 часов и затем ее приливают в делительную воронку, содержащую 50мл воды Затем ее экстрагируют CH2CI2 (3 х 30мл) Объединенные 21 48154 экстракты высушивают над К2СО3 и полученный сырец очищают хроматографией, получая продую" (160мг) вместе с 21-метоксилированным побочным продуїсгом (40мг) Продую" подвергают дальнейшей очистке перекристаллизацией из 10% ацетона в гексане, получая 88мг чистого продукта (28%) в виде белого твердого продуїсга, Т пл 140 142°С Пример 7 Зр-этинил-3а,20а-диокси-5р-прегнан и Зрэтинил-3а,20р-диокси-5р-прегнан К раствору Зр-этинил-3а,-окси-5р-прегнан-20она (0,31г, 0,91ммоль) в метаноле (20мл) добавляют боргидрид натрия (200мг, 5,3ммоль) и перемешивают смесь при 25°С в течение 1 часа Затем добавляют раствор хлорида аммония (50мл) и смесь экстрагируют СН2СІ2 (3 х 30мл) Хроматографией (EtOAc Hex = 3 7) получают Зр-этинилЗа,20р-диокси-5р-прегнан (200мг, 65%) в качестве основного продукта, Т пл 221 - 223°С Минорный продую", Зр-этинил-3а,20а-диокси-5р-прегнан, подвергают дальнейшей очистке другой хроматографией (25 - 30% этилацетата в гексане, 16мг, 5%), Тпл 187-188°С Пример 8 За,21-диокси-3р-этинилил-5р-прегнан-20-он и За-окси-Зр-этинилил-21-метокси-5р-прегнан-20-он К раствору За,21-диокси-3р-этинил-5рпрегнан-20-она 21-ацетата (725мг, 1,81ммоль) в 45мл метанола добавляют при 0°С водный 10% раствор К2СО3 (3,75мл) После перемешивания в течение 30 минут при к т смесь снова охлаждают до 0°С и добавляют 2N водный раствор НОАс (1,8мл) Затем реакционную смесь добавляют к смеси ЕЮАс/вода Водный слой экстрагируют дважды ЕЮАс и объединенные органические фазы экстрагируют солевым раствором, сушат (Na2SO4) и концентрируют Очистка хроматографией в тонком слое (20см силикагеля в колонке с диаметром 4см, элюирование 2 литрами 20% смеси ацетон/гексан) приводит к образованию 582мг (90%) диола в виде белого твердого продукта, Тпл 155,5-157°С В большом количестве производных За,21диолов выделяют менее полярную примесь с Тпл 176 - 178,5°С, которая, как установлено, является За-окси-Зр-этинил-21-метокси-5р-прегнан20-оном и образуется, возможно, как побочный продукт при получении 21-ацетата Пример 9 Р-этинил-За-окси-5а-прегнан-20-он и Заэтинил-3р-окси-5а-прегнан-20-он Раствор 5а-прегнан-3,20-дион,20-кеталя (720мг, 2ммоль) в сухом ТГФ (20мл) обрабатывают винилмагнийбромидом (1М в ТГФ, 4ммоль, 4мл) при -78°С После перемешивания смеси при этой температуре в течение 5 часов, ее охлаждают добавлением 2N раствора НСІ (2мл) Растворитель удаляют и остаток затем растворяют в ацетоне (25мл) После добавления 2N НСІ (10мл) раствор перемешивают при к т в течение 15 часов Растворители удаляют и остаток экстрагируют СН2СІ2 Органический слой промывают водой, разбавленным раствором ЫаСОз, водой и солевым раствором После высушивания над MgSO4 22 раствор фильтруют и упаривают, получая сырец (1г) Сырец затем растворяют в небольшом количестве CH2CI2 и вносят в колонку ссиликагелем Элюция смесью толуол ацетон (95 5) дает Зрэтенил-3а-окси-5а-прегнан-20-он (250мг) в качестве первой фракции, Т пл 163-165°С Дальнейшая элюция той же смесью растворителей дает За-этенил-3р-окси-5а-прегнан-20-он (150мг) Пример 10 За-окси-Зр-трифторметил-5р-19-норпрегнан20-он К раствору За-окси-Зр-трифторметил-5а-19норпрегн-17(20)(2)-ена (2,6г, 7,3ммоль) в ТГФ (80мл) добавляют по каплям комплекс диборанТГФ (1М раствор в ТГФ, 22мл) при 25°С Реакция заканчивается за 1 час и затем очень осторожно добавляют раствор гидроксида натрия (20%, 50мл) при 0°С, после чего добавляют перекись водорода (30%, 30мл) Затем добавляют воду и ТГФ-слой отделяют с помощью делительной воронки Водный слой экстрагируют метиленхлоридом (2 х 40мл) Органический раствор сушат над карбонатом калия и растворитель удаляют под вакуумом На короткой колонке (гексан ацетон = 1 1) получают 1,8г продукта, который подвергают РСС-окислению (РСС, 2,1 г, 9,6ммоль, ацетат натрия 0,8г, 9,6ммоль) Чистый продукт (700мг, 26%) очищают колоночной хроматографией с применением этилацетата и гексана (15 85) в качестве элюента, Тпл 151,5 - 153,0°С Пример 11 а 3(Р)-спиро-2'-оксиран-5а-17р-оксиандростан Смесь иодида триметилсульфония (6,82г, 31ммоль) и трет-бутилата калия (3,5г, Зіммоль) в ТГФ (30мл) нагревают с обратным холодильником в течение 1,5 часов и затем охлаждают до 25°С Затем добавляют 17р-окси-5а-андростан-3-он (Зг, Ю.Зммоль) и реакционную смесь перемешивают при 25°С в течение 2 часов Затем добавляют воду и смесь экстрагируют диэтиловым эфиром (3 х 80мл) Экстракт высушивают над карбонатом калия, и удаление растворителя приводит к образованию Зг довольно чистого продукта (выход сырца 96%), который применяют на следующей стадии b Зр-метил-зст-окси-ба-андростан-і 7-он «раствору 3(Р)-спиро-2'-оксиран-5а-17роксиандростана (Зг, 9,9ммоль) в ТГФ (50мл) под аргоном добавляют литийалюминийгидрид (LAH, 1М раствор в ТГФ, 10мл) и смесь нагревают с обратным холодильником в течение 5 минут и затем охлаждают до 25°С Добавляют раствор хлорида аммония (водный, насыщенный, 70мл) и затем смесь экстрагируют СН2СІ2 (3 х 70мл) Органический раствор высушивают над карбонатом калия и затем добавляют 4-метилморфолин-І\І-оксид (2,9г, 25ммоль) и размолотые молекулярные сита (4 Ангстрем, Юг) Смесь затем перемешивают в течение 20 минут и добавляют перрутенат тетрапропиламмония (200мг) Реакция заканчивается через 1,5 часа, и реакционную смесь фильтруют через Флорисил, который промывают смесью СН2СІ2 и эфира (1 2) Полученный материал очищают хроматографией (30% ЕЮАс в гексане) для получения продукта (2,5г, 83%) 23 48154 24 Элюция градиентом 5% ацетона/СЬЬСЬ - 100% Зр,21-диметил-3а-окси-5а-прегн-17(20)(2)ацетона дает 667мг целевой кислоты єн Для удаления пиридиниевых солей кислоту К реагенту Виттига, полученному перемеширастворяют в ЕЮАс и экстрагируют охлажденным ванием смеси бромида нльдом, 0,01 N водным раствором НСІ (30мл) Орпропилтрифенилфосфония (2,55г, б.бммоль) и ганический слой сушат Na2SO4 и концентрируют трет-бутилата калия (0,75г, б.бммоль) в ТГФ Остаток, 633мг, Т пл 62 - 68°С, растворяют в ме(20мл) в течение 30 минут, добавляют Зр-метилтаноле и добавляют водный раствор 116мг За-окси-5а-андростан-17-он (0,5г, 1,65ммоль) и (0,253ммоль) ЫаНСОз После перемешивания в смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3,5 часов растворитель удаляют при потечение 18 часов Затем реакционную смесь охниженном давлении и остаток растирают в поролаждают добавлением раствора хлорида аммония шок со смесью диэтиловый эфир/гексан Получаи экстрагируют СН2СІ2 Чистый продукт (420мг, ют светло-желтый твердый продукт, вес 616мг, 77%) получают хроматографией (20% ЕЮАс в растворимость в воде - больше 20мг/мл гексане) Пример 14 d Зр,20а-диокси-3р,21 -диметил-5а-прегнан Зр-фторметил-3а-окси-5а-прегнан-20-он К раствору Зр,21-диметил-3а-окси-5а-прегнСмесь H-Bu4NFxH2O (7,873г) и бензола (50мл) 17(20)(Z)-eHa (0,42г, 1,27ммоль) в ТГФ (30мл) донагревают с обратным холодильником с ловушкой бавляют по каплям комплекс диборан-ТГФ (1М Дин-Старка в течение ночи Смесь, которая не раствор в ТГФ, 2,6мл) при 0°С Реакцию проводят является прозрачным раствором, затем конценпри нагревании до 25°С в течение 2 часов Затем трируют (при нормальном давлении) до примерно очень осторожно добавляют раствор гидроксида 10мл и охлаждают до комнатной температуры К натрия (2N, 10мл) при 0°С, после чего добавляют вышеупомянутому концентрированному раствору перекись водорода (30%, 10мл) Реакционную добавляют раствор 3(Р)-5а-прегнан-3-спиро-2'смесь перемешивают при 25°С в течение 1 часа оксиран-20-он этиленкеталя (2,55г, 6,81ммоль) в Затем добавляют водный хлорид аммония и ТГФсухом бензоле (15мл + 5мл для промывания), слой отделяют с помощью делительной воронки применяя двухконцевую пипетку Полученный Водный слой экстрагируют CH2CI2 (2 х 40мл) Орраствор концентрируют, применяя аппарат молеганический раствор сушат над карбонатом калия и кулярной перегонки, до примерно 10мл и нагрерастворитель удаляют под вакуумом Продукт вают с обратным холодильником в течение 15 получают колоночной хроматографией (0,17г, минут Поскольку очень трудно нанести концен38%) Далее его очищают перекристаллизацией и трированный реакционный раствор на ТСХполучают 110мг продукта Т пл 200 - 203°С пластинку, добавляют сухой бензол (5мл) ТСХ Пример 12 (100 1 СНгСЬ/ацетон или 3 1 гексан/ацетон) Зр,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20показала некоторое количество непрореагироон вавшего исходного материала, наряду с двумя Раствор За,21-диокси-3р-трифторметил-5рновыми менее полярными пятнами Реакционную прегнан-20-она,21 -ацетата (1,36г, З.Обммоль) в смесь снова концентрируют и затем нагревают с МеОН (75мл) охлаждают до 0°С Затем добавляют обратным холодильником в течение 30 минут, по каплям раствор К2СО3 (10% водный раствор, ТСХ (после разбавления смеси бензолом) показа6,45мл, 4,67ммоль) После перемешивания в тела на этот раз почти полный расход исходного чение 1,5 часов при 0°С добавляют по каплям эпоксида Как и раньше смесь концентрируют и раствор уксусной кислоты (2N водный, 2,5мл, нагревают некоторое время с обратным холо5,0ммоль) и смесь нагревают до комнатной темдильником Следует отметить, что данная реакция пературы Добавляют ЕЮАс, CH2CI2 и воду имеет место только тогда, когда смесь высоко (100мл каждого) и перемешивают Органическую концентрирована После остывания смеси до комфазу отделяют, промывают водными растворами натной температуры (образование светло-желтого ЫаНСОз и NaCI, сушат над MgSO4 и упаривают осадка) добавляют диэтиловый эфир или воду под вакуумом Остаток очищают колоночной хроПоскольку не весь осадок растворяется, добавляматографией (гексан/ЕЮАс 3 1) и получают беют СН2СІ2 Водный слой повторно экстрагируют лый твердый продукт (973мг, 79%), Т пл 148 СН2СІ2 Объединенные органические экстракты 150°С промывают водой (х 2), сушат (ЫагЗОД фильтруют и упаривают при пониженном давлении для Пример 13 получения белого твердого продукта, ПМР-спектр Зр,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он 21 которого показал, что он является смесью 4 13ргемисукцинат натрия фторметил-3а-окси-5а-прегнан-20-онэтиленкеталя Раствор За,21-диокси-3р-этинил-5р-прегнани За-фтор-3р-оксиметил-5а-прегнан-20-он этилен20-она (535мг, 1,49ммоль) в 2мл сухого пиридина кеталя обрабатывают при 0°С твердым янтарным ангидридом (1,2экв , 180мг, 1,80ммоль) После нагреваДля гидролиза кеталя к вышеупомянутому ния до к т реакционную смесь перемешивают в твердому продукту добавляют ацетон (100мл), течение 48 часов Удаление растворителя под воду (5мл) и p-TsOH Н2О (143мг, 0,752ммоль) вакуумом и растирание в порошок остатка с гексаЗначение рН подводят добавлением HCI до сланом (2 х 10мл) дает липкий продукт, который расбокислой реакции Смесь нагревают в течение творяют, насколько возможно, в СН2СІ2 и вносят в времени, достаточного для получения прозрачноколонку с 13см силикагеля и диаметром 2см го раствора, который перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов Смесь станос 25 26 работкой основанием, с последующей экстракцией метиленхлоридом, очищают хроматографией, получая 4,5 г продукта (83%) Чистый стереоизомер получают повторной перекристаллизацией из гексан а b За-окси-3р-трифторметил-5р-прегн17(20)(Z)-eH К раствору 5р-прегн-17(20)(2)-ен-3-она (950мг, 3,1 ммоль) в ТГФ (15мл) добавляют трифторметилтриметилсилан (0,5М раствор в ТГФ, 9,5мл) при 0°С Раствор постепенно окрашивается в коричневый цвет и реакция заканчивается за 30 минут Добавляют воду (30мл) и органические слои собирают Водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром (3 х 50мл) и органический раствор сушат над карбонатом калия Чистый продукт (680мг, 58%) выделяют колоночной хроматографией, применяя в качестве элюента этилацетат и гексан (1 9) Пример 18 а За-окси-5р-прегн-ен-20-он К раствору 5р-прегн-11-ен-3,20-диона (Сигма, 1,5г, 4,77ммоль) в ТГФ (40мл) осторожно добавляют три-трет-бутоксиалюминийгидрид лития (1М раствор в ТГФ, 5,7ммоль) при -78°С в течение 15 минут Реакция нагревается до 25°С в течение 12 часов Смесь распределяют между хлоридом аммония и диэтиловым эфиром и полученный таким образом сырец очищают колоночной хроматографией (10 - 20% ацетона в гексане, 1,3г продукта, 86%) b За-окси-5р-20,20-этилендиоксипрегн-11 -ен К смеси За-окси-5р-прегн-11-ен-20-она (1,3г), этиленгликоля (8мл) и триметилортоформиата (20мл) добавляют п-толуолсульфокислоту (0,1 г) и перемешивают реакционную смесь в течение 1 часа Обычной обработкой (бикарбонат натрия и диэтиловый эфир), сопровождаемой удалением растворителей, получают сырец, который очищают хроматографией (ацетонтексан 1 4, 1,2г, 81%) с 5р-20,20-этилендиокси-5р-прегн-11 -ен-3-он Смесь За-окси-20,20-этилендиокси-5р-прегн11-єна (1,2г), ацетата натрия (0,53г) и РСС (1,4г) перемешивают при 25°С в течение 1 часа и затем фильтруют через Флорисил, элюируя метиленхлоридом и эфиром (1 2) Чистый продукт получают колоночной хроматографией (ацетонтексан = 1 9, 0,71г, 60%) d За-окси-3р-трифторметил-5р-прегн-11-ен20-он К раствору 5р-20-этилендиоксипрегн-11-ен-3она (710мг, 1,98ммоль) в ТГФ (15мл) добавляют трифторметилтриметилсилан (0,5М раствор в ТГФ, 6мл) и затем фторид тетрабутиламмония при 0°С Раствор постепенно окрашивается в коричневый цвет и реакция заканчивается за 1 час Добавляют воду (30мл) и органический слой собирают Водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром (3 х 40мл) и органический раствор сушат над карбонатом калия Сырец, полученный удалением растворителя, гидролизуют HCI (2N, 5мл) в ацетоне (40мл) Чистый продукт (554мг, 73%) выделяют колоночной хроматогрфией, применяя в 48154 вится мутной, поэтому добавляют CH2CI2 для получения прозрачного раствора ТСХ показала окончание реакции Растворители удаляют при пониженном давлении, получая белый твердый продукт, к которому добавляют CH2CI2 и воду Водный слой повторно экстрагируют CH2CI2 Объединенные органические слои промывают насыщенным ЫаНСОз, сушат (MgSO4), фильтруют и упаривают при пониженном давлении, получая белый кристаллический осадок (2,5г), ПМР-спектр которого показал, что он является смесью 4 1 Зафторметил-3а-окси-5а-прегнан-20-она и За-фторЗр-оксиметил-5а-прегнан-20-она Колоночная хроматография указанной смеси с применением CH2CI2 в качестве элюента дает целевой Зафторметил-3а-окси-5а-прегнан-20-он (1,41 г, 59%), Тпл 20 1-203°С Пример 15 Зр-этинил-3а,20а-диокси-5а-прегнан и Зрэтинил-3а,20р-диокси-5а-прегнан К раствору Зр-этинил-3а-окси-5а-прегнан-20она (0,31г, 0,91ммоль) в метаноле (20мл) добавляют боргидрид натрия (200мг, 5,3ммоль) и перемешивают смесь при 25°С в течение 1 часа Затем добавляют раствор хлорида аммония (50мл) и смесь экстрагируют СН2СІ2 (3 х 30мл) Хроматографией (EtOAc Hex = 3 7) получают Зр-этинилЗа,20р-диокси-5а-прегнан (192мг, 60%) в качестве основного продукта, Тпл 195,5 - 197,5°С, и Зрэтинил-3а,20а-диокси-5а-прегнан (19мг, 6%) в качестве минорного продукта, Т пл 210 - 215°С (с разл) Пример 16 Зр,20а-диокси-21 -метил-5а-прегнан бисгемисукцинат В сухую колбу, содержащую За,20а-диокси-21метил-5р-прегнан (350мг, 1,05ммоль), добавляют пиридин (безводный, 5мл) и затем добавляют янтарный ангидрид (1г, Юммоль) Смесь нагревают на масляной бане при 100°С в течение 20 часов, а затем охлаждают до 25°С Смесь перемешивают с раствором HCI (1N, 70мл) и экстрагируют ЕЮАс (3 х 40мл) и экстракты сушат над Na2SC4 Продукт (0,54г) получают хроматографией (7% МеОН и 0,3% НОАс в CH2CI2) и затем подвергают дальнейшей очистке перекристаллизацией из ЕЮАс, получая 334мг продукта (60%), Тпл 159- 162,5°С Пример 17 а 3,3-этилендиокси-5р-прегн-17(20)(2)-ен 5р-3-Этилендиокси-андростан-17-он (6г) добавляют к реагенту Виттига, полученному из бромида этилтрифенилфосфония (15г) и третбутилата калия (4,5г) в ТГФ (15мл) Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 2 часов и охлаждают до 25 °С Затем добавляют метиленхлорид (80мл) и раствор хлорида аммония (60мл) и органический слой отделяют с помощью делительной воронки Водный слой экстрагируют метиленхлоридом (2 х 50мл) Органический раствор сушат над карбонатом калия и растворитель удаляют под вакуумом Наибольшую часть трифенилфосфиноксида удаляют промыванием гексаном Полученный продукт (6г) растворяют в ацетоне (100мл) и добавляют соляную кислоту (2N, 10мл) Сырец (5,5г), полученный об 27 48154 качестве элюента етилацетати гексан (1 5) Т пл 160-162,5°С Пример 19 За,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он 21 ацетат Суспензию Зр-этинил-3а-окси-5р-прегнан-20она ( 1,00г, 2,92ммоль) в 35мл толуола обрабатывают 2 мл метанола Полученный раствор охлаждают в бане лед/вода и добавляют чистый BF 3 Et 2 0 (Aldnch, 5,8мл, 5,02г, 35,4ммоль) Твердый тетраацетат свинца (Aldnch, 1,96г, 4,42ммоль) добавляют несколькими порциями Светлопурпурный раствор, образующийся сначала, приобретает коричневый цвет при продолжении перемешивания при 0°С Смесь перемешивают при к т в течение 3 часов и затем охлаждают до 0°С Холодную реакционную смесь добавляют к смеси 52мл насыщенного раствора NaHCO3, воды и размельченного льда Полученную смесь экстрагируют ЕЮАс (2 х 75мл) Объединенные органические слои экстрагируют насыщенным раствором NaCI, сушат (ЫагЗСч) и концентрируют Сырец очищают колоночной хроматографией (25см силикагеля для тонкого слоя в колонке, диаметром 5, элюируют 3 литрами 20% ацетон/гексана), получая 749 (64%) ацетата, Т пл 196 - 198°С Пример 20 За,21 -диокси-3р-фторметил-5р-прегнан-20-он, 21 -ацетат За-Окси-Зр-трифторметил-5р-прегнан-20-он (1,94г, 5,02ммоль) растворяют в толуоле (86мл) и МеОН (5,2мл) в атмосфере безводного аргона Эфират трифтористого бора (10,4мл, 84,3ммоль) добавляют шприцем Затем добавляют тетраацетат свинца (2,89г, 6,51ммоль) Смесь перемешивают в течение 70 минут, приливают в воду и экстрагируют три раза CH2CI2 Органические фазы объединяют, промывают водными растворами NaHCO3 и NaCI, сушат над MgSO4 и упаривают под вакуумом, получая бледно-желтый твердый продукт (2,18г) Этот твердый продукт очищают колоночной хроматографией (СЬЬСЬ/ЕЮАс 150 1 и гексан/ЕЮАс 4 1), получая белый твердый продукт (1,54г, 69%) Тпл 167-168,5°С Пример 21 За-окси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он Ссылка Krishnamurti R, Bellew D R , Surya Prakash, G К J Org Chr=em 1991,56,984 К раствору 5р-прегнан-3,20-дион 20этиленкеталя (60мг, 0,166ммоль) в сухом ТГФ (Змл) добавляют 0,5М F3CSi(CH3)3 (в ТГФ, 0,5мл, 0,25ммоль) Полученный бесцветный раствор охлаждают до 0°С и добавляют n-BiuNFxbhO (несколько кристаллов) Охлаждающую баню удаляют и смесь нагревается до комнатной температуры Хотя та же реакция происходит с 5а-прегнан-3,20-дион 20-этилкеталем, вышеупомянутая реакционная смесь не окрашивается в желтый цвет, и также не происходит выделения газа ТСХ (3 1 гексан/ацетон) не показала образование какого-либо продукта После чего добавляют 0,5М F3CSi(CH3)3 {в ТГФ, 0,5мл, 0,25ммоль) Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение нескольких минут ТСХ показывает новое пятно, Ri которого близко к 1, но еще наблюдается некоторое количество не 28 прореагировавшего исходного материала Поэтому добавляют еще 0,5М F3CSi(CH3)3 (в ТГФ, 0,5мл, 0,25ммоль) Смесь опять перемешивают при комнатной температуре Не наблюдается присутствия непрореагировавшего исходного кетона Добавляют 1N HCI (примерно Змл) и полученную двухфазную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи Пятно, которое образуется как продукт трифторметилирования, сейчас полностью исчезает, и наблюдают два новых, менее полярных пятна, нижнее из которых является основным продуктом Смесь разбавляют диэтиловым эфиром и водой Водный слой отделяют и экстрагируют диэтиловым эфиром Объединенные органические слои промывают насыщенным NaHCO3 и солевым раствором, сушат (MgSO4), фильтруют и упаривают при пониженном давлении, получая белый кристаллический (пенистый) осадок ПМР- и 19Г-ЯМР-спектры указанного осадка показывают присутствие двух эпимеров в соотношении 85 15 Разделение этих двух эпимеров достигается хроматографией в тонком слое с применением 15 1 гексан/ацетон а Упаривание полученных ранее фракций дает минорный изомер, который не был охарактеризован, и является, как предполагалось, Зр-окси-Затрифторметил-5р-прегнан-20-оном Дальнейшая элюция с колонки дает За-оксиЗр-трифторметил-5р-прегнан-20-он (50мг) Пример 22 За-окси-Зр-трифторметил-5р-19-норпрегн17(20)(Z)-eH К раствору 5р-19-норпрегн-17(20)(2)-ен-3-она (823мг, 2,88ммоль) в ТГФ (30мл) добавляют трифторметилтриметилсилан (0,5М раствор в ТГФ, 8,6мл) при 0°С Раствор постепенно окрашивается в коричневый цвет и реакция заканчивается за 30 минут Добавляют воду (30мл) и органический слой собирают Водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром (3 х 50мл) и органический раствор сушат над карбонатом калия Чистый продукт (800мг, 78%) выделяют колоночной хроматографией, применяя в качестве элюента этилацетат и гексан (1 9) Пример 23 За,21 -окси-3р-метил-5а-прегнан-20-он, 21 ацетат Раствор За-окси-3р-метил-5а-прегнан-20-она ( 3,00г, 9,02ммоль) в сухом толуоле (110мл) и метаноле (6мл) охлаждают на бане сухой лед/ацетон до -75°С Добавляют шприцем чистый BF3Et2O (Aldnch, 18мл, 146ммоль), после чего твердый тетраацетат свинца (4,39г, 9,90ммоль) добавляют порциями Реакция не шла при -75°С, и реакционную смесь нагревают до -10°С в течение 4 часов Реакционную смесь нагревают до 0°С дополнительно 90 минут По данным ВЭЖХ исходное вещество присутствует как основной пик После 1 часа при 0°С реакционную смесь охлаждают до 15°С и добавляют еще 1,94гтетраацетата свинца, реакционную смесь нагревают до 0°С Спустя 30 минут анализ ВЭЖХ (рассеивающий детектор) дал нескорректированное соотношение продукта и исходного материала 10 1, и после дополнительных 45 минут реакционную смесь охлаждают до 29 48154 10°С и добавляют охлажденную льдом смесь 100мл ЕЮ Ас, 165мл насыщенного раствора ЫаНСОз и измельченного льда Водный слой отделяют и промывают ЕЮАс (2 х 150мл) Объединенные органические слои промывают затем дважды водой и насыщенным раствором NaCI После высушивания над Na2SO4, удаляют растворитель и остаток перекристаллизовывают из ЕЮАс, получая 1г ацетата с примесью исходного материала Маточник концентрируют под вакуумом и растирают в порошок с двумя порциями по 100мл гексана Остаток из гексановых промывок объединяют с перекристаллизованным материалом и перекристаллизовывают второй раз Полученный твердый осадок загрязнен 2,8% исходного материала (по данным ВЭЖХ) Третья перекристаллизация дает 1,087г (выход 31%) ацетата, который содержит меньше 2% исходного материала Пример 24 Зр,21 -диокси-5а-прегнан-20-он 21-динатрий фосфат К раствору 21-бром-За-окси-5р-прегнан-20-она (1,0г, 2,5ммоль) в 10мл ТГФ при к т добавляют дибензилфосфат (2,1 г, 7,55ммоль) и триэтиламин (1,085мл, 7,8ммоль) при перемешивании Реакционную смесь затем нагревают с обратным холодильником в течение 2,5 часов и затем охлаждают до к т Затем добавляют дихлорметан (25мл) и раствор переносят в делительную воронку, промывают 1N HCI, насыщенным водным ЫаНСОз, сушат MgSO4 и концентрируют под вакуумом, получая дибензилфосфат в виде масла-сырца (943мг) Масло растворяют в ЕЮН (50мл) и добавляют несколько капель серной кислоты В колбу загружают 40мг 5% Pd/C и перемешанный раствор затем выдерживают под давлением 1 атм газа ЬІ2 при к т до тех пор, пока реакция не закончится Катализатор удаляют фильтрацией и раствор концентрируют, получая остаток Этот остаток растворяют в смеси 4 1 МеОН вода (20мл) и титруют до рН 11 с помощью 2N NaOH Добавляют другую порцию 50мл МеОН и после осаждения при 0°С в течение 1 часа твердый неорганический фосфат отфильтровывают Раствор концентрируют под вакуумом и остаток промывают горячим толуолом (примерно 50мл) и затем растворяют в минимальном объеме МеОН К этому раствору осторожно добавляют ацетон до тех пор, пока не выпадет твердый осадок Смесь центрифугируют, растворитель декантируют и влажный твердый осадок переносят в ампулу и сушат под вакуумом, получая целевое соединение в виде гигроскопичного твердого вещества Пример 25 За,21 -диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он 21 динатрий фосфат К раствору 21-бром-За-окси-Зр-метил-5апрегнан-20-она (1,0г, 2,43ммоль) в 10мл ТГФ при к т добавляют дибензилфосфат (2,1 г, 7,3ммоль) и триэтиламин (1,085мл, 7,53ммоль) при перемешивании Реакционную смесь затем нагревают с обратным холодильником в течение 4,5 часов и затем охлаждают до к т Затем добавляют дихлорметан (25мл) и раствор переносят в делительную воронку, промывают 1N HCI, насыщенным водным ЫаНСОз, сушат MgSO4 и концентри 30 руют под вакуумом, получая дибензилфосфат в виде масла-сырца (1,205г) Дибензилфосфат (790мг, 1,3ммоль) растворяют в смеси 2 1 ЕЮН ТГФ (30мл) с несколькими каплями серной кислоты, загружают 5% Pd/C (180мг, 20% по весу) и выдерживают под давлением 50 psi H2 при к т до тех пор, пока реакция не закончится (по ТСХ) Катализатор удаляют фильтрацией и фильтрат концентрируют Остаток растворяют в смеси 4 1 МеОН вода (10мл) и титруют до рН 11 с 1М NaOH Раствор обрабатывают ацетоном, пока не выпадет легко фильтруемый осадок, после чего смесь охлаждают до 0°С и фильтруют, чтобы выделить твердый продукт-сырец 260мг Твердый продукт растворяют в 20 мл воды, получая мутный раствор, который фильтруют и затем концентрируют, получая 220мг целевого соединения в виде белого твердого продукта Пример 26 а 20,20-этилендиокси-5а-прегнан-3-он Указанное соединение получают со средним выходом примерно 90% из Зр-окси-5а-прегнан-20она, применяяспособ, описанный для 5рсоединений b Зр-этинил-За-окси 5а-прегнан-20-он, 20кеталь и За-этинил-Зр-окси 5а-прегнан-20-он, 20кеталь В 250 миллилитровую трехгорлую колбу, снабженную отводом для газа, термометром и конденсатором, загружают комплекс ацетил ид лития-EDA (2,75г, 90%, 27,5ммоль) Добавляют сухой бензол (60мл) и в смесь пробулькивают ацетилен с небольшой скоростью Затем смесь нагревают до 50 - 55°С на масляной бане и обрабатываютчастями 5а-прегнан-3,20-дион,20-кеталя (9г, 25ммоль) Перемешивание продолжают при этой температуре в течение 5 часов и затем при к т еще 17 часов Полученную суспензию охлаждают до 10°С и обрабатывают насыщенным раствором NaCI (5мл) Растворитель удаляют и остаток помещают в воду Водонерастворимый продукт собирают фильтрацией, промывают водой и сушат под вакуумом Этот сырец затем перекристаллизовывают из ЕЮАс, получая Заэтинил-3р-окси-5а-прегнан-20-он,20-кеталь (3,35г) Маточник упаривают досуха и остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле Элюирование смесью толуол ацетон (92 8) дает непрореагировавший исходный кетон (1,3г) и Зрэтинил-3а-окси-5а-прегнан-20-он,20-кеталь (1,3г) во второй фракции Дальнейшее элюирование с той же смесью растворителей дает более полярный За-этинил-3р-окси-5а-прегнан-20-он,20-кеталь (270мг) с Зр-этинил-3а-окси-5а-прегнан-20-он Зр-Этинил-За-окси-5ст-прегнан-20-он,20кеталь (550мг) растворяют в смеси ацетона (20мл) и 2N НСІ (10мл) и смесь перемешивают при к т в течение 15 часов Растворители удаляют и остаток экстрагируют СН2СІ2 Органический слой промывают водой, разбавленным раствором NaHCO3, водой и солевым раствором После высушивания над безводным MgSO4 раствор фильтруют и упаривают, получая сырец (414мг) Этот сырец затем растворяют в небольшом количестве CH2CI2 и 31 48154 наносят на колонку с силикагелем Элюирование смесью толуол ацетон (92 8) дает целевое соединение (280мг), Т пл 175-177°С d За-этинил-3р-нитроокси-5а-прегнан-20-он Раствор За-этинил-3р-окси-5а-прегнан-20он,20-кеталя (2,15г) в СНСІз (45мл) охлаждают до 20°С и обрабатывают уксусным ангидридом (20мл) Затем добавляют дымящую азотную кислоту, и смесь перемешивают при этой температуре в течение 45 минут После нагревания до 5°С желтый раствор приливают в смесь 2N NaOH (70мл) и воды (150мл), получая конечный раствор с рН 3 - 4 Его затем экстрагируют СНСІз, промывают водой, насыщенным раствором ЫаНСОз, солевым раствором, сушат (МдБСч) и упаривают, получая целевой продукт в виде вязкого материала, который применяют на следующей стадии е Зр-этинил-3а-окси-5а-прегнан-20-они-3аэтинил-3р-окси-5а-прегнан-20-он Сырец (Зг) из предыдущей стадии берут в смеси ТГФ и воды (30мл, 1 1) и добавляют АдІЧОз (516мг) После перемешивания при к т в течение 15 часов растворители удаляют и остаток экстрагируют СН2СІ2 Органический слой промывают водой, разбавленным раствором МаНСОз, водой и солевым раствором После высушивания над безводным MgSO4 раствор фильтруют и упаривают, получая сырец (2г) Этот сырец затем растворяют в небольшом количестве CH2CI2 и наносят на колонку с силикагелем Элюирование смесью толуол ацетон (93 7) дает Зр-этинил-Заокси-5а-прегнан-20-он (550мг) в первой фракции Дальнейшее элюирование той же смесью растворителей дает, более полярный, За-этинил-Зрокси-5а-прегнан-20-он (460мг) Пример 27 Зр,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20он, 21-гемисукцинат В атмосфере безводного аргона За,21-диоксиЗр-трифторметил-5р-прегнан-20-он (920мг, 2,29ммоль), янтарный ангидрид (457мг, 4,57ммоль) и диметиламинопиридин (14мг) растворяют в безводном пиридине После перемешивания в течение 16 часов добавляют еще 7мг диметиламинопиридина После перемешивания в течение еще 3 часов растворитель удаляют под вакуумом Остаточный пиридин удаляют упариванием из толуольного раствора Остаток очищают колоночной хроматографией (СНгСЬ/МеОН, градиент 100 1 до 50 1), получая белый полутвердый остаток (1,1 г) Этот слабо загрязненный твердый продукт растворяют в CH2CI2, промывают водой (3 х 50мл) и сушат над MgSO4 Растворители удаляют под вакуумом, получая белый твердый продукт (883мг, 77%) Натриевая соль Зр,21-диокси-3ртрифторметил-5р-прегнан-20-он, 21гемисукцината За,21-Диокси-Зр-трифторметил-5р-прегнан-20он,21-гемисукцинат (859мг, 1,71ммоль) растворяют в МеОН (35мл) Затем добавляют по каплям NaHCO3 (143мг, 1,70ммоль) в воде (10мл) Добавляют еще 10мл МеОН После перемешивания в течение 2,5 часов растворитель упаривают Добавляют толуол и упаривают под вакуумом Оста 32 ток растирают со смесью диэтиловыи эфир/гексан и затем с гексаном, получая белый твердый продукт Добавляют МеОН и удаляют Добавляют гептан и удаляют под вакуумом Остаток растирают с гексаном и сушат в вакууме, получая белый твердый продукт (878мг, 98%) Пример 28 Зр-этинил-За-окси-5р-прегнан-11 -ен-20-он К раствору цис^ранс дибромэтилена (236мг, 1,27ммоль) в 5мл сухого ТГФ при -78°С добавляют по каплям 1,6М раствор BuLi в гексане (1,6мл, 2,54ммоль) и смесь перемешивают в течение 30 минут Затем снижают температуру до -90°С и добавляют через канюлю раствор 5р-прегн-11-ен3,20-она в 10мл ТГФ в течение 10 минут и реакционную смесь перемешивают при -90°С еще 30 минут, после чего добавляют Змл насыщенного водного раствора NH4CI и смесь перемешивают при комнатной температуре Количество растворителя уменьшают под вакуумом до примерно 5мл и затем распределяют реакционную смесь между этилацетатом и водой (25мл каждого) Органический слой промывают насыщенным водным NaCI, сушат MgSO4 и концентрируют в вакууме, получая сырец Хроматографией в тонком слое на 6-дюймовой колонке с 2см силикагеля, собирая фракции по 10мл, элюируя смесью 95 5 толуол ацетон, получают 142мг (65,61) целевого соединения Т пл 147 - 50°С Пример 29 Зр-фторметил-За-окси-5а-19-норпрегнан-20он Это соединение было получено в качестве побочного продукта при получении За-окси-Зртрифторметил-5р-19-норпрегнан-20-она (см пример 10) Оно было выделено из соответствующих хроматографических фракций Т пл 178 -179°С Пример 30 Зр-(1-гептинил)-За-окси-5р-прегнан-20-он Раствор 1-гептина (0,327мл, 2,5ммоль) в сухом ТГФ (15мл) обрабатывают n-BuLi (2,5M в ТГФ, 2,5ммоль, 1мл) при -78°С После перемешивания смеси при этой температуре в течение 1 часа добавляют раствор циклического 20-(1,2этандиилацеталя) 5р-прегнан-3,20-диона (360мг, Іммоль) в сухом ТГФ (15мл) и смесь перемешивают при -78°С в течение 1 часа Затем ее охлаждают добавлением 2N раствора HCI (1мл) Растворитель удаляют и остаток затем растворяют в ацетоне (10мл) После добавления 2N HCI (10мл) раствор перемешивают при к т в течение 1 часа Добавляют насыщенный раствор ЫаНСОз для нейтрализации кислоты Растворители удаляют и остаток экстрагируют ЕЮАс Органический слой промывают водой, разбавленным раствором ЫаНСОз, водой и солевым раствором После высушивания над безводным MgSO4 раствор фильтруют и упаривают, получая сырец (400мг) Сырец затем растворяют в небольшом количестве CH2CI2 и вносят в колонку с силикагелем Элюция смесью толуол ацетон (93 7) дает Зр-(1-гептинил)-Заокси-Зр-прегнан-20-он (260мг) в виде безцветного твердого продукта, Т пл 121 - 123°С Аналогичный способ был применен для получения Зр-(1-гептинил)-За-окси-5р-прегнан-20-она, 33 48154 Зр-(1 -октинил)-3а-окси-5р-прегнан-20-она, Зр-(1 циклопропилэтинил)-3а-окси-5р-прегнан-20-она, Зр-(3-метилбутил-2-ен-1-инил)-За-окси-5рпрегнан-20-она, Зр-(3,3-диметилбутинил)-3а-окси5р-прегнан-20-она Пример 31 Зр-циклопропилэтинил-3а-окси-5р-прегнан-20он а Зр-(5-хлор-1-пентинил)-За-окси-5р-прегнан20-он-циклический 20-(1,2-этандиилацеталь) Раствор 5-хлорпентина (0,5мл, 4,8ммоль) в сухом ТГФ (15мл) обрабатывают n-BuLi (2,4M в ТГФ, 4,8ммоль, 2мл) при -60°С После перемешивания смеси при температуре -78°С в течение 0,5 часов добавляют раствор циклического 20-(1,2этандиилацеталя) 5р-прегнан-3,20-диона (560мг, 1,56ммоль) в ТГФ (15мл) и смесь перемешивают при -78°С в течение 1 часа Охлаждающую баню удаляют и смесь охлаждают добавлением раствора NH4CI (Змл) Растворитель удаляют и остаток экстрагируют ЕЮАс Органический слой промывают водой, разбавленным раствором ЫаНСОз, водой и солевым раствором После высушивания над безводным MgSO4 раствор фильтруют и упаривают, получая сырец (660мг) Этот сырец применяют на следующей стадии b Зр-циклопропилэтинил-3а-окси-5р-прегнан20-он Раствор диизопропиламина (0,4мл, Зммоль) в сухом ТГФ (15мл) обрабатывают n-BuLi (2,5M в ТГФ, Зммоль, 1,2мл) при -60°С После перемешивания смеси при температуре -78°С в течение 0,5 часов добавляют раствор Зр-(5-хлор-1 -пентил)За-окси-5р-прегнан-20-он-циклического 20-(1,2этандиилацеталя) (100мг, 0,22ммоль) в ТГФ (15мл) Охлаждающую баню удаляют и смесь перемешивают при к т в течение 0,5 часа Затем ее охлаждают раствором ІЧЬЦСІ (Змл) Растворитель удаляют и остаток затем растворяют в ацетоне (40мл) После добавления 1N НСІ (4мл) раствор перемешивают при к т в течение 15 минут Добавляют насыщенный раствор ЫаНСОз для нейтрализации кислоты Растворители удаляют и остаток экстрагируют ЕЮАс Органический слой промывают водой, разбавленным раствором Nah-ІСОз, водой и солевым раствором После высушивания над безводным MgSO4 раствор фильтруют и упаривают, получая сырец (120мг) Этот сырец затем растворяют в небольшом количестве CH2CI2 и вносят в колонку с силикагелем Элюция смесью толуол ацетон (95 5) дает Зр(циклопропилэтинил)-3а-окси-5р-прегнан-20-он (55 мг) в виде безцветного твердого продукта, Т пл 121 - 138°С, TCX-Rf (гексан ацетон 7 3) 0,29 Для опытных исследователей очевидно, что вышеописанные соединения могут быть представлены как смеси диастереомеров, которые могут быть разделены на индивидуальные диастереомеры Разделение диастереомеров может быть достигнуто посредством газовой или жидкостной хроматографии или выделением из природных источников До введения другого определения, ссылка в описании и формуле изобретения на соединения изобретения, как обсуждалось вы 34 ше, подразумевает включение всех изомеров, как разделенных, так и их смесей Там, где изомеры разделены, желаемая фармакологическая активность часто будет преобладать в одном из диастереомеров Как отмечалось, эти соединения проявляют высокую степень стереоспецифичности В частности, те соединения, которые обладают большей аффинностью к комплексу рецептора ГАМК, являются соединениями с Зр-замещенными-За-оксипрегнановыми стероидными скелетами Соединения изобретения и применяемые в нем, которые являются нетоксичными, фармацевтически приемлемыми, природными или синтетическими, непосредственно действующими формами или "пролекарственными формами" метаболитов прогестерона, дезоксикортикостерона и андростана, обладают до сих пор неизвестной активностью в головном мозге в отношении комплекса рецептора ГАМКд Настоящее изобретение дает преимущество в раскрытии этого до сих пор неизвестного механизма и активности Фармацевтические препараты изобретения готовят в обычных дозированных формах введением активного соединения изобретения или смеси таких соединений с нетоксичным фармацевтическим носителем в соответствии с принятыми процедурами в нетоксичном количестве, достаточном для получения желательной фармакодинамической активности у субъекта, животного или человека Предпочтительно композиция содержит активный ингредиент в активном, но нетоксичном количестве, выбранном из интервала от приблизительно 1мг до 500 г активного ингредиента на единицу дозы Это количество зависит от желательной специфической биологической активности и состояния пациента Желательными объектами композиций и способов изобретения являются нуждающиеся в лечении стресса, тревожности, PMS, PND и припадков, таких, как вызываемые эпилепсией, с целью облегчения или предупреждения приступов тревожности, мышечного напряжения и депрессии, обыкновенных для пациентов, страдающих от этих аномалий центральной нервной системы Дополнительным желательным объектом композиции и способов является лечение бессонницы и получение снотворных Другим желательным объектом применения соединений и способов является индукция анестезии, особенно при внутривенном введении Применяемым фармацевтическим носителем может быть, например, как твердый, жидкий носитель, так и носитель с замедленным высвобождением (см , например Remington's Pharmaceutical Sciences, 14th Edition, 1970) Представителями твердых носителей являются лактоза, каолин, сахароза, тальк, желатин, агар, пектин, акация, стеарат магния, микрокристаллическая целлюлоза, полимерные гидрогели и т п Типичными жидкими носителями являются пропиленгликоль, гликофурол, водные растворы циклодекстринов, сироп, арахисовое масло и оливковое масло, а также подобные эмульсии Подобным образом носитель или разбавитель могут включать любые материалы с замедленным выделением, которые хорошо известны, такие как моностеарат глицери 35 на или дистеарат глицерина, как один, так и с воском, микрокапсулы, микросферы, липосомы и/или гидрогели Может быть использован широкий круг фармацевтических форм Таким образом, при использовании твердого носителя препарат может быть необработанным, измельченным, микронизированным, содержащимся в масле, таблетированным, помещенным в твердую желатиновую капсулу или капсулу в оболочке для перорального применения в микронизированном порошке или в форме пилюли или в форме пастилки или лепешки Соединения изобретения или используемые в нем могут также быть применены в форме суппозиториев для ректального введения Соединения могут быть смешаны с материалом, таким как масло какао и полиэтиленгликоли или другим подходящим нераздражающими материалом, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре При использовании жидкого носителя препарат может быть в форме жидкости, такой как ампула или как водная или неводная, жидкая суспензия Жидкие дозированные формы также требуют фармацевтически приемлемых консервантов и т п Кроме того, из-за низких доз, которые будут требоваться, исходя из описанных здесь данных, парентеральное введение, назальные спреи, подъязычное и защечное введение и кожные пластыри с задержанным выделением также являются подходящими фармацевтическими формами для наружного применения Способ получения активности против тревожности, противосудорожной, изменяющей настроение (такой, как антидепрессивная) или снотворной активности в соответствии с этим изобретением предусматривает введение нуждающемуся в такой активности субъекту соединения изобретения, обычно приготовленного в композиции, как описано выше, с фармацевтическим носителем в нетоксическом количестве, достаточном для получения указанной активности Во время менструаций уровни выделяемых метаболитов изменяются приблизительно в четыре раза (Rosciszewska et al , 1986) Поэтому терапия, регулирующая симптомы, включает поддержание у пациента повышенного уровня метаболитов прогестерона по сравнению с нормальным в предменструальном статусе пациентов с PMS Уровни в плазме активных и главных метаболитов наблюдают во время предменструальноПо и постменструального периодов у пациента Количество вводимых соединений изобретения, как отдельно, так и в виде их смесей, рассчитывают таким образом, чтобы достигнуть уровень, который дает активность ГАМК-рецептор, равную или превышающую уровень метаболитов прогестерона у нормального субъекта в предменструальном статусе Способом введения может быть любой способ, который эффективно доставляет активное соединение к рецепторам ГАМКд, которые подлежат стимуляции Введение может быть проведено парентерально, перорально, ректально, внутривагинально, внутрикожно, внутримышечно, подъязычно или назально, предпочтительными являют 48154 36 ся пероральныи, внутримышечный и накожный способы Например, одна доза в кожном пластыре может доставлять активный ингредиент пациенту в течение периода до одной недели Однако, парентеральный способ предпочтителен при эпилепсии Активность и эффективность участка GR Полученные in vitro и in vivo экспериментальные данные показывают, что существующие в естественных условиях метаболиты прогестерона/дезоксикортикостерона и их производные взаимодействуют с высокой аффинностью с новым и специфическим сайтом узнавания на комплексе GR для облегчения проведения ионов хлорида через мембраны нейронов, чувствительных к ГАМК (Gee et al , 1987, Harrison et al , 1987) Опытным исследователям известно, что моJ S]tдуляции связывания бутилбициклофосфоротионат([ S]TBPS)a является мерой активности и эффективности лекарственных средств, действующих на комплекс GR, эти лекарства могут обладать потенциальной терапевтической ценностью при лечении стресса, тревожности и эпилептических нарушений (Squires R F , et al , "[35S]t-Butylbicyclophophorothionate binds with high affinity to brain-specific sites coupled to gamma amimbutyric acid-A and ion recognition site", Мої Pharmacol , 23 326, 1983, Lawrence L J , et al , Benzodiazepme anticonvulsant action gammaammobutinc acid-dependent modulation of the chloride lonophore", Biochem Biophys Res Comm 123 1130-1137, 1984, Wood et al , "In vitro characterization of benzodiazepme receptor agonists, antagonists, inverse agonists and agonist/antagonists", Pharmacol Exp Ther,231 572-576,(1984)) Мы провели ряд экспериментов для установления природы модуляции [35S]TBPS при воздействии соединений изобретения Мы обнаружили, что эти соединения взаимодействуют с новым сайтом на комплексе GR, который не перекрывается с барбитуратным, бензодиазепиновым или любыми другими ранее известными сайтами Более того, эти соединения обладают высокой активностью и эффективностью в отношении комплекса GR при строгих структурных требованиях для такой активности Процедуры проведения этого анализа полно обсуждены в (1) Gee et al , 1987, и (2) Gee K W , L J Lawrence and H I Yamamura, Molecular Pharmacology, 30 218 (1986) Эти процедуры выполняют как описано ниже Головной мозг самцов крыс Spague-Dawley удаляют сразу после умерщвления и кору головного мозга иссекают на льду Гомогенат P-z готовят, как описано ранее (Gee et al , 1986) Коротко говоря, кору головного мозга осторожно гомогенизируют в 0.32М сахарозе с последующим центрифугированием при 1000 х g в течение Юмин Супернатант собирают и центрифугируют при 9000 х g в течение 20 минут Полученный осадок P-z суспендируют до получения 10% (исходная сырая масса/объем) суспензии в 50Мм Na/K фосфатном буфере (рН 7,4) с 200Мм NaCI для получения гомогената Аликвоты по сто микролитров (мкл) гомогената Рг (0,5 миллиграммов (мг) белка) инкубируют с 2 наномолярным (Нм) [ S]TBPS (TBPS -т 37 48154 бутилбициклофосфоротионат) (70 100 Ки/миллимоль, N e w England Nuclear, Boston, MA) в присутствии или отсутствии тестируемых существующих в естественных условиях стероидов или их синтетических производных Тестируемые соединения растворяют в диметилсульфоксиде (Baker C h e m Co , Phillpsbury, NJ) и добавляют в инкубационную с м е с ь в аликвотах по 5мкл Инкубационную смесь доводят буфером до конечного объема 1мл Неспецифическое связывание отмечают как связывание в присутствии 2 М м T B P S Э ф ф е к т и специфичность ГАМК (Sigma C h e m Co , St Louis, МО) оценивают, проводя все анализы в присутствии Г А М К + бикукуллин (Sigma Chem С о ) Инкубирования, п р о в о д и м ы е при 25°С в течение 90 минут (в постоянных условиях), заканчивают быстрой фильтрацией через стекловолоконные ф и л ь т р ы (No 32, Schleicher and Schuell, Keene, NH) Связанную с фильтром радиоактивность количественно определяют жидкостной сцинтилляционной спектрофотометрией Д а н н ы е по кинетике и кривые зависимости доза-ответ для соединения/[ 3 5 3]ТВРЭ анализируют с п о с о б о м нел и н е й н о й регрессии с использованием компьютеризированной повторяющейся процедуры для получения значений констант скорости и ICso (концентрации соединения, при которой происходит половина максимального ингибирования основного связывания [ 3 5 S]TBPS) Экспериментальные данные, полученные с п о м о щ ь ю этого анализа, также опубликованы Gee etal , 1987 Д а н н ы е , обсуждаемые в этой ссылке, показаны и о п и с а н ы в опубликованной заявке РСТ No W 0 9 3 / 0 3 7 3 2 от 04 марта 1993 г В противоположность, сайт связывания стероидов, идентифицированный в этой работе, отличается от сайта ГАМК/бикукуллина Сдвиг кривых зависимости доза-ответ, индуцированной бикукуллином, когда ингибирование связывания [ 3 5 S]TBPS, вызывается альфаксалоном, не является параллельным Это указывает на то, что сайты ГАМК и стероидоов не перекрываются Второй сет экспериментов проводят, чтобы продемонстрировать, что стероиды, барбитураты и бензодиазепины не делят обычный сайт связывания на рецепторе Г А М К Анализ проводят в соответствии с в ы ш е о п и с а н н ы м и процедурами Пол у ч е н н ы е д а н н ы е по кинетике показывают, что диссоциация связывания [S]TBPS, инициированная н а с ы щ а ю щ е й концентрацией За-окси-5апрегнан-20-она, потенцируется ЮОмкМ фенобабрбиталом Na Этот э ф ф е к т является указанием на 38 то, что За-ОН-5а-прегнан-20-он (стероид) и фенобарбитал (барбитурат) связывают независимые сайты В третьем сете экспериментов исследуют взаимодействия между За-окси-5а-прегнан-20оном и фенобарбиталом Na в потенцировании связывания ( 3 Н) флунитразепама (FLU) Эти эксперименты в дальнейшем поддерживают пункт ф о р м у л ы изобретения о т о м , что стероиды не д е л я т обычный сайт действия бензодиазепинов и барбитуратов В этой серии экспериментов устанавливают э ф ф е к т различных концентраций Заокси-5а-прегнан-20-она на связывание ( 3 Н) FLU в присутствии или отсутствии максимально стимул и р у ю щ е й концентрации фенобарбитала Na Поскольку фенобарбитал Na имеет б о л ь ш и й максимум эффективности, чем таковой За-окси-5апрегнан-20-она в потенцировании связывания ( 3 Н) FLU, то За-окси-5а-прегнан-20-она был бы полным антагонистом э ф ф е к т а фенобарбитала Na при их о д н о в р е м е н н о м конкурентном взаимодействии с этим сайтом Это не отмечается Таким образом, д а н н ы е е щ е более поддерживают наше заключение о т о м , что некоторые стероиды, в к л ю ч а ю щ и е соединения изобретения и используемые в нем, взаимодействуют с новым сайтом, отличным от барбитуратного и бензодиазепинового регуляторного сайта на комплексе GR Из-за этого независимого сайта действия принимают, что эти стероидные соединения будут обладать терапевтическими профилями, отличными от таковых барбитуратов и бензодиазепинов Исследуют различные соединения для установления их активности как модуляторов связывания ( 3 Н) FLU in vitro Эти анализы проводят в соответствии с в ы ш е о п и с а н н ы м и процедурами Основываясь на этих анализах, мы устанавливаем требования структура-активность для специфического взаимодействия с комплексом GR и порядок их активности и эффективности В Табл и ц е 1 приводят значения ICso и максимума ингибирования для некоторых соединений, включая примеры таковых, вошедших в пункты ф о р м у л ы изобретения заявки ICso определяется как концентрация соединений, ингибирующая 5 0 % связывания [ 3 5 S]TBPS в контроле Это значение активности соединения in vitro Максимум ингибирования является значением эффективности соединения in vitro Таблица 1 Зр-циклопропилэтинил-3аа-окси-5р-прегнан-20-он За-окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5р-прегнан-20-он За-окси-Зр-метил-5р-19-нор-прегнан-20-он За,20а-диокси-21-этил-5а-прегнан Зр-(циклопропил)этинил-3а-окси-5р-прегнан-20-он За,20а-диокси-21-метил-5а-прегнан За-окси-5а-прегнан-20-он За-окси-3р-метил-5р-прегнан-20-он Зр-этинил-3а-окси-5р-прегнан-20-он 1С 50 22 24 26 27 32 35 37 37 39 LMAX 94 91 94 13 97 28 95 98 101 39 48154 40 П р о д о л ж е н и е табл 1 Зр-этинил-За-окси-19-нор-5р-прегнан-20-он Зр-(5'-хлоропентин-1'-ил)-За-окси-5р-прегнан-20-он Зр-этенил-3а-окси-5р-прегнан-20-он За-окси-3р-этинил-5а-прегнан-20-он За-окси-3р-метил-5а-прегнан-20-он Бис(3а,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он)21 -гемисукцинат За,21 -диокси-5а-прегнан-20-он 21 -ацетат За,21 -диокси-5а-прегнан-20-он (5a-THDOC) За-Окси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он За-окси-21-метил-5р-прегнан-20-он За-окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5а-прегнан-20-он За-окси-3р,21-диметил-5а-прегнан-20-он За-окси-Зр-метил-5а-19-нор-прегнан-20-он За,20а(3)-диокси-5а-прегнан Н-(За-окси-Зр-метил-5а-прегнан-20-илидин)этаноламин Зр-этенил-3а-окси-5а-прегнан-20-он За,21 -диокси-5а-прегнан-20-он 21 -гемисукцинат За,21-диокси-5р-прегнан-20-он 21 -ацетат За,20а-диокси-3р-метил-5а-прегнан За,20-диокси-20-метил-5а-прегнан За,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он 21 -гемисукцинат Бис(3а,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он)21 -гемисукцинат За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За,20а-диокси-3р-этинил-5а-прегнан За-окси-3р-трифторметил-5р-прегн-11 -ен-20-он За,21-диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он 21-гемисукцинат, натриевая соль За-окси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он За,21 -диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он 21 -гемисукцинат За-окси-Зр-метил-5а-прегн-11 -ен-20-он За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За,21 -диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он За,21-диокси-5а-прегнан-20-он 21 -гемисукцинат, натриевая соль За-окси-Зр-трифторметил-19-нор-5а-прегнан-20-он За,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он, 21-ацетат За,21 -диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он За,21 -диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он, 21-ацетат За,21-диокси-3р-этенил-5а-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21 -ацетат За,21 -диокси-3р-этенил-5а-прегнан-20-он 21-гемисукцинат За,20р-диокси-3р-метил-5р-прегнан За,20а-диокси-3р,21-диметил-5а-прегнан За,21 -диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он, 21-гемисукцинат, натриевая соль За,21-диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он, 21-гемисукцинат, натриевая соль За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21-гемифумарат натриевая соль За,20а-диокси-3р-этинил-5р-прегнан За,21-диокси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21-гемисукцинат За,20уб-диокси-3р-этинил-5р-прегнан За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21-гемисукцинат, натриевая соль За,20р-диокси-3р-этинил-5а-прегнан За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он метил 21-сукцинат 1С 50 44 44 46 53 62 68 75 76 76 78 88 89 91 99 101 113 117 119 166 176 179 189 200 202 203 211 211 216 241 242 244 246 251 251 251 258 284 288 354 370 377 455 507 530 LMAX 540 546 102 102 557 592 648 688 712 98 101 101 77 99 774 480 107 86 93 98 100 91 97 56 99 100 100 100 95 85 80 46 93 88 91 49 52 40 82 23 77 56 99 104 98 104 92 76 44 100 92 40 101 96 93 101 102 88 89 105 48 101 41 48154 42 Продолжение табл 1 За-окси-Зр-метил-21 ,21 ,21 -трифторметил-5а-прегнан-20-он За,20р-диокси-3р-метил-5а-прегнан За-окси-Зр-метил-ба-прегн-16-ен-20-он За-окси-Зр-метил-5а-прегнан-11 ,20-дион 21-бром-За-окси-Зр-трифторметил-5р-прегнан-20-он эстрадиол прогестерон корти костерон холестерин - неактивный Как видно из Таблицы 1, соединения изобретения и используемые в нем имеют низкое значение ІСбо, которое является концентрацией, необходимой для достижения 5 0 % от максимума ингибирования связывания [ 3 5 S]TBPS, в то время, как соединения такие, как половые стероиды (эстрадиол и прогестерон), глюкокортикоиды (кортикостерон) и холестерин, и м е ю щ и е высокое значение IC50 являются в основном неактивными Таким образом, принимают, что гормональные стероиды и холестерин per se не будут иметь терапевтическую ценность для описанных здесь случаев Для того, чтобы разграничить этот уникальный класс стероидов и гормональные стероиды, их т е п е р ь называют нейроактивные стероиды Однако, пол о в ы е стероиды, такие как прогестерон, могут метаболизироваться в т е л е в стероиды, подобные За-окси-5а-прегнан-20-ону Таким образом, прогестерон может рассматриваться как пролекарство Д а н н ы е по T B P S хорошо коррелируют с данными по поглощению иона 3 6 CI, потенцированному различными За-гидроксилированными стероидами, описанными Purdy R Н et al , J Med С hem 33 1572 - 1581 (1990), включенными здесь в виде ссылки, и эти данные также хорошо коррелируют с электрофизиологическими данными, полученными измерением активности стероидов при потенцировании ГАМК-индуцируемого ответа в яйцеклетках, в которые инъецированы рецепторы ГАМК человека Это указывает на то, что анализ T B P S является подходящим способом измерения способности стероидов к аллостерическои модуляции активности канала CI Соединения с частичной активностью В той мере, в какой желательная терапевтическая активность предоставлялась бы пациенту при минимуме нежелательных побочных эффектов, важный аспект этого изобретения включает открытие агонистов с частичной активностью в этих соединениях с группой 5а-прегнан-За,20агидроксил, 5р-прегнан-3а,20р-гидроксил или производными или пролекарственными формами этих соединений Кроме того, подгруппа нейроактивных стероидов, отличных от этих двух групп, также показывает частичную активность в анализе T B P S (Таблица 1) Д л я пациентов, которые желают облегчить состояние тревожности или судороги, снотворный э ф ф е к т нежелателен Для пациентов, которые ж е л а ю т облегчения бессонницы, нежелат е л ь н а анестезия Ожидается, что соединения и активности, описанные как агонисты с частичной 1С 50 915 924 955 958 1530 >1000 >1000 >1000 >1000 LMAX 101 99 100 100 102 I* I* I* I* активностью, обладают желательным эффектом при минимальном нежелательном эффекте Кроме того, способность этих соединений потенцировать обусловленное ГАМК усиление тока CI ограничена по сравнению с таковой За-окси-5апрегнан-20-она в яйцеклетках Xenopus, в которые инъецированы гены рецептора ГАМКд человека Когда экспрессирующую систему яйцеклеток X e n o p u s применяют для тестирования ограниченной активности некоторых нейроактивных стероидов, проводят с л е д у ю щ у ю процедуру Яйцеклетки X e n o p u s laevis (стадия VI), которые были "дефолликулированы" с использованием способа расщепления коллагеназой [3 часа при 18 - 23°С, 2 мг/мл коллагеназы "А" в солевом растворе Барта без солей Са 2 + ), инъецируют транскриптами кРНК комплекса субъединиц а 1 , p i и y i рецептора ГАМКд человека Главный комплекс рецептора ГАМКд содержит субъединицы ару Инъецированные яйцеклетки отдельно поддерживают в 96луночных планшетах (200мкл на лунку нормального раствора Барта с добавкой 50 IU (международных единиц)/мл пенициллина, 50мг/мл стрептомицина и 100мг/мл гентамицина) в течение 9 дней при 19 - 20°С Индуцированные агонистами токи записывают с напряжения яйцеклеток X e n o p u s при фиксированном потенциале - 60 мв, используя усилитель вольт-клампа Axoclamp 2 А (Ахоп Instilments) в двухэлектродном способе вольтклампа Чувствительные к напряжению и прохожд е н и ю тока микроэлектроды наполняют ЗМ KCI, а сопротивление составляет 1 - 3 Мом при измерении в стандартном внеклеточном солевом растворе Яйцеклетки постоянно омывают раствором Рингера для лягушек (120мМ NaCI, 2 м М KCI, 1,0мМ CaCI 2 , 5 м М H E P E S рН 7,4) со скоростью 5 7мл/мин при комнатной температуре (17 - 21 °С Все лекарства вводят через систему переливания Стероиды ( 1 0 2 М) готовят в виде концентрированных маточных растворов в Д М С О или этаноле, а затем разводят раствором Рингера до подходящей концентрации Конечные концентрации Д М С О и этанола составляют 0,2% об/об, эти концентрации не влияют на получаемые реакции ГАМК Маточные растворы всех других лекарств готовят в растворе Рингера Реакции мембранного тока медленно фильтруют при 100гц и записывают на магнитную ленту, используя магнитофон FM (Racal Store 4DS) для последующего анализа Преимущества перед прогестероном 43 48154 Корреляции между пониженными уровнями прогестерона и симптомами, ассоциированными в PMS, PND и менструальной эпилепсией (Backstrom et al, 1983, Dalton К, 1984) приводят к использованию прогестерона в их лечении (Mattson etal, 1984 и Dalton, 1984) Однако, прогестерон не является последовательно эффективным при лечении вышеупомянутых синдромов Например, для прогестерона не существует связи доза-ответ при лечении PMS (Maddocks et al , 1987) Эти результаты являются предсказуемыми в свете результатов наших исследований in vitro, которые демонстрируют, что прогестерон имеет очень низкую активность в отношении комплекса GR, как видно из Таблицы 1, по сравнению с определенными метаболитами прогестерона Благоприятный эффект прогестерона, возможно, связан с различными превращениями прогестерона в активные метаболиты прогестерона Применение специфических метаболитов прогестерона в лечении вышеупомянутых синдромов четко превосходит применение прогестерона ввиду высокой активности и эффективности метаболитов и их производных (см Gee et al , 1987 и Таблицу 1 выше) Отсутствие гормональных побочных эффектов Продемонстрировано также, что у нейроактивных стероидов отсутствуют гормональные побочные эффекты ввиду отсутствия аффинности к прогестероновому и иным рецепторам стероидных гормонов При проведении анализов в соответствии с процедурами, описанными ранее Gee et al , 1988, получают данные для установления эффекта метаболитов прогестерона и его производных и прогестина R5020 на связывание [3H]R5020 с прогестероновым рецептором в матке крыс (Gee et al , 1988) 3 Н-прогестерон (0,15нМ) инкубируют с цитозолем матки крыс в присутствии тестируемых соединений Специфическое связывание устанавливают после инкубирования и сравнивают с контрольным инкубированием без соединений Результаты выражают в процентах ингибирования 44 связывания При связывании соединений с прогестероновым рецептором с высокой аффинностью, следовало бы ожидать 100% ингибирование при тестируемой концентрации Нейроактивные стероиды показывают менее, чем 10% ингибирование, что указывает на то, что они неактивны как прогестеновые агенты Различные гормональные активности представителей нейроактивных стероидов далее изучают тестированием их потенциальной эстрогенной, минералокортикоидной и глюкокортикоидной активностей Эти активности анализируют мониторингом способности соединений ингибировать связывание стероидных гормонов с их соответствующими гормональными рецепторами Результаты этих экспериментов представлены в опубликованной заявка РСТ W093/03732 от 04 марта 1993г, и они полностью включены здесь в виде ссылки Результаты этих экспериментов ясно показывают, что нейроактивные стероиды не обладают сильной аффинностью ни к одному из вышеупомянутых стероидных рецепторов Таким образом, они не имеют ожидаемых гормональных побочных эффектов, которые были бы обусловлены связыванием таких стероидных рецепторов Противосудорожная активность Проводят также эксперименты для установления физиологического соответствия взаимодействий нейроактивного стероида и рецептора ГАМК по оценке способности соединений изобретения и используемых в нем предотвращать индуцированные метразолом судороги у мышей Мышам инъецируют различные дозы тестируемых соединений изобретения за 10 минут до инъекции метразола Время начала миоклонии (наличие клоничской активности передних конечностей), индуцированной метразолом, определяют, наблюдая за каждой мышью в течение 30 минут У контрольных мышей метразол (85мг/кг) будет индуцировать судороги у 95% животных Способность некоторых соединений изобретения и используемых в нем защищать мышей от судорог показана в Таблице 2 Таблица 2 Антиметразольная активность нейроактивных стероидов у мышей 50% hpbcd Доза М Г/КГ 10 % защищенных животных 87,5 IP 50% hpbcd 10 100 IP 50% hpbcd микро раств 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 10 100 10 70 10 10 10 10 10 10 100 87,5 37,5 87,5 87,5 100 Название Способ Носитель Зр-Циклопропилэтинил-За-окси-5р-прегнан-20-он За-Окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5р-прегнан-20он За-Окси-5а-прегнан-20-он За-Окси-Зр-метил-5р-прегнан-20-он IP Зр-Этинил-За-окси-5р-прегнан-20-он Зр-Этинил-За-окси-19-нор-5р-прегнан-20-он Зр-(1-Гексинил)-За-окси-5р-прегнан-20-он Зр-Этенил-За-окси-5р-прегнан-20-он За-Окси-Зр-этинил-5а-прегнан-20-он За-Окси-Зр-метил-5а-прегнан-20-он IP IP IP IP IP IP IP 45 48154 46 Продолжение табл 2 Название Бис(3а,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он)21 гемисукцинат За,21 -Диокси-5а-прегнан-20-он 21 -ацетат За,21 -Диокси-5ст-прегнан-20-он (5a-THDOC) За-Окси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он Зр-Этинил-За-окси-5р-прегн-11 -ен-20-он За-Окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5а-прегнан-20он За-окси-Зр-метил-5а-19-нор-прегнан-20-он За,20а(3)-Диокси-5а-прегнан Зр-Этинил-За-окси-5а-прегнан-20-он За,21 -диокси-5р-прегнан-20-он 21 -ацетат За,20а-Диокси-Зр-метил-5а-прегнан За,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он 21 гемисукцинат Бис(3а,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20он)21-гемисукцинат За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он 21 Гемисукцинат, натриевая соль За-окси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он За,21 -диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он, 21 Гемисукцинат За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За,21 -диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20он За,21 -диокси-5а-прегнан-20-он 21 -гемисукцинат, натриевая соль За-окси-Зр-трифторметил-19-нор-5а-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он, 21 -ацетат За,21-диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-метил-5а-прегнан-20-он, 21 -ацетат За,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 2 1 ацетат За-окси-Зр-трифторметил-5р-19-нор-прегн-17(2)-ен За,20-диокси-3р,20-диметил-5р-прегнан За,20а-диокси-3р,21 -диметил-5а-прегнан За,21 -диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20он, 21-гемисукцинат, натриевая соль За,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он, 21гемисукцинат, натриевая соль За,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21гемифумарат натриевая соль За,21-диокси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21 гемисукцинат За,20р-диокси-3р-этинил-5р-прегнан За,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21 гемисукцинат, натриевая соль За,20р-диокси-3р-этинил-5а-прегнан IP - внутрибрюшинне введение hpbcd - гидроксипропил-р-циклодекстрин Способ Носитель Доза М Г/КГ % защищенных животных IP 50% hpbcd 10 37,5 IP IP IP IP 50% 50% 50% 50% hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd 10 10 10 10 50 87,5 100 75 IP 50% hpbcd 10 87,5 10 37,5 10 30 IP IP IP микро раств микро раств 50% hpbcd 50% hpbcd микро раств 10 10 100 100 25 60 IP Вода 10 50 IP 50% hpbcd 10 25 IP 50% hpbcd 10 14,3 IP микро раств 10 11,11 IP IP 50% hpbcd 50% hpbcd 10 10 62,5 18,8 IP Вода 10 37,5 IP 50% hpbcd 10 62,5 IP 50% hpbcd 10 118,8 IP Вода 60 100 IP IP IP IP IP 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd микро раств 50% hpbcd 10 10 10 10 10 25 62,5 87,5 10 50 IP 50% hpbcd 10 62,5 IP IP IP 50% hpbcd микро раств ДМСО 10 10 10 25 22,2 0 IP вода 10 50 IP Вода 10 50 IP Вода 10 50 IP 50% hpbcd 10 25 IP Вода 10 50 IP 50% hpbcd 10 25 IP вода 10 62,5 IP 50% hpbcd 10 37,5 IP IP 47 48154 Способность нейроаісгивньїх стероидов защищать животных от других химических агентов, вызывающих судороги, далее продемонстрирована для За-окси-5а-прегнан-20-она, За,21-диокси-5апрегнан-20-она и За-окси-3р-метил-5р-прегнан-20она Тесты на противосудорожную активность близки вышеописанным Используют следующие химические агенты, вызывающие судороги метразол (85мг/кг), (+)бикукуллин (2,7мг/кг), пикротоксин (3,15мг/кг), стрихнин (1,25мг/кг) или носитель (0,9% солевой раствор) Сразу после инъекции агента, вызывающего судороги, или носителя за мышами наблюдают в течение от 30 до 45 минут Записывают число животных с тоническими и/или тоническими судорогами В тесте с использованием максимального электрошока ток 50мА 60Гц подводят через корнеальные электроды в течение 200мсек с целью индукции тонического припадка Способность соединений устранять тонический компонент определяют как конечную точку Общий 48 потенциал депрессии центральной нервной системы устанавливают тестом вращения на стержне через 10 минут после инъекции соединений, в котором определяют число мышей, остающихся на вращающемся стрежне (6 об/мин) через 1 минуту в одном из трех опытов ED50 (доза, при которой наблюдается половинный от максимума эффект) устанавливают для каждого испытания и представляют в Таблице 3 infra Результаты демонстрируют, что нейроактивные стероиды в сравнении с другими используемыми в клинике противосудорожными агентами являются высоко эффективными и имеют профили, близкие к таковым клоназепама из группы бензодиазепинов Эти наблюдения показывают терапевтическую пригодность этих соединений как модуляторов возбудимости головного мозга, что согласуется с их высоко аффинным взаимодействием с комплексом GR in vitro Таблица 3 Противосудорожная активность некоторых нейроактивных стероидов и выбранных известных противосудорожных агентов у мышей Е05о(мг/кг) Соединение RR MES MTZ ВІС PICRO STR 30 28,6 4,9 12,3 10,2 >300 За5а("-Р 22,9 26,7 8,1 17,8 5,6 >300 5a-THDOC(" 246,2 >100 6,3 61,9 35,4 >100 За-окси-Зр-метил-5а-прегнан-20-он(С>1 Кпоназепам* 0,184 93 0,009 0,0086 0,043 NP Фенобарбитал* 69 22 13 38 28 95 ** Фенитоин* 65 10 NP NP NP Прогабид*** 75 30 30 105 75 Вальпроат* 426 272 149 360 387 293 Сокращения RR (тест вращения на стержне),MES (максимальный электрошок), MTZ (метразол), ВІС (бикукуллин), PICRO (пикротоксин), STR (стрихнин), NP (отсутствие защиты) - Растворен в 20% растворе гидроксипропил-р-циклодекстрина в воде Способ введения для стероидов и агентов, вызывающих судороги внутрибрюшинный и подкожный, соответственно * - Данные по противосудорожным агентам получены из Swmyard & Woodhead, General principles experimental detection, quantification and evaluation of anticonvulsants, in Antiepileptic Drugs D M Woodbury, J К Penryand С Е Pippenger, eds p 111,(Raven Press, New York), 1982 (b| - Носитель содержит 0,32% гидроксипропилметилцеллюлозы и 4% ТВИН 80 в солевом растворе ** - Максимальная защита 50% животных при дозе 55 - 100мг/кг *** - Противосудорожные агенты химического происхождения в исследованиях прогабида вводят внутривенно, все данные из Worms et al , Gamma-ammobutyric acid (GABA) receptor stimulation I Neuropharmacological profiles of progabide (SL 76002) and SL75102, with emphasis on their anticonvulsant spectra, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 220 660 - 671 (1982) Действие против тревожности Следующие эксперименты демонстрируют, что метаболиты прогестерона За-ОН-5а-прегнан20-он и За-ОН-5р-прегнан-20-он являются эффективными агентами против тревожности на четырех моделях тревожности человека с использованием животных Следует понимать, что эти два соединения приведены в изобретении в качестве иллюстрации Данные по этим синтетическим производным в этих определениях также присутствуют в Таблицах 4 - 6 Для измерения поведенческих эффектов соединений против тревожности применяют четыре следующие модели с использованием животных 1) тест перемещений из света в темноту, 2) приподнятый крестообразный лабиринт, 3) конфликтный тест Geller-Seifter и 4) тест Vogel а) Тест перемещений из света в темноту Тест перемещений из света в темноту (Crawley and Goodwin, Pharmacol Biochem Behav 13 67 - 70, 1980) основан на наблюдении того, что грызуны в естественных условиях стремятся осваивать новые пространства, но открытые ярко освещенные участки неприятны для грызунов и сдерживают поведение осваивания (Christmas and Maxwell, Neuropharmacol 9 1 7 - 2 9 , 1970, File J Neurosci Meth 2 219-238,1980) Множество применяемых в клинике агентов против тревожности, 49 48154 включая диазепам, клоназепам и пентобарбитал, как было показано, повышают число перемещений из светлой камеры в темную камеру, тогда как не имеющие активности против тревожности агенты не демонстрируют этот поведенческий эффект (Crawley et al , Neuropharmacol 23 531 537(1984)) Самцов мышей N I H Swiss-Webster (Harlan, Harlan, Indianapolis, IN) массой 15 - 20 г помещают по четыре/клетку в полиэтиленовые клетки с покрытием опилками В комнате, где содержат животных, контролируют условия среды (22°С) при 12-часовом цикле CBeTfreMHOTa (0600 - 1800час) Корм и воду дают ad libitum за исключением периода тестирования Эксперименты проводят в течение 0700 - 1500 часов, и группы уравновешивают по времени дневных эффектов Мышам только вводят однократно лекарство или носитель Используемый способ является модификацией ранее описанных способов (Wielandetal , Вг Res 565 263 - 268 (1991) Устройство содержит две автоматизированные тест-камеры из двух отделений (Модель RXYZCM16, Ommtech Electronics, Columbus, ОН) Открытое отделение связывается с закрытым отделением через коридор 7,5 х 7,5см Открытое отделение ярко освещают, используя лампу накаливания 200ватт Экспериментальную комнату не освещают Пересечения пучков инфракрасных лучей в каждой камере автоматически записываются, будучи связанными с компьютером посредством Digiscan Analyzer (Ommtech Electronics), а данные анализируют, используя Integrated Lab Animal Monitinng System (Ommtech Electronics) Мышам N I H Swiss-Webster вводят носитель или тестируемое лекарство внутрибрюшинно (IP), через 10 минут их помещают в центр освещенного отделения Число перемещений между освещенным и темным отделениями, общую активность в освещенной камере и время, проведенное в освещенной камере, измеряют в течение 10минутного тест-периода Введение За-ОН-5а-прегнан-20-она и За-ОН5р-прегнан-20-она в тесте перемещения из света в темноту дает важную кривую зависимости дозаответ в отношении числа перемещений между светлой и темной камерами Последующие сравнения показывают, что число пересечений для доз как За-ОН-5а-прегнан-20-она, так и За-ОН-5рпрегнан-20-она значительно повышается по сравнению с дозами, тестируемыми как контроль (tтест Dunnett) Кроме того, За-ОН-5а-прегнан-20-он и За-ОН5р-прегнан-20-он дают значительное (р < 0,01) повышение в активности при 10 & 20мг/кг по сравнению с контрольными группами (t-тест Dunnett) Значительных различий между двумя соединениями при всех тестируемых дозах не отмечается Ь) Приподнятый крестообразный лабиринт Теоретическая основа для теста с приподнятым крестообразным лабиринтом близка к таковой теста перемещений из света в темноту Как описано Fellow et al , J Neurosci Meth 14 149-167 (1985), устройство приподнятого крестообразного 50 лабиринта разработано для использования природного избегания мышами открытых пространств Устройство состоит из двух открытых коридоров и двух закрытых коридоров Тест с использованием приподнятого крестообразного лабиринта позволяет делать два измерения тревожности - определение числа выходов в открытые коридоры и времени, проведенного в открытых коридорах, которые выражают в процентах от общего числа выходов и проведенного времени в/на открытых и закрытых коридорах Самцов мышей N I H Swiss-Webster (Harlan, Harlan, Indianapolis, IN) массой 15 - 20 г помещают по четыре/клетку в полиэтиленовые клетки с покрытием опилками В комнате, где содержат животных, контролируют условия среды (22°С) при 12-часовом цикле CBeTfreMHOTa (0600 - 1800 час) Корм и воду дают ad libitum за исключением периода тестирования Эксперименты проводят в течение 0700 - 1500 часов, и группы уравновешивают по времени дневных эффектов Мышам только вводят однократно лекарство или носитель Используемый способ описан ранее (Lister, Psychoparmacol 92 180-1 85(1987)) Устройство включает два открытых коридора, перпендикулярных двум закрытым коридорам, которые приподняты от пола на 50см Каждый коридор имеет длину 50см и стенки у закрытых коридоров высотой 40см Лабиринт полностью сделан из черного плексигласа Над каждым из открытых коридоров помещают лампы накаливания по 200Вт, чтобы создать сильный контраст между открытыми и закрытыми коридорами Через 10 минут после инъекции мышей N I Н Swiss-Webster помещают в центр крестообразного лабиринта мордой в открытому коридору В течение 5-минутного тест-периода измеряют число выходов в открытые коридоры и закрытые коридоры, а также время, проведенное в открытых коридорах и закрытых коридорах Все четыре лапы должны находиться в коридоре, чтобы зависимая вариация была отмечена Вследствие этого, время пребывания в центре лабиринта не считают, при этом, общее время, проведенное в открытых коридорах, и закрытых коридорах может не быть равным 5мин Оба, За-ОН-5а-прегнан-20-он и За-ОН-5рпрегнан-20-он, в тесте с использованием приподнятого крестообразного лабиринта демонстрируют повышенное соотношение выходов в открытые коридоры в зависимости от дозы За-ОН-5апрегнан-20-он дает значительное повышение выходов при 20мг/кг (р < 0,05), тогда как За-ОН-5рпрегнан-20-он дает значительное повышение выходов при 5мг/кг (р < 0,05), 7,5мг/кг (р < 0,01) и 10мг/кг(р< 0,01) Кроме того, За-ОН-5а-прегнан-20-он и За-ОН5р-прегнан-20-он дают доза-зависимое увеличение времени, проводимого в открытых коридорах За-ОН-5а-прегнан-20-он дает значительное увеличение времени, проводимого в открытых коридорах, при 10мг/кг (р < 0,01), тогда как За-ОН-5рпрегнан-20-он дает значительное увеличение времени, проводимого в открытых коридорах, при 7,5мг/кг (р < 0,01) и 10мг/кг (р < 0,01) 51 48154 Результаты этих экспериментов представлены в опубликованной заявке РСТ W093/03732 от 04 марта 1993г и полностью входят в данное описание в виде ссылки В Таблице 4 показаны суммар 52 ные результаты активности против тревожности соединений изобретения и используемых в нем при использовании приподнятого крестообразного лабиринта в вышеописанных условиях Таблица 4 Активность против тревожности в крестообразном лабиринте у мышей Название Способ Носитель Доза мг/кг За-Окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-1'-инил)-5р-прегнан-20-он За-0кси-5а-прегнан-20-он Зр-Этинил-За-окси-5р-прегнан-20-он Зр-Этинил-За-окси-19-нор-5р-прегнан-20-он Зр-Этенил-За-окси-5р-прегнан-20-он За-Окси-Зр-этинил-5а-прегнан-20-он За-Окси-Зр-метил-5а-прегнан-20-он За,21 -Диокси-5а-прегнан-20-он 21 -ацетат За-Окси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он Зр-Этинил-За-окси-5р-прегн-11 -ен-20-он За-Окси-Зр-(3'-метил-бут-3'-ен-Г-инил)-5а-прегнан-20-он Зр-Этенил-За-окси-5а-прегнан-20-он За,20а-Диокси-Зр-метил-5а-прегнан За,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он 21 гемисукцинат Бис(3а,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он)21 гемисукцинат За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За-окси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он За,21 -диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он За-окси-Зр-трифторметил-19-нор-5а-прегнан-20-он За,21-диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он, 21 -ацетат За,21-Диокси-Зр-трифторметил-5р-прегнан-20-он За-Этинил-За-окси-5р-прегнан-11 ,20-дион За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21 ацетат За-окси-Зр-трифторметил-5р-прегнан-11,20-дион За,20а-диокси-3р,21-диметил-5а-прегнан За,21 -диокси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он, 21-гемисукцинат, натриевая соль За,21 -диокси-3р-этинил-5р-прегнан-20-он 21гемисукцинат, натриевая соль За,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21 гемифумарат, натриевая соль За,21-диокси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За,20Ь-диокси-Зр-этинил-5р-прегнан За,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21 гемисукцинат, натриевая соль * - внутрибрюшинно IP* IP IP IP IP IP IP IP IP IP IP IP IV 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd микро раств 10 20 1 10 10 10 5 10 10 10 10 5 10 % к контролю 155 143,7 186,6 172 151 213 165,6 133 173,8 233 141 154,3 174,5 IP 50% hpbcd 10 164,2 IP 50% hpbcd 10 92 IP IP IP IP IP IP IP IP 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd 50% hpbcd микро раств 50% hpbcd 20 20 10 10 10 10 10 5 150,7 197,6 162 140 161 159 237 235,9 IP 50% hpbcd 5 143,3 IP IP 50% hpbcd ДМСО 10 10 112 73 IP вода 20 161,1 PO вода 10 159 IP Вода 50% hpbcd 126 IP IP 50% hpbcd ДМСО 10 10 109 178 IP вода 20 172,8 с) Конфликтный тест Geller-Seifter В этой модели на животных тревожности человека используют условное состояние конфликта у крыс для установления свойств лекарств против тревожности Крыс приучают нажимать пластинку для положительного подкрепления при двух режимах поведения (Geller and Seifter, Psychopharmacologia 1 482 - 492 (1960)) Первый включает нажимание на пластинку при режиме с изменяющейся скоростью без наказания Второй компонент является режимом с фиксированным соотношением, при котором каждое нажатие на пластинку приводит к положительному подкреплению и наказанию Компонент наказания образует состояние конфликта у животного Компонент без наказания позволяет наблюдать любые ответы на эффекты депрессанта, которыми может обладать лекарственное средство Ответ против тревожно 53 48154 сти повышал бы ответ с наказанием без влияния на ответ без наказания В конфликтных экспериментах используют самцов белых крыс Sprague-Dawley (Charles River Labs, Wilmington, MA) массой 250 - 300г, их держат на ограниченном питании гранулированным кормом Purina Lab Chow при доступности воды в любое время для поддержания массы тела на 85% уровне от уровня свободно питающихся молодых зрелых животных Крыс помещают отдельно при 12-часовом цикле свет-темнота с освещением в период 0700-1900 Эффекты против тревожности (наказаниеуменьшение наказания) и против депрессии ЗаОН-5а-прегнан-20-она и За-ОН-5а-прегнан-20-она (возможно, ошибка в оригинале) измеряюту крыс конфликтным тестом Geller и Seifter (1960) В этом 63-минутном тесте голодные крысы в ответ на нажатие рычага получают в награду подслащенное молоко Режим подкрепления состоит из компонентов наказания и отсутствия наказания, меняющихся каждые 15 минут Крыс обучают в тесткамерах (Coulbourn instruments) с рычагом, повешенным на одну стенку, маленькой капельницей, которая выдает в награду 0,1мл молока (1 часть концентрированного молока Eagle 2 части воды) и полом из металлической сетки, через который производят наказание в виде удара тока по лапам Для программирования и записи используют управляемый SKED (State Systems) миникомпьютер DEC PDP 11/73 Сначала крысы обучаются отвечать на режим непрерывного подкрепления и быстро усваивают режимы с изменяющимися 30 секундным, 1минутным и 2-минутным интервалами (VI) При режиме непрерывного подкрепления крысы получают в награду молоко после каждого нажатия на рычаг, при режиме VI награда в виде молока доступна через нечастые и изменяющиеся интервалы, случайные в среднем один раз каждые 2 мин Затем в основной режим VI без наказания вводят 3-минутные "конфликтные" периоды, первый на 54 чинается через 3 мин проведения VI, а другие изменяются между 12-минутными периодами ответа VI Во время конфликтных периодов, которые сопровождаются сигналом в виде света и звука, режим непрерывного подкрепления снова появляется, и каждое нажатие на рычаг дает как награду в виде молока, так и наказание в виде короткого (0,25мсек) удара тока по лапам Интенсивность удара вначале составляет 0,2мА и повышается ежедневно на 0 02мА для постепенного подавления нажимания на рычаг до 5 или менее ответов за конфликтный период Это обучение занимает 4 - 6 недель, после чего отмечают стабильно низкое количество ответов во время конфликтных периодов и стабильно высокое количество в периоды отсутствия наказаний Индуцированное лекарствами повышение количества наказанных ответов принимают за показатель активности против тревожности, тогда как снижение количества ненаказанных ответов принимают за показатель ответной депрессии или седативного эффекта Здесь суммированы эффекты За-ОН-5апрегнан-20-она и За-ОН-5р-прегнан-20-она в конфликтом тесте Оба соединения приводят к сильному повышению количества наказанных ответов, что предполагает, что они были бы активными в качестве агентов против тревожности Пик эффекта За-ОН-5а-прегнан-20-она отмечают при 2 мг/кг, а таковой За-ОН-5р-прегнан-20-она - при 4,4 мг/кг при подкожном введении (Для статистического анализа и вследствие небольшого числа тестов в каждой дозе все тесты с каждым соединением комбинируют для сравнения с контрольными тестами с носителем, используя t-тест для близких измерений для За-ОН-5а-прегнан-20-она р < 0,02, для За-ОН-5р-прегнан-20-она р < 0,008) Таблица 5 показывает итоги активностей против тревожности соединений изобретения и применяемых в нем при использовании теста GellerSeifter в вышеописанных условиях эксперимента Таблица 5 Активность против тревожности в тесте Geller/seifter у крыс Соединения За-Окси-5р-прегнан-20-он За-Окси-5а-прегнан-20-он Зр-Этинил-За-окси-5р-прегнан-20-он За-Окси-Зр-этинил-5а-прегнан-20-он За-Окси-Зр-метил-5а-прегнан-20-он За-Окси-Зр-трифторметил-19-нор-5р-прегнан-20-он Зр-Этенил-За-окси-5а-прегнан-20-он За-окси-3р-трифторметил-5а-прегнан-20-он За-окси-Зр-трифторметил-5р-прегн-11 -ен-20-он За-окси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он За,21-Диокси-Зр-трифторметил-5р-прегнан-20-он За-окси-Зр-трифторметил-5р-19-норпрегн-17(20)-ен Способ SC SC SC SC SC SC ро SC SC SC SC SC Носитель 50% 50% 50% 50% 50% 50% 50% 50% 50% 50% 50% 50% hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd hpbcd Доза мг/кг 2 5 2 8 4 4 12 8 4 4 16 16 Geller/Seifter (% от контро ля) 860,5 471,8 751,1 830,2 1384,6 1073,1 1092,3 1005 508,3 663,2 982,4 1130,3 55 48154 56 Продолжение табл 5 Пролекарства За,21-диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21 ацетат За,21 -диокси-Зр-этинил-бр-прегнан^О-он, 21 гемисукцинат За,21 -диокси-3р-трифторметил-5р-прегнан-20-он, 21 гемисукцинат, натриевая соль За,21 -диокси-Зр-трифторметил-5р-19-нор-прегнан-20он, 21-гемисукцинат, натриевая соль За-окси-Зр-метил-5а-прегнан-20-спиро-2'-(1 '3'тиазолидин-4'-карбоновая кислота) d) Тест Vogel Тест Vogel основывается на создании конфликта между высокомотивированным поведением и отвращением Для этого теста сильной мотивацией служит жажда Животное лишают воды на 1 2 - 1 6 часов для получения мотивации питья Во время периода обучения животных помещают в условия проведения теста, чтобы они привыкли к поильнику и для снижения страха перед новой окружающей средой После обучения животным дают избыток воды в течение 2 часов В этот период животные будут пить и есть нормальное для них количество воды и корма, компенсируя время ограничения Однако, этот режим дает также сильную мотивацию питья во время периода тестирования Животное, которое было лишено воды в течение двенадцати - шестнадцати часов, помещают в клетку для проведения теста, где ему разрешают пить свободно в течение пяти минут Этот период используют для привыкания животного к окружающей среде и поильнику После периода обучения животные получают избыток поды и корма в клетках, где их содержат, в течение 2 часов Корм Способ Носитель Доза мг/кг Geller/Seifler (% от контро ля) SC 50% hpbcd 8 882,8 ро вода 16 1350,0 ро вода 8 840,0 ро вода 8 2493,4 SC 50% hpbcd 16 900,0 доступен все время Через двадцать четыре часа животным интрацеребровентрикулярно вводят лекарственное средство После указанной отсрочки, начинающейся от времени инъекции, животное снова помещают в клетку для тестирования на десять минут Компьютер учитывает каждый раз, когда животное облизывает, и после каждого двадцатого облизывания применяет мягкий электрический раздражитель через язык и/или лапы Электрический раздражитель состоит из тока 0,6мА продолжительностью ЮОмсек Эта процедура создает состояние конфликта для животного, которое снижается введением применяемых в клинике агентов против тревожности (например, валиума) Для получения кривых доза-ответ отдельным группам животных вводят увеличивающиеся дозы тестируемого лекарственного средства и проводят тестирование в течение заданного времени Данные по некоторым репрезентативным соединениям с использованием этих измерений суммированы в Таблице 6 Таблица 6 Активность против тревожности в тесте vogel у крыс Соединения За,20а-Диокси-2р-изопропокси-5а-прегнан За,20-Диокси-20-метил-5а-прегнан За,20а-Диокси-21-метил-5а-прегнан За,20а(3)-Диокси-5а-прегнан За-Окси-5а-прегнан-20-он За,20а-Диокси-5а-прегнан 2а-Фтор-За,20а-диокси-5а-прегнан За,20а-Диокси-21-этил-5а-прегнан За,20а-Диокси-5а-прегнан і с v - интрацеребровентрикулярное введение g-CD - глюкоза-циклодекстрин Пролекарства Противосудорожную активность и активность против тревожности пролекарственных форм базовых соединений За-окси-5а-прегнан-20-она и За,21-диокси-5а-прегнан-20-она и их производных оценивают, используя те же процедуры, что опи Способ I СV I СV I СV I СV I СV I СV I СV I СV I СV Н ос и-тел ь Дозам г/кг g-CD g-CD g-CD g-CD g-CD g-CD g-CD g-CD g-CD 10 ug 20 ug 10 ug 10 ug 10 ug 10 ug 20 ug 20 ug 20 ug Vogel (% от контроля) 169,0 179,0 157,9 193,0 431,1 283,3 264,9 225,8 267,3 саны выше Процент защиты некоторыми пролекарственными формами За-окси-5а-прегнан-20она от индуцированных метразолом припадков рассчитывают относительно времени после введения соединений (Таблица 7) 57 48154 Некоторые дополнительные пролекарства также тестируют и представляют результаты в Таблице 8 Модификация базовых соединений Заокси-5а-прегнан-20-она и За,21-диокси-5апрегнан-20-онапогидроксилам За и 21 различными эфирами поддерживает их биологическую активность и в некоторых случаях такая модификация увеличивает время защиты, обеспечиваемое соединением Таким образом, соединения этого изобретения могут быть модифицированы для получения противосудорожной активности и активности против тревожности в течение периода времени с изменяющимися степенями защиты Таблица 7 Антиметразольная активность пролекарственных эфиров За-окси-5а-прегнан-20-она (3a-(RC00)5а-прегнан-20-она) % Защиты 60 мг/кг 1 час IP 25 75 75 33 75 16(4час) 17 33 50 17 R Метил Этил Пропил Бутил 2-Пропил 4-Гептил Циклобутил Фенил 4-Хлорфенил 4-Метоксифенил 58 З-Пиридил 3-(1 -Метил-1,4дигидропиридинил) 50 (20час) 63 (20час) В противоположность бензодиазепинам, нейроактивные стероиды могут также индуцировать анестезию Их способность индуцировать анестезию, как считают, обусловлена их способностью, открывать канал ионов хлорида в отсутствии ГАМК, это свойство, которым не обладают бензодиазепины Поэтому нейростероиды могут действовать прямо на рецептор при отсутствии ГАМК, а также "косвенно" в присутствии ГАМК Это "косвенное" действие называют "модуляцией" рецептора Lambert et al , Trends Pharmacology Science 8 224-227(1987) Соединения изобретения и применяемые в нем могут быть также использованы при показаниях для анестезии в высоких дозах Однако, предпочтительным способом введения для индукции анестезии является внутривенное (iv) введение У животных анестезирующие свойства лекарственных средств измеряют по способности лекарственных средств, приводить к потере установочного рефлекса Потерю установочного рефлекса определяют, как неспособность животного встать в течение 30 секунд после того, как его кладут на спину Мышам вводят лекарственное средство внутривенно в латеральную хвостовую вену После введения мышей кладут на спину и наблюдают за потерей установочного рефлекса Иллюстрирующие результаты приведены в Таблице 8 Таблица 8 Анестезирующая активность нейроактивных стероидов у мышей Соединения Способ Носитель За,21-Диокси-Зр-этинил-5р-прегнан-20-он IV Зр-(Хлорэтинил)-За-окси-5р-прегнан-20-он IV Зр-Этинил-За-окси-5р-прегнан-20-он IV За-Окси-Зр-метил-5а-прегн-16-ен-20-он IV За-Окси-5а-прегн-9-ен-20-он IV За-Окси-17(20)(2)-метоксиметилен-19-нор-5а-андростан IV За-Окси-Зр-метил-5р-прегнан-20-он IV За-Этокси-Зат-окси-5а-прегнан-20-он IV 2р-Фтор-За-окси-5а-прегнан-20-он IV За-Окси-Зр-метил-21 -метоксиметил-5а-прегнан-20-он IV 20% кремофор микронизированный раствор 10% hpbcd микронизированный раствор микронизированный раствор микронизированный раствор микронизированный раствор 20% кремофор микронизированный раствор микронизированный раствор Несмотря на то, что предпочтительные воплощения описаны и проиллюстрированы, в них могут быть сделаны различные замены и модификации, не выходящие из рамок изобретения Со 10 Потеря установочного рефлекса 100 20 100 30 100 50 100 10 100 5 75 2,5 100 5 100 5 100 20 100 Доза мг/кг ответственно, следует понимать, что настоящее изобретение было описано путем иллюстрации, а не ограничения 59 48154 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71 60